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ANEXO I: PERFIL DE PROYECTO METODOLOGA DE LA INVESTIGACIN

-Identificacin
Nombre alumno
Registro
E-mail
Fono

Karen Mussa Valenzuela

2009000509
Kmussa2009@alu.uct.cl
72191231

II.-Ttulo:
Comparacin de la respuesta fisiolgica de leptina a la inyeccin de GnRH, dentro y fuera de la
temporada reproductiva en vicuas (Vicugna vicugna) en semicautiverio.

III. Fundamentacin Bibliogrfica/Estado del arte/Marco terico/Introduccin

En la actualidad, el cambio climtico ha creado potenciales amenazas a la biodiversidad mundial (Rinawati
et al, 2013). La distribucin de la vicua est limitada a 3300 metros sobre nivel del mar, siendo un hbitat
difcil y muy exigente. Los requerimientos alimenticios de las vicuas silvestres del altiplano son
complacidos exclusivamente por los bofedales existentes cuyas especies vegetales presentan baja calidad
nutricional. Las condiciones ambientales en las que se desarrolla la vegetacin son rigurosas, entre ellas
cuentan con una alta radiacin solar y temperatura baja con amplia oscilacin diaria. Ocurre una
concentracin de las precipitaciones (alrededor de 300mm/ao) en el perodo estival (diciembre a marzo),
mientras los restantes ocho meses se encuentran prcticamente carente de ellas.
El comienzo y la intensidad de la temporada de lluvias en la puna varan de ao en ao, las cuales no son
confiables ni predecibles, ya que existen grandes sequas relacionadas con las anomalas climticas como el
fenmeno El Nio.
Las vicuas (Vicugna vicugna) son camlidos silvestres endmico de Amrica del Sur. Se distribuyen en un
rea de aproximadamente 250.000 km en los altos Andes de las provincias biogeogrficas de Per,
Bolivia, Argentina y Chile (UICN, 2012). En Chile, se encuentran desde la XV a la III Regin del pas.
Con la creacin de las reas Silvestres Protegidas y la ejecucin del Plan Nacional de Conservacin y
Manejo de la Vicua de la CONAF, se ha llevado a cabo la ejecucin de acciones de seguimiento de la
especie, con el objetivo de obtener informacin sobre procesos ecolgicos, como el uso de hbitat,
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desplazamientos, tamao poblacional, reas de concentracin de la especie y conformacin de grupo.

Tambin se realizan patrullajes, fiscalizacin y supervisin de actividades incompatibles que pudiesen
afectar de manera directa o indirecta a la especie. Dichos manejos incluyen un evento anual que se realiza
en primavera, en el que los individuos que se encuentran en semi-cautivo se esquilan y se pesan (Bonacic et
al., 2006, Bonacic y Macdonald, 2003). Este procedimiento, como la mayora de los desarrollados en vida
silvestre, tiene una corta duracin (4 hrs aprox, Bonacic et al, 2006), y recoge muy poca informacin del
xito reproductivo de la poblacin (Ej. Nmero de cras nacidas en el ao). Un programa de manejo
sostenible debe tener como propsito asegurar el crecimiento de la poblacin, especialmente en las especies
amenazadas de extincin (Situacin en peligro en Chile; Cofr y Marquet, 2006)
Hoy, existe la necesidad de desarrollar marcadores moleculares reproductivos en el rea de fauna silvestre,
los que puedan obtenerse dentro del corto perodo de tiempo que dura el proceso de captura y liberacin de
los individuos. Los camlidos sudamericanos son especies de ovulacin inducida, es decir, no hay
asociacin entre estro y ovulacin. El celo no se manifiesta de manera cclica y predecible, sino que los
signos de celo pueden durar mientras no se establezca un cuerpo lteo. El mecanismo de liberacin de la
LH se desencadena naturalmente por la cpula o artificialmente a travs de la administracin de hormonas
(hCG y GnRH). En la vicua la duracin de la onda y el intervalo inter onda son cortos, la liberacin de LH
comienza a los 15 minutos de iniciada la cpula y llega al pick a las 2-3 horas para volver a niveles basales
a las 6-7 horas (cita). La respuesta al estmulo ovulatorio depende del tamao del folculo y del momento
de la onda. Las hembras con folculos de 4-5 mm, posiblemente por menor cantidad de estrgeno, provocan
liberacin de niveles menores de LH que las que poseen folculos de mayor tamao en fase de crecimiento,
esttica o regresin. Los folculos de 4-5 mm no ovulan y los que estn en fase de regresin se luteinizan.
(Agerot al, 2006)
La leptina es una molcula de protena de 16 KDa sintetizada principalmente por los adipocitos, pero
tambin se produce, en niveles mucho ms bajos por los tejidos placentarios y fetales; glndulas mamarias;
el estmago; los msculos y en tejido adiposo pardo en roedores y seres humanos (Chilliard et al, 2001;
2005). La leptina regula el apetito y el gasto energtico de los individuos y sus valores plasmticos tienen
una alta correlacin con la masa corporal en varias especies. La accin de la leptina en el sistema
reproductivo de la hembra se infiere por la presencia de receptores de leptina en el hipotlamo, hipfisis,
clulas de la teca y de la granulosa, ovocitos y cuerpo lteo (CL). Tambin se han observado en embriones
y en endometrio de diversas especies (Karlsson et al, 1997; Koshiba et al, 2001; Sarkar et al, 2010.).
Adems, diversos estudios sealaron una efecto positivo de la leptina en los procesos de sntesis de
progesterona (Ruiz-Cortez et al, 2003;. Kendall, et al, 2004), la maduracin del ovocito (Craig et al, 2004),
la ovulacin (Barkan et al, 2005, Di Yorio et al, 2008; Romano et al, 2005), el desarrollo embrionario
temprano (Craig et al, 2004;.. Malik et al, 2001), implantacin y placentacin (Ramos et al, 2005; Schultz
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et al., 2004).
Norambuena, et al., (2013) observaron que la administracin de GnRH en hembras de llamas con folculo
preovulatorio, y no lactantes, indujo un rpido incremento en la concentracin de leptina en plasma dentro
de 45-60 min. Esta respuesta fisiolgica de leptina se afect por el estado nutricional de las llamas pues fue
mayor y ms rpida en hembras bien nutridas respecto de las mal nutridas. La leptinemia se mantuvo alta
hasta los das 10 y 12

