C. MEDICION DE PARAMETROS JIM FIELD Universidad Agricola de Wageningen HolandaC, MEDICION DE PARAMETROS 1 METANO 1,1. SISTEMAS DB DESPLAZAMIENTO DE LIQUIDO El volumen de gas metano producido en experimentos de laboratorio puede medirse por desplazamiento de un liquido. El método mis co min es el que utiliza 1a “botella de Mariotte”. Figura 14. También pueden usarse botellas de suero, como sistema menor de desplazamien to de liquide, como se muestra en la Figura 15. El Iiquido utiliza do es una solucién concentrada de NaOH o KOH en un rango entre 15 ~ 20 g/L. A medida que el biogés, pasa a través de estas solucio nes de pH alto, el C0, del biogés se convierte en carbonato y es ab sorbido dentro del liquido. Unicamente el gas metano pasa a través de 1a solucién y un volumen equivalente es impulsado afuera de la botella de Mariotte. El liqui do desplazado puede medirse en un cilindro graduado o puede pesarse. Si se pesa el liquido, se debe medir también su densidad para calcu lar el volumen. Las soluciones alcalinas deben contener un gran ex ceso de equivalentes de hidréxido:para estar seguros que todo el CO, es absorbido por el 1iquido. Debe mantenerse como exceso minino el doble, esto significa que por cada litro de biogés al menos 2 ¢ de NaOH deben estar presentes en el liquide contenido en 1a botella de Mariotte. Se puede calcular cuando se necesita reemplazer la solu cién alcalina como sigue (para una temperatura de 30°C) : [ Vol.ni, * Conceyony 1 * = Vole, 9, 20agitador ; puntos de | lentejuelas de soda caustica frasco de Mariotte (15% NaOH) digestor medidor de metano FIGURA 14 Ensayo establecido para digestidn anaerdbica en reactor de flu jo discontinuo y regimen mezclado con una botella de Mariatte para medir la produccién de gas metano. cH2FIGURA 15 botella de si ro como siste| ma de desplg zamiento de Nquido. 1.5% NaOH 9 solucidn sa Jina. aguja hipodérmica botella -de suero como reactor cilindro 5 groduado” Ensayo establecido para digestién anaerébica en reactores de flujo discontinuo y. regimen estético por el sistema de despla zamiento del Liquido con botellas de suero, para medir la pro duccién de gas metano.1.2 donde + Vol.aj, = Bl minimo tolerado de solucién alcalina dentro de 1a botella de Mariotte. (L). = La concentracién de NaH, de 1a solucién alcalina, cuando se preparé (g/L). Cone yaoH Vol.cy = Volumen de metano medido en la botella de Mariotte, cuando es tiempo de reemplazar 1a solucién alcali Otro método para la vigilancia de la solucién alcalina es medir el pH de 1a solucién. La solucién debe reemplazarse cuando el pH es menor © igual que 12. En los sistemas de desplazamiento, frascos de Mariotte o botellas de suero se deben controlar los escapes (fugas). Los frascos se deben llenar hasta la mitad con solucién alcalina, debe cerrarse el tubo de gas y se deja por un dia para permitir que el sistema se equilibre a la temperatura del cuarto. La tasa de desplazamiento del liquide de be iniciarse al dia siguiente y continuar su control por unos dias. Si ocurre algin desplazamiento del liquido, la fuga es evidente. Los sistemas de desplezamiento de liquido, también pueden faller si en 1a solucién alcalina hay presente jabén. Se debe tener especial cuidado. -° que todos los residuos de jabén sean enjuagados de las botellas antes de ser usadas. COMPOSICION DEL BIOGAS Si solamente se controla el volumen de biogés, puede ser necesario cH1.3 medir 1a composicién dei mismo. El C0, y el CH,, gases