RECOPILACIN: Dr Albis Garcia M. D.

Citogentica Bsica
Qu son los Cromosomas?
La citogentica es el estudio de los cromosomas y las enfermedades relacionadas, causadas por
un nmero y/o estructura anormales de los cromosomas. Los cromosomas son estructuras
complejas localizadas en el ncleo de las clulas, compuestos por DNA, histonas y otras
protenas, RNA y polisacridos. Son bsicamente los "paquetes" que contienen el DNA.
Normalmente los cromosomas no se pueden ver con un microscopio ptico, pero durante la
divisin celular se condensan lo suficiente como para poder ser fcilmente analizados a 1.000
aumentos. Para recoger clulas con sus cromosomas en este estado condensado se las expone
a un inhibidor de la mitosis, que bloquea la formacin del huso mittico y detiene la divisin
celular en la etapa de metafase.
Se pueden usar distintos tejidos para obtener preparaciones de cromosomas; por ejemplo,
sangre perifrica, medula sea, fluido amnitico y productos de la concepcin. Aunque las
tcnicas especficas difieren segn el tejido usado, el mtodo bsico para obtener preparaciones
de cromosomas es as:
1.-Recoleccin de la muestra y preparacin inicial.
Cultivo celular.
2.- Adicin de un inhibidor de la mitosis para detener las clulas en metafase.
3.- Recogida de las clulas. Este paso es muy importante para obtener preparaciones de
alta calidad. Implica exponer las clulas a una disolucin hipotnica, seguida de una serie
de disoluciones fijadoras. Esto hace que las clulas se expandan, de modo que los
cromosomas se extiendan y puedan examinarse individualmente.
Tincin de las preparaciones cromosmicas para detectar los posibles cambios numricos y
estructurales.

Morfologa del Cromosoma

Bajo el microscopio, los cromosomas se ven como estructuras delgadas y alargadas. Tienen un
brazo corto y otro largo separados por un estrechamiento o constriccin primaria, llamada
centrmero. El brazo corto se designa como p y el largo como q. El centrmero es el punto de
unin del huso mittico y es parte integral del cromosoma. Es esencial para el movimiento y
segregacin normales del cromosoma durante la divisin celular. Los cromosomas metafsicos
humanos presentan tres formas bsicas y se pueden clasificar de acuerdo con la longitud de los
brazos corto y largo, as como por la posicin del centrmero. Los cromosomas metacntricos
tienen los brazos corto y largo de aproximadamente la misma longitud, con el centrmero en el
punto medio. Los cromosomas submetacntricos tienen los brazos corto y largo de longitudes
desiguales, con el centrmero ms prximo a uno de los extremos. Los cromosomas
acrocntricos tienen el centrmero my cerca de un extremo, con un brazo corto muy pequeo.
Con frecuencia tienen constricciones secundarias en los brazos cortos, conectando trozos muy
pequeos del DNA, llamados tallos y satlites, al centrmero. Los tallos contienen genes que
codifican el RNA ribosmico.

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Los diagramas, idiogramas*, de los cromosomas 1, 9 y 14 con bandas G` mostrados a

continuacin son ejemplos tpicos, respectivamente, de cromosomas metacntricos,
submetacntricos y acrocntricos. El idiograma es bsicamente un "mapa cromosmico" que
muestra la relacin entre los brazos corto y largo, el centrmero (cen) y, en el caso de
cromosomas acrocntricos, los tallos (st, de stalk) y satlites (sa). Tambin se ilustran los
patrones de bandas especficos. Cada banda se numera para ayudar en la descripcin de
reorganizaciones.

Submetacntrico
(Cromosoma 9)
Metacntrico
(Cromosoma 1)

Acrocntrico
(Cromosoma 14)

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EJEMPLO DE IDEOGRAMA

Esta imagen muestra cada cromosoma humano normal comparado con su idiograma, o mapa, de bandas G, un
esquema acordado internacionalmente para los patrones de bandas.

