UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

FACULTAD DE INGENIERA AMBIENTAL

PRCTICA N1 Normas de
seguridad del laboratorio. Limpieza,
desinfeccin y esterilizacin del
material
MICROBIOLOGA
AMBIENTAL
SECCIN
K
DOCENTE:
MARTN MARTNEZ

INTEGRANTE
S:
FERNNDEZ RAMREZ ROXANA
ARENAS VARGAS JEAN PAUL

Roxana Fernndez
Ramrez
CDIGO: 20164171G
Ingeniera Ambiental

Jean Paul Arenas

Vargas
CDIGO: 20160573C
19
de agosto
2016
Ingeniera
dedel
Higiene
y Seguridad Industrial

MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

1.

OBJETIVOS:

1.1 OBJETIVOS GENERALES

Los objetivos generales de esta primera clase prctica en el
laboratorio son:
a) Facultar sobre el manejo de las tcnicas usadas en la
limpieza y desinfeccin de los materiales usados en el
laboratorio.
b) Identificar y manipular correctamente los agentes
antimicrobianos.
c) Conocer las normas dictaminadas en el laboratorio.
1.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS
Los objetivos especficos de esta primera clase de laboratorio son:
a) Identificar y reconocer los materiales de laboratorio, as
como conocer sus usos.
b) Prevenir accidentes de cualquier ndole en el laboratorio.

2.

FUNDAMENTO TERICO

Para obtener mejores resultados en las prcticas a realizar

requerimos de ciertas condiciones de higiene, como lo es la
limpieza del laboratorio y la desinfeccin de los materiales con los
que vamos a trabajar.

DEFINICIONES:

Limpieza: Proceso de remover, a travs de medios mecnicos y/o

fsicos, el polvo, la grasa y otros contaminantes de las superficies,
equipos, materiales, personal, etc.
Desinfeccin: Es la destruccin, inactivacin o remocin de
aquellos microorganismos que pueden causar infeccin u
ocasionar otros efectos indeseables; la desinfeccin no implica
necesariamente esterilizacin.
Esterilizacin: Proceso que destruye toda forma de vida
microbiana. Un objeto estril (en sentido microbiolgico) est libre
de microorganismos vivos.
Por qu es importante la limpieza en el laboratorio?
Nosotros antes de realizar una prctica en el laboratorio, debemos
eliminar aquellos microorganismos contaminantes, pues si no lo
hacemos podemos perjudicar los resultados, de igual manera
ocurre con la desinfeccin y esterilizacin del material de
laboratorio. Estos son procesos que implican la eliminacin de
impurezas. Llevar estos procedimientos con de manera adecuada
es de gran importancia para no tener problemas de
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MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

contaminacin, obtencin de datos errneos, clculos no deseados

ni malos resultados.
La desinfeccin de instrumentos y superficies de los puestos de
trabajo, bsicamente en el laboratorio donde se manipulan
muestras microbiolgicas, constituye la forma ms adecuada de
evitar el posible contagio debido a agentes infecciosos. Esto se
consigue con una correcta utilizacin de desinfectantes.
Qu factores influyen en la destruccin de
microorganismos?
Temperatura: Al elevarla causa efectos dainos sobre los
microorganismos Si adems del incremento de la temperatura
se le adiciona un agente antimicrobiano su eliminacin ser ms
efectiva.
Tipo de microorganismo: Se susceptibilidad a los agentes fsicos
y qumicos es diferente para cada especie.
Estado fisiolgico de las clulas: Las clulas jvenes,
metablicamente activas, son ms fcilmente destruidas que las
clulas viejas cuando el agente acta interfiriendo con
el metabolismo

Ambiente: Influyen mucho las propiedades fsicas y qumicas del

medio o sustancia donde se encuentran. La consistencia del
material en donde se encuentran influyen en la penetracin del
agente.

