MTODO COLORIMTRICO PARA LA DETERMINACIN DE CREATINIA

EN ORINA
David Colorado 10120042, Laura Mara Vivas 10220030
Universidad Icesi
Facultad de Ciencias Naturales
Laboratorio de Anlisis Qumico
Santiago de Cali, Colombia
Abril 13 de 2011
obituary07@hotmail.com, lalam9104@hotmail.com
Resumen:
en
la
prctica
de
determinacin de creatinina en una
muestra de orina por medio del mtodo
colorimtrico
se
utiliz
un
espectrofotmetro a 500nm y se ley la
absorbancia pasado 5 y 10 minutos de
preparadas las disoluciones, las cuales
una es la disolucin estndar y la otra es
Introduccin:
La espectrofotometra se refiere a los
mtodos, cuantitativos, de anlisis
qumico que utilizan la luz para medir la
concentracin
de
las
sustancias
qumicas. Se conocen como mtodos
espectrofotomtricos y es segn de la
radiacin utilizada, por ejemplo la
espectrofotometra de absorcin visible
llamada tambin colorimetra.
Dentro de la fotometra de absorcin,
uno de los aparatos ms utilizados en la
determinacin de las concentraciones de
los analitos es el espectrofotmetro; que
es un instrumento que utiliza medidas
de absorcin de las radiaciones
electromagnticas.
Las
determinaciones
por
espectrofotometra requieren que se
lleve a cabo previamente una reaccin
qumica especfica que vara segn el
analito a determinar. Los productos
finales de esta reaccin son los que se
cuantifican utilizando la lectura de la
absorbancia de la muestra, as como la
de estndares conocidos.

la que contiene la muestra de orina,

ambas utilizadas para la determinacin
de creatinina. El contenido de creatinina
en la muestra de orina despus de 5
minutos de tratamiento fue de 2.661
gcreat/24 hrs; y el contenido luego de 10
minutos fue de 2.660 gcreat/24 hrs.
El principio del Espectrofotmetro est
basado en la Ley de Lambert-Beer, que
relaciona la intensidad de luz incidente
y la de la luz transmitida, cuando es
atravesada una longitud de onda de un
medio que absorbe.
Datos, clculos y resultados:
Tabla 1. Datos de la absorbancia
medida en diferentes tiempos
Muestra

Absorbancia
a 5 min

Absorbancia
a 10 min

Estndar
Disolucin
de orina

0.351
0.519

0.364
0.538

Para determinar la absorbancia se

utiliz un espectrofotmetro a 500 nm.
Tabla 2. Datos del contenido de
creatinina en una muestra de orina
Tiempo de ledo
Contenido de
de absorbancia
creatinina
(min)
(gcreat/24hrs)
5
2.661
10
2.660

Para determinar el contenido de

creatinina en la muestra de orina del
paciente se utiliza la siguiente ecuacin:

contenido de creatinina=

|.|dis
|.|est

conce . estan factor . dilu.

orina produ. humano. dia

Entonces, la concentracin de la
muestra estndar es de 0.02g/L, el factor
de dilucin es de 50/1, y la cantidad de
orina producida por un humano adulto
en promedio es de 1.8L/24hrs,
reemplazando:
cont . cret =

0.519 0.02 g

50
0.351
L

1.8 L
=2.661 g /24 hrs
24 hrs
Anlisis de Resultados:
El mtodo o tcnica de colorimetra
busca determinar la concentracin de
una sustancia o bien del producto de su
reaccin con un reactivo qumico
especfico; para ello, la tcnica se basa
en que la absorbancia del compuesto
analizado es proporcional a la
concentracin de la sustancia problema
en la muestra1.
Esta tcnica es muy usada en el mbito
clnico para determinar la concentracin
de sustancias presentes en el cuerpo
como: glucosa, colesterol, urea, acido
rico,
lpidos,
calcio,
hierro,
triglicridos,
fosfatasa
alcalina,
transaminasas, etc. Aunque, como su
nombre lo sugiere, la colorimetra
necesita que el compuesto a analizar no
sea incoloro; pero esto no es un limitante
para la versatilidad de la tcnica, ya que
es posible modificar dichas sustancias
incoloras para poder determinar, a partir
de la colorimetra, su concentracin.
Por ejemplo, para determinar la
concentracin de colesterol en suero, que
es un compuesto incoloro y que por lo
tanto no absorbe luz en la regin UV
visible, este se hace reaccionar con un

