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INDICE

INTRODUCCIÓN……….………………………………….............................
Practica No 1.

3

Reglas de seguridad del laboratorio de bacteriología…………………….……..
Practica No 2.

4-8

Esterilización en el laboratorio de bacteriología……………...…...…………….
Practica No 3.

9-14

Medios de cultivo……...…………………………………………………….......
Practica No 4.

15-22

Siembra de exudado faríngeo…...……………………………………………….

23-26

1

Introducción
La microbiología tiene numerosas áreas o ramas con fundamentos técnicos comunes, pero
cada rama tiene sus características particulares, dado que hay diversos tipos de
microorganismos hallados en diferentes hábitats. Una de estas divisiones es la bacteriología
médica que estudia aquellas bacterias, que afectan la salud del hombre, especialmente por
su capacidad patógena. De tal manera que la bacteriología es una rama de la microbiología
que estudian a las bacterias.
Este trabajo tiene como objetivo dar a conocer las prácticas realizadas en el laboratorio de
bacteriología, en el cual incluirá:
∞ Objetivo en el cual da a conocer lo que se aprenderá en cada práctica.
∞ Generalidades en este apartado se encontrara las definiciones e información de las
palabras claves utilizadas en cada práctica.
∞ Método da a conocer el procedimiento que se debe utilizar para cada una de esas
prácticas
∞ Resultados se encontrara el producto obtenido al realizar cada practica en el
laboratorio de bacteriología
∞ Conclusión aquí se encontraran las opiniones de nosotros al concluir dicha práctica.
Con estas prácticas realizadas en el laboratorio de bacteriología aprendimos a realizar
medios de cultivo y sembrar en ellos, también las normas que hay que seguir para no
provocar accidentes o la contaminación de los medios de cultivo y lograr aislar las bacterias
que crecen en ellos, así como esterilizar dependiendo los materiales a esterilizar.

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PRACTICA No 1. REGLAS DE SEGURIDAD PARA EL LABORATORIO DE
BACTERIOLOGÍA
Objetivo:
Aplicar las reglas básicas de higiene y seguridad para los laboratorios del área
microbiológica. Analizar y aprender la importancia que tiene cada una de estas reglas, tanto
en las actividades académicas de aprendizaje, como en el ejercicio profesional.
Generalidades:
Microbiología es la ciencia encargada del estudio de los organismos microscópicos
(celulares y subcelulares), principalmente de aquellos que se encuentran por debajo del
poder de resolución del ojo humano.
Microbiología médica estudia los microorganismos que son responsables de las
principales enfermedades infecciosas de los humanos.
Bacteriología es la rama de la biología que estudia la morfología, ecología, genética y
bioquímica de las bacterias.
Microorganismo es un organismo vivo que requiere de montajes especiales para su
observación bajo microscopio.
Principios de bioseguridad
La seguridad biológica o bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las técnicas
y de los equipos necesarios para prevenir la exposición del personal, del área de laboratorio
y del medio ambiente a agentes potencialmente infecciosos o biopeligrosos.
Agentes biopeligrosos son todos aquellos agentes biológicos y materiales que son
potencialmente peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas. Entre ellos
podemos citar: bacterias, virus, hongos, parásitos, productos recombinantes, alergenos,
priones, etc.
El Riesgo Microbiológico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad
práctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulación de cultivos de
microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy elevadas y pueden
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llegar a provocar una infección si no son manipulados adecuadamente. Para que se
produzca un accidente por un agente biológico deben estar presentes básicamente 4
elementos: un huésped susceptible, un agente infeccioso, una concentración suficiente de
éste y una ruta de transmisión adecuada; siendo este último punto el que mejor se puede
controlar en el laboratorio.
Vías de infección
Los microorganismos pueden ingresar al organismo a través de: la boca, los pulmones, la
piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. Las vías de contaminación más frecuentes en el
laboratorio se dan a través de:
La boca: Comer, beber y fumar en el laboratorio; realizar transferencias con pipetas sin
utilizar ningún tipo de protección y por transferencia indirecta de microorganismos a través
de los dedos o utensilios contaminados (lápices, bolígrafos, etc.).
La piel: Inoculación accidental con una aguja hipodérmica u otros instrumentos punzantes
o de vidrio y Cortaduras o rasguños.
Los ojos: Salpicaduras de materiales infecciosos y Transferencia indirecta de
microorganismos a través de los dedos contaminados.
Los pulmones: Inhalación de microorganismos transportados por el aire (aerosoles).
Método:
1. Entrar al laboratorio en forma ordenada portando bata de laboratorio la cual debe
permanecer completamente cerrada.
2. Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la
sesión práctica.
3. Lavar las manos con agua y jabón antes de realizar las actividades programadas,
antes de salir del laboratorio y siempre después de manejar materiales que se sabe o
se sospecha que son contaminantes.
4. Evitar llevar en el laboratorio, accesorios que podrían ser fuente de contaminación
(por ejemplo joyas).
5. Recoger el cabello largo.

