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INDICE

INTRODUCCIN..............................
Practica No 1.

Reglas de seguridad del laboratorio de bacteriologa...


Practica No 2.

4-8

Esterilizacin en el laboratorio de bacteriologa.......


Practica No 3.

9-14

Medios de cultivo..........
Practica No 4.

15-22

Siembra de exudado farngeo....

23-26

Introduccin
La microbiologa tiene numerosas reas o ramas con fundamentos tcnicos comunes, pero
cada rama tiene sus caractersticas particulares, dado que hay diversos tipos de
microorganismos hallados en diferentes hbitats. Una de estas divisiones es la bacteriologa
mdica que estudia aquellas bacterias, que afectan la salud del hombre, especialmente por
su capacidad patgena. De tal manera que la bacteriologa es una rama de la microbiologa
que estudian a las bacterias.
Este trabajo tiene como objetivo dar a conocer las prcticas realizadas en el laboratorio de
bacteriologa, en el cual incluir:
Objetivo en el cual da a conocer lo que se aprender en cada prctica.
Generalidades en este apartado se encontrara las definiciones e informacin de las
palabras claves utilizadas en cada prctica.
Mtodo da a conocer el procedimiento que se debe utilizar para cada una de esas
prcticas
Resultados se encontrara el producto obtenido al realizar cada practica en el
laboratorio de bacteriologa
Conclusin aqu se encontraran las opiniones de nosotros al concluir dicha prctica.
Con estas prcticas realizadas en el laboratorio de bacteriologa aprendimos a realizar
medios de cultivo y sembrar en ellos, tambin las normas que hay que seguir para no
provocar accidentes o la contaminacin de los medios de cultivo y lograr aislar las bacterias
que crecen en ellos, as como esterilizar dependiendo los materiales a esterilizar.

PRACTICA No 1. REGLAS DE SEGURIDAD PARA EL LABORATORIO DE


BACTERIOLOGA
Objetivo:
Aplicar las reglas bsicas de higiene y seguridad para los laboratorios del rea
microbiolgica. Analizar y aprender la importancia que tiene cada una de estas reglas, tanto
en las actividades acadmicas de aprendizaje, como en el ejercicio profesional.
Generalidades:
Microbiologa es la ciencia encargada del estudio de los organismos microscpicos
(celulares y subcelulares), principalmente de aquellos que se encuentran por debajo del
poder de resolucin del ojo humano.
Microbiologa mdica estudia los microorganismos que son responsables de las
principales enfermedades infecciosas de los humanos.
Bacteriologa es la rama de la biologa que estudia la morfologa, ecologa, gentica y
bioqumica de las bacterias.
Microorganismo es un organismo vivo que requiere de montajes especiales para su
observacin bajo microscopio.
Principios de bioseguridad
La seguridad biolgica o bioseguridad, es la aplicacin del conocimiento, de las tcnicas
y de los equipos necesarios para prevenir la exposicin del personal, del rea de laboratorio
y del medio ambiente a agentes potencialmente infecciosos o biopeligrosos.
Agentes biopeligrosos son todos aquellos agentes biolgicos y materiales que son
potencialmente peligrosos para los seres humanos, los animales y las plantas. Entre ellos
podemos citar: bacterias, virus, hongos, parsitos, productos recombinantes, alergenos,
priones, etc.
El Riesgo Microbiolgico se encuentra presente cada vez que se realiza una actividad
prctica en el Laboratorio, donde se requiera la manipulacin de cultivos de
microorganismos, los cuales pueden alcanzar concentraciones muy elevadas y pueden
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llegar a provocar una infeccin si no son manipulados adecuadamente. Para que se


produzca un accidente por un agente biolgico deben estar presentes bsicamente 4
elementos: un husped susceptible, un agente infeccioso, una concentracin suficiente de
ste y una ruta de transmisin adecuada; siendo este ltimo punto el que mejor se puede
controlar en el laboratorio.
Vas de infeccin
Los microorganismos pueden ingresar al organismo a travs de: la boca, los pulmones, la
piel (intacta o lesionada), la conjuntiva, etc. Las vas de contaminacin ms frecuentes en el
laboratorio se dan a travs de:
La boca: Comer, beber y fumar en el laboratorio; realizar transferencias con pipetas sin
utilizar ningn tipo de proteccin y por transferencia indirecta de microorganismos a travs
de los dedos o utensilios contaminados (lpices, bolgrafos, etc.).
La piel: Inoculacin accidental con una aguja hipodrmica u otros instrumentos punzantes
o de vidrio y Cortaduras o rasguos.
Los ojos: Salpicaduras de materiales infecciosos y Transferencia indirecta de
microorganismos a travs de los dedos contaminados.
Los pulmones: Inhalacin de microorganismos transportados por el aire (aerosoles).
Mtodo:
1. Entrar al laboratorio en forma ordenada portando bata de laboratorio la cual debe
permanecer completamente cerrada.
2. Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar la
sesin prctica.
3. Lavar las manos con agua y jabn antes de realizar las actividades programadas,
antes de salir del laboratorio y siempre despus de manejar materiales que se sabe o
se sospecha que son contaminantes.
4. Evitar llevar en el laboratorio, accesorios que podran ser fuente de contaminacin
(por ejemplo joyas).
5. Recoger el cabello largo.

6. Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos (para evitar corrientes de


aire que ocasionen contaminacin). Hablar slo lo indispensable.
7. No comer, beber, fumar, almacenar comida, objetos personales o utensilios,
aplicarse cosmticos ni ponerse o quitarse lentes de contacto en ningn rea del
laboratorio.
8. Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar las
actividades indicadas en la prctica. Si usted tiene alguna duda, dirjase al profesor.
9. Mantener el rea de trabajo ordenada, libre de libros, cuadernos u objetos
personales, exceptuando aquellos equipos y materiales necesarios para la realizacin
del trabajo prctico.
10. Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar ste
desatendido.
11. Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios y
de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad.
12. Colocar los materiales de vidrio contaminados en los recipientes dispuestos para tal
fin, por ejemplo: las pipetas en los pipeteros, tubos y placas de Petri en las ollas de
desecho, etc.
13. No usar ningn reactivo que no est debidamente identificado, verificar las etiquetas
de los mismos y estar seguro de cmo emplearlo.
14. No devolver sustancias a sus envases originales.
15. Emplear la pipeta al medir lquidos. Est rigurosamente prohibido pipetear con la
boca. De igual manera las pipetas tendrn tapones de algodn para reducir la
contaminacin de estos dispositivos de pipeteo.
16. Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo
experimentos no autorizados.
17. Reportar inmediatamente cualquier accidente al profesor (derrame de material
contaminado, heridas, quemaduras, etc.), ninguno puede ser catalogado como
menor.
18. Extremar las precauciones cuando se utilicen agujas y jeringas para evitar la
inoculacin accidental y la generacin de aerosoles durante su manipulacin y
desecho.
19. Emplear tcnicas aspticas para el manejo de cultivos de microorganismos.

Medidas en caso de emergencia


1. Derrame de material biolgico sobre el cuerpo:
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Remover la ropa inmediatamente.


Lavar vigorosamente el rea expuesta con agua y jabn por un minuto.
Reportar el incidente al profesor. Buscar atencin mdica si es necesario.
La ropa contaminada debe ser colocada en una solucin desinfectante antes
de ser lavada.

2. Salpicaduras en los ojos con materiales biopeligrosos:


Lavar inmediatamente el globo ocular e interior de la superficie del prpado
con abundante agua durante 15 minutos aproximadamente. Abrir el ojo para
asegurar efectivamente el lavado, comenzando por los prpados. Reportar el
incidente al profesor.
3. Cortadas menores y heridas por pinchazo:
Lavar vigorosamente la herida con agua y jabn por varios minutos. Aplicar
un antisptico adecuado. Reportar el incidente al profesor
4. En el caso de derrames:
Colocarse guantes y cubrir con papel absorbente el rea del derrame.
Verter un desinfectante adecuado y dejar actuar por el tiempo necesario.
Retirar el material absorbente junto al material roto y colocarlos en un
recipiente para residuos contaminados o bolsa de desechos, la cual debe
esterilizarse junto con los guantes utilizados.
Limpiar y desinfectar nuevamente el rea empleando nuevas toallas de papel
y desinfectante. Lavarse las manos con abundante agua y jabn
Resultados:
Para esta prctica, todos los alumnos seguimos las normas de seguridad antes mencionadas
a seguir en un laboratorio de bacteriologa y como resultado obtuvimos que todos
estuvimos en orden para no ocasionar ningn accidenten dentro del laboratorio o alguna
contaminacin en nuestros medios.
Conclusin:
Para llevar a cabo un buen trabajo dentro el laboratorio, se deben seguir todas las normas
ates dichas, para no crear corrientes de aire contaminantes, hablar frente de nuestro cultivo,
y tener una buena siembra en cajas Petri con agar.
Referencias electrnicas:

Garcs Alessandra (2008) Normas de seguridad en el laboratorio de microbiologa


Recuperado de:
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_normas_de_
bioseguridad.pdf Consultado: 25/sep/2015

PRACTICA No 2. ESTERILIZACIN EN EL LABORATORIO DE


BACTERIOLOGA
Objetivo:
Aplicar algunos mtodos utilizados para la esterilizacin de medios de cultivo, materiales y
accesorios utilizados en el laboratorio de bacteriologa, asimismo, aprender a utilizar

cualquier forma de esterilizacin para eliminar de un objeto a utilizar o sustancias que


realicemos cualquier forma de vida utilizando la autoclave, la cinta testigo, y adems
manejar cualquier otro mtodo de esterilizacin.
Generalidades:
La esterilizacin es un mecanismo por el que se consigue la muerte o eliminacin de todos
los microorganismos vivos de una muestra, medio, superficie o material de trabajo. Entre
los microorganismos vivos se incluyen bacterias, hongos, protistas, virus y sus formas de
resistencia. Un objeto esterilizado est, por lo tanto, totalmente libre de microorganismos,
no debemos confundir la esterilizacin con la desinfeccin en la que no se eliminan todos
los microorganismos, sino nicamente aquellos que pueden causar enfermedad o efectos
sobre los productos en los que se encuentran (en alimentos, cosmticos, etc). Un objeto
desinfectado, por lo tanto, no est estril.
En el laboratorio de Microbiologa la esterilizacin se puede utilizar como esterilizacin
preparativa o como esterilizacin final. La esterilizacin preparativa es la que se realiza
para mantener libre de microorganismos el material que vamos a utilizar antes de empezar
el trabajo en s mismo o durante el proceso de trabajo (placas Petri, pipetas, medios de
cultivo, asas de siembra, hisopos, etc.). La esterilizacin final sin embargo tiene como
nico fin destruir los microorganismos con los que se ha estado trabajando. En el primer
caso, la eleccin del proceso de esterilizacin se debe adecuar para preservar las
caractersticas de los diversos materiales o medios a esterilizar, pues algunos pueden ser
susceptibles de ser destruidos o alterados, durante los mecanismos de esterilizacin. Sin
embargo, en la esterilizacin final no es necesario considerar ni el tipo de medio de cultivo,
ni la posible alteracin de materiales.
El material que se utiliza para determinacin de microorganismos debe esterilizarse
previamente para liberarlo de la microbiota ambiental. Existen varios mtodos de
esterilizacin los agentes fsicos (calor seco, calor hmedo, radiaciones) y agentes qumicos
(cloro y compuestos clorados, aldehdos, xido de etileno, compuestos fenlicos y lcalis).
El agente ms empleado es el calor, ya sea hmedo o seco, la efectividad del calor depende
de la temperatura y el tiempo de exposicin.
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Agente antimicrobiano es un compuesto qumico que inhibe el crecimiento o elimina


totalmente los microorganismos presentes, de acuerdo a su aspecto de accin puede ser
antibacteriano y antifungico, de acuerdo a su actividad o efecto de los microrganismos
puede ser:
Esttico que inhibe el crecimiento pero no elimina los microorganismos
(bacteriostticos, fungistticos).
Cida que elimina totalmente los microorganismos (bactericida, fungicida).
Antisptico compuesto que evita la sepsis (putrefaccin por desnaturalizacin de
protenas).
Mtodos empleados para esterilizacin
Tabla 1. Mtodos, fuentes y tipos de agentes esterilizantes empleados en microbiologa.
Mtodo

Fuente
Accin directa de la llama

Calor seco

Accin directa por


generadores de calor
Accin de agua caliente

Calor hmedo

Accin de vapor de agua


Ionizantes

Radiaciones
Ultravioleta

Filtracin

Filtros

Tipos
Esterilizacin al rojo
Flameado
Incineracin
Estufa de calor seco
Bao de mara hirviente
Calentamiento repetido
Ebullicin directa
Autoclave
Rayos x
Rayos gamma
UV 260mn (ADN/ARN)
UV 280nm-230nm
(protenas)
Filtros de diferente
composicin, tamao de
poro y estructura.

Mtodos fsicos
Calor seco
El calor seco produce desnaturalizacin de protenas, efectos txicos por desecacin de la
clula alcanzo niveles elevados de solutos, procesos oxidativos irreversibles, fusin y

desorganizacin de las membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde


los materiales a los microrganismos que estn en contacto con estos (tabla 1).
El horno de aire caliente es el equipo utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor
seco; se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que los mtodos por calor
hmedo. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de
exposicin. A 140C se necesita por lo menos 5 horas d exposicin, mientras que entre
160C a 180C se requieren al menos 2 horas de exposicin el cual se utiliza para
esterilizacin de materiales de vidrio. Recuerde que el papel y el algodn no pueden ser
esterilizados a ms de 160C.
Calor hmedo
El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se
deben principalmente a dos razones (tabla 1).
El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el
aire, por lo que los materiales hmedos conducen el calor ms rpidamente que los
materiales secos debido a la energa liberada a la energa liberada durante la condensacin.
El autoclave es el equipo utilizado comnmente en los laboratorios para esterilizar cultivos
y soluciones que no formen emulsiones con el agua y no se desnaturalizan a temperaturas
mayores de 100C. Una temperatura de 121C (una atmosfera de sobrepresin) con un
tiempo de exposicin mayor a 15 minutos sirve para destruir microrganismos formadores
de esporas. Es necesaria la accin combinada de calor, tiempo y presin para conseguir la
destruccin celular.
Autoclave (calor hmedo)
El calor hmedo por medio de utilizacin de vapor de agua es el agente esterilizante ms
frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye eficazmente lo microorganismos por
desnaturalizacin de protenas y enzimas, y desestabilizacin de membranas.

