Qumica Analtica Biotecnolgica

Exerccios
Cromatografia Gasosa e HPLC
1- Na anlise por cromatografia gasosa de uma mistura contendo os compostos na tabela abaixo foi
realizada. Escolha e justifique a ordem de eluio em uma coluna apolar e em uma coluna polar.
Composto

Ponto de Ebulio (oC)

Polaridade

75

Baixa

75

Mdia

60

Mdia

2-Calcule a eficincia da coluna em relao ao pico 5 da tabela abaixo, e a resoluo entre os picos
(2 e 3) e (3 e 4). Considere t M = 1 cm.
Pico

Largura do pico (cm)

tR (cm)

0,5

3,1

1,3

9,5

0,9

10,2

1,1

11,2

1,5

16,4

3-Em um equipamento de HPLC, inicialmente foi registrado o cromatograma para a injeo de uma
soluo 0,5 mM de paration. Um segundo cromatograma foi registrado para a injeo de um mesmo
volume de outra soluo 1mM de paration. Qual deve ser a diferena entre os cromatogramas no
que se refere a (i) altura, (ii) rea e (iii) tempo de reteno do pico relativo a este analito.

4-Uma amostra de vitamina E foi analisada pelo mtodo da padronizao externa, ou seja, a partir
de um padro de acetato de alfa-tocoferol foram preparadas 4 solues com as seguintes
concentraes: 200, 400, 600 e 800 mg/L. Em paralelo, foi preparada uma soluo contendo 500
mg de amostra/L. As 5 solues preparadas foram analisadas nas mesmas condies
cromatogrficas e o volume injetado foi sempre o mesmo (20 L). A partir das reas dos picos em
cada cromatograma, calcular a porcentagem em massa de acetato de alfa-tocoferol na amostra.

Soluo

rea (mm2)

Concentrao (mg/L)

483

200

972

400

1454

600

1938

800

Amostra

1091

5- Em qual dos casos a eluio por gradiente indicada? Para aqueles casos onde a eluio por
gradiente for adequada, sugira um gradiente. Qual a modificao que solucionaria o problema nos
outros casos. Para os trs casos foi empregada uma coluna C18 e fase mvel composta por uma
mistura de acetonitrila : gua (1 : 1)

6- O cromatograma abaixo refere-se anlise de tolueno (PE = 111C) e fenol (PE = 182 oC) por
cromatografia gasosa.

Coluna: 2mm x 200 cm

FE: SE-30

Vazo nitrognio: 30 mL/min

Temp. injetor: 200C

Temp. detector: 280C

Temp. coluna: 180C

Amostra dissolvida em metanol

e injeo de 1 L

Pede-se: Identifique os picos e explique.

7- Anlise da cloroquina e hidroxicloroquina em leite.

Cloroquina

Hidroxicloroquina

Preparo da curva analtica: Alquotas de 1 mL de leite foram enriquecidas com padres de

cloroquina e hidroxicloroquina nas concentraes especificadas abaixo. Em seguida, foram
submetidas a extrao com acetato de etila em meio bsico. Volumes de 100 L da fase orgnica
foram coletados, evaporados at a secura, os resduos foram dissolvidos em 100 L da fase mvel e
20 L foram injetados no sistema cromatogrfico.
Padres

Cloroquina (g/mL)

Hidroxicloroquina (g/mL)

0,5

0,25

II

0,8

0,4

III

2,0

1,0

Amostra: Diversas alquotas 1 mL de leite de diferentes fabricantes foram analisadas.

Anlise cromatogrfica: Coluna RP-18 (partculas 5 m, 125 x 4,6 mm); fase mvel: gua
alcalinizada com trietilamina pH 7,5 : acetonitrila (80:20, v/v); vazo 1 mL/min; deteco em 320
nm).
Perguntas:
a. Calcular a concentrao de CQ e HCQ na amostra de leite
b. Porque foi necessrio alcalinizar a fase mvel
c. Explicar a ordem de eluio

Cloroquina
Concentrao
(g/mL)
0,5

Altura (cm)

Hidroxicloroquina
Altura (cm)

Concentrao
(g/mL)
0,25

0,8

14

0,4

2,0

36

1,0

12

Amostra ?

Determinar a altura Amostra ?

no
cromatograma
abaixo.
Depois
determinar a conc. da
amostra

Determinar a altura
no
cromatograma
abaixo.
Depois
determinar a conc. da
amostra