Anlisis Cromosmico
Prcticamente todos los anlisis citogenticos de rutina se realizan sobre preparaciones
cromosmicas que se han tratado y teido para producir un patrn de bandas especfico de cada
cromosoma. Esto permite la deteccin de cambios sutiles en la estructura de los cromosomas. El
tratamiento de tincin ms comn se llama bandeo G. Se dispone de otras tcnicas de tincin
que ayudan a identificar anomalas especficas. Una vez que se han obtenido las preparaciones
de cromosomas metafsicos teidos, pueden examinarse al microscopio. Tpicamente, se
observan y cuentan de 15 a 20 clulas, con un anlisis completo de al menos 5 de ellas. Durante
un anlisis completo, cada cromosoma se compara crticamente banda por banda con su
homlogo. Es necesario examinar tantas clulas para poder detectar un mosaicismo, con
significado clnico.
Tras el anlisis al microscopio, se toman imgenes de las clulas en metafase que tengan mejor
calidad, bien mediante fotografa o por digitalizacin de imagen computerizada. Cada
cromosoma puede entonces disponerse en pares de acuerdo con su tamao y patrn de
bandas, formando un cariotipo. El cariotipo permite al citogenetista examinar an ms en detalle
cada cromosoma en busca de cambios estructurales. Se hace entonces una descripcin por
escrito del cariotipo, definiendo el anlisis cromosmico.
*Los idiogramas son gentileza de Tim Knight (Fred Hutchinson Cancer Research Center, Seattle,
WA., U.S.A.)

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Cromosomas Normales
Las clulas somticas humanas normales tienen 46 cromosomas: 22 pares de cromosomas
homlogos o autosomas (los cromosomas 1 a 22) y dos cromosomas sexuales. A esto se le
llama el nmero diploide. Las mujeres tienen dos cromosomas X (46,XX) mientras que los
varones tienen un X y un Y (46,XY). Las clulas germinales (vulo y espermatozoide) tienen 23
cromosomas: una copia de cada autosoma ms un solo cromosoma sexual. A esto se le llama el
nmero haploide. Se hereda de cada progenitor un cromosoma de cada par autosmico y un
cromosoma sexual. Las madres slo pueden aportar un cromosoma X a sus hijos e hijas,
mientras que los padres pueden aportar bien un X (a sus hijos) o bien un Y (a sus hijas).
Anomalas Cromosmicas

Aunque las anomalas cromosmicas pueden ser muy complejas, hay dos tipos bsicos:
numricas y estructurales. Ambos tipos pueden darse simultneamente.
Las anomalas numricas implican la prdida y/o ganancia de uno o varios cromosomas
completos y puede incluir tanto a autosomas como a cromosomas sexuales. Generalmente, la
prdida de cromosomas tiene mayor repercusin en un individuo que la ganancia, aunque sta
tambin puede tener consecuencias serias. Las clulas que han perdido un cromosoma
presentan monosoma para ese cromosoma, mientras que aqullas con un cromosoma extra
muestran trisoma para el cromosoma implicado. Casi todas las monosomas autosmicas
llevan a la muerte poco despus de la concepcin y slo unas pocas trisomas permiten llegar al
nacimiento. La anomala autosmica numrica ms comn es el Sndrome de Down o trisoma
21. Los individuos con trisoma en los cromosomas 13 y 18 pueden tambin sobrevivir hasta el
nacimiento, pero estn ms seriamente afectados que aqullos con sndrome de Down.
Curiosamente, los individuos con una condicin llamada triploida, en la cual hay una copia
extra de todos los cromosomas (69 en total), pueden ocasionalmente sobrevivir hasta el
nacimiento, aunque normalmente mueren durante el periodo neonatal.
Otra regla general es que la prdida o ganancia de un autosoma tiene consecuencias ms
graves que la de un cromosoma sexual. La anomala de cromosomas sexuales ms comn es la
monosoma del cromosoma X (45,X), o Sndrome de Turner. Otro ejemplo bastante comn es el
Sndrome de Klinefelter (47,XXY). Aunque hay variaciones considerables dentro de cada
sndrome, los individuos afectados a menudo llevan vidas bastante normales.
En ocasiones, un individuo porta un cromosoma extra que no se puede identificar por su patrn
de bandas; a stos se les llama cromosomas marcadores. La introduccin de las tcnicas FISH
ha sido de gran ayuda en la identificacin de estos cromosomas marcadores.
Las anomalas estructurales implican cambios en la estructura de uno o varios cromosomas.
Pueden ser increblemente complejas, pero para el propsito de esta discusin nos centraremos
en tres de los tipos ms comunes:
Las deleciones implican la prdida de material de un solo cromosoma. Los efectos son
tpicamente graves, puesto que hay prdida de material gentico.
Las inversiones tienen lugar cuando se dan dos cortes dentro de un mismo cromosoma y el
segmento intermedio gira 180 (se invierte) y se vuelve a unir, formando un cromosoma que

