Aceites Esenciales

con propiedades antimicrobianas

RESUMEN
El presente estudio trata sobre la extraccin y

evaluacin del perfil biolgico antimicrobiano in vitro de

aceites esenciales de especies vegetales aromticas. Los
aceites fueron obtenidos mediante destilacin por
arrastre de vapor de agua de diferentes rganos: partes
areas (hojas y tallos) y dermis de ctricos (cscara). El
crecimiento del hongo saprfito Neurospora crassa fue
inhibido por el aceite de Citrus limetta (Lima) a
concentraciones de 0, 5 mg/ml. El aceite de Rosmarinus
oficinalis (Romero), a una concentracin de 1 mg/ml,
inhibi el crecimiento de la bacteria Staphylococcus
aureus. Mientras que los aceites de Petroselium
sativum (Perejil), Satureja boliviana (Khoa), Schnus
molle (Molle), Citrus aurantium (Naranja), Citrus
paradisii (Toronja) y Citrus nobilis (Mandarina),
inhibieron el crecimiento tanto de hongos a 0, 5 mg/ml,
como bacterias a 1 mg/ml Entre estas ltimas esencias,
las del Perejil y Molle a 3.7 mg/ml y la Khoa a 7.5 mg/
ml inhibieron el crecimiento de Sigella flexneri.
1. INTRODUCCION

Universidad Mayor de San Andrs

Facultad de Ciencias Farmacuticas
y Bioqumicas

Instituto de Investigaciones Frmaco

Bioqumicas-IIFB
Area Temtica de Qumica Farmacutica

A quien debe dirgrse la correspondencia

ifb@hotmail.com

Bolivia presenta una diversidad de zonas geogrficas con climas

variados, favoreciendo de esta manera que exista una gran riqueza
de flora con propiedades medicinales an no estudiadas en su
totalidad. Con este trabajo pretendemos contribuir a las
investigaciones cientficas sobre aceites esenciales de plantas
aromticas comunes en nuestro pas. Los aceites esenciales son los
constituyentes odorferos o esencias de una planta, son productos
voltiles, aromticos, constituidos por una mezcla compleja de varias
sustancias,' 2.2 generadas por lo general mediante la ruta biosinttica
del cido mevalnico.4,5,6
El trmino aceite probablemente se origina del hecho que, el
aroma de una planta existe en forma lquida inmiscible en agua, en
glndulas o entre clulas. Los aceites esenciales se hallan en las
flores, sumidades floridas, hojas, frutos y semillas de los vegetales a
veces, aunque no muy frecuentemente, en los tallos y races. Su
distribucin es amplia en el reino vegetal.3,4,5
Los aceites esenciales son utilizados en la industria cosmtica,
farmacutica, alimenticia y entre otros usos, son materia prima pivotal
en la aromaterpia atribuyndoseles acciones antibacterianas;
antifngicas; antivirales, etc.7 Cabe destacar que es tambin
importante el procedimiento que se emplea para la obtencin de las
esencias de los vegetales, es as que existen varias tcnicas, entre

Vol. VII - Diciembre de 1999

FLORES, VELASCO, FIGUEROA, GIMENEZ.

las ms utilizadas estn el mtodo por arrastre de vapor

de agua, la extraccin por fluidos en estado supercrtico,
la expresin en fro y otros mtodos especficos que se
utilizaran de acuerdo al uso final que tendrn los aceites
esenciales. 8' 9
METODOLOGA
OBTENCION DE LOS ACEITES ESENCIALES POR
ARRASTRE DE VAPOR
Los aceites esenciales fueron obtenidos por el mtodo
de arrastre de vapor de agua, utilizando un extractor de
aluminio de capacidad de 12 litros, para procesar aprox. 1
kilo de material vegetal. Consta del reservorio de agua
(3Lt) un trpode (18cm) y una rejilla milimtrica metlica
sobre la cual se deposita la muestra vegetal pesada (0.5
a 1.0Kg). El extractor cerrado hermticamente esta
conectado aun condensador de serpentn, que desemboca
en una bureta graduada. Cuando el volumen de aceite
destilado se mantiene constante, se considera punto final
de la extraccin. El aceite extrado es secado con Na2SO4
anhidro y conservado a -20 C en tubos tapa rosca. 70'17,72

ATCC 12022, Escherichia coli ATCC 8739.a una

poblacin de 106 ufc/ml. La caja fue incubada 372C durante
24 hrs antes de leer el crecimiento o inhibicin.14
Concentracin Mnima Inhibitoria (CIM): Se realiz
la tcnica de microdilucin utilizando el medio caldo Mueller
Hinton (MHB-DIFCO), en el que se realizaron las diluciones
de los aceites en estudio a partir de 30mg/ml, adicionando
una poblacin bacteriana a 3 x 106 ufc/ml de cada
microorganismo, colocando en la microplaca controles de
crecimiento bacteriano; control de esterilidad y control de
solvente. Una vez montada toda la microplaca, se incubo
a 372C por 16-18 hrs;, despues de este periodo las placas
se examinaron visualmente. 14

El punto final (Concentracin Mnima Inhibitoria) se

considera la menor concentracin de compuesto frente a
la cual el microorganismo ensayado no presenta desarrollo
visible. El criterio de desarrollo es una turbidez definida
como se presenta en el control de crecimiento; y la CIM
se observa cuando no hay turbidez, como el control de
esterilidad.
Concentracin Mnima Bactericida (CMB):

PRUEBAS BIOLOGICAS
Todo el material de vidrio, medios de cultivo, y agua
destilada fueron esterilizados en autoclave (Al American,
Mod-No 25X) a 120 C, por 15 min a 1.5 atm. Los medios
de cultivo utilizados fueron Agar Saboraud, Caldo
Saboraud, Agar Muller Himton, Caldo Soya Tripticasa.
Como control en las pruebas antifngicas, se utiliz
Ketoconazol (2.5 ug/ml) y en las pruebas antibacterianas,
Gentamicina(10ug/ml).
Evaluacin antifngica contra Neurospora crassa
1M70, ATCC 9279: En una microplaca de 24 pozos se
colocaron los aceites (a 1.0, 0.5 y 0.2mg/ml) mezclados
con el medio inoculado con esporas (106) de N. Crasssa.
La microplaca fue incubada a 289C en estufa por 24hr antes
de realizar la lectura del crecimiento o inhibicin. 13
Evaluacin antifngica contra Candida albicans
ATCC 10231 En una microplaca de 24 pozos se colocaron
los aceites (a 1.0, 0.5 y 0.2mg/ml) mezclados con el medio,
una vez solidificado, se siembr C. albicans.(106 ufc/ml)
La microplaca fue incubada a 372C en estufa por 24hr antes
de realizar la lectura del crecimiento o inhibicin.
Evaluacin antibacteriana contra Bacterias: El
grado de inhibicin de crecimiento mediante fue
determinado mediante la tcnica de Mitcher, utilizando caja
Petri y mezclando el aceite (1 mg/ml) con el medio de cultivo
(MHA) sobre el cual se sembraron las bacterias en estudio:
Staphylococcus aureus ATCC 6538 Shigella flexneri

La CMI mide la capacidad del agente antimicrobiano

para inhibir la multiplicacin del microorganismo. En
consecuencia los microorganismos presentes en el inculo
pueden ser "slo inhibidos" por el compuesto
antibacteriano, estos reinician su crecimiento si se elimina
la accin del compuesto, en este caso se dice que es
Bacteriosttico . En caso de ser Bactericida los
microorganismos no podrn volver a multiplicarse aunque
sean separados del compuesto antibacteriano.
Estas pruebas se basan en la anterior tcnica de
microdilucin. Se realiza diluciones de la suspensin
bacteriana inicial de 1x106 ufc/ml, para determinar el
nmero real de unidades formadoras de colonias del
inculo.
Despus de realizar la lectura de la CIM, se sembraron
100 ul de todos los pocillos que no tuvieron desarrollo (no
turbios) en cajas Petri con agar Nutritivo,se incubaron las
cajas, a 372C por 16-18 hrs.14
Despus del tiempo de incubacin, realizar el recuento
de colonias desarrolladas y se compara con el inculo
inicial (105ufc/ml). Dado que las substancias bactericidas
no siempre esterilizan totalmente una poblacin bacteriana,
la mnima concentracin del agente antibacteriano que
permita sobrevivir a menos de 0,1% del inculo original
se denomina CONCENTRACION BACTERICIDA MINIMA
O CONCENTRACION LETAL MINIMA.15

JARABE 15 MG

AMBROLITIC CAPSULAS 30 MG

C1 Chiesi Wassermann

Ambroxol
Espaa
Monosustancia de doble dimensin
t Iva
enso ac'
M uco l ltlva - T
* Fabricado bajo licencia por: Laboratorios Alfa Ltda.
Vol. VII- Diciembre de 1999

ACEITES ESENCIALES CON PROPIEDADES ANTIMICROBIANAS

Biolgicos

RESULTADOS
Qumicos
La Tabla No 1, detalla el nombre cientfico, nombre
comn y porcentaje de rendimiento del aceite esencial
destilado de cada una de las 9 plantas estudiadas. Este
grfico, representa el rendimiento relativo de los aceite
obtenidos durante nuestros estudios. Puede observarse
que la especie de mayor rendimiento es el Molle, dentro
de las especies de los ctricos, la Naranja produce ms
aceite que la Toronja, la Mandarina, y la Lima, mientras
que la esencia de perejil es la menos abundante.

Todos los aceites esenciales fueron evaluados

mediante pruebas in vitro contra bacterias Gram (+) y Gram
(-), as como contra mohos y levaduras para definir su
actividad antbacteriana y antifngica. Los resultados de
las pruebas antibacterianas se detallan en la Tabla No. 2 y
los resultados de las pruebas antifngicas se presentan
en la Tabla No. 4.
TABLA No 2.- RESULTADOS DE LA ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANA DE LOS ACEITES ESENCIALES A
1 MG/ML

TABLA No 1.- NOMBRE CIENTIFICO , NOMBRE

COMUN Y RENDIMIENTO DE LAS ESPECIES
VEGETALES.
Nombre cientfico

Nombre comn

Rendimiento

Nombre cientfico

Petroselium sativum

(-)

(+)

(-)

Citrus limetta

(-)

(-)

(-)

Citrus paradisii

(+)

(-)

(-)

Citrus nobilis

(+)

(-)

(-)

Petroselium sativum

Perejil

0.09%

Citrus limetta

Lima

0.10%

Citrus paradisii

Toronja

0.20%

Citrus nobilis

Mandarina

0.27%

Citrus aurantium

(+)

(-)

(-)

Citrus aurantium

Naranja

0.33%

Cymbopgon citratus

(+)

(-)

(-)

Cymbopgon citratus

Paja Cedrn

0.40%

Satureja boliviana

(-)

(+)

(-)

Satureja boliviana

Khoa

0.45%

Rosmarinus oficinalis

Romero

0.55%

Rosmarinus oficinalis

(+)

(-)

(-)

Schinus molla

Molle

0.72%

Schinus molle

(+)

(+)

(-)

1 Staphylococcus aureus: 2 Shigella flexneri: 3 Escherichia coli

GRAFICO No 1

(V/P)*100
0.80% 070%

0.60%-1--0-50 %------

El Pelroseoum salivum
^'Olms limalla
110 lrus paradisii
El Olmo nobilis
Olma aurantium
^mlwpgan cilratus
-Solurele boliviana
Rosmarinus oficinalis
1 Scbinus molla

0.40%-1--0.30 %
0.20%

0.00%-I,
Rendimiento
Especies vegetales

CREMA

GRAMON BOLIVIA

LTDA
Av. Ecuador 2387 esq. Waldo Ballivin (Sopocachi)
Telfonos: 410215 - 411762 Fax: 411762 Casilla 1998
La Paz - Bolivia
Vol.

VII

Diciembre

de

1999

,,:.

FLORES, VELASCO, FIGUEROA, GIMENEZ.

TABLA No 3.- RESULTADOS DE CIM Y CBM DE LOS ACEITES ESENCIALES

1

Nombre cientfico

Petroselium sativum

CIM 3,7 mg/ml

CMB 3,7 mg/ml

Satureja boliviana

CIM 7,5 mg/ml

CMB 30 mg/ml

Schinus molle

1 Staphylococcus aureus

CIM 15 mg/mI

CIB 3,7 mg/ml

CMB 15 mg/ml

CMB 15 mg/ml

2 Shigella flexneri

TABLA NO 4.- RESULTADOS DE LA ACTIVIDAD ANTIFNGICA DE LOS ACEITES.

Neurospora crassa

C. albicans

Nombre cientfico

1,0 mg/mI

0,5 mg/mI

0,25 mg/ml

1,0 mg/mI

Petroselium sativum

()

(+)

()

()

Citrus limetta

Citrus paradisii

(+)

()

Citrus nobilis

(+}

{)

{)

Citrus aurantium

(+)

{)

()

()

Cymbopgon citratus

(+)

()

()

()

Satureja boliviana

(+)

(+)

()

()

Rosmarinus oficinalis

(}

()

()

()

Schinus molle

{+)

(+)

{}

(}

BIBLIOGRAFA
1.- FERNAROLI, Giovanni."Sostance Aromatiche
Natturali", Ed. Ulrico Hoepli; Milan 1963
2.- HARRISON, Jack."Curso de Farmacognosia",
Universidad San Marcos; Lima, 1984

9.- DE OLIVEIRA J.V. "Recientes Pesquisas en Extraccin

Supercrtica No DEQUFSC", Memorias del Primer Encuntro
sobre Extraccin Supercrticas de Productos Naturales,
UNICAMP-CAMPINAS, Brasil, 1994.

3.- BANDONI,Arnoldo, MIZRAHI Isaac, "Taller

Normalizacin de Esencias", Programa Agroqumico
CORDECO-UMSS; Cochabamba, 1993.

10.- FIGUEROA, Nelson. "Evaluacin Antibacteriana,

Antifngica, Insecticida y Caracterizacin Qumica de los
Aceites Esenciales Extrados de Especies Vegetales
Aromticas, con Valor Comercial", Tesis BioqumicoFarmacutico, UMSA. 1996.

4.- VARRO E, Tyler et al "Farmacognosy", 9Th Edition,

Lea Febiger; Philadelphia, (1989).

11.- RETAMAR, Juan. "Curso Sobre Aceites Esenciales"

Primera Parte, FCPN-UMSA, 1993.

5.- LOCK DE UGAZ, Olga."Investigacin Fitoqumica",

Ed. PUCP; Lima, 1995.

12.- MOLLI, Jos. "Curso Sobre Aceites Esenciales"

Segunda Parte, FCPN-UMSA, 1993.

6.- TREASE ANDEVANS "Pharmacongosy" 2'' Edition

WB Saunders, Londosn 1998.

13.- FLORES, Esther. "Manual de Pruebas Antifngicas

para Productos Naturales" IIFB-UMSA, 1998.

7.- www.Frontiercoop.com/aromatherapy.
8: LANCAS F., VILLEGAS J., QUEIROZ M, MARCHIE.,
"Proyecto Construccin Supercriticas de Productos
Naturales, UNICAMP-CAMPINAS, Brasil, 1994.

14.- VELASCO, Patricia. "Manual de Pruebas

Antifngicas para Productos Naturales" IIFB-UMSA, 1998.
15.- KONEMAN W. Elmer. "Diagnstico Microbiolgico"
3ra. Ed. Panamericana, 1992.

GRANULADOS
FOSCAL TABLETAS

El recalcificante de 1 ra. eleccin

LABORATORIOS ALFA Ltda.

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Vol. VII- Diciembre de 1999

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