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La esterilizacin con calor hmedo, se utiliza


principalmente con el autoclave. El autoclave,
desarrollado por CHAMBERLAND en 1884, es un
Figura 1: Autoclave
(http://www.fairdealtraders.com/products/enlarge/
autoclave-for-two-drums.jpg)

aparato (Figura 1) constituido por una caldera, que se


puede cerrar hermticamente con una tapa metlica y
que presenta una resistencia elctrica en su interior
(antiguamente por gas) que calienta el agua. Este
aparato permite que en el interior de la caldera se

desplace el aire por una vlvula de purga, dejando que se acumule posteriormente vapor
saturado a presin, que alcanza temperaturas superiores a los 100C sin que se produzca
ebullicin.
Flameado (calor seco)
La
esterilizacin
rpida
durante
los
procedimientos de trabajo en microbiologa se
realiza por flameado (Figura 2), mediante la
exposicin directa y breve de los materiales a la
llama de un mechero. Este procedimiento est
especialmente indicado para la esterilizacin de
agujas y asas de siembra, o para la boca de los
tubos y matraces, ya estriles o con cultivos,
durante los procedimientos habituales de
manipulacin de microorganismos y/o medios
estriles.

Figura 2: Utilizacin del mechero bunsen para


proteger el rea de trabajo (Prctica de laboratorio
en el CBTis 13)

Los procesos de esterilizacin deben disponer de sistemas o mecanismos que nos permitan
garantizar y controlar que el proceso se ha realizado con xito. Existen diferentes
mecanismos para ello; como son los sistemas de control fsico. Lo ms bsico es el control
mecnico de las temperaturas (sensor de temperatura) que permita realizar un registro de
las temperaturas alcanzadas en el interior durante todo el proceso. Son sistemas requeridos
en los laboratorios acreditados y el sistema de control qumico que son habitualmente
sistemas constituidos por cintas adhesivas impregnadas en compuestos qumicos
termosensibles, los cuales son sensibles a radiaciones o al xido de etileno que cambian de
color si el proceso se ha desarrollado de forma correcta, es decir, si se ha alcanzado la
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temperatura adecuada, si ha sido irradiado, o si ha


estado expuesto a xido de etileno. Ests tiras se
adhieren al material a esterilizar de forma que el
cambio de color supone una garanta de la
temperatura alcanzada estos se utiliza de forma
rutinaria en los laboratorios de microbiologa
(Figura 3).

Figura 3: Cinta testigo


(http://www.pscolombia.com/img/cinta_sogeva.jp
g)

Mtodo
1. Colocar agua en la olla hasta cubrir la resistencia (no colocar agua en la camisa), el
nivel del agua debe mantenerse en cada ciclo de esterilizacin.
2. Colocar el material a esterilizar dentro de la camisa, colocando previamente la
rejilla en el fondo (figura 4 y figura 5).
3. Introducir la camisa
4. Tapar la olla haciendo coincidir las flechas impresas en la tapa y en la olla,
insertando el tubo flexible en el canal dispuesto en la pared interior de la camisa.
5. Apretar los tornillos haciendo cierre lateral, simultneo y uniforme. No use llaves
para apretar y mantenga las superficies de contacto de la tapa y el borde interno de
la olla perfectamente limpio y lubricado.
6. Abrir la vlvula de seguridad colocndola en posicin vertical. El vapor generado
en la base del esterilizados, pasa hacia arriba y por fuera del recipiente y luego hacia
abajo a travs de los paquetes hasta la base del recipiente, empujando hacia afuera
desde la base a travs del tubo flexible de escape y la vlvula de seguridad; es
importante que la corriente de vapor elimine por completo el aire de la cmara de lo
contario la temperatura alcanzada es mucho menor.
7. Cuando el vapor escapa vigorosamente se debe colocar la vlvula en posicin
horizontal.
8. A partir de entonces la presin y la temperatura empezaran aumentar, lo cual se ver
indicado en la aguja del manmetro.
9. Permitir que la aguja llegue a 121C y 15 libras de presin, es a partir de este
momento que se empieza a contabilizar el tiempo de esterilizacin.
10. Tenga en cuenta los siguientes tiempos de esterilizacin: 10 a 15 minutos para
materia limpio; 30 a 40 minutos para material contaminado.

