SAGH

Test de antiglobulinas.

La prueba de antigenos humanos permite detectar e identificar inmunoglobulinas y/o componentes

unidos a GR y que aadiendo a los Gr sensibilizados, producir su aglutinacin en condiciones de
que dichos GR hayan sido lavados con suero fisiolgico para eliminar las protenas plasmticas que
no estn unidas especficamente a los mismos.
Consideraciones generales:
1.-Fijacion del anticuerpo.
2.-IgG aglutinacin.
3.-Se detecta sensibilidad mediante SAGH.
4-.Test directo (sensibilidad in vivo).
5.-Test indirecto (sensibilidad in vitro).
6.-Reactivo se prepara por sensibilizacin.
7.-SAGH poliespecifico (color verde), monoespecifico(color transparente)
Test Directo:
Casos:
*EHRN.
*AHAI.
*AH inducida por frmacos.
*Reaccin postransfusional.
Test Indirecto:
Usos:
*Deteccin de anticuerpos en suero problema. Detecta o identifica anticuerpos irregulares
(para ver si el sujeto esta sensibilizado)
*Determinacin fenotipo: Un anticuerpo de especificidad conocida se incuba con hemates
problema para identificar los antigenos especficos de sistemas Du,K,Fy,Jk.
*Pruebas cruzadas: Suero paciente con GR a transfundir.
*Identificacin de anticuerpos presentes en eluatos.
*Pruebas especiales: Consumo de antiglobulinas anticuerpos antileucocitario o plaquetarios.
Medio de suspensin:
1.- Salino: para disminuir el tiempo .LISS
2.- Para aumentar sensibilidad:
+Albumina: resalta anticuerpos clnicamente significativos: Rh.
+Enzimas: GR pretratados aumentan sensibilidad:alo y auto(Rh,K,Kidd).
Destruyen M,N,S,Duffy.

Importancia del Anticomplemento:

Algunas IgG y la mayora de las IgM fijan complemento in vivo.

Componente detecta en GR en c3d.

El SAGH usado de rutina es poliespecifico.

Sensibilizacin in Vitro (IAT) IgG fijado y/o complemento. El complemento aumenta
sensibilidad, anti Jk.
Se requiere 200 molculas IgG unida a GR.

Factores que afectan la prueba de la Antiglobulina.

Fase sensibilizacin:
* Temperatura 37 C.
* Medio reactivo: SSF, albmina, suero inerte, Liss.
* Proporcin de clulas y suero, 2 gotas + 1 gota de GR al 5%.
* Tiempo de incubacin:
+Albmina: 15 a 30 min.
+Liss: 5 -15 min.
Fase lavado:
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T lavado.
Volumen salino.
Decantacin salino.
Contaminacin.
Elucin.
Centrifugar.
Lectura de prueba.

Controles:
o Rutina: SAGH poliespecificos.
o Actividad anti IgG: Deteccin de la mayora de anticuerpos que conducen a destruccin
in vivo.
o Actividad anti Complemento. Componente del Complemento. Fijador a membrana por
efecto de reaccin antigeno anticuerpo.
o Normas: Control de calidad del Banco de Sangre.
o Controles positivos: Suero anti D diluido + GRO + incubacin +SAGH.
o Control negativo: GR suspensin + incubacin +lavado + SAGH.
o Nota: al examen negativo agregar clulas control Coombs, centrifugar y leer.

Falsos negativos:
o
o
o
o

Lavado incorrecto (inactivacion del complemento)

Contaminacin con proteinas.
Contaminacin de reactivo con suero humano.
Elusin de anticuerpos durante el lavado.

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o
o
o

Suspensin celular muy concentrada o muy diluidas.

Celulas mal conservadas (bemolizadas, envejecidas).
Suero viejo (congelado calentando o descongelado repetidamente).
Uso de plasma (interferencia activacin del Complemento).
Incubacin inadecuada (fase sensibilizacin).
Omisin reactivo Coombs.
Retardo en adicin de Coombs ( elucion).
Dilucin del SAGH: exceso residual de solucin salina.
Remocin violenta del botn.
Perdida de clulas durante el lavado. Suspensin muy diluida.

Falsos positivos:
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o
o
o
o
o

Contaminacin bacteriana: Muestra , Reactivos.

GR de pacientes spticos: TCD+, activacin Ag.
Contaminacin SSf c/slice coloidal: Envase,tubo.
Contaminacin c/iones metalicos: SSF envase,material.
Tubos de ensayo mal lavados:polvo,detergente.
Reactivos antiglobulinas mal preparados:trazas anticuerpos.
Muestras congeladas, refrigeradas:anticuerpos frios, cativacion del complemento.