componen tes del biogés, pueden medirse, tomando en una jeringa grande, 100 mL. de la mestra de biogfs e impulséndole lentamente (10 oL/ min), a través de un sistema de desplazamiento de liquido de 500 nL,, botellas de suero. El volumen de la solucién alcalina que es desplazado de la botella, dividido por el volumen de biogés inyectado es igual a la fraccién de CH, en el biogés. FACTOR DE CONVERSION DE DQO PARA METANO La DQO equivalente del gas metano, puede calculerse usando los fac tores normalizados de conversién (F.C.) de g de DQO a mL. de CH, Listados en la Tabla 7 para diferentes temperaturas, asumiendo una elevacién a nivel del mar. A 0°C, 1 g de DQO es igual a 350 mL, de gas metano seco. Los valores de 1a Tabla 7 fueron calculados como sigue + 350 * (273 + Temperatura en °C)/273 Si. se realiza a elevaciones mayores, se puedecorregir el factor de conversién reportado para la presién atmosférica reducida como sigue F.C. * 1000/presién (milibars) o F.C. * 760/presién (mm de nercurio) El gas metano medido generalmente es himedo, el factor de conversién puede ser corregido para la presién de vapor del agua en el gas 0 también el gas puede secarse antes de su medicién. El error causado por no contabilizar 1a humendad es pequefio (3 a 42). Para trabajos csoaawni 7H9 oavivodsy "Ho 3a wv “Twner pat be 8 vanyaadW3L (Uv 730 TAIN = VOT¥aySOWLY NOTSaUd ¥) ONVIBW SYD 72 N3 OBG 3d OGINILNOD 13d OTNDWI Ta VuVd NOISYBANOD 30 SBYOLIVI 2 vias c-8precisos el factor de conversién de metano a DQO se puede corregir como sigue : F.C, * 1000/ (1000 - presién de vapor en milibars) En la Tabla 7, también se listan los factores de conversién del gas himedo, calculado con esta ecuacién para las temperaturas indicadas. - 2 DETERMINACION DE ACEDOS'GRASOS VOLATILES (AGV) : METODO DE TITULACION 2.1 PROPOSITO Y APLICABILIDAD Estas instrucciones describen un método para la determinacién. del bicarbonato (HC03) y los Scidos grados volatiles (AGV) en soluciones acuosas. 2,2 PRINCIPIO La muestra centrifugada o filtrada se lleva a pH = 3 con HCl 0.1 N. ee A este pH, el bicarbonato, HCO, seré convertido en CO, y los ALG. estarén presentes en solucién en la forma no ionizada. Después de = ebullir 1a solucién bajo condensador, para remover el CO), Ja solu cién se titula con NaOH 0.1 N hasta pH = 6.5. Los A.G.V. (y quizds - algunos otros cidos orgénicos) serén convertidos ahora a su forma disociada. Los equivalentes de bicarbonato y AGV se pueden calcular a partir de los volimenes de acido y base utilizados en Ja titulacién. 2.3 REACTIVOS C72.4 2.5 = Acido clorhidrico, HC1, 0.1000 N « Hidréxido de sodio, NaQH, 0.1000 N. ‘EQUIPOS + Belones de digestién de 250 mL. con conecciones de vidrio esmeri Jado 0 balones de mayor capacidad, si 1a concentracién de acidez total es menor que 3-meg/L. + Condensador de reflujo. + pH-metro (o indicadores de pH) + 2 buretas de 30 mL, PROCEDIMIENTO Centrifugar, 1a muestra durante 5 minutos a 5000 RPM o filtrarla a través de papel de filtro. Decanter el sobrenadante después de la centrifugacién, llevar a un vaso de precipitados una cantidad de muestra, (V mL), con una cantidad . mixima de acidez total de 3.0 meq ouna cantidad minima de deteccién de 0.3 meq, Agregar agua destilada hasta un volumen de 100 mL, Si el volumen usado, V, es mayor que 100 mL se debe usar un balén mas grande. Cuando el pH es mayor que 6.5 se afiade Acido hasta pH = 6.5, enseguida se titula con 4cido hasta pH = 3.0 (El consumo se registra