20 500 gapi* Staph erases 1200004 VD ‘Systéme didentication des staphylocoques, microcoques et apparentés INTRODUCTION ET OBJET DU TEST ‘API Staph ost un eystéme standardisé pour identification des gentes Staphylococcus, Micrococcus et Kocuria ‘comprenant des tests biochimiques. miniaturisés. ainsi ‘qu'une base de données. La liste complate des bacteries ‘uil est possible didentifier avec ce systéme est présente dans le Tableau c'ldentification en fin de notice. PRINCIPE La galerie API Staph comporte 20 microtubes contenant des substrats déshydratés. Les microtubes sont inoculés avec une suspension bactérienne réalisée dans API Staph Medium ui reconstiue les tests. Les réactions pproduites pendant la période dincubation se tradulsent par des virages colorés spontanés ou révélés par addition de réactits La lecture de ces réactions se fait a Taide du Tableau de Lecture et identification est obtenue a Taide du Catalogue Analytique ou d'un logiciel dideniiication. PRESENTATION (coffret de 25 tests) - 28 galeries API Staph = 25 boltes incubation = 25 ampoules API Staph Medium 25 fichos de résultats = 1 notice ‘COMPOSITION Galerie La composition de la galerie API Staph est reportée dans le tableau de lecture de cette notice, ieu ‘API Staph | Extrait de levure 0,5 9| Modium | Bactopeptone 6m (origine bovine/porcine) 109] Nacl 59| Oligosiéments 10m} Eau déminéralisée ‘asp 1000 mi pH: 7,0-7.4 REACTIFS ET MATERIEL NECESSAIRES MAIS NON FOURNIS Réactits ~ Huile de paraffine (REF. 70 100) = Réactifs: VP 1 + VP 2 (Ret. 70.422) NIT 1 + NIT 2 (Ret. 70.442) ZYMA (R6f. 70 494) ZYMB (Réf. 70499) - McFarland Standard (Ref. 70 900) = Catalogue Analytique API Staph (R6f. 20 690) ou logiciel dentiication apiweb ™ (Ret. 40.071) {consult bioMériew) Matériot - Pipettes ou PSipeites + Portoir pour ampoules = Protége-ampoule ~ Equipement général de aboratoire de bactériologie PRECAUTIONS D'UTILISATION ‘Pour diagnostic in vitro et pour contréle micro- biologique. ‘+ Pour usage professionnel uniquement. Ge coffret contient des composants dorigine animale. La mattise de forigine eVou de fétat sanitaire des ‘animaux ne pouvant garantir de fagon absolue que ces, produits ne contiennent aucun agent pathogéne transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions dusage relatives aux produits, Potenticllement infectiewx (ne pas ingérer; ne pas inhaler). ‘+ Les prélavements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent tre considérés comme potentiellement infectioux et doivent étre manipulés de fagon appropriée. Les techniques asepliques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent étre respectées tout au long de la manipulation ; se referer 4 "CLSI M29-A, Protection of Laboratory Workers From Occupationally Acquired Infections; Approved Guideline - Révision en vigueur’ Pour informations complémentaires sur les précautions de manipulation, se référer a "Biosafety in Micro- biological and Biomedical Laboratories - CDC/NIH - Demiére écition*, ou a la réglementation en vigueur dans le pays dutiisation, ‘+ Ne pas utiliser les reactfs apres la date de péremption. “Avant utlisation, s‘assurer de Tintégrité de 'emballage et des composants. ‘+ Ne pas utiliser de galeries ayant subi une alteration phy- siqua : cupule déformée, sachet déshydratant ouvert, + Ouvrir les ampoules délicatement comme suit = Placer fampoule dans le protége-ampoule. = Tenir ensemble verticalement dans une ‘main (oouchon blane vers le haus). + Bien enfoncer le bouchon, = Exercer une pression horizontale avec le pouce sur ia partie siriée du bouchon de fagon a casser lexirémité de ampoule. + Retirer ampoule du protége-ampoule et conserver le protege-ampoule pour une ufisation ukérieure. - Eniever délicatement le bouchon, + Les performances présantées sont oblenues avec le méthodologie indiquée dans cette notice. Toute dé- vialion de méthodologie peut altérer les résultats «+ Linterprétation des résultats du test doit étre faite en tenant compte du contexte clinique ou autre, de rorigine du prélévement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résullals dautres tests, on particulier de fantibiogramme. +L est recommandé de réaliser un contréle qualité avant ulliser chaque nouvelle ampoule de réactif ZYM B. ‘ieMérieux SA Frangais-7api® Staph ‘CONDITIONS DE STOCKAGE Les galeries et milioux se conservent & 2-8°C jusqu'a la date mite d'utilisation indiquée sur emballage. ECHANTILLONS (PRELEVEMENT ET