UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO

INFORME DE LABORATORIO N1

TEMA: RECONOCIMIENTO DE UN LABORATORIO DE ANATOMIA

PATOLGICA

NOMBRE: VERNICA GUEVARA

CTEDRA: TCNICAS HISTOLGICAS

DOCENTE: LIC. IVN PEAFIEL

Objetivo General:

Identificar el rea de anatoma patolgica.

Objetivos Especficos:

Realizar reconocimiento del rea total requerida y distribucin para un

laboratorio de anatoma patolgica.
Observar los equipos y materiales necesarios en cada rea de trabajo en
un laboratorio de anatoma patolgica.
Clasificar cada uno de los desechos generados dentro del rea de
anatoma patolgica.

Fundamento terico:

Fijacin

La fijacin es el proceso ms importante al llevar a cabo las tcnicas de

preparacin de muestras histolgicas. No importa el cuidado con el que se
procese y seccione las muestras de tejido, los detalles morfolgicos esenciales
solo se mostraran si el tejido se fija de manera adecuada y rpida.
Casi siempre es ms fcil seleccionar las muestras mal fijadas que aquellas que
estn bien fijadas.
Los tejidos mal fijados siempre mostraran menos caractersticas morfolgicas,
aunque se hayan procesado de manera ptima y con cuidado.

Ilustracin 1 Fijacin

Procesamiento de tejidos

Un bloque de parafina ser difcil de seccionar, a no ser que una muestra bien
fijada sea procesada de la manera adecuada utilizando un programa
apropiado.
Las muestras pueden estar poco procesadas (muestras demasiado grandes,
programa demasiado breve) o demasiado procesadas (programa demasiado
largo para el tamao y la naturaleza de la muestra). En ambos casos, puede
ser difcil o imposible realizar un corte.
Existen varias tcnicas que se pueden utilizar para obtener secciones de
bloques difciles.
Si es difcil seccionar el bloque porque el tejido es duro, la superficie expuesta
puede empaparse en agua fra o en un agente reblandecedor, como una
solucin de detergente blando, suavizante.
Para muestras calificadas, puede aplicar un agente decalcificador, durante 10
minutos o ms, en el tejido expuesto, ellos le permitir obtener varias
secciones. Enjuague bien los bloques antes de que la descalcificacin dae la
placa de presin del portacuchillas.
Evitar aquellas secciones de bloques difciles en los que la fijacin, el
procesamiento o la infiltracin puede ser errnea y los mtodos de corte
normales no se realizan con xito.
Cuando es imposible obtener secciones de un bloque porque la muestra ha
sido incorrectamente procesada en primera instancia, puedo ser imposible
reprocesarlo.

Ilustracin 2 Procesamiento de Tejidos

Inclusin de tejidos en parafina

Realice la inclusin con cuidado.

La inclusin es un paso importante que precisa una aproximacin cuidadosa.
Una inclusin poco cuidadosa puede hacer la microtoma mucho ms difcil.
No llenar lo suficiente el molde de inclusin puede dar lugar a una sujecin
inestable en el micrtomo y originar cortes de distinto espesor uno grueso y
despus otro fino y otros problemas.
Evitar llenar excesivamente los moldes de inclusin, porque esto puede
interferir con la alineacin correcta de la cara del bloque durante el corte.
Cualquier exceso de parafina e la parte exterior del molde de inclusin
debera ser eliminado antes de sujetarlo, para asegurarse de que el bloque
est sujeto con firmeza durante el seccionamiento.

Ilustracin 3 Muestra de Tejido conservada en Parafina

Microtoma

La posicin del micrtomo en el laboratorio es importante.

Coloque el micrtomo en un lugar estable, lejos de las rfagas de aire,
puertas y puntos de paso. Cualquier movimiento del aire debido a los
equipos de aire acondicionado u otras causas puede hacer que el tratamiento
de la seccin sea muy difcil.
Es preferible utilizar un banco ajustable en altura y una silla ergonmica.
Es muy importante que el personal no este distrado al usar el micrtomo por
los riesgos de lesionarse con cuchillas extremadamente afiladas. Al colocar los
micrtomos en un laboratorio debera considerarse el potencial para
interactuar con otros miembros del personal.

Es preferible tener un suelo antideslizante en las inmediaciones de los

micrtomos porque, inevitablemente, los fragmentos de parafina caern al
suelo y pueden originar una superficie resbaladiza. Muchos laboratorios usan
esterillas antideslizantes para que el entorno sea ms seguro.