como Z mL). Se coloca 1a muestra en el balén de digestién, se afiaden algunas per Jas de ebullicién y se conecta el balén al condensador como se mues wtra en 1a Figura 16. Se celienta el balén hasta que el 1iquido c-8_, Salida de’ agua fria Entrada de Condensador agua fria Erlenmeyer. Muestra Mechero FIGURA 16 Arreglo del equipo usado en la determinacién de AGV pare la eliminacién por calentamiento del H,C0, cono CO, mientras se preservan de volatilizacién los AGVpo? condensfcién. c-92.6 2.7 enpieza a ebullir y se deja asi, 3 minutos mas, Se interrumpe el calentamiento y se espera 2 minutos, entonces se titula innediata mente hasta pH = 6.5 (El consumo se registra como B mL). No es ne cesario enfriar el liquido. CALCULOS SIMPLIFICADOS Bol * 0.1 meq/ml = meq. A.G.V. [AGV (meq)/V {mL)] # 1000= AGV (meq/L) Z ml * 0.1 meq/ml = meq de Acidez Total (meq Acidez Total/V (mL) * 1000 = Acidez Total (meq/L) (Acidez Total meq/L) - (AGV meq/L) = HCO, (meq/L}. FACTORES DE CONVERSION DE AGV (meq/L) a AGV (mg DQO/L) El factor de conversién de AGV en meq/L a concentracién de DQ0, de pende de la composicién de los AGV. Los factores de conversién pare los acidos acético, C, propiénico, C, y mbutirico, C,, se mestran en la Tabla 8. A partir de estos datos se puede calcular el factor de conversién correcto si se conoce la relacién C, : Cz: C,. La re Jacién se puede determinar por cromatografia de gases. Ocasionalmen te, se debe tener una muestra control y un cromatégrafo de gases para determiner 1a relacién, Si no se puede tener una muestra de concen tracién probada, se puede utilizar el valor indicado en la Table 8 para efluentes de reactores UASB, este valor se aproxima a un valor determinado empiricamente para efluentes de reactores UASB, a escala de leboratorio, que tratan aguas de azicar (Thin y Tissinger, datos no publicados). Figura 17. Este factor de conversién es mayor que para el Scido acético, Cy, puesto que los AGV en el efluente del reac tor contienen una alta proporcién de acido propiénico, C3. En el c-10nov ap asuanyye ua % xcp £9 x¢2 10 nev ap aguamye ua % xsz x £9 xsz 12 aunsy. xx ounsy * we asyn SINENTIY asym 3LN3N143 OdoLaW Td SALNBGHIOUd |_7 x beu sO7 ad ABV ad Oba ad OTNITWI Ta Wd NoTOVINUTL 30 NOTSUBANOD 3d S3¥OLIVS g vievl rn FBLA v éAGV del Efluente UASB * Comparacion de Cromatografia de Gas y Metodos Titulome- tricos. qomeg/t AGV Método Titulométrico 12 =0,9638 OA NWAATAN OO ° 200 400 .600 800 1000 1200 mg DQO/L AGV Método de Cromatografia de Gas FIGURA 17 Correlacién observada entre los meq/L de AGV del efluente, de terminados por titulacién y los mg D@O/L de AGV, determinados por cromatografia gas-Liquido. Estos resultados fueron obte \ nidos @ partir de un estudio de tratabilidad, de dos meses, de agua de azucar, en un reactor UASB a escala de Laboratorio (Thin y Tissinger, datos no publicados). 22.8 - 2.8.1 ~ 2.8.2 experimento citado el C, contebiliza entre el 80 al 90% de 1a DQO de los AGV en el efluente del reactor UASB. CORRECCION POR ACIDEZ PRE-EXISTENTH EN EL AGUA RESIDUAL Giertas aguas residuales tienen acidez debida a écidos orghnicos que no son volatiles. Estos Acidos son generalnente fcidos himicos y compuestos acaramelados, los cuales corresponden a la fraccién de 100,,, Su acidez debe ser determinada ya que ellos se detectan como AGV por el método de titulacién. Por regla general las aguas residua les que contienen compuestos oscuros coloreados. necesitardn ser eva luados para correccién