UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE MEDICINA, CAMPUS XALAPA

BIOQUIMICA BSICA
M. en C.F. Marco Antonio Guadarrama Vzquez

Lis de Veracruz: Arte, Ciencia, Luz

PRACTICA- DETERMINACION DE TRIGLICRIDOS

ALUMNO: ___________________________________________________ GRUPO: ________

OBJETIVO
El alumno realizar una determinacin de Triglicridos para cuantificar la concentracin en suero, mediante
espectrofotometra. Aprender a correlacionar clnicamente los resultados obtenidos, con los procesos
fisiolgicos, metablicos y las patologas propias de este metabolito.

FUNDAMENTO:
Los triglicridos son esteres de glicerol y cidos grasos que provienen de la dieta o son sintetizados
en el hgado principalmente. Los triglicridos se transportan en el plasma en las lipoprotenas y son utilizadas
por el tejido adiposo, musculo entre otros sitios anatmicos. Su principal funcin es suministrar energa a la
clula. Concentraciones elevadas de triglicridos en suero pueden ser debidas a alteraciones hepatobiliares,
diabetes mellitus, nefrosis, hipotiroidismo, alcoholismo, hiperlipoproteinemia familiar entre otras.
Los triglicridos presentes en la muestra, al ser incubados

con Lipoproteinlipasa (LPL) liberan

glicerol y cidos grasos libres. El glicerol es fosforilado por Glicerolfosfato-deshidrogenasa (GPO) y ATP en
presencia de Glicerolquinasa (GK) para producir Glicerol-3-fosfato (G3P) y ADP.

El G3P es entonces

convertido a Dihidroxiacetona-fosfato (DAP) y Perxido de hidrogeno (H2O2) por GPO.

Al final el Perxido de hidrogeno (H2O2) reacciona con 4-aminofenazona (4-AF) y p-Clorofenol, reaccin
catalizada por la peroxidasa (POD) dando una coloracin roja.

MATERIAL Y EQUIPO:
MATERIAL BIOLGICO
Suero basal (ayuno)

MATERIAL DE LABORATORIO Y REACTIVOS

EQUIPO

Tubos de Ensayo (4) 13x100 y (4)12x75

Espectrofotmetro

Gradilla

Celdillas para espectrofotmetro

Pipetas Pasteur con bulbo

Centrfuga

Puntillas para pipetas automticas

Bao Mara

Tubos al vaco sin aditivos

Pipetas automticas de 1.0 ml

Agujas para sistemas al vaco

Pipetas automticas de 10 l

Reactivo de Triglicridos
Estndar de Triglicridos
Agua destilada

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TCNICA:

1.

Realizar una extraccin de sangre venosa a un paciente en ayuno (en el tubo correspondiente para
la obtencin de suero).

2.

Una vez coagulada la sangre, centrifugar la muestra a 3000 r.p.m. durante 5 minutos. Retirar el tubo
de la centrifuga y separar el suero del paquete globular.

3.

Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.

4.

Para medir la concentracin srica de triglicridos, pipetear en tres tubos de ensayo los siguientes
volmenes (ml) y mezclar: **

Blanco de reactivo

5.

Estndar

Muestra

Reactivo

1.0 ml

1.0 ml

1.0 ml

Estndar

---

0.01 ml

---

Muestra

---

---

0.01 ml

Incubar los tubos de ensayo a 37C por 5 minutos o a Temperatura ambiente 16-25C por 15
minutos. **

6.

Leer la absorbancia de Estndar y de Muestra contra el Blanco de Reactivo, trasvasando el

contenido de un tubo a una celdilla para espectrofotmetro. La lectura se realiza a 500 nm el color
es estable durante al menos 2 horas. **
**Consultar el inserto del reactivo.

CLCULOS.
Los valores derivan de la siguiente ecuacin:

Triglicridos (mg/dl) =

Dnde: AM es el valor de la absorbancia

AE es la absorbancia del estndar
CE es Concentracin del estndar en mg/dl.

VALORES DE REFERENCIA
TRIGLICRIDOS mg/dl

TRIGLICERIDOS mmol/L

BAJO

Hasta 150

Hasta 1.7

INTERMEDIO

151 - 199

1.71 - 2.25

ALTO

200 - 499

2.26 - 5.64

500

> 5.65

MUY ALTO

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REPORTE DE RESULTADOS

ALUMNO: ___________________________________________________ GRUPO: ________

LECTURA:
ABSORBANCIA
Estndar
Muestra

CLCULOS:

Triglicridos (mg/dl) =

RESULTADOS:
TRIGLICRIDOS

VALORES DE REFERENCIA
mg/dl

Hasta 150 mg/dl

CONCLUSIONES:

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