LIMPIEZA DEL LABORATORIO:

Los mtodos para eliminar la suciedad se clasifican en fsicos y qumicos:
Mtodos fsicos: Consisten en el arrastre de las impurezas ya sea con
agua o con aire.
Mtodos qumicos: Consisten en la aplicacin de productos de
limpieza que reaccionan con los componentes de la suciedad facilitando
su dilucin o dispersin.
La suciedad incluye distintas sustancias. Por ejemplo, algunas son
hidrosolubles, otras insolubles, algunas orgnicas y otras inorgnicas.
(ESCOBAR, J. 2000)
Un producto de limpieza debe tener las siguientes propiedades:
Emulsionar y saponificar las grasas.
Surfactar, dispersar y suspender la suciedad.
Disolver las protenas.
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Tener agentes suavizantes del agua.

LIMPIEZA DEL PISO:
No se debe barrer ya que se diseminan microorganismos en el
aire.
La utilizacin de trapos y lampazos humedecidos con productos de
limpieza reduce la contaminacin microbiana y es el mtodo ms
comn y recomendado.
DESINFECTANTES DE USO MS FRECUENTE:

Agua oxigenada (perxido de hidrgeno)

Se emplea en soluciones acuosas en concentraciones del orden del 35%

o tambin, cuando se trata de procedimientos que implican la
generacin de fase vapor, a concentraciones ambientales no inferiores a
2 mg/L. Se usa muchas veces como sustituto del glutaraldehdo. El
perxido de hidrgeno es un compuesto que, a concentraciones
superiores al 20%, es corrosivo y comburente. Posee un TLV-TWA (valor
lmite ambiental para exposiciones de 8 horas/da y 40 horas a la
semana) de 1 ppm (1,4 mg/m3).

Alcohol etlico (etanol)

Es el desinfectante de uso tpico ms conocido y universalmente

aplicado, especialmente para desinfeccin de la piel. Se emplea a
diferentes concentraciones en agua. Es poco eficaz frente a ciertos tipos
de virus y la mayora de esporas. Tiene un valor TLV-TWA de 1.000 ppm
(1.880 mg/m3). Es una substancia inflamable.

Alcohol isoproplico (isopropanol)

Es utilizado tambin como antisptico de uso tpico en concentraciones

del 70%en agua, con una efectividad equivalente a la del etanol. El TLVTWA es de 400ppm (983 mg/m3) y el TLV-STEL (valor lmite umbral para
exposiciones de corta duracin) de 500 ppm (1230 mg/m3). Es una
substancia inflamable.

Aldehdos

La actividad de los aldehdos, bsicamente formaldehdo y

glutaraldehdo, est ligada a la desnaturalizacin de las protenas y de
los cidos nucleicos por reduccin qumica. Los aldehdos destruyen muy
bien las bacterias, los hongos microscpicos y tienen tambin una
excelente accin virucida. Se emplean para desinfectar superficies,
aparatos e instrumentos.

Formol-formaldehdo

MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

El formol o formalina es la disolucin de formaldehdo en agua en una

proporcin de alrededor de un 37% en peso, conteniendo as mismo
entre un 10 y un 15% de metanol para evitar su polimerizacin. Las
soluciones de formol que contienen concentraciones de formaldehdo
iguales o superiores al 5% constituyen un eficaz desinfectante lquido de
uso muy extendido.

Glutaraldehdo

La solucin de glutaraldehdo al 2% aplicada durante 30 minutos es

efectiva como desinfectante y, en aplicaciones de 10 a 12 horas, se
puede utilizar como esterilizante. Tiene un valor TLV-C de 0,2ppm (0,82
mg/m3). La solucin de esta substancia entre el 2 y el 10% est
clasificada como nociva y peligrosa para el medio ambiente.
El formol y el glutaraldehdo se pueden emplear solos o bien
asociados a un detergente, siendo esta ltima combinacin
especialmente efectiva frente a los polivirus. Tambin se emplean
mezclados con fenol y fenolatos.

Compuestos de amonio cuaternario

Este conjunto de compuestos (conocidos como "quats") representan una

familia de compuestos antimicrobianos en los cuales las cuatro valencias
del tomo de nitrgeno estn ocupadas por grupos tipo alquilo de
complejidad variable. Son solubles en agua y en alcohol y poseen
propiedades tenso activas. Los compuestos de amonio cuaternario
actan a nivel de la superficie celular, incrementando la permeabilidad
de la membrana con la consecuente prdida de los componentes
citoplasmticos. El espectro de actividad de estos productos es bastante
elevado frente a bacterias y hongos, pero escaso frente a virus y
esporas. Es necesario remarcar que hay microorganismos, como
pseudomonas, que en algunos amonios cuaternarios encuentran un
medio de cultivo en el que se multiplican perfectamente. Esta bacteria
puede crecer, por ejemplo, en cloruro deben zalconio que, utilizado
como desinfectante de superficies, ha sido la causa de inesperadas
infecciones en hospitales. Los compuestos de amonio cuaternario son
inactivos frente a las aguas duras, por lo que no deben utilizarse para
desinfectar el agua de los sifones de vaciado, rica en sales.

Compuestos fenlicos

Los aril-fenol halogenados o no halogenados tienen una muy buena

actividad bactericida, pero su actividad fungicida es muy discreta y su
accin virucida es discutida. El fenol y sus derivados son irritantes de la
piel y mucosas respiratorias y oculares. Tienen efecto alergnico y
fotosensibilizante. El TLV-TWA establecido para el fenol es de 5 ppm (19
mg/m3).
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MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

Yodos y yodforos

La accin de estos desinfectantes es parecida a la del hipoclorito. Las

superficies limpias pueden tratarse adecuadamente con soluciones que
contengan 75 ppm de yodo libre. En presencia de una cantidad
apreciable de material proteico, su eficacia no es tan buena. Los
yodforos pueden diluirse en alcohol etlico para el lavado de manos o
como esporicida.

LIMPIEZA DE LOS MATERIALES:

Existen tres mtodos prcticos para el tratamiento de los materiales de
laboratorio desechados y de los desechos contaminados:
La esterilizacin por autoclave.
La incineracin (no utilizada en los laboratorios)
La desinfeccin qumica.
La eleccin se realiza atendiendo a la naturaleza de los materiales; si es
desechable o recuperable y, en este ltimo caso, si se ve afectado por el
calor.
El primer paso del proceso de desinfeccin es la limpieza. Esta remueve
restos de tejido que podran interferir con la accin del desinfectante.
Para una limpieza adecuada se debe tomar en cuenta: tipo de accin del
agente utilizado, las condiciones requeridas para aplicar la solucin
limpiadora y el tiempo de contacto necesario para que sta ejerza su
efecto.
Debe haber en el laboratorio recipientes para productos potencialmente
infectados:

Autoclaves de un solo uso para recibir cultivos y muestras.

Vasijas de un solo uso para recibir portaobjetos, pipetas Pasteur

pequeos artculos a desechar.

Vasijas altas para pipetas graduadas (reusables).

Todos estos recipientes deben ir a la seccin de limpieza y esterilizacin
para el tratamiento final y esterilizacin de aquellos potencialmente
contaminados.
MATERIALES DE VIDRIO CONTAMINADOS:
Despus de esterilizarlos en autoclave, los medios de cultivo pueden
verterse o extraerse y los tubos, frascos, etc., se lavan a mano o
mecnicamente con un detergente adecuado. El tipo de lquido o polvos
de lavado que se utilice depender de la dureza del agua suministrada y

MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

del mtodo de lavado. Deben tenerse en cuenta las recomendaciones de

varios fabricantes de detergentes de laboratorio.
Los laboratorios con mucho trabajo precisan mquinas de lavado de
material de vidrio. Antes de adquirir una de estas mquinas es preferible
estudiar varias de ellas y preguntar a otros laboratorios cules son los
modelos de que disponen que consideran satisfactorios. No todas las
mquinas de lavado de material de vidrio son tan buenas como
proclaman sus fabricantes. Un requisito previo es un buen aporte de
agua destilada o desionizada.
AUTOCLAVADO:
El Autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios
para esterilizar cultivos y soluciones que no se desnaturalicen a
temperaturas mayores a 100C. Una temperatura de 121 C (15 Lbs de
presin) con un tiempo de exposicin de 15 minutos sirve para destruir
microorganismos, incluso los formadores de esporas.
Ventajas del calor hmedo:

Rpido calentamiento y penetracin.

Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo.
No deja residuos txicos.
Hay un bajo deterioro del material expuesto.
Econmico.
Ciclo esterilizacin en autoclaves:

1. Se abre la vlvula de admisin de vapor a la camisa precalentando la

cmara.
2. Al terminar de salir el aire de la camisa, se abre la vlvula que
comunica camisa y cmara permitiendo la entrada de vapor a la
cmara.
3. Cuando el vapor ocupa totalmente la cmara y el termmetro marca
la temperatura establecida empieza el ciclo de esterilizacin.
4. Al terminar el ciclo se expulsa el vapor de acuerdo a necesidades:
lentamente si se trata de lquidos para evitar una descompresin rpida
o rpidamente si se trata de otras cargas.
5. Una vez expulsado el vapor se abre la vlvula que comunica la
camisa con la atmsfera. Se produce presin negativa y se realiza el
secado por medio de la succin de aire en la cmara.
En los autoclaves de desplazamiento por gravedad que son los primeros
modelos fabricados, el tiempo de penetracin es prolongado por una
incompleta penetracin de aire y por lo tanto los tiempos de
esterilizacin tambin son mayores. En la actualidad an cuando
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MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

funcionan con el mismo principio, facilitan su operacin y aumentan el

nivel de seguridad por medio de la incorporacin de controles
automticos, bomba de vaco y microprocesadores.

3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. MATERIALES:
3.1.1. Instrumentos de vidrio:
Pipetas
La pipeta es un instrumento volumtrico de laboratorio que permite
medir la alcuota de un lquido con mucha precisin. Suelen ser de vidrio.
Est formada por un tubo transparente que termina en una de sus
puntas de forma cnica, y tiene una graduacin (una serie de marcas
grabadas) con la que se indican distintos volmenes.
Placas de Petri
La placa de Petri es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una
cubierta de la misma forma que la placa, pero algo ms grande de
dimetro, para que se pueda colocar encima y cerrar el recipiente,
aunque no de forma hermtica. Sirve para la preparacin de medios de
cultivo slidos.
Matraz
Recipiente de vidrio, generalmente de forma esfrica y con un cuello
recto y estrecho, que se usa en los laboratorios para contener y medir
lquidos.
Kitazato
Su funcin principal es evitar la prdida de lquido por agitacin o
evaporacin, suele usarse para calentar sustancias a temperaturas altas
y como complemento de un equipo de filtracin
Fiolas
Son recipientes de vidrio de cuello muy largo y angosto, en el cual
tienen una marca que seala un volumen exacto a una temperatura
determinada que est grabada en el mismo recipiente y generalmente
es 20C. Se emplean en operaciones de anlisis qumico cuantitativo,
para preparar soluciones de concentraciones definidas.
Bagueta
La Bagueta o Varilla de Agitacin es un fino cilindro de vidrio macizo,
que se utiliza principalmente para mezclar o disolver sustancias con el

MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

fin de homogenizar. Generalmente su dimetro es de 6 mm y longitud es

de 40 cm.
Vaso de precipitado
Un vaso de precipitados o vaso de precipitado es un recipiente cilndrico
de vidrio fino que se utiliza muy comnmente en el laboratorio, sobre
todo, para preparar o calentar sustancias y traspasar lquidos.
Tubo de ensayo
El tubo de ensayo o tubo de prueba es parte del material de vidrio de un
laboratorio de qumica. Consiste en un pequeo tubo de vidrio con una
punta abierta (que puede poseer una tapa) y la otra cerrada y
redondeada, que se utiliza en los laboratorios para contener pequeas
muestras lquidas (aunque pueden tener otras fases), realizar reacciones
en pequea escala
Embudo
El embudo es un instrumento empleado para canalizar lquidos y
materiales slidos granulares en recipientes con bocas estrechas. Es
usado principalmente en cocinas, laboratorios, actividades de
construccin, industria, etc.
Probeta
Es un instrumento volumtrico, que permite medir volmenes
considerables con un ligero grado de inexactitud. Sirve para contener
lquidos.
Esptula de Drigalsky:
Se utilizan para la extensin de microorganismos sobre la superficie de
un medio de cultivo en placa Petri.
Cubre y porta objetos:
Es una fina placa de cristal sobre el cual se disponen objetos para su
examen microscpico.
3.1.2. Instrumentos de metal o madera:
Pinza
Esta herramienta sirve para sujetar los tubos de ensayos, mientras se
calientan o se trabajan con ellos.
Gradilla
Es utilizada para sostener y almacenar gran cantidad de tubos de
ensayo, de todos los dimetros y formas.
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MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

Asa de siembra
El asa bacteriolgica o asa de platino es un instrumento de laboratorio
que consta de una base que puede estar hecha de platino, acero,
aluminio y un filamento que puede ser de nicromo, tungsteno o platino
que termina o en un arito de 5 mm o en punta. Se emplea para
transportar o arrastrar o trasvasar inculos (pequeo volumen que
contiene microorganismos en suspensin) desde la solucin de trabajo
tambin llamada solucin madre al medio de cultivo (slido o lquido)
o de un medio a otro (resiembra). Tambin sirve para la realizacin de
frotis.
Estuches cilndricos o cubiculares
Son recipientes utilizados para colocar las pipetas o las placas Petri
antes de llevarlos a su esterilizacin o para conservarlas lejos de
microorganismos aerbicos.
3.1.3 Otros
Pipeteador:
Es un instrumento diseado para succionar lquidos a travs de la
pipeta sin tener que hacerlo directamente con la boca, esto por obvias
razones, ya que las sustancias qumicas tienen diferentes grados de
toxicidad y su ingestin puede ser siempre en cierto grado peligrosa.
Papel kraft
Es un tipo de papel basto y grueso de color marrn, utilizado para
proteger el material de vidrio, medios de cultivo, etc.
Mechero de bunsen
Instrumento utilizado en laboratorios cientficos para calentar o
esterilizar muestras o reactivos qumicos. El quemador tiene una base
pesada en la que se introduce el suministro de gas. De all parte un tubo
vertical por el que el gas fluye atravesando un pequeo agujero en el
fondo de tubo. Algunas perforaciones en los laterales del tubo permiten
la entrada de aire en el flujo de gas (gracias al efecto Venturi)
proporcionando una mezcla inflamable a la salida de los gases en la
parte superior del tubo donde se produce la combustin.
Rejilla de asbesto
Es una tela de alambre de forma cuadrangular con la parte central
recubierta con asbesto. Se utiliza para sostener utensilios que se van a
someter a un calentamiento y con ayuda de este instrumento este
proceso se hace uniforme.
3.2. EQUIPOS:
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Balanza electrnica
La balanza electrnica es un instrumento de laboratorio que mide la
masa de un cuerpo o sustancia qumica, utilizando como medio de
comparacin la fuerza de la gravedad que acta sobre el cuerpo. Posee
una alta precisin.
Contador de colonias
Es un aparato que mediante la iluminacin de la placa y una lupa, nos
permite observar con mayor nitidez las colonias y por tanto facilita su
recuento.
Microscopio ptico
El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no
perceptibles a al ojo humano. Esto se logra mediante un sistema ptico
compuesto por lentes, que forman y amplifican la imagen del objeto que
se est observando.
Licuadora industrial
Es una tela de alambre de forma cuadrangular con la parte central
recubierta de asbesto, con el objeto de lograr una mejor distribucin del
calor. Se utiliza para sostener utensilios que se van a someter a un
calentamiento y con ayuda de este utensilio el calentamiento se hace
uniforme.
Refrigeradora
Utilizado para crear un entorno para replicar clulas y para llevar a cabo
experimentos en algunas de stas para determinar cmo es que las
afectan las bacterias u otros microorganismos. Los tipos de clulas
generalmente dirigidas para refrigeracin son microorganismos llamados
"mesfilos" y "psicotrpicos". Los cientficos normalmente tienen tres
usos para las clulas de refrigeracin los cuales son, el almacenamiento
para su uso posterior, evitar el crecimiento excesivo de stas y reducir la
tasa de actividad celular para evitar que aparezcan mutaciones y
microorganismos bacteriales adicionales.
Estufa de incubacin
Es una cmara de temperatura controlada para cultivo de
microorganismos. Se utiliza para facilitar el desarrollo de los
microorganismos
a
su
temperatura
ptima
de
crecimiento
(generalmente 35-37).
Autoclave

