Prctica 8: Separacin por cromatografa en capa fina de fosfolpidos

Introduccin:
Los lpidos son sustancias no polares
que pueden extraerse de las clulas y
tejidos por medio de disolventes no
polares; se clasifican segn su
solubilidad, y pueden mencionarse dos
clases generales de lpidos: los
complejos y los simples.
Los lpidos simples son aquellos que
no se hidrolizan con facilidad con un
cido o base acuosa; se consideran
tres grupos importantes: los
esteroides, las prostaglandinas y los
terpenos.
Los lpidos complejos son aquellos que
se hidrolizan con facilidad en
constituyentes ms sencillos. La
mayora de los lpidos complejos son
steres de cidos carboxlicos de
cadena larga llamados cidos grasos.
Los dos grupos principales de los
steres de los cidos grasos son las
ceras y los glicridos. Las ceras son
steres de alcoholes de cadena larga y
los glicridos son steres de alcohol.
Los fosfolpidos son lpidos que
contienen grupos derivados del cido
fosfrico. La mayora de los
fosfolpidos comunes son
fosfoglicridos, los cuales se
relacionan estrechamente con las

grasas y los aceites comunes y entran

en la clasificacin de lpidos
complejos. Muchos fosofolpidos
contienen un alcohol adicional
esterificado al grupo cido fosfrico.
Las

cefalinas son steres de etanolamina y

las lecitinas son steres de colina. Los
fosfolpidos desempean diversas
funciones en los organismos: los
fosfoglicridos se encuentran
fundamentalmente como
componentes de las membranas. Los
fosfolpidos de la membrana son
tambin precursores metablicos de
diversos elementos reguladores de las
rutas de transduccin de seal. En los
animales participan en el transporte
de triacilgliceroles y del colesterol
mediante la formacin de la superficie
de las lipoprotenas. Adems,
desempean funciones especficas en
procesos como la coagulacin de la
sangre y la funcin pulmonar.
Objetivos:
-Separar los fosfolpidos de la yema de
huevo de sus dems componentes
-Realizar una cromatografa en capa
fina del extracto de lpidos y
compararla con la de papel

-Determinar concentracin de
colesterol por mtodo de LiebermanBouchard
Anlisis de la tcnica:
Para purificar los fosfolpidos, se
tomaron en cuenta las propiedades de
los mismos. Para separar de
componentes de la yema como
carbohidratos, protenas y vitaminas
hidrosolubles, se utiliz una mezcla de

cloroformo-metanol 2:1, la cual por su

naturaleza no polar es afn a los lpidos
que queremos aislar(y adems se
realiz en un bao de hielo por la
volatilidad de la mezcla). Para retirar
los componentes
polares(carbohidratos, protenas y
vitaminas hidrosolubles) se agreg KCl
0.1 M. Se realiz una centrifugacin
para inducir la separacin de las fases
y se colect la fase orgnica que
contena los compuestos no polares.
Resultados:
La tabla con los Rf's obtenidos se
presenta posteriormente en hoja
anexa con las estructuras y frmulas.
Discusin de resultados:
El cromatograma revelado mediante
molibdato muestra la presencia de

Prctica 8: Separacin por cromatografa en capa fina de fosfolpidos

compuestos fosfatados, y ms
concretamente en este caso la
presencia de fosfolpidos. Se observan
4 manchas claras de color azul y una
con apariencia grasosa transparente y
contorneada. Corresponden
respectivamente a isolecitina,
esfingomielina, lecitina(fosfatidil colina
y fosfatidil serina),
fosfatidiletanolamina y lpidos neutros.
El cromatograma revelado con yodo
posee 4 manchas de color caf y la
mancha que corresponde a los lpidos
neutros se aprecia mejor y de color
caf; esto nos indica que la

porcin lipdica de los compuestos

posee al menos una insaturacin en la
cadena hidrocarbonada. El
cromatograma de ninhidrina revela la
presencia de grupos amino en los
compuestos, y solo muestra dos
manchas: la de fosfatidil serina y la de
fosfatidil etanolamina; la mancha que
se puede observar ms grande en los
dems cromatogramas(la de lecitina)
aqu se ve a la mitad o ligeramente
ms pequea, esto se debe a que la
ninhidrina reacciona con grupos amino
libres, y aunque la fosfatidil colina
tiene un grupo amino, este no tiene
pares de electrones libres y adems se

encuentra unido a 3 grupos metilos,

por lo que tambin el impedimento
estrico puede evitar que se una a la
ninhidrina y llevar a cabo la reaccin
tpica. El cromatograma de bismuto
nos indica la presencia de la molcula
de colina en los compuestos aislados,
y por ello observamos las 3 primeras
manchas que corresponden a la
lisofosfatidil colina, la esfingomielina y
a la porcin de la tercera mancha que
corresponde a la fosfatidil colina.
Conclusiones:
-Existen fosfolpidos en la yema de
huevo.
-Los fosfolpidos aislados contienen
insaturaciones en la cadena
hidrocarbonada.
-La fosfatidiletanolamina y la fosfatidil
serina contienen grupos amino libres.

-La isolecitina, la esfingomielina, y la

lecitina contienen colina.
Preguntas extra:
Cmo ser el perfil de fosfolpidos de
los siguientes extractos comparados
con el de huevo de gallina: pata,
guajolota, dinosaurio, codorniz,
cerebro de ratn.?

R= Los huevos tienen una

composicin muy general, al menos
los de distintas especies de aves,
aunque el porcentaje presencial de los
compuestos vara de acuerdo a el ave
y su alimentacin. El cerebro de ratn
por su parte contiene casi los mismos
fosfolpidos, y tambin tiene algunos
otros caractersticos de esta zona
(componentes de la materia gris y
blanca). Los huevos de dinosaurio de
igual manera deberan de tener una
composicin similar a la de los huevos
de aves, por su parentesco. Adems,
el proceso evolutivo ha ido adaptando
los organismos en base al entorno en
que viven, y dadas las funciones y
caractersticas de los fosfolpidos, es
factible que se encuentren en distintas
partes del cuerpo y en cada clula.
Incluso en el cerebro humano
podemos encontrar estos mismo
fosfolpidos, lo que indica que han
funcionado para los distintos
organismos vertebrados. Por lo tanto,
los perfiles de estos extractos
deberan ser muy similares si no es
que iguales al realizado en esta
prctica.

Bibliografa
Koolman, J. ;"Bioqumica: Texto y atlas", 3 ed.,
Editorial Mdica Panamericana. Madrid, Espaa
2004

Prctica 8: Separacin por cromatografa en capa fina de fosfolpidos

http://www.alanrevista.org/ediciones/1
9992/composicion_huevos_gallina_codorni
z.asp fecha de consulta 13/10/2013
7:19 pm

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NB
K28239/#A194 fecha de consulta
13/10/2013 7:22 pm
Van Holde,K.E.; Mathews, C.K.; Ahern,
K.G.; "Bioqumica"; Editorial Pearson,
3era Edicin; Espaa 2010

Fotos de cromatogramas: