Professional Documents
Culture Documents
HISTOLOGA
TEJIDOS Y ORGANOS
Integrantes
Profesor
Marlys Campos
Fecha Entrega
11 de Diciembre de 2015
INTRODUCCION
Laboratorio de Biologa Celular y Molecular
1|P a ge
2|P a ge
Obtencin de Material
2.
Fijacin
3.
Deshidratacin
Tcnica utilizada para eliminar el agua contenida ya que la parafina no es miscible con el
agua.
Se utilizan alcoholes de concentracin creciente, utilizando etanol al 70%, 80%, 95% y
100%.
3|P a ge
4.
Aclaracin
Se utiliza para darle transparencia a los tejidos. Para esto se ocupan solvente especial
especiales, en los que se encuentran el toluol, acetona, benceno y xilol, siendo el ms
utilizado este ltimo.
5.
Inclusin en parafina
Se utiliza la inclusin para que la muestra adquiera consistencia y dureza. Estas sustancias
tienen la caracteriza de incorporarse al interior de las clulas y tejido con la finalidad de ser
un soporte.
Para que los tejidos sean incluidos en parafina previamente deben ser deshidratados e
infiltrados con el solvente de inclusin, para esto se realizan tres pasos: deshidratacin,
seguido por la impregnacin del solvente, y finalmente la inclusin y formacin del bloque
de parafina.
6.
Etapa en la que los tejidos y la parafina se encuentran en un solo bloque que posee la
dureza y la consistencia suficiente para obtener la muestra en secciones delgadas y
transparentes.
Los cortes se obtienen utilizando un instrumento llamado micrtomo, el cual corta el
bloque de parafina en cortes delgados y grosor uniforme. Los cortes pueden tener un
espesor de 4 a 100 m, o ms segn el tejido a estudiar.
7.
Tincin
Los cortes realizados son adheridos a un portaobjetos para ser llevados a colorarlos. Este
procedimiento consiste en aadir una sustancia colorante a la estructura a estudiar, una
estructura correctamente teida es aquella que al ser lavada con el disolvente no se
decolora.
Para realizar la coloracin, se debe desparafinar el tejido y luego aclararlo nuevamente con
xilol. Una vez listo se procede a hidratarlo con etanol de manera decreciente (100%, 95%,
70% y agua destilada).
Finalmente coloramos la muestra en colorantes, donde los ms comunes son la
hematoxilina (tie estructuras cidas en tonos azules o purpuras como el ncleo) y eosina
(tie componentes bsicos, como el citoplasma).
8.
Deshidratacin y montaje
P a g e |4
FUNDAMENTOS HISTOLOGICOS
El propsito de hacer muestras histolgicas es el de analizar la morfologa de las clulas
que comprenden un tejido o un rgano, para ello se realizan una serie de pasos los cuales
ayudaran a conservarlas lo ms semejantes a la del tejido cuando se encontraba adherido
al ser vivo.
El paso principal de las muestras histolgicas es el de la toma de muestra, este
procedimiento debe ser llevado a cabo con mucha precaucin.
Una vez tomada la muestra debemos fijarla, esto se realiza de la manera ms rpida
posible para as evitar los procesos de autolisis.
La deshidratacin es el proceso que va despus de que la muestra ha sido fijada, esta
prctica se efecta al introducir la muestra de manera gradual en alcoholes de
concentraciones de menor a mayor para evitar la deformacin del tejido debido a la rpida
salida del agua.
Posterior a la deshidratacin el tejido debe ser sumergido en un lquido que sea miscible
tanto en el medio de inclusin como en el medio de deshidratacin. Generalmente se utiliza
xilol.
El proceso de inclusin se ejecuta para la obtencin de cortes delgado que sean ptimos
para su observacin a travs del microscopio. Los tejidos deben ser incluidos en una
sustancia consistente, la cual puede ser hidrfila o hidrfoba.
Si ocupamos parafina, esta debe estar altamente purificada y debe haber sido modificada
con cantidades variables de polmeros especiales para as tener una dureza diferente.
Ya listo el taco obtenido en la inclusin se realiza cortes utilizando el micrtomo, dichos
cortes deben ser suficientemente delgados para permitir el paso de la luz
Cuando ejecutamos la tincin, debemos eliminar la parafina, para aquello sumergimos el
portaobjetos con los cortes en xilol, para luego hidratarlos con alcoholes de concentraciones
decrecientes hasta una solucin que contenga 100% agua. Una vez rehidratado
procedemos a teir las muestras con hematoxilina y eosina.
Finalmente, deshidratamos nuevamente, eliminando el resto de colorante. Para esto,
sumergimos el portaobjetos por una serie de alcoholes de forma creciente. A continuacin,
sumergimos la muestra en xilol, para hacerlo miscible con el medio de montaje.
Por ltimo, se agrega el medio de montaje y el cubreobjetos, procurando no dejar burbujas.
Materiales y Mtodos
1.1
Inclusin en parafina.
5|P a ge
P a g e |6
Resultados y Discusiones
Antera y Espora
2.3
Musculo Esqueltico
Raz de Cebolla
7|P a ge
Conclusiones
La tcnica histolgica tanto de corte como fijacin de muestras, es bastante ms compleja de llevar
acabo fsicamente de lo que uno puede deducir al leer las instrucciones para su elaboracin.
Depende demasiado de la manipulacin de las muestras, las cuales dado el grosor nfimo son
extremadamente delicadas, lo cual complica ampliamente el trabajo con estas. Tambin cabe
destacar que al ser estas muestras de origen biolgico se debe proceder con extremo cuidado al
realizar la desecacin de estas al eliminar el agua al interior de las clulas mediante el uso de
lavados progresivos con alcoholes de diferente graduacin.
Las limitaciones tanto de material como de tiempo influyen directamente en la capacidad de procesar
y preparar muestras adecuadas para representar cortes histolgicos equivalentes a los encontrados
en la literatura. Aun con el avance cientfico las muestras histolgicas dado las tradicionales tcnicas
de elaboracin de muestras, ocasionan sean un trabajo tcnicamente de arte, el cual
preferencialmente debe ser realizado por un individuo con varias horas practicas dedicadas
exclusivamente al tema.
P a g e |8