UNIDAD 6.

BIORREACTORES Y
CRECIMIENTO MICROBIANO.

Los bio-procesos industriales

requieren de tres puntos
fundamentales:

Crecimiento microbiano eficiente

en grandes volmenes.
Acumulacin de metabolitos
secundarios en el cultivo.
Si el proceso implica bioconversin o produccin de
enzimas, que esto ocurra en las
condiciones de operacin del
proceso.

Un biorreactor es un volumen
de control o sistema que
mantiene un ambiente propicio
para el crecimiento biolgico.
En algunos casos, un biorreactor
es un recipiente en el que se lleva
a cabo un proceso qumico que
involucra organismos o sustancias
bioqumicamente
activas
derivadas de dichos organismos.
Este proceso puede ser aerbico o
anaerbico.
Estos
biorreactores
son
comnmente cilndricos, variando
en
tamao
desde
algunos
mililitros hasta metros cbicos y
son usualmente fabricados en
acero inoxidable.

Los criterios iniciales de diseo de un

biorreactor son:

Tener
caracterizado
morfolgica
bioqumicamente el cultivo a usar.

Caractersticas hidrodinmicas del reactor: es

necesario minimizar los fenmenos de
transporte en el reactor, para evitar
gradientes de nutrientes, temperatura.
La cintica de crecimiento bacteriana debe esta
ampliamente estudiada.
Asegurar
la
estabilidad
gentica
microorganismo,
impidiendo
que
estimulen mutaciones.

del
se

Esterilizacin lo ms barata posible, hasta el

punto que, a pesar de su importancia, y
segn el proceso, se llega a obviar.
Control de las condiciones ambientales (T,
pH,P,etc...).

Los criterios iniciales de diseo de un

biorreactor son:

Construccin y modo de operacin.

Facilidad para el escalamiento..

Inclusin de sistemas de oxigenacin

adecuados a las exigencias del
microorganismo.

Sistemas de muestreo para determinar las

condiciones internas del biorreactor.

Adopcin de refrigeradores, para mantener

constantes las condiciones de temperatura (la
actividad microbiana genera una gran
cantidad de calor, que puede afectar
negativamente a la produccin).

Materiales no txicos (ni para el

microorganismo ni para el consumo).

Tipos de Biorreactores:

De lecho fijo o empaquetado. Los

microorganismos se encuentran en
una matriz empaquetada. Por lo
general,
la
alimentacin
se
produce de forma vertical en
sentido ascendente.

En columna de burbujas. El
sustrato es el medio lquido en el
que estn inmersas las clulas,
aportndose ste por la parte
inferior del reactor. Se insufla gas
comprimido por la parte inferior
que, junto con una serie de bucles
externos, permite homogeneizar el
interior del reactor, suprimiendo
posibles gradientes.

Tipos de Biorreactores:

De lecho fluidizado. No son muy corrientes,

dados su alto coste y complejidad. El microorganismo
permanece suspendido (debido a burbujeo continuo,
lo que no es fcil de conseguir) en el fermentador,
como consecuencia del sustrato lquido ascendente.
De lecho de goteo. Son los ms tradicionales
(similares a los de lecho fijo). El sustrato se hace
pasar lentamente por la matriz empaquetada que
contiene
al
microorganismo
(un
proceso
semicontinuo, aunque permiten trabajar tambin en
discontinuo), lo que supone la consideracin de un
tiempo de residencia en dicha matriz.
De enzimas o clulas inmovilizadas. Son los
ms interesantes y novedosos. Los de enzimas
presentan grandes ventajas, pero es difcil aislar la
enzima que nos interesa. Permiten reutilizar
continuamente el biocatalizador, disminuyendo los
costes. Dicha inmovilizacin puede efectuarse por
medios fsicos (adsorcin, el ms usado, o
atrapamiento mecnico en matriz o membrana) o
qumicos (enlaces covalentes). Presentan el
inconveniente de que, dado que las clulas pueden
participar en varios procesos fermentativos, aumenta
la inestabilidad gentica

Los bioprocesos se desarrollan e implementan de

diferentes maneras, en sus escalas de
laboratorio, piloto, y manufactura
El
escalado
puede
definirse
como
el
procedimiento para disear y construir un
sistema de GRAN ESCALA base de los resultados
de experimentos con equipamiento de PEQUEA
ESCALA.
El desempeo de los bioprocesos es afectado
por varios parmetros:

El diseo geomtrico

Las variables de operacin

Propiedades del fluido

Procesos de transporte

Cintica de los organismos

El diseo de un prototipo optimizado para lograr
la mayor produccin debe ser trasladado a gran
escala, considerando toda esta complejidad de
parmetros