PREPARATION) API Staph ne doit pas étre utilisé directement a partir des prélévements dorigine clinique ou autre. Les microorganismes a identifier doivent dans un premier temps etre isolés sur un milieu de culture adapte selon les, techniques usuelles de bactériologi. MODE OPERATOIRE Préparation de la galerie + Réunir fond et couvercle dune bolte dincubation et répartr environ 5 mi deau distilée ou déminéralisée fou toute eau sans adit ou dérivés susceplibles de tbérer des gaz (Ex : Ch, CO2 ..)] dans les alvéoles pour créer tune atmosphere humide. ‘ Inscrire la référence de la souche sur la languette latérale de fa boite. (Ne pas inscrre la référence sur le cowvercle, celu-ci pouvant étre déplacé lors de la manipulation.) « Sortirla galerie de son emballage individuel ‘* Placer la galerie dans la boite incubation. Préparation de linoculum ‘+ Réaliser une préculture sur gélose Columbia au sang (ou Agar P) 18-24 Ha 38°C +2°C. + Verifier tappartenance de la souche @ Ia famille des Micrococcaceae (morphologie, Gram, catalase...) ainsi que sa pureté. ‘= Ouvrir une ampoule API Staph Medium comme indiqué au paragraphe "Précautions dulilisation”. ‘Preparer une suspension bactérienne homogéne, dopacité égale & 0.5 de McFarland. Utiiser preferentiel- lement des cultures jeunes (18-24 heures). Cette suspension doit étre uilisée extemporanément, Inoculation de la gale! ‘+A Taide cune pipette ou dune PSipette, remplir les tubes de la galerie avec API Staph Medium ensemencé, Ne remplir que les tubes et non les cupuies, sans ‘dépasser le niveau du tube. Pour éviter la formation de bulles au fond des tubes, poser la pointe de Ia pipette ou de la PSipette sur le o6t8 de la cupule, en inciinant légérement la boite dincubation vers avant. ‘* Créer une anaérobiose dans les tests ADH ot URE en remplissant leur cupule dhuile de paraffine pour former lun ménisque convex. ‘¢ Rentfermer a bolte dincubation. ‘+ Incuber & 36°C + 2°C pendant 18-24 heures. 74864 fr - 2000004 LECTURE ET INTERPRETATION Lecture de la gater ‘= Aprés incubation, lire les réactions conformément au Tableau de Lecture en ajoutant 1 goutte de chacun des réactifs suivants = Test VP : VP 1 et VP 2. Attendre 10 minutes. Une couleur rose franche ou violette indique une réaction positive. Une couleur rose pale ou rose claire obtenue eprés 10 minutes doit sire considérée négative. Test NIT: NIT 4 et NIT 2, Attendre 10 minutes. Une coloration rouge indique tune réaction positive, Test PAL: ZYM A el ZYMB (*). Allendre 10 minutes. Une coloration violette indique tune réaction positive. () Ilest recommandé de controler chaque ampoule de réactf ZYM B avant la 1" ulilsation Pour cela, il est recommandé dutiiser la souche ATCC 700404 mentionnée au paragraphe Contréle Qualité afin d exclure tout réactif défectueux. ‘ Noter les résultats sur la fiche de résultats. Test de résistance a la lysostaphine Déterminer Ia résistance @ la lysostaphine sur milieu ‘Agar P selon la procédure suivante ou selon les recommandations du fabricant. Pout cela, ensemencer par inondation la surface dune _gélose Agar P avec une suspension bactérienne d'environ 10" germes/ml Laisser sécher 10-20 min a 36°C + 2°C. Déposer la surface de la gélose, une goutte d'une solution de lysostaphine & 200 ygim. incuber 18-24 H & 35-37°C. Une lyse totale ou subtotale de ia culture bactérienne indique une sensibilté a enzyme. Ce test constitue le 21°" fest de la galerie. II est ‘considéré positf en cas de résistance a la lysostaphine. Interprétation identification est obtenue & partir du profil numérique. ++ Détermination du profil numérique : Sur la fiche de résultats, les tests sont séparés par Groupes de trois et une valeur 1, 2 ou 4 est indiquée pour chacun. En additionnant @ fintérieur de chaque groupe les valeurs correspondant a des réactions Positives, on obtient 7 chiffres qui constituent le profi numérique. ‘Identification Elle est réalisée a partir de la base de données (V4.1) *Alaide du Catalogue Anaiytique Rechercher le profil numérique dans a liste des profi. * 2 Taide du logicie! d'identification apiweb 7 ~Entrer manuellement au clavier le profil numérique a 7 chiffres. 