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estructuralmente tiene la secuencia cambiada. Normalmente no hay riesgo de problemas para el

individuo si la inversin es de origen familiar (es decir, se ha heredado de uno de los
progenitores). Hay un riesgo algo mayor si es una mutacin de novo (nueva), debido
posiblemente a la interrupcin de una secuencia clave de un gen. Aunque el portador de una
inversin puede ser completamente normal, tiene un riesgo ligeramente mayor de producir un
embrin con un desequilibrio cromosmico. Esto se debe a que un cromosoma invertido tiene
dificultad en emparejarse con su homlogo normal durante la meiosis, lo que puede producir
gametos que contengan derivados cromosmicos desequilibrados si ocurre un entrecruzamiento
desigual.
Las translocaciones implican el intercambio de material entre dos o ms cromosomas. Si una
translocacin es recproca (equilibrada) el riesgo de problemas para el individuo es similar al de
las inversiones: normalmente nulo si es familiar y ligeramente mayor si es de novo. Surgen
problemas con las translocaciones cuando a partir de un progenitor equilibrado se forman
gametos que no contienen ambos productos de la translocacin. Cuando tal gameto se combina
con un gameto normal del otro progenitor, el resultado es un embrin desequilibrado que es
parcialmente monosmico para un cromosoma y parcialmente trismico para el otro.
Las anomalas numricas y estructurales se pueden dividir a su vez en dos categoras
principales: constitutivas, aqullas con las que se nace, y adquiridas, las que surgen como
cambios secundarios a otras enfermedades, tales como el cncer.
A veces se encuentran personas que tienen tanto lneas celulares normales como anormales. A
estos individuos se los denomina mosaicos y en la inmensa mayora de los casos la lnea
celular anormal tiene una anomala cromosmica numrica. Los mosaicos estructurales son
extremadamente infrecuentes. El grado en el cual un individuo resulta afectado clnicamente
depende habitualmente del porcentaje de clulas anormales. Un anlisis citogentico de rutina
incluye tpicamente el examen de al menos 15 o 20 clulas, con el fin de descartar cualquier
mosaicismo clnicamente significativo.
stas son slo algunas de las anomalas ms comunes que se encuentran en un laboratorio de
citogentica. Puesto que el nmero de posibilidades anormales es casi infinito, se debe preparar
al citogenetista para detectar e interpretar virtalmente cualquier anomala cromosmica que
pueda tener lugar.

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Ejemplo 1: Sndrome de Down, una anomala numrica frecuente.

Este cariotipo es un ejemplo del Sndrome de Down, la anomala numrica ms frecuente en

recin nacidos. Se caracteriza por un cromosoma 21 extra y el cariotipo se escribe as:
47,XX,+21. La clave de la descripcin de cariotipo es:
47: el nmero total de cromosomas (46 es lo normal).
XX: los cromosomas sexuales (femeninos).
+21: indica que el cromosoma extra es un 21.

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Ejemplo 2: Inversin en el cromosoma 10.

Este cariotipo es un ejemplo de inversin, una de las reorganizaciones estructurales ms

frecuentes. En este caso, un segmento del brazo q, o brazo largo, del cromosoma 10 de la
derecha est invertido. Puesto que ambas rupturas han ocurrido en el brazo largo y el
centrmero no est implicado, se habla de una inversin paracntrica. Si hubiera habido
rupturas separadas tanto en el brazo largo como en el corto, el centrmero estara tambin
invertido y se hablara de una inversin pericntrica. El cariotipo se escribe como
46,XY,inv(10)(q11.23q26.3). La clave para la descripcin del cariotipo es:
46: el nmero total de cromosomas.

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XY: los cromosomas sexuales (masculinos).

inv(10): inversin en el cromosoma 10.
(q11.23q26.3): puntos de corte del segmento invertido.
El idiograma siguiente ilustra detalladamente esta inversin

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Ejemplo 3: Delecin del cromosoma 16.

Este cariotipo es un ejemplo de delecin simple en un cromosoma. En este caso se ha perdido

un segmento del brazo q, o brazo largo, del cromosoma 16 de la derecha. En este ejemplo
particular hay dos cortes visibles microscpicamente dentro del brazo largo, que forman una
delecin intersticial. Si hubiera un corte, ocasionando la prdida de un extremo del cromosoma,
se llamara delecin terminal. El cariotipo se escribe as: 46,XX,del(16)(q13q22). La clave de la
descripcin del cariotipo es:
46: el nmero total de cromosomas.
XX: los cromosomas sexuales (femeninos).
del(16): delecin en el cromosoma 16.
(q13q22): puntos de corte del segmento delecionado (o perdido).