Criterios de escalado

Mantener constante la potencia por

volumen utilizada, P/V
Mantener constante el coeficiente
volumtrico de transferencia de masa,
kLa
Mantener constante la velocidad de
la punta de las paletas del agitador.
Mantener constante el tiempo de
mezclado
Mantener constante el nmero de
Reynolds, Re
En los casos de procesos donde el
producto es muy viscoso (plsticos,
polisacridos) o el crecimiento es
filamentoso, la limitacin la plantea la
relacin P/V (o la agitacin) del fluido.
En general en el caso de procesos
aerbicos (como produccin de amino
cidos, levaduras de panificacin y
antibiticos) se debe mantener constante
la transferencia de oxigeno (kLa) como
objetivo del escalado

Se estima que un tercio de los

proyectos de produccin emplean
la regla de mantener P/V, aprox
20% usan la velocidad de la punta
del agitador, otro 20% de las
plantas industriales realiza sus
escalados en base al tiempo de
mezclado. El resto de los escalados
utiliza la concentracin de sustrato
o producto limitante o inhibitorio,
ms comunmente sobre la base de
la concentracin del oxgeno
disuelto

Igual consumo de potencia

Basado en la historia prctica del
escalado, la mayora de los
procesos fermentativos para la
produccin de alcohol y cidos
orgnicos han seguido el concepto
de la similitud geomtrica y
mantener constante la relacin de
potencia por volumen

FUNDAMENTOS DE
CRECIMIENTO MICROBIANO.
El comportamiento de un microorganismo en
crecimiento es el resultado de la interaccin que se
produce entre el microorganismo y el medio ambiente
en el reactor, y que en rigor es el resultado de los
llamados efectores intra y extra celulares.
Los efectores internos estn representados por la
dotacin gentica intrnseca del organismo
considerado y por sus mecanismos de regulacin
metablica.
Estos ltimos pueden ser modifi cados por
alteraciones del medio ambiente o ms precisamente
por los efectores externos mientras que la existencia
de un gen depende de la especie del microorganismo
considerado.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

Fase I: Fase de latencia, no hay
mucho crecimiento celular, solo
sntesis de enzimas y ajuste de
la maquinaria celular para
adaptarse al medio.
Fase II: Fase exponencial de
crecimiento, que es
proporcional a la concentracin,
las rutas metablicas estn
ajustadas y el uso de sustrato
es ms eficiente.
Fase III: Fase estacionaria, el
crecimiento celular cesa por
limitaciones de sustrato o por
acumulacin de metabolitos en
el medio. A pesar de esto,
muchos productos son
producidos en esta fase, com la
penicilina.
Fase IV: Fase de muerte
celular, debido a acumulacin
de txicos en el medio o falta se
sustrato.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

LEYES DE VELOCIDAD
En general , el desarrollo bacteriano se puede sintetizar
mediante al siguiente ecuacin:
Clulas + Sustrato

ms clulas + Productos.

La expresin matemtica ms usada es la de crecimiento de

Monod:

r g = C C

r g =velocidad de crecimiento microbiano ,

C C =Concentracin celular ,

( )

( )

gr
lt

=Velocidad especfica de crecimiento ,

CS
= max
s1
K S +C S

gr
lts

( 1s )

velocidad especfica de
max= Mxima
crecimiento.

K S=

Contante de Monod (gr/lt)

C S=

Concentracin de sustrato
(gr/lt)

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

LEYES DE VELOCIDAD
En algunos sistemas los productos inhiben el crecimiento celular,
por ejemplo, la fabricacin de vino; donde el desarrollo celular es
inhibido por el etanol. La ecuacin cintica, teniendo en cuenta este
fenmeno, es emprica y puede tomar la forma:

r g =k obs

max C S C C
K S +C S

k obs = 1

Cp
C *p

n = constante emprica.
Cp* = concentracin a la cual cesa el
crecimiento bacteriano.
Ecuacin de Tessier
r g = max

[ ( )]

C
1exp S C C
k

Ecuacin de Moser

max C C
r g=

1+kC C

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO

MICROBIANO.

Los factores que intervienen

son:
- Concentracin de sustrato.
- Temperatura.
- pH
- Potencial redox.
- Concentracin de oxgeno.
- Presin hidrosttica.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

ESTERILIZACIN DE CULTIVOS.
OBJETIVOS:
Evitar el desarrollo de microorganismos patgenos.
Evitar el desarrollo de microorganismos alterantes.
Incrementar la reproducibilidad del proceso
(rendimiento, pureza y tiempo de produccin).