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Aparato para esterilizar por vapor que consiste en un recipiente

cilndrico, de paredes resistentes, metlico y con cierre hermtico
autoclave, en cuyo interior contiene un lquido, generalmente agua, el
objeto se somete a presiones y temperaturas elevadas sin llegar a
hervir.
Horno de esterilizacin
El horno de esterilizacin es utilizado en el laboratorio para el secado de
material y para secar sales qumicas, regularmente sus temperaturas
oscilan de 60C a 300C. La circulacin del aire asegura una intensa
transmisin del calor y, por lo tanto, un secado ms rpido. Un orificio de
salida de aire, en la pared superior (en el techo) asegura una renovacin
continua del mismo.
Bao mara
Es un equipo que se utiliza en el laboratorio para realizar pruebas
serolgicas y procedimientos de incubacin, aglutinacin, inactivacin,
biomdicos, farmacuticos y hasta industriales.
3.4. METODOLOGA:
En el desarrollo de la clase el profesor nos explic el funcionamiento de
los equipos de esterilizacin, en este caso del horno y del autoclave. Sus
condiciones.

4. OBSERVACIONES:
Los materiales del laboratorio deben ser utilizados con precaucin,
pues la gran mayora son de material de vidrio.
Al utilizar los instrumentos, luego de haber sido esterilizados, no se
los debe exponer abiertamente al aire en el laboratorio.
En el caso de los materiales de vidrio, estos deben ser lisos,
transparentes, de bajo coeficiente de dilatacin y de paredes
gruesas.
5.

CONCLUSIONES:

La adecuada desinfeccin del laboratorio permite el correcto

desarrollo y efectividad de la prctica realizada.
A partir de la informacin terica, podemos decir que es muy
necesaria la desinfeccin y esterilizacin del material.
Debemos respetar los pasos para el uso de los equipos de
esterilizacin.
Seguir las recomendaciones que brindaremos.
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MICROBIOLOGA AMBIENTAL-PRCTICA N1

A partir de la identificacin de los materiales del laboratorio se

reconoci su uso y correcta manipulacin.
6.

RECOMENDACIONES:
Antes de realizar cualquier actividad en el laboratorio lavarnos las
manos con jabn carblico
Debemos tener precaucin con los materiales de vidrio, pues son
muy frgiles.
No exponer de manera prolongada los materiales de laboratorio,
previamente esterilizados, medios de cultivo, entre otros, al aire
libre.
No debemos pipetear produciendo burbujas ni usando la boca.
Al realizar algn transvase de material o siembra realizarlo al
calor del mechero.
Conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que
existen en el laboratorio.
Debemos conocer la metodologa de trabajo del laboratorio.
Reconocer el funcionamiento el equipamiento del laboratorio.

7.

BIBLIOGRAFA:

(2014, 06). Higiene hospitalaria. Recuperado de:

http://www.hospitalposadas.gov.ar/descargas/toxicologia/HIGIENE
%20HOSPITALARIA.pdf
Caballero E. (2011, junio). Manual de limpieza, desinfeccin y esterilizacin de
materiales en el laboratorio clnico. Monografas.com. Disponible en:
http://www.monografias.com/trabajos89/limpieza-desinfeccion-materialeslaboratorio-clinico/limpieza-desinfeccion-materiales-laboratorioclinico2.shtml
Real K., Romero I., Albarracin P., Roncancio P. (2013). Limpieza y desinfeccin
en el laboratorio fisicoqumico y en el laboratorio microbiolgico.
Scribd.com. Disponible en: https://www.scribd.com/doc/138713392/Plan-delimpieza-y-desinfeccion-de-laboratorios
Tplaboratorioquimico.com. Recuperado de:

https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorioquimico/materiales-e-instrumentos-de-un-laboratorio-quimico/hornomufla.html

8. ANEXOS:
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