Microscopio

El microscopio es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado

pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es
el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene dos o ms lentes
que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. La
ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se llama
microscopa.

1. Historia el Microscopio
El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece en la obra
de William Harvey sobre la circulacin sangunea al mirar al microscopio los capilares
sanguneos y Robert Hooke publica su obra Micrographia.
En 1665 Robert Hooke observ con un microscopio un delgado corte de corcho y not
que el material era poroso, en su conjunto, formaban cavidades poco profundas a modo
de celditas a las que llam clulas. Se trataba de la primera observacin de clulas
muertas. Unos aos ms tarde, Marcello Malpighi, anatomista y bilogo italiano, observ
clulas vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al microscopio.
A mediados del siglo XVII un holands, Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios
simples de fabricacin propia, describi por primera vez protozoos, bacterias,
espermatozoides y glbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna
preparacin cientfica, puede considerarse el fundador de la bacteriologa. Tallaba l
mismo sus lupas, sobre pequeas esferas de cristal, cuyos dimetros no alcanzaban el
milmetro (su campo de visin era muy limitado, de dcimas de milmetro). Con estas
pequeas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos. Observ los glbulos de la
sangre, las bacterias y los protozoos; examin por primera vez los glbulos rojos y
descubri que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no revel sus
mtodos secretos y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal
Society de Londres.
Durante el siglo XVIII continu el progreso y se lograron objetivos acromticos por
asociacin de Chris Neros y Flint Crown obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por
John Dollond. De esta poca son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard
Euler. En el siglo XIX, al descubrirse que la dispersin y la refraccin se podan modificar
con combinaciones adecuadas de dos o ms medios pticos, se lanzan al mercado
objetivos acromticos excelentes.
Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecnicos que aumentaron
su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras
pticas. Las mejoras ms importantes de la ptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe
public su teora del microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejor la microscopa de
inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de

2000. A principios de los aos 1930 se haba alcanzado el lmite terico para los
microscopios pticos, no consiguiendo estos aumentos superiores a 500X o 1,000X. Sin
embargo, exista un deseo cientfico de observar los detalles de estructuras celulares
(ncleo, mitocondria, etc.).
El microscopio electrnico de transmisin (TEM) fue el primer tipo de microscopio
electrnico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la
muestra consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst
Ruska en Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio
electrnico de barrido.

2. Partes de un Microscopio

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Ampla la imagen del
objetivo.

El TUBO: ptico se puede acercar o alejar de la preparacin mediante un

TORNILLO MACROMTRICO o de grandes movimientos que sirve para realizar
un primer enfoque.

REVLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar

los objetivos. La esfera se sulee llamar CABEZAL Y contiene los sistemas de
lentes oculares (monoculares o binoculares (2 lentes).

BRAZO: Es una pieza metlica de forma curvada que puede girar; sostiene por su
extremo superior al Tubo ptico y en el inferior lleva varias piezas importantes.

PLATINA: Lugar donde se deposita la preparacin.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta.

PINZAS DE SUJECION: Parte mecnica que sirve para sujetar la preparacin. La

mayora de los microscopios modernos tienen las pinzas adosadas a un carro con
dos tornillos, que permiten un avance longitudinal y transversal de la preparacin.

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin.

El condensador de la parte de abajo tambin se llama FOCO y es el que dirige los
rayos luminosos hacia el condensador.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macromtrico que aproxima el enfoque y

micromtrico que consigue el enfoque correcto.

BASE. Sujecin de todo el microscopio.

Sobre la PLATINA se coloca la preparacin que se va a observar con un Orificio central

por el que pasa la Luz procedente del Espejo. El ESPEJO con una cara plana y otra
cncava, est montado sobre un eje giratorio ubicado en la zona ms inferior del brazo
por debajo de la Platina.

Sistema optico
Es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes
que lo componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una
imagen de la muestra que el ocular luego ampla.

El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a

la cercana de la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la
imagen formada por el objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes
de aumento van desde 5X hasta 20X. Existen oculares especiales de potencias
mayores a 20X y otros que poseen una escala micromtrica; estos ltimos tienen
la finalidad de medir el tamao del objeto observado.

Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen

el aumento de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan
cerca de la preparacin que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente
son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de inmersin.
o

Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna

entre ellos y la preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices
que indican el aumento que producen, la abertura numrica y otros datos.
As, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65 y 160/0,17,
significa que el objetivo es planacromtico, su aumento 40 y su apertura
numrica 0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero
de objetivos vara con el tipo de microscopio y el uso a que se destina. Los
aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente utilizados son: 4X,
10X, 20X, 40X y 60X.

El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de

lentes. Para observar a travs de este objetivo es necesario colocar una
gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparacin, de manera que la
lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro. Generalmente, estos
objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos crculos o anillos de
color negro que rodea su extremo inferior.

Sistema de iluminacin
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine
la preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada.
Comprende los siguientes elementos:

Fuente de iluminacin: se trata clsicamente de una lmpara incandescente de

tungsteno sobrevoltada; en versiones ms modernas con leds. Por delante de ella
se sita un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de
campo, que permite controlar el dimetro de la parte de la preparacin que queda
iluminada, para evitar que exceda el campo de observacin produciendo luces
parsitas.

El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del

microscopio y ya alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los
microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cncava y otra plana. Goza
de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se emplea de
preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para natural (luz solar). Los
modelos ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que cumple la
misma funcin que el espejo.

Condensador: est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar

los rayos luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con
el mismo ngulo que el del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de
la platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara
superior plana en contacto con la preparacin cuando se usan objetivos de gran
abertura (los de mayor ampliacin); existen condensadores de inmersin, que
piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la preparacin.
La abertura numrica mxima del condensador debe ser al menos igual que la del
objetivo empleado, o no se lograr aprovechar todo su poder separador. El
condensador puede deslizarse verticalmente sobre un sistema de cremallera
mediante un tornillo, bajndose para su uso con objetivos de poca potencia.

Diafragma: el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su

abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular,
para aumentar el contraste, lo que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si
se quiere aprovechar la resolucin del sistema ptico.

3. Tipos de microscopios
Microscopio simple
Un microscopio simple es aquel que utiliza una sola lente de aumento. Es el
microscopio ms bsico. El ejemplo ms clsico es la lupa. El microscopio ptico
estndar utiliza dos sistemas de lentes alineados.

Microscopio compuesto
Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticos. Tambin se le
conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo
claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van

Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una nica lente

pequea y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el
material que se iba a examinar (la muestra o espcimen). Este uso de una nica lente
convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros
aparatos pticos.

Microscopio compuesto
Un microscopio compuesto tiene ms de una lente objetiva. Los microscopios
compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o
cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o
ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista

Microscopio

de

fluorecencia

El microscopio de
fluorescencia
es
una variacin del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados
por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado
de la radiacin electromagntica emitida por las molculas que han absorbido la
excitacin primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar
slo la emisin secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del
condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar sustancias con
autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos.

Microscopio de campo oscuro

es un microscopio que utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un

cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto iluminado dispersa la luz y se
hace as visible contra el fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo
iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin cerrada. Por ello las

porciones transparentes del espcimen quedan oscuras, mientras que las superficies
y partculas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en todas las
direcciones, incluida la del eje ptico que conecta el espcimen con la pupila del
observador. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos
transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es
decir, sin matarla. Tambin es bastante utilizado en la observacin de muestras
metalogrficas para la observacin de detalles en superficies con alta reflectancia.

Microscopio electrnico

Un microscopio electrnico es aqul que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible
para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten
alcanzar ampliaciones hasta 5000 veces ms potentes que los mejores microscopios
pticos, debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los
fotones "visibles".

Microscopio

electrnico de transmisin

es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a

que la potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de
onda de la luz visible. Lo caracterstico de este microscopio es el uso de una muestra
ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra.

Microscopio electrnico de barrido o SEM

es aquel que utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una
imagen. Tiene una gran profundidad de campo, la cual permite que se enfoque a la
vez una gran parte de la muestra. Tambin produce imgenes de alta resolucin, de
forma que las caractersticas ms nfimas de la muestra pueden ser examinadas con
gran amplificacin. La preparacin de las muestras es relativamente fcil ya que la
mayora de los SEM slo requieren que estas sean conductoras.