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11. Al finalizar el periodo de esterilizacin, apagar el autoclave y permitir que el


nanmetro baje a cero, levante la vlvula para que escape el vapor restante y
procede a destapar la olla desenroscando los tornillos opuestos simultneamente.

Figura 5: Medios de cultivo a esterilizar (Prctica de


laboratorio en el CBTis 13)

Figura 4: Colocacin de los materiales a esterilizar


(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Resultado
En esta prctica esterilizamos los materiales a utilizar en la realizacin delos medio de
cultivo adems esterilizamos en la autoclave los medios de cultivo para porder realizarlos
correctamente.
Conclusin
Se lleg a la conclusin que debemos saber toda la teora desde como abr asta como cerrar
el autoclave para que as podamos obtener un buen trabajo, ya que de lo contrario
podramos ocasionar algn accidente y no esterilizar como es debido, adems aprendimos
que existen otros diferentes mtodos de esterilizar dependiendo lo que se quiera esterilizar.
Referencia electrnica
Caballero Eric (2014) Formas de esterilizacin en el laboratorio de microbiologa
recuperado de: http://www.eurotherm.es/industries/life/sterilization/ consultado:
29/sep/2015

PRACTICA No 3. MEDIOS DE CULTIVO


Objetivo
Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de
microorganismos, siguiendo las indicaciones que cada bote de agar a utilizar trae anotado
en su modo de utilizar aplicando los conceptos bsicos de nutricin y preparacin de los
mismos. Aprender y desarrollar los puntos clave que deben tenerse en cuenta antes, durante
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y despus de la preparacin de un medio de cultivo, asimismo, preparar algunos medios de


cultivo, lquidos o slidos, siguiendo las instrucciones proporcionadas.
Generalidades
Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos nutrientes bsicos
y factores fsicos para el mantenimiento de su vida, estas necesidades varan segn el tipo
de microorganismo y es necesario conocerlas para cultivarlos en el laboratorio.
Las necesidades nutricionales bsicas pueden suministrarse en el laboratorio, mediante el
uso de medios de cultivo artificiales, los cuales se encuentran disponibles en una gran
variedad y los cuales en general aportan a los microorganismos:
1. Una fuente de carbono. El carbono es un componente esencial y central para
conformar la estructura celular y permitir a la clula realizar todas sus funciones.
Segn la fuente de carbono los microorganismos se encuentran en dos grupo:
Auttrofos y hetertrofos. Los organismos auttrofos pueden cultivarse en medios que
contengan nicamente compuestos inorgnicos (utilizan principalmente dixido de
carbono como carbono inorgnico). Los organismos hetertrofos en su lugar necesitan
un suministro de carbono orgnico (por ejemplo glucosa u otro carbohidrato).
2. Una fuente de Nitrgeno. Elemento esencial para que la clula construya
macromolculas como: protenas y cidos nucleicos. Algunos microorganismos usan
nitrgeno atmosfrico, otros emplean sales de nitrato o de amonio como compuestos
inorgnicos, as como, otros requieren compuestos orgnicos que contengan nitrgeno
como los aminocidos.
3. Elementos no metlicos. Iones no metlicos como el azufre y el fsforo. El azufre
puede encontrarse en protenas, sulfatos o como azufre elemental; mientras el que el
fsforo puede encontrarse formando sales.
4. Elementos metlicos. (Ca, Zn, Na, K, Cu, Mn, Mg, Fe +2 y Fe+3). Llamados tambin
micronutrientes, oligoelementos o elementos traza. Encontrados en sales inorgnicas
adicionadas a los medios y los cuales son tomados en bajas concentraciones por los
microorganismos.
5. Vitaminas. Los microorganismos pueden tomarlas del medio ya elaboradas o iniciar
procesos de sntesis de las mismas. Algunos microorganismos poseen una variedad de

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vas para sintetizar vitaminas; mientras otros, sintetizan un nmero muy limitado de
ellas a partir de componentes del medio. Otros las requieren como suministro.
6. Agua.
7. Energa. Existen dos tipos bioenergticos de microorganismos, los fottrofos y los
quimitrofos. Los fottrofos emplean la energa radiante (luz solar), como nica
fuente de energa; y los quimitrofos que, obtienen la energa por oxidacin de
compuestos qumicos orgnicos o inorgnicos.
Las necesidades fsicas involucran factores, como: Temperatura, pH y gases, los cuales se
encuentran en un rango ptimo especfico para cada microorganismo; por lo tanto, su
variacin puede acelerar o disminuir el crecimiento.
Un medio de cultivo es una solucin acuosa (bien como tal o, bien incorporada a un coloide
en estado de gel), en las que estn presentes todas las sustancias necesarias para el
crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s) (Tabla 2).
Propiedades de los medios de cultivo.
Humedad. Indispensable para el crecimiento de microorganismos, su carencia
(desecacin) puede llevar a la muerte del microorganismo.
Fertilidad. Se refieren a los elementos o compuestos bsicos que permiten el
crecimiento bacteriano.
pH. Se refiere a los pH ptimos para el desarrollo bacteriano, indispensable para su
aislamiento; variaciones cidas o alcalinas, pueden inhibir su crecimiento.
Transparencia. Permite la observacin bacteriolgica, evidenciar morfolgica y
fsicamente su crecimiento en medios de cultivo adecuado.
Tabla 2. Clasificacin de los medios de cultivo de acuerdo a su estado fsico, composicin
y su propsito.
Clasificacin