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6. Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos (para evitar corrientes de
aire que ocasionen contaminación). Hablar sólo lo indispensable.
7. No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios,
aplicarse cosméticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningún área del
laboratorio.
8. Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las
actividades indicadas en la práctica. Si usted tiene alguna duda, diríjase al profesor.
9. Mantener el área de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos
personales, exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la realización
del trabajo práctico.
10. Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar éste
desatendido.
11. Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios y
de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad.
12. Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para tal
fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las ollas de
desecho, etc.
13. No usar ningún reactivo que no esté debidamente identificado, verificar las etiquetas
de los mismos y estar seguro de cómo emplearlo.
14. No devolver sustancias a sus envases originales.
15. Emplear la pipeta al medir líquidos. Está rigurosamente prohibido pipetear con la
boca. De igual manera las pipetas tendrán tapones de algodón para reducir la
contaminación de estos dispositivos de pipeteo.
16. Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo
experimentos no autorizados.
17. Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material
contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como
menor.
18. Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar la
inoculación accidental y la generación de aerosoles durante su manipulación y
desecho.
19. Emplear técnicas asépticas para el manejo de cultivos de microorganismos.

Medidas en caso de emergencia
1. Derrame de material biológico sobre el cuerpo:
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Remover la ropa inmediatamente.
Lavar vigorosamente el área expuesta con agua y jabón por un minuto.
Reportar el incidente al profesor. Buscar atención médica si es necesario.
La ropa contaminada debe ser colocada en una solución desinfectante antes
de ser lavada.

2. Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos:
∞ Lavar inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del párpado
con abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para
asegurar efectivamente el lavado, comenzando por los párpados. Reportar el
incidente al profesor.
3. Cortadas menores y heridas por pinchazo:
∞ Lavar vigorosamente la herida con agua y jabón por varios minutos. Aplicar
un antiséptico adecuado. Reportar el incidente al profesor
4. En el caso de derrames:
∞ Colocarse guantes y cubrir con papel absorbente el área del derrame.
∞ Verter un desinfectante adecuado y dejar actuar por el tiempo necesario.
∞ Retirar el material absorbente junto al material roto y colocarlos en un
recipiente para residuos contaminados o bolsa de desechos, la cual debe
esterilizarse junto con los guantes utilizados.
∞ Limpiar y desinfectar nuevamente el área empleando nuevas toallas de papel
y desinfectante. Lavarse las manos con abundante agua y jabón
Resultados:
Para esta práctica, todos los alumnos seguimos las normas de seguridad antes mencionadas
a seguir en un laboratorio de bacteriología y como resultado obtuvimos que todos
estuvimos en orden para no ocasionar ningún accidenten dentro del laboratorio o alguna
contaminación en nuestros medios.
Conclusión:
Para llevar a cabo un buen trabajo dentro el laboratorio, se deben seguir todas las normas
ates dichas, para no crear corrientes de aire contaminantes, hablar frente de nuestro cultivo,
y tener una buena siembra en cajas Petri con agar.
Referencias electrónicas:

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Garcés Alessandra (2008) Normas de seguridad en el laboratorio de microbiología
Recuperado de:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_normas_de_
bioseguridad.pdf Consultado: 25/sep/2015

PRACTICA No 2. ESTERILIZACIÓN EN EL LABORATORIO DE
BACTERIOLOGÍA
Objetivo:
Aplicar algunos métodos utilizados para la esterilización de medios de cultivo, materiales y
accesorios utilizados en el laboratorio de bacteriología, asimismo, aprender a utilizar

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cualquier forma de esterilización para eliminar de un objeto a utilizar o sustancias que
realicemos cualquier forma de vida utilizando la autoclave, la cinta testigo, y además
manejar cualquier otro método de esterilización.
Generalidades:
La esterilización es un mecanismo por el que se consigue la muerte o eliminación de todos
los microorganismos vivos de una muestra, medio, superficie o material de trabajo. Entre
los microorganismos vivos se incluyen bacterias, hongos, protistas, virus y sus formas de
resistencia. Un objeto esterilizado está, por lo tanto, totalmente libre de microorganismos,
no debemos confundir la esterilización con la desinfección en la que no se eliminan todos
los microorganismos, sino únicamente aquellos que pueden causar enfermedad o efectos
sobre los productos en los que se encuentran (en alimentos, cosméticos, etc). Un objeto
desinfectado, por lo tanto, no está estéril.
En el laboratorio de Microbiología la esterilización se puede utilizar como esterilización
preparativa o como esterilización final. La esterilización preparativa es la que se realiza
para mantener libre de microorganismos el material que vamos a utilizar antes de empezar
el trabajo en sí mismo o durante el proceso de trabajo (placas Petri, pipetas, medios de
cultivo, asas de siembra, hisopos, etc.). La esterilización final sin embargo tiene como
único fin destruir los microorganismos con los que se ha estado trabajando. En el primer
caso, la elección del proceso de esterilización se debe adecuar para preservar las
características de los diversos materiales o medios a esterilizar, pues algunos pueden ser
susceptibles de ser destruidos o alterados, durante los mecanismos de esterilización. Sin
embargo, en la esterilización final no es necesario considerar ni el tipo de medio de cultivo,
ni la posible alteración de materiales.
El material que se utiliza para determinación de microorganismos debe esterilizarse
previamente para liberarlo de la microbiota ambiental. Existen varios métodos de
esterilización los agentes físicos (calor seco, calor húmedo, radiaciones) y agentes químicos
(cloro y compuestos clorados, aldehídos, óxido de etileno, compuestos fenólicos y álcalis).
El agente más empleado es el calor, ya sea húmedo o seco, la efectividad del calor depende
de la temperatura y el tiempo de exposición.
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Agente antimicrobiano es un compuesto químico que inhibe el crecimiento o elimina
totalmente los microorganismos presentes, de acuerdo a su aspecto de acción puede ser
antibacteriano y antifungico, de acuerdo a su actividad o efecto de los microrganismos
puede ser:
∞ Estático que inhibe el crecimiento pero no elimina los microorganismos
(bacteriostáticos, fungistáticos).
∞ Cida que elimina totalmente los microorganismos (bactericida, fungicida).
Antiséptico compuesto que evita la sepsis (putrefacción por desnaturalización de
proteínas).
Métodos empleados para esterilización
Tabla 1. Métodos, fuentes y tipos de agentes esterilizantes empleados en microbiología.
Método

Fuente
Acción directa de la llama

Calor seco

Acción directa por
generadores de calor
Acción de agua caliente

Calor húmedo

Acción de vapor de agua
Ionizantes

Radiaciones
Ultravioleta

Filtración

Filtros

Tipos
Esterilización al rojo
Flameado
Incineración
Estufa de calor seco
Baño de maría hirviente
Calentamiento repetido
Ebullición directa
Autoclave
Rayos x
Rayos gamma
UV 260mn (ADN/ARN)
UV 280nm-230nm
(proteínas)
Filtros de diferente
composición, tamaño de
poro y estructura.

Métodos físicos
Calor seco
El calor seco produce desnaturalización de proteínas, efectos tóxicos por desecación de la
célula alcanzo niveles elevados de solutos, procesos oxidativos irreversibles, fusión y

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desorganización de las membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde
los materiales a los microrganismos que están en contacto con estos (tabla 1).
El horno de aire caliente es el equipo utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor
seco; se requiere mayor temperatura y tiempo de exposición que los métodos por calor
húmedo. La temperatura varía entre 120 y 180ºC, requiriéndose distintos tiempos de
exposición. A 140ºC se necesita por lo menos 5 horas d exposición, mientras que entre
160ºC a 180ºC se requieren al menos 2 horas de exposición el cual se utiliza para
esterilización de materiales de vidrio. Recuerde que el papel y el algodón no pueden ser
esterilizados a más de 160ºC.
Calor húmedo
El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se
deben principalmente a dos razones (tabla 1).
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el
aire, por lo que los materiales húmedos conducen el calor más rápidamente que los
materiales secos debido a la energía liberada a la energía liberada durante la condensación.
El autoclave es el equipo utilizado comúnmente en los laboratorios para esterilizar cultivos
y soluciones que no formen emulsiones con el agua y no se desnaturalizan a temperaturas
mayores de 100ºC. Una temperatura de 121ºC (una atmosfera de sobrepresión) con un
tiempo de exposición mayor a 15 minutos sirve para destruir microrganismos formadores
de esporas. Es necesaria la acción combinada de calor, tiempo y presión para conseguir la
destrucción celular.
Autoclave (calor húmedo)
El calor húmedo por medio de utilización de vapor de agua es el agente esterilizante más
frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye eficazmente lo microorganismos por
desnaturalización de proteínas y enzimas, y desestabilización de membranas.