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El idiograma siguiente ilustra en detalle esta delecin intersticial.

Ejemplo 4: Translocacin entre los cromosomas 2 y 15.

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Este cariotipo es un ejemplo de una translocacin equilibrada entre dos cromosomas. En este
caso, un segmento largo del brazo p, o brazo corto, del cromosoma 2 de la derecha se ha
intercambiado con el brazo q prcticamente completo, o brazo largo, del cromosoma 15 de la
derecha. Debido a que el tamao de los fragmentos intercambiados es casi igual, esta
reorganizacin estructural en particular sera casi imposible de detectar sin tcnicas de bandeo.
El cariotipo se escribe como 46,XY,t(2;15)(p11.2;q11.2). La clave para la descripcin del
cariotipo es:
46: el nmero total de cromosomas.
XY: los cromosomas sexuales (masculinos).
t(2;15): translocacin entre los cromosomas 2 y 15.
(p11.2;q11.2): los puntos de corte en los cromosomas 2 (p11.2), y 15 (q11.2), respectivamente.
El siguiente idiograma ilustra en detalle esta translocacin.

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Ejemplo 5: Translocacin entre los cromosomas 5 y 8.

Este cariotipo es un ejemplo de translocacin equilibrada entre dos cromosomas. En este caso,
un segmento grande del brazo q, o brazo largo, del cromosoma 5 de la derecha se ha
intercambiado con un segmento pequeo del brazo p, o brazo corto, del cromosoma 8 de la
derecha. El cariotipo se escribe as: 46,XY,t(5;8)(q31.1;p23.1). La clave para la descripcin del
cariotipo es:
46: el nmero total de cromosomas.

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XY: los cromosomas sexuales (masculinos).

t(5;8): translocacin entre los cromosomas 5 y 8.
(q31.1;p23.1): puntos de corte en los cromosomas 5 (q31.1) y 8 (p23.1), respectivamente.
El idiograma siguiente ilustra en detalle esta translocacin.

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Ejemplo 6: Inversin sutil en el cromosoma 3.

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Esta clula en metafase es un ejemplo de una inversin muy sutil. As es como ve la clula un
citogenetista bajo el microscopio ptico. En este caso, est invertido un segmento del brazo q, o
brazo largo, del cromosoma 3 que se seala. Puesto que ambas rupturas han tenido lugar en el
brazo largo y no se ve implicado el centrmero, a esto se le llama inversin paracntrica. El
cariotipo se escribe as: 46,XX,inv(3)(q24q27). La clave de esta descripcin del cariotipo es
sta:
46: el nmero total de cromosomas.
XX: los cromosomas sexuales (mujer).
inv(3): inversin en el cromosoma 3.
(q24q27): puntos de ruptura del segmento invertido.
La siguiente comparacin de cromosomas e idiogramas proporciona una ilustracin en
detalle de esta inversin.

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Ejemplo 7: Delecin intersticial en el cromosoma 7.

Este cariotipo es un ejemplo de una delecin (eliminacin) simple en un cromosoma. En este

caso se elimina un segmento del brazo q,o brazo largo, del cromosoma 7 de la derecha. En este

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ejemplo concreto hay dos rupturas visibles al microscopio en el brazo largo, lo que la convierte
en una delecin intersticial. Si hubiera habido una ruptura, con prdida de un extremo del
cromosoma, se llamara delecin terminal. El cariotipo se escribe as:
46,XY,del(7)(q11.23q21.2). La clave para esta descripcin del cariotipo es sta:
46: el nmero total de cromosomas.
XY: los cromosomas sexuales (varn).
del(7): delecin en el cromosoma 7.
(q11.23q21.2): puntos de ruptura del segmento eliminado.
El siguiente idiograma proporciona una ilustracin en detalle de esta delecin intersticial.