Ilustracin 4 Micrtomo

Estudie las caractersticas del diseo de su micrtomo y aprenda a

utilizarlas

Los micrtomos con retraccin estn diseados para que la muestra se retire
de la cuchilla en la carrera ascendente. Es importante saber si su micrtomo
tiene esta presentacin.
La posicin retrada es una caracterstica de diseo que proporciona distintas
ventajas durante el corte y prolonga la vida la cuchilla.
Al usar un micrtomo de retraccin, el alineamiento de la cara del bloque al
borde de la cuchilla debe ser efectuado con el bloque en la carrera
descendente (en la posicin avanzada no retrada)
Si un bloque est alineado cerca del borde la cuchilla mientras el brazo de la
muestra est en la posicin retrada, en la siguiente vuelta completa del
volante, el bloque avanzara en funcin del valor de la posicin retrada del
grosor de la seccin seleccionada. Esto provocara que se cortara un trozo
grueso que podra daar tanto la muestra como la cuchilla.
Los micrtomos tambin pueden
completamente motorizados.

ser

manuales, semimotorizados o

Los equipos motorizados reducen los movimientos repetitivos que pueden

contribuir a desarrollar enfermedades musculo-esquelticas.

Materiales. Equipos Y Reactivos

Microscopia
Equipo o estacin de inclusin de tejidos en parafina, plancha fra 5C
Micrtomo
Bao de flotacin
Estufa de histopatologa
Batera de tincin

Muestra:

Instrumentos y equipos

Procedimiento:
El estudiante recibir informacin sobre el rea, distribucin y elementos que
deben integrar el laboratorio de Anatoma Patolgica.
El estudiante observara, conocer y pondr en prctica los protocolos de
generacin y eliminacin de desechos.
El estudiante elaborara su propio manual de protocolos de desecho.

Tcnica:
El Las normas de trnsito en un laboratorio de Anatoma Patolgica son muy
importantes ya que mantendremos el orden en todo momento y evitamos
provocar algn accidente.
Primera rea
Macroscopa
Consiste en citar caractersticas de ciertos rganos. Observacin de un rea
grande de la superficie, o secciones especficas de una muestra o pieza a simple
vista o empleando lupas de hasta 50 aumentos. En esta rea se realiza biopsias
por lo que es muy importante tener frascos para contopunzantes, desechos
infecciosos y especiales para biopsias.

Ilustracin 5 Macroscopa de un tero

Segunda rea
Procesamiento de tejidos
Que se hace
Se prepara el tejido para obtener una imagen microscpica enfocada y
magnificada, preservando todas las estructuras histolgicas, con mnima
modificacin.
Como se hace
1) Fijacin: Lo que se busca es evitar procesos de autolisis (autodestruccin)
del tejido, evitar contaminacin bacteriana y fngica, y que haya el mnimo
cambio posible en el preparado. Se hace poniendo al tejido en el fijador
(mezcla fijadora). El que ms se usa es el formol salino (formalina, NaCl y
agua). A veces se usa congelacin, aunque solo en casos crticos (no preserva
la estructura, pero permite detectar lpidos por ejemplo).
2) Deshidratacin: Eliminar el agua del tejido, se hace colocndolo en baos
crecientes de alcohol (50, 70,96,100)
3) Aclaramiento: Se pasa el tejido a baos de xilol, que desplazan al alcohol.
Esto se hace para que el siguiente paso de resultado (en el siguiente paso se
usa parafina, que solo es soluble en xilol, no en alcohol). Se llama
aclaramiento, porque el xilol cambia el ndice de refraccin del tejido,
hacindolo translucido
4) Inclusin en parafina: Se coloca el tejido en parafina (en estufa), que
penetra en el mismo. El tejido se "endurece", para que luego se puedan hacer
cortes delgados de l.

5) Seccin: Cortar el tejido en finas lminas, en general de entre 5 y 15

micrmetros de espesor, con un aparato llamado micrtomo.
6) Montaje: Se trata de rehidratar el corte, colocndolo en una gota de agua
sobre un portaobjetos
7) Tincin: Finalmente se tie para la observacin al microscopio ptico. La
coloracin de rutina es la HE (hematoxilina - eosina)
Para que se hace

Ilustracin 6 Procesamiento de Tejidos

Para que se hace

Por lo general se lo realiza resaltar una parte de la estructura.