MTODOS DE ESTERILIZACIN:
Calor hmedo (autoclave o chorro de vapor).
Calor seco
Radiacin ( Rayos X ,UV)
Esterilizacin qumica con lquidos o gases.
Filtracin (filtros de superficie o de profundidad).
Nuevos mtodos ( altas presiones, campos elctricos)

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

ESTERILIZACIN DE CULTIVOS.
DONDE SE CONTROLA LA ESTERILIDAD?

Mantener la pureza del inculo.

Esterilizar el medio de cultivo y los aditivos.

Esterilizar el material en contacto con el

medio ( recipiente, fermentador, vlvulas y
conductos)

Esterilizar los gases entrantes y salientes.

Mantener las condiciones aspticas durante

la manipulacin.

Construccin apropiada del biorreactor para

su esterilizacin y para la prevencin durante
la fermentacin.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

ESTERILIZACIN DE CULTIVOS.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

CLASIFICACIN DE BIORREACTORES

1- Por su forma y tipo de agitacin.

2- De acuerdo a las fases: homogeneos
o heterogeneos.
3- Por el tipo de operacin (continuos,
semicontinuos, discontinuos)
4- Biorreactores especiales: de estado
slido y foto- biorreactores.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

Clasificacin de biorreactores por su forma y tipo

de agitacin

Agitacin mcanica: utilizan equipos mecnicos

Agitacin numatica: utilizan gas a presin

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

Agitacin mcanica: utilizan equipos mecnicos

Son los ms utilizados,

- Sistema de agitacin mecnica.
- Agitacin continua.
- Inyeccin de aire por la parte inferior.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

2- Clasifi cacin de biorreactores de

acuerdo a las fases:
- Biorreactores homogeneos: las clulas (o
enzimas) permanecen en suspensin en el
medio de cultivo durante todo el proceso.
- Biorreactores heterogeneos: las clulas (o
enzimas) estn unidas a una fase solida en
contacto eco el medio de cultivo.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

2- Clasificacin de biorreactores de acuerdo a

las fases:

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

3- Clasifi cacin por el tipo de operacin

- Proceso continuos.
- Procesos en batch o discontinuos.
- Procesos en batch alimentado o semicontinuos.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

4. Biorreactores Especiales.

FUNDAMENTOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO.

4. Biorreactores Especiales.

ESTEQUIMETRIA DEL CRECIMIENTO

MICROBIANO.
La estequiometra del crecimiento bacteria es bastante compleja y vara de
acuerdo con la combinacin de microorganismo/sustrato y las condiciones
de cultivo.
Clulas + Sustrato

ms clulas + Productos.

Para relacionar a nivel macro, el sustrato consumido, las nuevas clulas

formadas y el producto generado, se usan los llamados, coeficientes de
rendimiento, (Yield coefficients)
Y C /S =

CC
Cp
Masa de celulas formadas
Masa de producto formado
Y p/C =
=
=
Masa de nuevas celulas
CC
Masa de sustrato consumido
C S

La formacin de producto se lleva a cabo en diferentes fases del

crecimiento celular. Cuando la formacin de producto se lleva a cabo de la
fase exponencial:

max C C C S
r p =Y p /C r g =Y p /C C C =Y p /C
K S +C S

ESTEQUIMETRIA DEL CRECIMIENTO

MICROBIANO.
Parmetro de mantenimiento celular (m)
m=

Masa de sustrato consumido solo para mantenimiento

Masa de celulasTiempo

Balance de masa para la utilizacin de

sustrato.

][

][

][

Velocidad
Velocidad
Velocidad
Velocidad
=
+
+
neta de consumo
neta de muerte
neta de consumo
neta de consumo
de sustrato
de celulas
de sustrato para formar prodcuto
de sustrato para mantenimiento

BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y

SUSTRATO.
BALANCE DE MASA
CELULAR

BALANCE DE SUSTRATO

BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y

SUSTRATO.
(Para un reactor BATCH)
Para un sistema sin flujos de entrada y salida.

CELULAS.

SUSTRATO
Consumo de sustrato en la
fase se crecimiento.
Consumo de sustrato en la
fase estacionaria.
Formacin de producto durante la fase
de crecimiento.

BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y

SUSTRATO.
EJEMPLO 1.
Los siguientes datos fueron recopilados en un cultivo batch del microorganismo
Sacchromyces cerevisiae, con glucosa como sustrato.
Glucosa + Clulas -------> Ms clulas + Etanol
Tiempo

Clulas

Glucosa

Etanol

Determinar, en base a estos datos:

Y S /C , Y C / S , Y S / P , Y P /S , Y P /C , max y K S

BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y

SUSTRATO.
EJEMPLO 1.
a) Calcular el coeficiente de rendimiento de sustrato, para csa hora de
crecimiento:
* Entre la hora cero (0) y una (1) hora.

* Entre la hora uno (2) y la hora dos (3).

b) Coeficiente de rendimiento de sustrato:

BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y

SUSTRATO.
c) El coeficiente de rendimiento producto a masa celular:

Ahora calcularemos max y

de Monod.

Ks

que son los parmetros del modelo

max C C C S
r g=
K S +C S

Para hallar los valores, se usa linealizacin de la ecuacin de Monod,

con la forma de Hanes-Woolf.

BALANCES DE MATERIA PARA CELULAS Y

SUSTRATO.
K s +C s
1
=
r g max C c C s
Ks
Cs
1
=
+
r g max C s C c max C s C c
Ks
Cs
1
=
+
r g max C c max C c

Cc
rg

( )

Cc K s 1
1
= max
+ max
rg
Cs
Y=

mX

dC c
r g=
dt

1
Cs

b
max=0,33 h1

K S =0,33

1
lt

El Quimiostato: el reactor continuo

ideal de tanque agitado
El uso de reactores continuos de tanque agitado, con el fin de extender la
duracin de un cultivo microbial, se implement en la dcada de 1950 por
Novick y Szilard (1950) y Monod (1950)

El hecho que un reactor continuo de tanque agitado se poda utilizar para

mantener el crecimiento microbial en su valor de estado estacionario, el cual
puede variarse desde cualquier velocidad de crecimiento hasta la mxima m
max , fue un avance muy importante, ya que acab con la tradicional
manera de pensar en el sentido que el tiempo para el crecimiento
estacionario de los microorganismos era nicamente posible a la mxima
velocidad, correspondiente al tiempo mnimo de replicacin que aparece en
los cultivos por lotes.

El Quimiostato: el reactor continuo

ideal de tanque agitado
Por consiguiente, el empleo de biorreactores continuos de mezcla completa
para el estudio de la fisiologa microbial, condujo a importantes avances en
la comprensin del ciclo celular, la regulacin metablica y la formacin de
productos.
La agitacin se puede lograr por medio de impulsores o por el movimiento
de la fase lquida debido al ascenso de burbujas de gas. En los sistemas
aerobios, el suministro de oxgeno a los microorganismos se lleva a cabo,
generalmente, por burbujeo de aire.
En el caso ideal la fase lquida est completamente mezclada, es decir, la
composicin del lquido es uniforme en todos los puntos de la mezcla de
reaccin. De forma similar, la temperatura se mantiene constante y uniforme
por medio de la circulacin de agua de enfriamiento, bien sea por
serpentines que se encuentran dentro del reactor, o por el interior de una
chaqueta que rodea el recipiente de reaccin. Por lo general, el pH del
medio de cultivo se controla con la adicin de cido o de base.

El Quimiostato: el reactor continuo

ideal de tanque agitado
Balances de materia para el reactor, por cada uno de los componentes
importantes:
Acumulacin = Entrada Salida + Generacin.
Clulas:

d (C c V )
=F e C c0 F sal C c + (C c V )
dt
dC c F e
F
=
C c0 sal C c + C c
dt
V
V

( ) ( )

Si definimos Fe = Fsal y una nueva variable llamada Velocidad de

dilucin:
F
D=
max C C C S
V
C =

dC c
=DC c0 DC c + C c
dt

K S +C S

Para una operacin en estado estacionario y entrada de medio de cultivo

estril:

dC c
=0
dt

DC c0 =0

DC c = C c

D=

El Quimiostato: el reactor continuo

ideal de tanque agitado
Sustrato:

d (C s V )
1
= F e C s0 F sal C s
(C c V )
dt
Y c /s

( )

dC s F
1
=
(C s0 C s )
Cc
dt
V
Y c /s
dC s
1
=D (C s0 C s )
Cc
dt
Y c/ s
Para el estado estacionario:

dC s
=0
dt

1
0=D (C s0 C s )
Cc
Y c /s
1
D (C s0 C s )=
Cc
Y c/ s

El Quimiostato: el reactor continuo

ideal de tanque agitado
Combinando dos ecuaciones que hemos obtenido:

D=

max C C C S
C c=
K S +C S
max C C C S
D C c=
K S +C S
DK s
C S=
max D

El crecimiento especfico puede ser controlado por la velocidad

de dilusin.