despus del tratamiento, en sincrona con la vida media del CL y con la

concentracin de progesterona en plasma. Esto sugiere que la respuesta fisiolgica de leptina al tratamiento
GnRH podra tener una funcin reproductiva que sera afectada por la nutricin. Adems, los niveles
basales de leptina (antes de inyectar GnRH, T0 = L0) se correlacionaron fuertemente y positivamente con
la masa corporal en camlidos (0,8).
Considerando lo anteriormente expuesto se plantea que la respuesta fisiolgica de leptina podra reflejar en
un corto plazo (1 hr) el estatus nutricional y reproductivo de una poblacin animal. En otras palabras podra
ser til como una herramienta para diagnosticar la subfertilidad debido a la sub-nutricin en el corto tiempo
que se cuenta en un evento de manejo de la vicua silvestre, entre otras especies.
Este estudio tiene como objetivo determinar la variacin de la respuesta fisiolgica de leptina a la
inyeccin de Gn RH en vicuas del norte de Chile en semi-cautiverio.
Palabras clave: vicuas, leptina, fertilidad, balance energtico.

IV.- Presentacin o Definicin del Problema

Las especies en peligro de extincin requieren monitoreo reproductivos para asegurar su conservacin,
dentro del estudio de la fauna silvestre no contamos con marcadores reproductivos que nos facilite
informacin en un periodo corto de tiempo.
La captura, el manejo desencadenan en los animales silvestres una respuesta de estrs que causa numerosos
cambios fisiolgicos y de comportamiento que afectan su sobrevivencia y reproduccin.
El estrs con la consiguiente liberacin de cortisol impacta el eje reproductivo del hipotlamo al afectar la
secrecin de GnRH y la glndula pituitaria al afectar la secrecin de gonadotropinas, con efectos directos
sobre las gnadas (Montan, 2002).
En este corto

tiempo de captura los mdicos veterinarios podemos

tomar muestras para realizar

diagnsticos, nutricionales, genticos y de salud animal sin embargo no existen marcadores que permitan
establecer el estatus reproductivo de una poblacin. En el mbito reproductivo se puede hacer un conteo de
hembras, de cras menores de un ao y diagnstico de gestacin, aquellos parmetros nos reflejan el xito
reproductivo de una temporada reproductiva que ya pas y en la que ya no se puede intervenir.
Es necesario contar con marcadores que evidencien el estado en que se encuentra el eje hipotlamo
hipofisario-gonadal en el corto plazo. La secrecin de GnRH y LH son pulstil, el ciclo estral de los
mamferos entrega perfiles de estradiol progesterona que son cclicos por lo que su interpretacin requiere
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de muestreos seriados que incluyen varios das.

Por todas aquellas razones planteadas anteriormente es que nos vemos en la necesidad de contar con un
marcador molecular que podamos obtener en 2 hrs de plazo.

V. Hiptesis

La respuesta fisiolgica de leptina a GnRH ser mayor dentro de la estacin reproductiva respecto de lo
observado fuera de ella, y tendr una relacin positiva con el estatus nutricional de un rebao de vicuas.