Tercera rea
Inclusin de tejidos de parafina
Que se hace
Para la inclusin de muestras que han de observarse con el microscopio
ptico se utiliza sobre todo la parafina, y en menor medida la celoidina,
como medio de inclusin.
La parafina es una sustancia de aspecto ceroso que est formada por mezclas
de hidrocarburos saturados. A temperatura ambiente es slida y su punto de
fusin puede variar entre 40 C y 70 C segn la composicin de la mezcla de
hidrocarburos. As, parafinas ms duras a temperatura ambiente tienen un
punto de fusin mayor, mientras que las ms blandas uno menor.
Como se hace
La parafina no es miscible con agua, mientras que todos los tejidos estn
formados principalmente por agua. Adems, la mayora de los fijadores son
soluciones acuosas. Esto implica que para que la parafina lquida pueda
penetrar completamente en el tejido ha de sustituirse el agua por un solvente
orgnico. Esto se consigue mediante la deshidratacin del tejido en alcoholes,
normalmente etanol, de gradacin creciente hasta alcohol de 100.
Posteriormente se transfiere el tejido a un lquido que es miscible tanto con el
alcohol de 100 como con la parafina, denominado sustancia intermediaria,
como es el benceno, xileno, tolueno o el xido de propileno, entre otros.
Por ltimo se pasa el tejido a parafina previamente licuada en una estufa
regulada a la temperatura apropiada para dicho tipo de parafina. Se dan tres
pasos por parafina lquida para favorecer una completa sustitucin del lquido
intermediario por la parafina.

Ilustracin 7 Inclusin de tejidos de parafina

Cuarta rea
Micrtomo
Que se hace
Se realiza cortes en micras porque mientras ms delgado sea el corte facilita la
observacin. Los micrtomos para cortar material incluido en parafina son
probablemente los ms usados en los laboratorios de histologa. Todos
poseen varias partes comunes: una cuchilla, un portabloques y un sistema
mecnico que permite acercar el bloque de parafina a la cuchilla, a una
distancia que se corresponde con el grosor de la seccin que pretendemos
obtener, y realizar el corte.
Como se hace
Hay dos tipos de micrtomos para parafina: el de rotacin y el de
deslizamiento. El micrtomo de rotacin provoca el corte gracias a la
transformacin de un movimiento de rotacin en otro de ascenso y descenso
del portamuestras. En el movimiento de bajada sobre la cuchilla se produce
un acercamiento del portamuestras hacia la cuchilla segn el grosor de corte
seleccionado. Con el micrtomo de deslizamiento se obtienen cortes
mediante un movimiento de deslizamiento del bloque sobre la cuchilla, o
viceversa. En estos micrtomos el movimiento lo proporciona directamente
la mano y es de ida y vuelta, siendo en la vuelta cuando se eleva la posicin
del bloque, o de la cuchilla, una distancia que nos dar el grosor del corte.
Tanto el micrtomo de rotacin como el de deslizamiento tienen ventajas e
inconvenientes. La principal ventaja del de rotacin es su precisin, la
posibilidad de obtener secciones seriadas con facilidad y la automatizacin
del proceso de corte mediante motores elctricos. Los micrtomos de
deslizamiento son ms sencillos mecnicamente y su disposicin permite
cortar bloques ms grandes o bloques de celoidina.

Ilustracin 8 Micrtomo para parafina con

mecanismo de rotacin

Ilustracin 9 Micrtomo para parafina con

mecanismo de deslizamiento

Quinta rea
Bao de flotacin
Que se hace
Es un paso que se utiliza para observar tejidos (estudio histolgico), es parte
del corte (microtoma)
Como se hace
Un tejido baado en parafina (con anterioridad) se pone en agua a 40C, se
pone en un portaobjetos y se aade alcohol para extender y deslizar el
tejido, ya deslizado ste, se levanta y coloca sobre una laminilla. entonces se
pasa a desparafinacin sobre una platina o estufa a ms de 60C para pasar
luego a la tincin (coloracin de tejidos).

Ilustracin 10 Bao de Flotacin

Conclusiones y Recomendaciones:
-

Se deben tomar las medidas de bioseguridad antes de ingresar al

laboratorio de anatoma patolgica.
Debemos conocer el correcto funcionamiento de cada equipo.
Tener mucha precaucin al manipular un equipo.
Se debe tomar en cuenta que estos equipos nicamente deben ser
manipulados por personas que tengan el conocimiento necesario.

Bibliografa:
-

Leica Microsystems. Instruction Manual Leica RM2235 V1.3 Nussloch:

Leica Microsystems
Rolls GO Farner NJ, Hall JB Artifacts In Hitological and Cytilogical
Preparatioons Menlbourne: Leica Microsystems 2008,106.
Santoianni RA, Hammami A. Nuclear Bubbling an Overlooked Artifact.
The Journal Histotechnology, 1990,13;135-136.

Anexos