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La esterilización con calor húmedo, se utiliza
principalmente con el autoclave. El autoclave,
desarrollado por CHAMBERLAND en 1884, es un
Figura 1: Autoclave
(http://www.fairdealtraders.com/products/enlarge/
autoclave-for-two-drums.jpg)

aparato (Figura 1) constituido por una caldera, que se
puede cerrar herméticamente con una tapa metálica y
que presenta una resistencia eléctrica en su interior
(antiguamente por gas) que calienta el agua. Este
aparato permite que en el interior de la caldera se

desplace el aire por una válvula de purga, dejando que se acumule posteriormente vapor
saturado a presión, que alcanza temperaturas superiores a los 100ºC sin que se produzca
ebullición.
Flameado (calor seco)
La
esterilización
rápida
durante
los
procedimientos de trabajo en microbiología se
realiza por flameado (Figura 2), mediante la
exposición directa y breve de los materiales a la
llama de un mechero. Este procedimiento está
especialmente indicado para la esterilización de
agujas y asas de siembra, o para la boca de los
tubos y matraces, ya estériles o con cultivos,
durante los procedimientos habituales de
manipulación de microorganismos y/o medios
estériles.

Figura 2: Utilización del mechero bunsen para
proteger el área de trabajo (Práctica de laboratorio
en el CBTis 13)

Los procesos de esterilización deben disponer de sistemas o mecanismos que nos permitan
garantizar y controlar que el proceso se ha realizado con éxito. Existen diferentes
mecanismos para ello; como son los sistemas de control físico. Lo más básico es el control
mecánico de las temperaturas (sensor de temperatura) que permita realizar un registro de
las temperaturas alcanzadas en el interior durante todo el proceso. Son sistemas requeridos
en los laboratorios acreditados y el sistema de control químico que son habitualmente
sistemas constituidos por cintas adhesivas impregnadas en compuestos químicos
termosensibles, los cuales son sensibles a radiaciones o al óxido de etileno que cambian de
color si el proceso se ha desarrollado de forma correcta, es decir, si se ha alcanzado la
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temperatura adecuada, si ha sido irradiado, o si ha
estado expuesto a óxido de etileno. Estás tiras se
adhieren al material a esterilizar de forma que el
cambio de color supone una garantía de la
temperatura alcanzada estos se utiliza de forma
rutinaria en los laboratorios de microbiología
(Figura 3).

Figura 3: Cinta testigo
(http://www.pscolombia.com/img/cinta_sogeva.jp
g)

Método
1. Colocar agua en la olla hasta cubrir la resistencia (no colocar agua en la camisa), el
nivel del agua debe mantenerse en cada ciclo de esterilización.
2. Colocar el material a esterilizar dentro de la camisa, colocando previamente la
rejilla en el fondo (figura 4 y figura 5).
3. Introducir la camisa
4. Tapar la olla haciendo coincidir las flechas impresas en la tapa y en la olla,
insertando el tubo flexible en el canal dispuesto en la pared interior de la camisa.
5. Apretar los tornillos haciendo cierre lateral, simultáneo y uniforme. No use llaves
para apretar y mantenga las superficies de contacto de la tapa y el borde interno de
la olla perfectamente limpio y lubricado.
6. Abrir la válvula de seguridad colocándola en posición vertical. El vapor generado
en la base del esterilizados, pasa hacia arriba y por fuera del recipiente y luego hacia
abajo a través de los paquetes hasta la base del recipiente, empujando hacia afuera
desde la base a través del tubo flexible de escape y la válvula de seguridad; es
importante que la corriente de vapor elimine por completo el aire de la cámara de lo
contario la temperatura alcanzada es mucho menor.
7. Cuando el vapor escapa vigorosamente se debe colocar la válvula en posición
horizontal.
8. A partir de entonces la presión y la temperatura empezaran aumentar, lo cual se verá
indicado en la aguja del manómetro.
9. Permitir que la aguja llegue a 121ºC y 15 libras de presión, es a partir de este
momento que se empieza a contabilizar el tiempo de esterilización.
10. Tenga en cuenta los siguientes tiempos de esterilización: 10 a 15 minutos para
materia limpio; 30 a 40 minutos para material contaminado.