6 706 113 Staphylococcus epidermials ‘ickieroux SA Frangais-2api Staph rast -r- 2000106 ‘CONTROLE DE QUALITE Les milleux, galeries et réactifs font lobjet de conirdles de qualité systématiques aux différentes étapes de leur Tabrication. Un controle bactériologique des tests de ta galerie est de plus réalisable par lulisateur avec la souche 1, Staphylococcus xylosus ATCC® 700404 de préférence ou une des souches suivantes 2. Staphylococcus fentus ATCC 700403 3, Staphylococcus capitis ATCC 38661 [ATOC: American Type Cute Colection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110-2208, USA, 0 [eto | eeu [ome [oat [usc [ame [oan [xr [mec | [ror [pat | ve [rar [ome [ sao [woo [rs [x08 [use | wlete+ t+ le [tp - fe - [ - -e 2f-f+ tele [- [= lve ee es af-1+l+|+|-|1-|-lv[-[- zoe este ~[-T? * Ce résuliat peut varier en fonction du milieu de culture uti. Profis obtenus aprés culture des souches sur gélose au sang de mouton. {I est de la responsabilité de Tutlisateur de stassurer que le controle de qualité est mis en oeuvre oonformément a ta [egislation locale en vigueur LIMITES DU TEST * Le systéme AP! Staph est destiné & fidentifcation des ‘espéces mentionnées dans la base de données (voir Tableau didentification en fin de notice), et & elles seules. 1 ne peut étve utilisé pour identifier dautres ‘microorganismes ou exclure leur présence. ‘= Seules des cultures pures contenant un seul type de microorganisme doivent ee utilisées. RESULTATS ATTENDUS Se référer au Tableau d'ldentifcation en fin de cette notice pour les résultats allendus des différentes actions biochimiques. PERFORMANCES + Staphylocoques 2104 ‘souches de diverses origines et souches do Collection appartenant aux especes de la base de données ont été testes = 92.49% des souches ont été correctement identifiées. {avec ou sans tests complémentaires). = 4.42 % des souches n'ont pas été identiiées. + 3,09 % des souches ont été mal identifiges. ‘* Microcoques/Kocurla 171 souches de diverses origines et souches de collection appartenant aux espéces de la base de données ont été testées : = 87,72 % des souches ont 6t@ correctement identifies (avec ou sans tests complémentaires), = 7,60 % des souches r’ont pas été identifices. + 4168 % des souches ont été mal identifies. ELIMINATION DES DECHETS Eliminer les réaciis utlisés ou non utilisés ainsi que les ‘matériels @ usage unique contaminés en suivant les procédures relatives aux produits infectieux ou potentiellement infectioux. |Vincombe a chaque laboratoire de gérer les déchets et les effluents quil_ produit selon leur nature et feur dangerosité, et den assurer (ou faire assurer) le traitement et éliminalion selon ies réglementations applicables, Biahteroux SA Frangais-3api® Staph ‘TABLEAU DE LECTURE 7480s - 2009004 ReSUCTAT rests | courosanrs acts | 07S] neactions /enzrwes Soieee Ee a Tow Tan roe . au] Boos Tae | concn pos SLI) ru | omar 1 | scteton FRU oe 1 | soieaton Menke) wat | omatow 1 | aseaton sion) vac | biagene | 14 Jacctesbon uaciese) rouge ane rae | bvomioen | 132. [atten -TRERo8) vn | coment — | 38 faoateaton (stant) ar vt 14 | steaton otro) ner |___omaoise | 1.a2_|soteaten (MEL Wit ziome wur_| rite doctnsim | 000 |rscindsenrisoeonntite | reioevoeepae | re SZuBZio mn ar | enworshsstaie | oze | pepatt line ire vel Wrevpali ve | sodumeyute | soe [posicongastrmiticstin’ | resrrasoptio | vatite wae | Drathose | 128 |octetion Ros Mt Davina 1 acicaon con) sec | vactse | 1.2. |acteaton oaccase) ae ae wos | glayteaian | 128 |Stttyansa)™ wee |_nesivgccenine | 120 | aceon Ady nse ‘AoH_| Large | 1.904 [Arne Diyas jae | omens Re oe 076 [eae inne reek! Les tests d'aciification doivent étre lus comparativement aux témoins négatif (0) et post (GLU) * Les tests MINE et XLT peuvent étre oranges, lorsquils sont entourés ou précédés de tests positifs. On doit alors fas ‘considérer comme négatis. ‘+ Les quantités indiquées peuvent étre ajustées en fonction des tires des matieres premieres. ‘* Cettaines cupules contiennent des composants ¢origine animate, notamment des peptones. METHODOLOGIE TABLEAU D'IDENTIFICATION BIBLIOGRAPHIE TABLES DES SYMBOLES bioMlieu, fe lego bleu, API e aplwvab sont des marques ullstes, déposéesetfou enregistrées appartenant a bioNéveux SA ou afune de ses Males. ATCC est une marque appartenant & American Type Culture Collection. Les eutres marques el noms de produits menlionnés dans oe document sont des marques commercials de urs dtenteurs respects BIOME|RIEUX HD orensrse au capital de 12 029 370€ RCS LYON 673 620 399, 69280 Marcy.Ntolle / France ‘Tél, 33 (0)4 78 87 20.00 Fax 33 (0}4 78 87 20 80 pie biomeriewe.com bioMérioux, Ine Box 15969, Durham, NC 27704-0969 / USA ‘Tat. (1) 919 820 20 00 Fax (1) 919 620 2211 Imprié en France