Segn su estado
fsico

Estado/composicin/o
bjetivo
Slidos:
Semislidos:
Lquidos:
Bifsico:
Naturales:

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Descripcin
1.5 a 2.0 % de agar agar.
0.5 % de agar agar.
No contienen agar agar.
Contiene fase slida y fase lquida
(listos para utilizar).
Utilizados
para
cultivar
microorganismos tal y como se

Segn su
naturaleza o
composicin

Segn su propsito
(aislamiento de
microorganismos)

encuentran en la naturaleza. Se usan con


base a la experiencia y no a su
composicin. Ej.: Sangre diluida, leche,
jugos vegetales, etc.
Sintticos
De composicin exactamente conocida.
Los ms utilizados son los medios
comerciales deshidratados.
Vivos
Aislamiento de microorganismos que
contienen clulas u organismos vivos,
como las clulas de rin de mono o
huevos embrionados.
Medios enriquecidos
Con adicin de sangre, suero o extractos
de tejidos de animales o plantas al caldo
o agar, proporcionando sustancias
nutritivas complementarias para el
crecimiento
de
microorganismos
exigentes.
Medios selectivos*
Con adicin de algunas sustancias que
no permiten el desarrollo de un grupo de
microorganismos y sin afectar el
desarrollo de los grupos de inters. En
principio se pueden seleccionar los
microorganismos que se desarrollan en
medios orgnicos poco comunes, caso
en el cual se omiten otros compuestos de
carbono.
Medios diferenciales* Contienen reactivos qumicos que traen
como resultado, determinado tipo de
crecimiento bacteriano despus de la
incubacin (observacin de hemlisis,
coloraciones de las colonias y otras
reacciones indicadoras).
Medios
para Para determinar el tipo de crecimiento
identificacin

producido por los microorganismos, as


como,

la

capacidad

para

producir

cambios qumicos.
*Existen medios que pueden cumplir funciones mixtas, es decir, permiten aislar
microorganismos y revelan una reaccin o cambio qumico especifico de
metabolismo como coloraciones de colonias o cambios de color del medio, es decir

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selectivos y diferenciales al mismo tiempo.


Clasificacin de los medios de cultivo:
Segn su origen
Naturales son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal
como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce
exactamente.
Sintticos son los medios que contienen una composicin qumica definida
cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles.
Semisintticos son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una
forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
Segn su consistencia:
Lquidos se denominan caldos y contienen los nutrientes en solucin acuosa.
Slidos se preparan aadiendo un agar a un medio lquido a razn de 15g/litro. El agar es
una sustancia inerte polisacrido (hidrato de carbono) que se extrae de las algas. Como esta
sustancia no es digerida por las bacterias no constituye ningn elemento nutritivo. Este
conjunto convenientemente esterilizado puede ser vertido en placas de Petri o en tubos de
ensayo y presentan la posibilidad de aislar y diferenciar bacterias, "procesos que antes no
eran posibles en medio lquido".
Semislidos contienen 7,5 g de agar /litro de caldo. Se utilizan para determinar la motilidad
de las especies en estudio. Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el
agregado de agar.
Segn su composicin:
Comunes o universales su finalidad es el crecimiento de la mayor parte de los
microorganismos poco existentes. Es el medio ms frecuentemente utilizado para mantener
colonias microbianas. Por ejemplo: agar comn o caldo comn.

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Enriquecidos estn compuestos de un medio base como apoyo del crecimiento al cual se le
puede agregar un gran exceso de nutrientes como suplementos nutritivos, por ejemplo:
sangre, suero, lquido asctico, etc. Se utiliza para microorganismos que tienen grandes
exigencias nutricionales.
Selectivos son slidos en los que la selectividad se consigue alterando las condiciones
fsicas del medio o aadiendo o suprimiendo componentes qumicos especficos con el fin
de inhibir el crecimiento de especies qumicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de
medio slo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el de
otros.
Clases de medios de cultivo.
Medios simples.
Agar Nutritivo: Contiene extracto de carne, peptona y agar-agar.
Caldo Nutritivo: Contiene extracto acuoso de carne adicionado de peptona al 1% y
Cloruro de Sodio al 0.5% (Ej.: Caldo BHI (Brain Heart Infusion/Infusin Cerebro
Corazn), Caldo TSB (Caldo de Soya Tripticasa), y Caldo Nutritivo).
Agar Base Sangre: Medio slido que contiene peptona, enriquecido con sangre desfibrada
de conejo al 7%; usado para el desarrollo de todo tipo de bacterias y especialmente para
observar la actividad hemoltica.