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11. Al finalizar el periodo de esterilización, apagar el autoclave y permitir que el
nanómetro baje a cero, levante la válvula para que escape el vapor restante y
procede a destapar la olla desenroscando los tornillos opuestos simultáneamente.

Figura 5: Medios de cultivo a esterilizar (Práctica de
laboratorio en el CBTis 13)

Figura 4: Colocación de los materiales a esterilizar
(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Resultado
En esta práctica esterilizamos los materiales a utilizar en la realización delos medio de
cultivo además esterilizamos en la autoclave los medios de cultivo para porder realizarlos
correctamente.
Conclusión
Se llegó a la conclusión que debemos saber toda la teoría desde como abrí asta como cerrar
el autoclave para que así podamos obtener un buen trabajo, ya que de lo contrario
podríamos ocasionar algún accidente y no esterilizar como es debido, además aprendimos
que existen otros diferentes métodos de esterilizar dependiendo lo que se quiera esterilizar.
Referencia electrónica
Caballero Eric (2014) Formas de esterilización en el laboratorio de microbiología
recuperado de: http://www.eurotherm.es/industries/life/sterilization/ consultado:
29/sep/2015

PRACTICA No 3. MEDIOS DE CULTIVO
Objetivo
Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de
microorganismos, siguiendo las indicaciones que cada bote de agar a utilizar trae anotado
en su modo de utilizar aplicando los conceptos básicos de nutrición y preparación de los
mismos. Aprender y desarrollar los puntos clave que deben tenerse en cuenta antes, durante
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y después de la preparación de un medio de cultivo, asimismo, preparar algunos medios de
cultivo, líquidos o sólidos, siguiendo las instrucciones proporcionadas.
Generalidades
Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos nutrientes básicos
y factores físicos para el mantenimiento de su vida, estas necesidades varían según el tipo
de microorganismo y es necesario conocerlas para cultivarlos en el laboratorio.
Las necesidades nutricionales básicas pueden suministrarse en el laboratorio, mediante el
uso de medios de cultivo artificiales, los cuales se encuentran disponibles en una gran
variedad y los cuales en general aportan a los microorganismos:
1. Una fuente de carbono. El carbono es un componente esencial y central para
conformar la estructura celular y permitir a la célula realizar todas sus funciones.
Según la fuente de carbono los microorganismos se encuentran en dos grupo:
Autótrofos y heterótrofos. Los organismos autótrofos pueden cultivarse en medios que
contengan únicamente compuestos inorgánicos (utilizan principalmente dióxido de
carbono como carbono inorgánico). Los organismos heterótrofos en su lugar necesitan
un suministro de carbono orgánico (por ejemplo glucosa u otro carbohidrato).
2. Una fuente de Nitrógeno. Elemento esencial para que la célula construya
macromoléculas como: proteínas y ácidos nucleicos. Algunos microorganismos usan
nitrógeno atmosférico, otros emplean sales de nitrato o de amonio como compuestos
inorgánicos, así como, otros requieren compuestos orgánicos que contengan nitrógeno
como los aminoácidos.
3. Elementos no metálicos. Iones no metálicos como el azufre y el fósforo. El azufre
puede encontrarse en proteínas, sulfatos o como azufre elemental; mientras el que el
fósforo puede encontrarse formando sales.
4. Elementos metálicos. (Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, Fe +2 y Fe+3). Llamados también
micronutrientes, oligoelementos o elementos traza. Encontrados en sales inorgánicas
adicionadas a los medios y los cuales son tomados en bajas concentraciones por los
microorganismos.
5. Vitaminas. Los microorganismos pueden tomarlas del medio ya elaboradas o iniciar
procesos de síntesis de las mismas. Algunos microorganismos poseen una variedad de

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vías para sintetizar vitaminas; mientras otros, sintetizan un número muy limitado de
ellas a partir de componentes del medio. Otros las requieren como suministro.
6. Agua.
7. Energía. Existen dos tipos bioenergéticos de microorganismos, los fotótrofos y los
quimiótrofos. Los fotótrofos emplean la energía radiante (luz solar), como única
fuente de energía; y los quimiótrofos que, obtienen la energía por oxidación de
compuestos químicos orgánicos o inorgánicos.
Las necesidades físicas involucran factores, como: Temperatura, pH y gases, los cuales se
encuentran en un rango óptimo específico para cada microorganismo; por lo tanto, su
variación puede acelerar o disminuir el crecimiento.
Un medio de cultivo es una solución acuosa (bien como tal o, bien incorporada a un coloide
en estado de gel), en las que están presentes todas las sustancias necesarias para el
crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s) (Tabla 2).
Propiedades de los medios de cultivo.
∞ Humedad. Indispensable para el crecimiento de microorganismos, su carencia
(desecación) puede llevar a la muerte del microorganismo.
∞ Fertilidad. Se refieren a los elementos o compuestos básicos que permiten el
crecimiento bacteriano.
∞ pH. Se refiere a los pH óptimos para el desarrollo bacteriano, indispensable para su
aislamiento; variaciones ácidas o alcalinas, pueden inhibir su crecimiento.
∞ Transparencia. Permite la observación bacteriológica, evidenciar morfológica y
físicamente su crecimiento en medios de cultivo adecuado.
Tabla 2. Clasificación de los medios de cultivo de acuerdo a su estado físico, composición
y su propósito.
Clasificación