reactivo especfico con tal de formar un

producto coloreado que puede ser
medido por el espectrofotmetro o
colormetro y as determinar su
concentracin1.
Durante la prctica se opto por
determinar
la
concentracin
de
creatinina en una muestra de orina
humana por medio de la tcnica de
colorimetra, mediante el uso de un
espectrofotmetro de UV visible.
Los aminocidos glicina, arginina y
metionina forman en el hgado la
creatina, que por fosforilacon da forma
a la fosfocreatina, esta se mantiene en
circulacin por la sangre entre los
msculos y el cerebro, y solamente en
cantidades muy pequeas es eliminada a
travs de la orina. Esta fosfocreatina
acumulada en los msculos es un
depsito de energa para el cuerpo ante
un esfuerzo fsico; en dicho esfuerzo
fsico la fosfocreatina pierde su grupo
fosfato y pasa a ser creatina, y con la
deshidratacin pasa a ser creatinina.
Dicho de otra forma, la creatinina es el
anhdrido de la creatina que despus de
este proceso pasa a la sangre y no vuelve
a ser utilizada, siendo desechada
constantemente por la orina.
Adems, por su funcin, la creatinina se
forma endgenamente en el metabolismo
muscular, existiendo una relacin directa
con la masa muscular; por eso, los
estndares de creatinina eliminada en la
orina humana son diferentes para
mujeres (0.5 1.0mg/dL)2 que para los
hombres (0.6 1.2mg/dL)2.
En gran medida, es de importancia
clnica, en cuanto a la salud, que la
creatinina sea filtrada por los
glomrulos, como ya se dijo, esta no se
reabsorbe en circunstancias normales y
solo una mnima proporcin es secretada
a nivel tubular, aumentando dicha
secrecin con el incremento de la

concentracin srica de creatinina en la

insuficiencia renal progresiva. Por tanto,
segn los estndares, un nivel de
creatinina prximo al nivel superior
indica nicamente que el paciente debe
tener filtrado glomerular y un
rendimiento renal de por lo menos del
50% de lo normal. En otras palabras,
tanto ms elevado es el valor de la
concentracin de la creatinina srica,
mayor es el descenso de la funcin
renal2.
En la realizacin de la prctica se
encontr un nivel de creatinina de
2.661g/24horas; se investigo que la
cantidad promedio de orina producida
por un humano adulto en 24 horas es de
1.8L, es decir tambin que el nivel de
creatinina
puede
expresarse
en
2.661g/1.8L. Al pasar esta concentracin
obtenida en trminos de mg/dL
obtenemos, Si: 1L = 10dL, entonces:
2.661 g 1000 mg
1L

1.8 L
1g
10 dL
147.8 mg /dL

Se dedujo que el valor es exorbitante, es

decir que la concentracin de creatinina
en mg por unidad de dL se escapan de
los estndares reportados anteriormente
por una cantidad enorme; confiando en
la conversin de los datos, se dedujo que
no podra haber causa de que se
produjera tal cantidad de creatinina en la
orina humana.
Se determino encontrar otra fuente para
contrastar los resultados obtenidos, se
encontr que la excrecin urinaria de
creatinina en un hombre cubano con una
edad entre 19 y 58 aos, talla de 170 cm
y peso de 66,5 kg fue de 1.216,19 mg/24
horas (IP 95%: 821,02-1.611,36 mg/24
horas). La excrecin urinaria de
creatinina en una mujer cubana con una
edad entre 19 y 58 aos, talla de 160 cm

y peso de 59,7 kg fue de 852,00 mg/24

horas (IP 95%: 420,15-1.283,84 mg/24
horas)3. Por lo tanto se tomo como
estndar de excrecin de creatinina los
siguientes datos, para hombres adultos
valores cercanos a 1.216 g/24horas y
para mujeres valores cercanos a 0.85
g/24horas.
Realizando un % de error entre los
niveles considerados estndar y el valor
obtenido, suponiendo que el paciente es
un hombre, es de:
%E=

VexVteo
Vteo

%E=

( 2.661 ) ( 1.216 )
=1.18
1.216

Lo que nos permiti inferir en que,

claramente, el valor de de la creatinina
del paciente, suponiendo es hombre, esta
considerablemente por encima de el
estndar determinado en el desarrollo de
este anlisis; permitiendo deducir que el
paciente posee una insuficiencia renal de
ms de 50%, pues excede el lmite
superior del estndar encontrado.
Los errores presentes durante la prctica
se le atribuyen a aquellos que afectaron
la capacidad de absorbancia de la
muestra problema. Entre estos se destaca
un error sistemtico personal que se
observo en la elaboracin de la
muestra problema con el acido prico en
medio alcalino, pues la posibilidad de
que se agregara ms menos de este
reactivo a la muestra problema pudo
afectar el rango al que se mide la
absorbencia de la muestra, el cual es de
500nm2.
Conclusiones:
La absorbencia permite determinar la
concentracin de un sustrato o solucin,

que se quiera analizar, porque las

molculas
de
todo
compuesto
interacciona con la luz polarizada,
interaccin
que
reconoce
el
espectrofotmetro.
Los niveles de creatinina por encima del
estndar indican que el funcionamiento
renal del paciente es deficiente, y que
por lo tanto la filtracin por parte de los
glomrulos tambin lo es; permitiendo
concluir
para
el
analista
el
funcionamiento de las nefronas del
paciente.
La colorimetra es un mtodo muy
verstil porque permite analizar una gran
variedad de muestras compuestos sin
necesidad de alterarlos en gran medida,
exigiendo menos experticia en el
experimentador y otorgando resultados
ms precisos y exactos.
Referencias:
1. J. Ruiz Soriano, problemas de
Laboratorio Quimico y Farmaceutico,
2da Edicion, Elsevier, 2009, Espaa, pp.
194 195 y 204.
2. J. Diaz Portillo, M. T. Fernandez del
Barrio, F. Parede Salido, Aspectos
Basicos de Bioquimica Clinica, Diaz de
Santos, 1997, Espaa, pp. 83 84.
3.
http://scielo.isciii.es/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S021216112003000200003
Visitada el da lunes11 de abril del 2011
a las 10am.