Medios enriquecidos.
Agar Sangre: Al medio Agar Sangre se le adiciona sangre de conejo desfibrada al 7%
estril, cuando este tiene una temperatura de 45C y luego de su esterilizacin (la fuente de
sangre debe ser estril).

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Agar Chocolate: Consiste en un agar sangre que antes de su solidificacin se lleva a 100
C/1min., (llevar a ebullicin); as, se rompen los glbulos rojos y el medio toma un color
caf. Se usa para el aislamiento de Haemophilus spp., y Neisseria spp.
Medio de Tioglicolato: Permite el aislamiento de aerobios tolerantes y anaerobios. Debe
conservarse en la oscuridad y en tubos tapa rosca de manera que, la anaerobiosis se
mantenga en el fondo y la aerobiosis en la superficie del medio.

Mtodo
1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparacin del medio de cultivo asignado
(figura 6).
2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas de cada
uno de los ingredientes segn las instrucciones del fabricante.
3. Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo.
4. Disolver la porcin pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante. Si es
necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar (figura 7).
5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones sealadas por el
profesor.
6. Esterilizar de inmediato el medio de cultivo siguiendo las instrucciones. En
autoclave a temperatura de 121C y por 15 minutos (figura 8).
7.

Despus de esterilizar, esperar que se enfri a 42C (figura 9).

8. Verter el medio a una caja Petri o tubo de ensaye.


9. Se deja enfriar hasta que solidifique (figura 10).

Figura 6: indicaciones del fabricante


(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 7: Medio de cultivo disolvindose


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(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 9: agar enfrindose a 42C


(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 8: Medio de cultivo a esterilizar


(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 10: Medio de cultivo solidificado


(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Resultados
Para

esta

prctica realizamos tres agares, sal y manitol,


agar sangre y mueller hinton (figura 11). El
primer

agar

mencionado

lo

preparamos

correctamente, sin equivocaciones, pero el


segundo que es el agar sangre sali mal, ya que
se coagulo cuando vertimos la sangre, ya que se
enfri demasiado y ya no se mezcl bien con la

Figura 11: Agar sal y manitol, agar sangre


y muller miton solidificados. (Prctica de
laboratorio en el CBTis 13)

sangre, lo tuvimos que desechar como es debido, y lo realizamos de nuevo pero esta vez
quedo correctamente y el tercero, muller hinton, nos qued correctamente ya que tenamos
la experiencia de haber realizado los otros dos pasados.
Conclusin:
En la preparacin de medios de cultivos podemos encontrar varias clasificaciones de ellos,
ya que hay tres comunes, enriquecidos y selectivos, para prepararlos debemos saber qu
tipo de bacteria se va sembrar. Tambin hay demasiados tipos de agares que sirven para
aislar cualquier tipo de bacteria.
Los medios de cultivo son uno de los mtodos ms usados para el anlisis de
microorganismos con varios fines, como el de multiplicacin, identificacin, antibiograma,
entre otros, y puede ofrecer informacin valiosa sobre los mismos si se realiza de manera

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adecuada e higinica para evitar la contaminacin del medio y la alteracin de los


resultados.
Referencias electrnicas:
Lpez Tvez, Leonor; Torres, Carola (2013) Medios de cultivo en un laboratorio de
microbiologa recuperado de: http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp4.pdf

PRACTICA No 4. SIEMBRA DE EXUDADO FARINGEO


Objetivo:
Saber realizar un exudado farngeo a un paciente y hacer una siembra en el medio de
cultivo, previamente preparado y ya solidificado. Identificando aquellos microorganismos
que son causantes de infecciones en la garganta y as poder analizar cada bacteria que se
desarrolle.