Según su estado
físico

Estado/composición/o
bjetivo
Sólidos:
Semisólidos:
Líquidos:
Bifásico:
Naturales:

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Descripción
1.5 a 2.0 % de agar – agar.
0.5 % de agar – agar.
No contienen agar – agar.
Contiene fase sólida y fase líquida
(listos para utilizar).
Utilizados
para
cultivar
microorganismos tal y como se

Según su
naturaleza o
composición

Según su propósito
(aislamiento de
microorganismos)

encuentran en la naturaleza. Se usan con
base a la experiencia y no a su
composición. Ej.: Sangre diluida, leche,
jugos vegetales, etc.
Sintéticos
De composición exactamente conocida.
Los más utilizados son los medios
comerciales deshidratados.
Vivos
Aislamiento de microorganismos que
contienen células u organismos vivos,
como las células de riñón de mono o
huevos embrionados.
Medios enriquecidos
Con adición de sangre, suero o extractos
de tejidos de animales o plantas al caldo
o agar, proporcionando sustancias
nutritivas complementarias para el
crecimiento
de
microorganismos
exigentes.
Medios selectivos*
Con adición de algunas sustancias que
no permiten el desarrollo de un grupo de
microorganismos y sin afectar el
desarrollo de los grupos de interés. En
principio se pueden seleccionar los
microorganismos que se desarrollan en
medios orgánicos poco comunes, caso
en el cual se omiten otros compuestos de
carbono.
Medios diferenciales* Contienen reactivos químicos que traen
como resultado, determinado tipo de
crecimiento bacteriano después de la
incubación (observación de hemólisis,
coloraciones de las colonias y otras
reacciones indicadoras).
Medios
para Para determinar el tipo de crecimiento
identificación

producido por los microorganismos, así
como,

la

capacidad

para

producir

cambios químicos.
*Existen medios que pueden cumplir funciones mixtas, es decir, permiten aislar
microorganismos y revelan una reacción o cambio químico especifico de
metabolismo como coloraciones de colonias o cambios de color del medio, es decir

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selectivos y diferenciales al mismo tiempo.
Clasificación de los medios de cultivo:
∞ Según su origen
Naturales son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal
como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce
exactamente.
Sintéticos son los medios que contienen una composición química definida
cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
Semisintéticos son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una
forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
∞ Según su consistencia:
Líquidos se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución acuosa.
Sólidos se preparan añadiendo un agar a un medio líquido a razón de 15g/litro. El agar es
una sustancia inerte polisacárido (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta
sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningún elemento nutritivo. Este
conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de
ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no
eran posibles en medio líquido".
Semisólidos contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad
de las especies en estudio. Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el
agregado de agar.
∞ Según su composición:
Comunes o universales su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los
microorganismos poco existentes. Es el medio más frecuentemente utilizado para mantener
colonias microbianas. Por ejemplo: agar común o caldo común.

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Enriquecidos están compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le
puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo:
sangre, suero, líquido ascítico, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes
exigencias nutricionales.
Selectivos son sólidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones
físicas del medio o añadiendo o suprimiendo componentes químicos específicos con el fin
de inhibir el crecimiento de especies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de
medio sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el de
otros.
Clases de medios de cultivo.
∞ Medios simples.
Agar Nutritivo: Contiene extracto de carne, peptona y agar-agar.
Caldo Nutritivo: Contiene extracto acuoso de carne adicionado de peptona al 1% y
Cloruro de Sodio al 0.5% (Ej.: Caldo BHI (Brain Heart Infusion/Infusión Cerebro
Corazón), Caldo TSB (Caldo de Soya Tripticasa), y Caldo Nutritivo).
Agar Base Sangre: Medio sólido que contiene peptona, enriquecido con sangre desfibrada
de conejo al 7%; usado para el desarrollo de todo tipo de bacterias y especialmente para
observar la actividad hemolítica.

∞ Medios enriquecidos.
Agar Sangre: Al medio Agar Sangre se le adiciona sangre de conejo desfibrada al 7%
estéril, cuando este tiene una temperatura de 45ºC y luego de su esterilización (la fuente de
sangre debe ser estéril).

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Agar Chocolate: Consiste en un agar sangre que antes de su solidificación se lleva a 100º
C/1min., (llevar a ebullición); así, se rompen los glóbulos rojos y el medio toma un color
café. Se usa para el aislamiento de Haemophilus spp., y Neisseria spp.
Medio de Tioglicolato: Permite el aislamiento de aerobios tolerantes y anaerobios. Debe
conservarse en la oscuridad y en tubos tapa rosca de manera que, la anaerobiosis se
mantenga en el fondo y la aerobiosis en la superficie del medio.

Método
1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo asignado
(figura 6).
2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cada
uno de los ingredientes según las instrucciones del fabricante.
3. Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo.
4. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante. Si es
necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar (figura 7).
5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones señaladas por el
profesor.
6. Esterilizar de inmediato el medio de cultivo siguiendo las instrucciones. En
autoclave a temperatura de 121ºC y por 15 minutos (figura 8).
7.

Después de esterilizar, esperar que se enfrié a 42°C (figura 9).

8. Verter el medio a una caja Petri o tubo de ensaye.
9. Se deja enfriar hasta que solidifique (figura 10).

Figura 6: indicaciones del fabricante
(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 7: Medio de cultivo disolviéndose
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(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 9: agar enfriándose a 42ºC
(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 8: Medio de cultivo a esterilizar
(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 10: Medio de cultivo solidificado
(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Resultados
Para

esta

práctica realizamos tres agares, sal y manitol,
agar sangre y mueller hinton (figura 11). El
primer

agar

mencionado

lo

preparamos

correctamente, sin equivocaciones, pero el
segundo que es el agar sangre salió mal, ya que
se coagulo cuando vertimos la sangre, ya que se
enfrió demasiado y ya no se mezcló bien con la

Figura 11: Agar sal y manitol, agar sangre
y muller miton solidificados. (Práctica de
laboratorio en el CBTis 13)

sangre, lo tuvimos que desechar como es debido, y lo realizamos de nuevo pero esta vez
quedo correctamente y el tercero, muller hinton, nos quedó correctamente ya que teníamos
la experiencia de haber realizado los otros dos pasados.
Conclusión:
En la preparación de medios de cultivos podemos encontrar varias clasificaciones de ellos,
ya que hay tres comunes, enriquecidos y selectivos, para prepararlos debemos saber qué
tipo de bacteria se va sembrar. También hay demasiados tipos de agares que sirven para
aislar cualquier tipo de bacteria.
Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el análisis de
microorganismos con varios fines, como el de multiplicación, identificación, antibiograma,
entre otros, y puede ofrecer información valiosa sobre los mismos si se realiza de manera

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adecuada e higiénica para evitar la contaminación del medio y la alteración de los
resultados.
Referencias electrónicas:
López Tévez, Leonor; Torres, Carola (2013) Medios de cultivo en un laboratorio de
microbiología recuperado de: http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf

PRACTICA No 4. SIEMBRA DE EXUDADO FARINGEO
Objetivo:
Saber realizar un exudado faríngeo a un paciente y hacer una siembra en el medio de
cultivo, previamente preparado y ya solidificado. Identificando aquellos microorganismos
que son causantes de infecciones en la garganta y así poder analizar cada bacteria que se
desarrolle.

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Generalidades:
El cultivo del exudado faríngeo o frotis faríngeo se realiza utilizando un hisopo especial
para detectar la presencia de estreptococo grupo A, que es la causa más común de la
faringitis estreptocócica.
El tracto respiratorio habitual (la faringe) está formado por distintos microorganismos entre
los que destacan los siguientes grupos y especies: estreptococos, estafilococos, micrococos,
neisserias, Moraxella catarrhalis, corinebacterias, Haemophilus spp, Porphyromonas,
Prevotella, Fusobacterium, Veillonela, Peptostreptococcus, Actinomyces, etc. Sin embargo,
cuando encontramos una patología en la faringe, el agente etiológico más frecuentemente
aislado es el Streptococcus pyogenes, pero también, otros microorganismos patógenos que
podemos hallar son: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus alfa-hemolítico grupo
viridans, etc.
Una muestra tomada de la pared posterior de la garganta se coloca en un medio de cultivo
que permite el crecimiento de las bacterias. El tipo específico de infección se determina
utilizando análisis químicos. Si no hay crecimiento de bacterias, el cultivo es negativo y la
persona no tiene una infección estreptocócica.
La faringitis estreptocócica es una infección bacteriana que afecta la parte posterior de la
garganta y las amígdalas, que se inflaman e irritan, lo cual provoca dolor de garganta
particularmente molesto al tragar. Es posible que la garganta y las amígdalas presenten
manchas o una capa de color amarillo y los ganglios linfáticos del cuello estén inflamados.
Algunos ejemplos de infecciones que pueden encontrarse durante un cultivo del exudado
faríngeo incluyen:
∞ Candida albicans: Este hongo causa aftas, una infección de la boca y la lengua y, a
veces, de la garganta.