VI. Objetivo General

Objetivo General: Determinar la variacin de la respuesta fisiolgica de leptina a GnRh dentro y fuera de
la estacin reproductiva y relacionarla con el estatus nutricional y la concentracin de progesterona de un
rebao de vicuas altiplnicas.
Objetivos especficos
1. Determinar y comparar la respuesta fisiolgica de leptina fuera y dentro de la estacin
reproductiva.
2. Determinar la masa corporal y condicin corporal de ejemplares de vicuas.
3. Determinar la concentracin plasmtica de metabolitos nutricionales y de progesterona plasmtica.
4. Determinar la relacin existente entre la concentracin plasmtica de leptina basal y las variables
masa corporal, y la concentracin plasmtica de triglicridos, nefas, y colesterol.
5. Determinar la relacin existente entre la concentracin plasmtica de leptina una hora despus de
la aplicacin de GnRH y la de progesterona plasmtica al da 8.
VII. Material y Mtodo
Se utilizaran veinte cuatro vicuas en semicautiverio de la localidad de Visviri, en los Andes de Chile (XV
Regin) no preada ni lactante. Las vicuas se dividirn en tres grupos, un grupo de invierno (n = 8), un
grupo de primavera (n = 8) y un grupo de verano (n = 8). Se descartarn las hembras preadas a travs de
la ecografa trans-rectal (Vet Portable Ultrasound Escner HKVET0215, Hekang Dispositivos Mdicos,
China). Las Vicuas no preadas que cuenten con un folculo preovulatorio en crecimiento de 6 mm,
recibirn entonces una dosis de GnRH (50 ug / vicua, im; acetato gonadorelin; Ovalyse, Pfizer Chile SA,
Santiago, Chile) para inducir ovulacin. Inmediatamente antes (T0) y 60 minutos despus de colocar la
inyeccin se tomar una muestra de sangre (4 ml) de la vena yugular en tubos heparinizados. La primera
muestra se utilizara para determinar concentraciones en plasma de leptina (L0), y metabolitos y la
segunda se utilizar para determinar las concentraciones plasmticas de leptina (L1). Posteriormente, al
da 8 se volver a tomar una muestra de sangre de las hembras para determinar la concentracin
plasmtica de progesterona. Las muestras se centrifugan manualmente, y se almacenara a -20 C. El
estado nutricional de las vicuas ser determinado por la obtencin de e la condicin de la masa corporal y
por un perfil bioqumico incluyendo la determinacin de los siguientes metabolitos: colesterol (mtodo
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enzimtico CHOD-PAD), triglicridos (mtodo enzimtico GPO-PAD), y cidos grasos no esterificados

(Nefa, mtodo colorimtrico enzimtico ASC-ACOD).
Las concentraciones del metabolito en plasma se determinarn en el Laboratorio Clnico de la Escuela de
Medicina Veterinaria, en la Universidad Catlica de Temuco y la de leptina y progesterona en el
laboratorio de fisiologa animal de la Universidad de Concepcin.
1. Los datos se analizaron mediante el test de Shapiro-Wilks para la normalidad y la prueba de Levene
para determinar la homocedasticidad de las varianzas.
ANOVA se utilizar para comparar la leptina (L0, L1, L1-L0), la progesterona en el da 8, la masa
corporal, BCS y metabolitos entre los grupos.
La prueba de Kruskal-Wallis se utilizar si los datos no cumplen los supuestos paramtricos.
Adems se realizar una correlacin para determinar las relaciones entre la concentracin de leptina en
plasma en T0 (L0) vs. masa corporal, BCS y metabolitos y la relacin de leptina plasmtica (L1) con la
concentracin plasmtica de progesterona al 8d. Tambin las correlaciones sern utilizados para probar la
relacin entre la concentracin de leptina en plasma en T1 (L1) frente a la concentracin plasmtica de
progesterona en el da 8, por ltimo vamos a comparar estas correlaciones entre grupos. Los anlisis
estadsticos se realizaron con el programa SPSS V 15.0 con un nivel de significacin de 0,05.
Prediccin:
La respuesta fisiolgica de leptina ser mayor dentro que fuera de la estacin reproductiva. L0 presentar
correlacin positiva con la masa corporal triglicridos, y colesterol y negativa con los cidos grasos no
esterificados. L1 tendr una correlacin positiva con la concentracin de progesterona.
Las vicuas del grupo de verano (poca de reproduccin) tendr mejor estado nutricional (niveles bajos en
plasma de Nefa y altos triglicridos, masa corporal, BCS, y la leptina en T0, que el grupos de primavera e
invierno. Adems, el grupo de verano tendr mayor concentracin de progesterona en plasma en el da 8
respecto de los grupos de primavera e invierno.

VIII. Aportes y proyecciones

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Siendo la vicua una especie bajo amenaza de extincin, los mdicos veterinarios nos vemos en la
obligacin de encontrar mtodos que contribuyan al diagnstico y xito reproductivo que aseguren la
sobrevivencia de la especie.
La idea es contribuir al conocimiento del mejoramiento en el aspecto reproductivo de (Vicugna
vicugna) ya que estara ligado a su estado nutricional.
Podramos lograr prevenir un estado de nutricin desfavorable que influya en su futura reproduccin,
permitindonos hacer manejos para suplementar una poca crtica de alimentacin.
Una caracterstica importante para conservar esta especie es destacar el aspecto cultural que tiene, con
una alta representatividad en las tradiciones de las comunidades andina de las regiones altiplnicas,
contribuyendo a la biodiversidad cultural que poseemos como pas.

IX. Bibliografa
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Barkan, V.; Hurgin, V.; Dekel, N.; Amsterdam, A.; Rubinstein, M.; (2005) Leptin induces ovulation in Gn
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