por acidez pre-existente. Hay dos métodos pa ra determinarla, Dejar por 4 semanas un litro del efluente neutralizado del reactor UASB, para digestar con 5 g S.S.V./L de un lodo estable, rico en bacterias metanogénicas, para asegurar que toda la DQQy eadegradada, incluyendo los AGV. (La produccién de CH,, dar& una indicacién si todos los AGV son consumidos). Determinar los meq/Lde AGV de acuerdo al método antes descrito. Es ta es la acidez Pre-existente. Cuél fue 1a concentracién de D.Q.0. del afluente el dia que se colecté el efluente del reactor UASB.? Calcular 1a acidez Pre-existente para la relacién de D.Q.0. afluente, de tal manera que esta se pueda calcular para una concentracién dada de DQO. Acidificar con HCl una muestra del efluente del reactor UASB, hasta pH = 3, hervir la muestra por 30 minutos en un beaker pando. No se debe permitir que el agua se evapore mucho (si es necesario se afia de agua) para prevenir 1a caramelizacién durante el calentamiento. Al c-13beaker no se le coloca condensador, por el contrario se debe permi tir que los AGV se volatilicen y salgen de 1a muestra. Después del calentamiento se reajusta el pH a 3 y luego se titula la mes tra hasta pH = 6.5 con NaQH 0.100 N. Los meq de NaOH usados, serén iguales a los meq de la acidez Pre-existente. Una vez conocida esta acidez, entonces 1a concentracién verdadera de los AGV, puede calcularse como sigue : AGV verdaderos (meq/L) = AGV (meq/L) - Aeidez Pre-existente meq/L La acidez Pre-existente de melazas oscuras coloreadas provenientes de vinazas de azticar de remolacha fue evaluada de acuerdo al método 2.8.1. Se encontraron 0.26meq por g de DQ afluente (Thin y Field, datos no publicados). Esta agua residual tiene una concentracién de 80 g de DQO/L, Si esta agua residual no se diluye (solamente se recircula el efluente) tiene una acidez pre-existente de 20.8 mg/L. 3 BIOENSAYOS EN SISTEMAS ANAEROBICOS Se pueden usar dos tipos de sistemas para estudios de digestién anaeré bica con flujo discontinuo. Uno, el "Régimen mezclado" que usa grandes recipientes de 1 a 10 L, los cuales se agitan mecénicamente y se conec tan a un frasco de Mariotte para medir el gas, como se muestra en la Figura 14, Generalmente la agitacién es intermitente con 3 a 15 minu tos de pausa y pulsos de agitacién de 6 segundos. El otro es un "Sis tema estAtico", que,usa pequefias botellas de suero, las cuales no se agitan y estén conectadas al sistema de desplazamiento para medicién del gas como se muestra en 1a Figura 15. Los digestores de flujo disconti nuo (ya sea los recipientes grandes o las botellas de suero) deberén ser controladas para fugas. Se debe usar el mismo procedimiento indica do en la secciénC.1.1 para el sistema de desplazamiento del liquido, pero cn14la linea de gas debe abrirse y conectarse a un digestor batch lleno de agua. En todos los bicensayos anaerdbicos, se debe suministrar siempre los nutrientes esenciales para el crecimiento y actividad bacterial. Mien tras en la mayoria de los casos, puede no ser necesario aplicar los nu trientes, en este caso son afiadidos para asegurar que no hay limitacién de nutrientes. La solucién patrén normalizada de nutrientes se indica en la Tabla 9. 3.1 ENSAYOS DE ACTIVIDAD METANOGENICA 3.1.1 3.1.2 Objetivo ) Este ensayo es realizado para determinar le actividad metanogénica especifica de los S.S.V. de’un lodo anaerébico. 