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∞ Estreptococo del Grupo A: Esta bacteria puede causar faringitis estreptocócica,
escarlatina y fiebre reumática. Si la faringitis estreptocócica es probable, puede
hacerse una prueba que se llama prueba rápida de estreptococos antes de un cultivo
del exudado faríngeo. Con una prueba rápida de estreptococos, los resultados están
listos en 10 minutos en vez de demorarse 1 o 2 días con un cultivo del exudado
faríngeo. Si los resultados de la prueba rápida de estreptococos son positivos, puede
comenzarse de inmediato con los antibióticos. Un cultivo del exudado faríngeo es
más exacto que la prueba rápida de estreptococos. La prueba rápida de
estreptococos puede dar resultados negativos falsos aun cuando las bacterias de
estreptococo estén presentes. Cuando los resultados de una prueba rápida de
estreptococos son negativos, muchos médicos recomiendan realizar un cultivo del
exudado faríngeo para asegurarse de que no haya faringitis estreptocócica.
∞ Neisseria meningitidis: Esta bacteria puede causar meningitis.
Si se multiplican bacterias en el cultivo, pueden hacerse otras pruebas para determinar qué
antibiótico tratará mejor la infección. Estas se llaman pruebas de susceptibilidad o de
sensibilidad.
La mayoría de los dolores de garganta son causados por una infección con un virus, como
un catarro o una gripe. No se hacen cultivos de garganta para infecciones virales porque es
muy difícil cultivar virus y es costoso.

Método:
1. Se dispondrá de los hisopos, y se evitara rozar cualquier parte de la lengua.
2. Se sentara al paciente y colocar su cabeza hacia atrás iluminar bien la cavidad
orofaríngea y con un abate lengua para facilitar el obseso a la parte posterior de la
faringe.

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3. Con un hisopo (previamente esterilizado), hacer un raspado firme, haciendo girar el
hisopo, en las áreas dañadas que deben verse hiperémicas, purulantes o necróticas y
también en las membranas formadas sobre las lesiones o de las manchas de Koplic.
4. En el medio de cultivo previamente realizado, colocar el hisopo haciendo como un
óvalo (figura 12).
5. Con el aza bacteriológica (previamente esterilizada) hacer la estría como es debido
(figura 13).
6. Encubar la muestra de 24 a 48 hrs a la temperatura adecuada.

Figura 13: Estría de exudado faríngeo en agar
(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 12: Hisopo con exudado faríngeo en agar
(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Resultados:
Se

realizaron

cuatro

exudados faríngeos los cuales se

colocaron en los medios de cultivo antes realizados y solidificados, al pasar unos cuantos
días se observó en los cultivos que el paciente tenía bacterias, ya que se reprodujeron unas
bacterias de color rosado (figura14), sin embargo había otras que ya habían envejecido por
que las dejamos más del tiempo correspondiente, la que ya estaban viejas se observaban de
un color grisáceo.
Figura 13: Exudado faríngeo con bacterias.
(Práctica de laboratorio en el CBTis 13)

Conclusión:

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Después de haber realizado esta práctica, nos pudimos dar cuenta que en este mecanismo
en particular se debe ser muy cuidadoso ya que si calentamos el aza bacteriológica y no
esperamos a enfriar puede romper las bacteria obtenidas en el exudado faríngeo y así ya no
se podrían desarrollar correctamente las bacterias y el medio de cultivo no serviría.
Referencias electrónicas:
Personal de Healthwise (2015) Cultivo del exudado faríngeo Recuperado de:
http://www.uwhealth.org/spanishhealth/topic/medicaltest/cultivo-del-exudado-far
%C3%ADngeo/hw204006.html consultado: 26/sep/2015

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