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Ejemplo 8 - TRASLOCACION CROMOSOMA DICENTRICO

Este cariotpo es un ejemplo de un tipo especial de translocacin que implica a los brazos largos
completos, y bastante a menudo a los centrmeros, de los cromosomas acrocntricos. Se la
llama translocacin de Robertson.
En este caso todo el brazo largo (q) y el centrmero de un cromosoma 13 se fusionan con todo
el brazo q y el centrmero de un cromosoma 14. Este ejemplo concreto es una translocacin no
equilibrada y conduce a trisoma 13. Hay dos cromosomas 13 normales ms el cromosoma 13
implicado en la translocacin, por tanto tres copias del cromosoma 13. La translocacin se
muestra e el cariotipo como el cromosoma 14 de la derecha. El cariotipo se escribe as:
46,XY,+13,dic(13;14)(p11.2;p11.2). La clave de esta descripcin del cariotipo es sta:

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46: el nmero total de cromosomas. Sigue siendo 46 porque los brazos largos de los
cromosomas 13 y 14 se han fusionado en un cromosoma.
XY: los cromosomas sexuales (varn).
+13: indica la presencia de un cromosoma 13 adicional.
dic(13;14): cromosoma dicntrico que implica a los cromosomas 13 y 14. Como en el caso de
muchas translocaciones de Robertson, estn presentes los centrmeros de ambos cromosomas,
de donde viene la designacin "dicntrico".
(p11.2;p11.2): puntos de ruptura en los cromosomas 13 (p11.2), y 14 (p11.2) respectivamente.
El siguiente idiograma proporciona una ilustracin en detalle de esta translocacin.

Hibridacin in situ Fluorescente

(FISH : Fluorescent In Situ Hybridization)
La FISH es una nueva tecnologa que utiliza sondas de DNA marcadas con fluorescencia para
detectar o confirmar anomalas gnicas o cromosmicas que generalmente estn ms all del
poder de resolucin de la citogentica de rutina. Primero, la muestra de DNA (cromosomas
metafsicos o ncleos en interfase) se desnaturaliza, proceso que separa las hebras
complementarias de la estructura en doble hlice del DNA. A la muestra desnaturalizada se le
aade entonces la sonda de inters, marcada con fluorescencia, que se hibridar al DNA de la
muestra en el sitio diana, en el proceso denominado templado, donde se vuelve a formar una
doble hlice. La seal de la sonda se observa mediante un microscopio de fluorescencia y la
muestra de DNA se clasifica segn la presencia o ausencia de la seal.

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FISH de Metafase

La FISH puede usarse sobre clulas en metafase para detectar microdeleciones especficas ms
all de la resolucin de la citogentica de rutina o para identificar material extra de origen
desconocido. Puede tambin ser de ayuda en casos donde es difcil determinar mediante la
citogentica de rutina si un cromosoma tiene una delecin simple o est implicado en una
reorganizacin sutil o compleja. Adems, la FISH de metafase puede detectar algunos de los
reordenamientos especficos que se observan en ciertos cnceres.
El nmero de sndromes de microdelecin diagnosticados por FISH est aumentando con
rapidez. La sensibilidad de estos ensayos es en todos los casos mejor que la de la citogentica
de rutina, pero depende del sndrome en concreto. En algunos, la sonda es especfica para el
gen defectuoso, como en el Sndrome de Williams, donde se ha encontrado una delecin en el
gen de la elastina en el 96% de los pacientes con diagnstico confirmado. En otros sndromes
como el de Prader-Willi/Angelman, la etiologa es heterognea y las microdeleciones slo forman
una parte de los casos (60%).
Sndromes de Microdelecin Actualmente Diagnosticables mediante FISH
Sndrome del maullido (cri-du-chat)
Sndrome de Kallman
Sndrome de Miller-Dieker
Sndrome de Williams
Sndrome de Smith-Magenis
Sndrome de Wolf-Hirschhorn
Deficiencia de esteroide-sulfatasa
Sndrome de Prader-Willi/Angelman
Sndrome DiGeorge/Velo-Cardio-Facial/CATCH 22/Shprintzen

FISH de Interfase
La FISH se puede usar sobre clulas en interfase para determinar el nmero de copias de uno o
varios cromosomas, as como para detectar algunas reorganizaciones especficas que son
caractersticas de ciertos cnceres. La ventaja principal de la FISH de interfase es que se puede
realizar muy rpidamente si es preciso, normalmente en 24 horas, porque no requiere
crecimiento de las clulas.
Un buen ejemplo es el ensayo de Prueba de Aneuploida, que se realiza sobre clulas del
fluido amnitico cuando hay una fuerte indicacin clnica de una de las trisomas ms comunes.
Se desnaturalizan los ncleos de la muestra, se hibridan con sondas especficas para los
cromosomas 13, 18, 21, X e Y, y los resultados se obtienen comnmente en 24 horas. La prueba
de aneuploida suele incluir tambin una citogentica de rutina para confirmar los resultados o
detectar cualquier anomala no detectada por la FISH de interfase.