DISCUSION RANGO DE LINEALIDAD ACTIVIDAD ENZIMATICA

La actividad cataltica de un enzima se determina midiendo la velocidad

inicial de reaccin, que es la pendiente de la curva de progreso (curva
de producto formado o sustrato transformado frente al tiempo) en el
tiempo cero. Inicialmente, las reacciones transcurren linealmente,
pudindose tomar la pendiente de esta recta como velocidad inicial. A
tiempos ms largos, el progreso de la reaccin se aparta de la linealidad.
Esta cada de la velocidad de reaccin se debe a la disminucin
significativa de la concentracin de sustrato, aunque tambin pueden
influir otros factores como el aumento de la concentracin de producto,
cambios de pH, inactivacin del enzima, etc. La mxima fiabilidad en la
determinacin de la actividad de un enzima la suministra el valor de
velocidad inicial o velocidad durante el tramo inicial de progreso lineal
de la reaccin. (Aldave, 2004).
De esta forma podemos ver que con la dilucin que deberamos trabajar
durante toda la experiencia es de enzima 1:4 porque me asegura una
linealidad hasta en 10 min y me permite saber hasta que concentracin
llego de azcares reductores.

Adems de considerar la variacin de la velocidad con el tiempo, hay

que tener en cuenta que la actividad de una enzima es afectada por
otros factores como la temperatura, la fuerza inica, el pH, la
concentracin de S, la cantidad de enzima en el medio de medida. Todos
estos factores deben ser convenientemente conocidos y fijados al
realizar medidas de actividad enzimtica.
La medida de la actividad de una enzima requiere determinar el
consumo de S o la aparicin de un P de la reaccin en funcin del
tiempo. La determinacin cuantitativa de S o de P puede hacerse por

diferentes mtodos analticos segn el caso: espectrofotomtricos (los

ms

comunes),

volumtricos,

potenciomtricos,

radioqumicos,

espectrofluoromtricos. (Enzimologa, 2008).

Con la dilucin 1:1 se genera ms producto. Pero ya con el tiempo unos
productos comienzan a ser inhibidores, baja la actividad, el producto se
pega al centro activo y no deja a la enzima reaccionar.

Las enzimas son protenas especializadas en la catlisis de

reacciones bioqumicas. Destacan por ser extraordinariamente
especificas con un poder cataltico mucho mayor que el de los
catalizadores elaborados por el hombre (Lehninger, 1984).
Factores que afectan la actividad enzimatic
Efecto del Ph, temperatura e inhibidores
La relacion entre el PH y la actividad de cualquie enzima depende del
comportamiento cido-base de la enzima y del sustrato. Los valores
extremos del PH comunmente las inactivan y/o desnaturalizan. En
el intervalo de PH en el que la inactivacion es irreversible el proceso
involucra una ionizacion reversible de grupos funcionales en el sitio
o areas activas d ela molecula (Richardson e Hislop, 1985).
Las enzimas generalmente exhiben un mximo d eactividad en un
valor de PH particular. Ensu mayoria estas presentan un optimo de
actividad en PH de 4.5 a 8.0
Al igual que sucede con todas las reacciones quimicas, la rapidez d
elas reacciones enzimaticas se incrementan con la temperatura,
dentro del intervalo en el que la enzima permanece estable y activa.
El modelo de Arrhenius-que en lo general describe este proceso

satisfactoriamente-observa desviaciones cuando aplica a reacciones

bioquimicas en las que intervienen enzimas. En los casos tipicos de
comportamiento se pueden distinguir uno que est referido a la
activacion de la enzima y otro referido a su inactivacion (Peterson y
Johnsosn, 1978).
A partir del estudio

delos inhibidores enzimticos s eha obtenido

informacion de importancia sobre los mecanismos de catalisis

enzimatica, lka especificidad de las enzimas por el sustrato, la
naturaleza de los grupos funcionales en el centro activo y en el
mantenimiento dela conformacion activa de la molcula e la enzima.
Los tipos de inhibicion enzimtica mas importante son: competitiva,
acompetitiva,

no-competitiva

por

excesos

de

sustrato.

El

mecanismo y efecto de cada tipo ha sido estudiado ampliammente y

puede distinguirse experimentalemente (Robert, 1977). Cuando
sucede una inhibicion irreversible, se trata propiamente

de una

inactivacion de la enzima y se da cuando los agentes son capaces de

unirse covalentemente y, con ello, modificar permanentemente a un
grupo funcional necesario para la catlisis.