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Generalidades:
El cultivo del exudado farngeo o frotis farngeo se realiza utilizando un hisopo especial
para detectar la presencia de estreptococo grupo A, que es la causa ms comn de la
faringitis estreptoccica.
El tracto respiratorio habitual (la faringe) est formado por distintos microorganismos entre
los que destacan los siguientes grupos y especies: estreptococos, estafilococos, micrococos,
neisserias, Moraxella catarrhalis, corinebacterias, Haemophilus spp, Porphyromonas,
Prevotella, Fusobacterium, Veillonela, Peptostreptococcus, Actinomyces, etc. Sin embargo,
cuando encontramos una patologa en la faringe, el agente etiolgico ms frecuentemente
aislado es el Streptococcus pyogenes, pero tambin, otros microorganismos patgenos que
podemos hallar son: Streptococcus pneumoniae, Streptococcus alfa-hemoltico grupo
viridans, etc.
Una muestra tomada de la pared posterior de la garganta se coloca en un medio de cultivo
que permite el crecimiento de las bacterias. El tipo especfico de infeccin se determina
utilizando anlisis qumicos. Si no hay crecimiento de bacterias, el cultivo es negativo y la
persona no tiene una infeccin estreptoccica.
La faringitis estreptoccica es una infeccin bacteriana que afecta la parte posterior de la
garganta y las amgdalas, que se inflaman e irritan, lo cual provoca dolor de garganta
particularmente molesto al tragar. Es posible que la garganta y las amgdalas presenten
manchas o una capa de color amarillo y los ganglios linfticos del cuello estn inflamados.
Algunos ejemplos de infecciones que pueden encontrarse durante un cultivo del exudado
farngeo incluyen:
Candida albicans: Este hongo causa aftas, una infeccin de la boca y la lengua y, a
veces, de la garganta.

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Estreptococo del Grupo A: Esta bacteria puede causar faringitis estreptoccica,


escarlatina y fiebre reumtica. Si la faringitis estreptoccica es probable, puede
hacerse una prueba que se llama prueba rpida de estreptococos antes de un cultivo
del exudado farngeo. Con una prueba rpida de estreptococos, los resultados estn
listos en 10 minutos en vez de demorarse 1 o 2 das con un cultivo del exudado
farngeo. Si los resultados de la prueba rpida de estreptococos son positivos, puede
comenzarse de inmediato con los antibiticos. Un cultivo del exudado farngeo es
ms exacto que la prueba rpida de estreptococos. La prueba rpida de
estreptococos puede dar resultados negativos falsos aun cuando las bacterias de
estreptococo estn presentes. Cuando los resultados de una prueba rpida de
estreptococos son negativos, muchos mdicos recomiendan realizar un cultivo del
exudado farngeo para asegurarse de que no haya faringitis estreptoccica.
Neisseria meningitidis: Esta bacteria puede causar meningitis.
Si se multiplican bacterias en el cultivo, pueden hacerse otras pruebas para determinar qu
antibitico tratar mejor la infeccin. Estas se llaman pruebas de susceptibilidad o de
sensibilidad.
La mayora de los dolores de garganta son causados por una infeccin con un virus, como
un catarro o una gripe. No se hacen cultivos de garganta para infecciones virales porque es
muy difcil cultivar virus y es costoso.

Mtodo:
1. Se dispondr de los hisopos, y se evitara rozar cualquier parte de la lengua.
2. Se sentara al paciente y colocar su cabeza hacia atrs iluminar bien la cavidad
orofarngea y con un abate lengua para facilitar el obseso a la parte posterior de la
faringe.

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3. Con un hisopo (previamente esterilizado), hacer un raspado firme, haciendo girar el


hisopo, en las reas daadas que deben verse hipermicas, purulantes o necrticas y
tambin en las membranas formadas sobre las lesiones o de las manchas de Koplic.
4. En el medio de cultivo previamente realizado, colocar el hisopo haciendo como un
valo (figura 12).
5. Con el aza bacteriolgica (previamente esterilizada) hacer la estra como es debido
(figura 13).
6. Encubar la muestra de 24 a 48 hrs a la temperatura adecuada.

Figura 13: Estra de exudado farngeo en agar


(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Figura 12: Hisopo con exudado farngeo en agar


(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Resultados:
Se

realizaron

cuatro

exudados farngeos los cuales se

colocaron en los medios de cultivo antes realizados y solidificados, al pasar unos cuantos
das se observ en los cultivos que el paciente tena bacterias, ya que se reprodujeron unas
bacterias de color rosado (figura14), sin embargo haba otras que ya haban envejecido por
que las dejamos ms del tiempo correspondiente, la que ya estaban viejas se observaban de
un color grisceo.
Figura 13: Exudado farngeo con bacterias.
(Prctica de laboratorio en el CBTis 13)

Conclusin:

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Despus de haber realizado esta prctica, nos pudimos dar cuenta que en este mecanismo
en particular se debe ser muy cuidadoso ya que si calentamos el aza bacteriolgica y no
esperamos a enfriar puede romper las bacteria obtenidas en el exudado farngeo y as ya no
se podran desarrollar correctamente las bacterias y el medio de cultivo no servira.
Referencias electrnicas:
Personal de Healthwise (2015) Cultivo del exudado farngeo Recuperado de:
http://www.uwhealth.org/spanishhealth/topic/medicaltest/cultivo-del-exudado-far
%C3%ADngeo/hw204006.html consultado: 26/sep/2015

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