1a actividad meta nogénica de un lodo depende de muchos factores. Si nosotros desea mos medir la actividad potencial de un lodo, entonces tenemos que asegurar que se provean condiciones ideales. Temperatura.- Factores como la temperatura pueden ser condiciones fijadas para un sistema de tratamiento, puesto que puede resultar no econémico, calentar o enfriar el agua residual. En estos casos se debe estudiar la actividad del lodo,a la misma temperatura que esperamos operar en la practica. Concentracién del sustrato y del Lodo.- La concentracién del sus trato en el micro~ambiente de las bacterias anaerébicas es critico. Mientras las bacterias tienen una alta afinidad por el sustrato (bajo Ks), nosotros debemos estar concientes de las limitaciones de 1a difusién que puede causar que ‘las concentraciones de sustrato sean muy bajas en el fondo del lecho del lodo 0 en el fondo de los c-15*(o0Lap3uLs) OYDasap Je 4_7 euNpena] ap o3DeUaKa |p B 2-9 JEUOLIIpY ¥x seiqop 9s upjonjos e} ap UpLoeuzUa2UOD e] saDuOIUe “17 Bu QODE epe2xe (094373048) OYDBS—ep Yep ba #1 opueny *)_7 W 4 9p UpLoeUZUB2UD GUN UD (ODsapaULS) Oasap Je SupeUOLoLPe Los souOLaNyOS seIsa + w+ VaNQVART 3¢ OLIVER “y 18 coL o%H6"sen W sz sesedasg -eosauy esn os upponjos eas3 “ouRsTNS “E NOTONTOS upanzesoy 4-7 8 os Foaty x9E 19H j-7 88 os 2 youz vida j-7 8H of ofa" yang {7 88 00s oie houH o%H9"?191N ofrs*foasZen 4-1 84 0002 0%9*21909 o%hy*oton? FAN 4-1 4 0002 ony * 1905 SOLNSW313 30 VZVUL *Z NOTINTOS o%Hy* "osu p18 Yost o*H2"* 1989 i718 oe 107HN SBLNBTULNN-OYVH *L NOTINTOS + OTYOLVYORV "13 NA SOGVSN ‘SOLNIWITA 3d VZVUL A S3LNITULAN 3d ¥IOLS SANOTINIOS 30 NOTITSOdWOD 6 WIE¥L c-16grénulos de lodo. Con el sistema estético, el lodo deberé sedimentar formando un Jecho de lodo, en el cual puede haber una limitada difusiéa hacia el lod bajo 1a capa superficial, Solamente suninistrendo una ba ja concentracién de lodo, el efecto de difusién en el lecho del Jodo puede ser miimizedo. La Figura 18, muestra el papel de 1a concentracién'del lodo, sobre Jas medidas de actividad de bacterias metanogénicas con agitacién intermitente durante la digestién (De Jong, 1986). Se observé que un aumento en la actividad corresponde a una disminucién en la con centracién del lodo. La concentracién del lodo es ain mas critica, si para la medicién de la actividad metanogénica se use el sistema estatico. Con cantidades tan pequefias como 1.5 g S.S.V/L en el sis tema sin agitacién, se observé un valor aparente de K, tan alto como 2.5 g DQO/L de AGV. (Field, sin publicar). Con agitacién intermi tente, se observé un menor valor aparente de K, de 0.8 g DQO/L. (De Jong, 1986). Figura 19, en este ejemplo se utilizaron 10 g de S.8.V/L. Este valor es todavia mayor que el valor aparente de K, debido a difusién dentro del granulo (seccion B 9.2) indicando 1a importancia de 1a difusién del lecho del lodo, bajo Jas condiciones usadas para la prueba de activided. Por lo tanto se usa una con centracién de los AGV del sustrato tal. que esegure una adecuada con centracién en le masa del medio para sobrepasar 1a limitacién de 1a tasa de difusién en el lecho del lodo. La Tabla 10 indica los rangos de concentracién del lodo y de los AGV del sustrato, los cuales deben usarse tanto para sistemas de régimen mezclado como de régimen estatico. £1 régimen estatico (0.5 a 1 L) Gmicamente debe usarse para medir la actividad de lodos, cuyos valores son mayores que(0.1 8. 000cH, ) /g SSV x d, con el ob jjeto de medir el metano con mayor precisién. c-17; ACTIVIDAD METANOGENICA en funcidn de la Concentracidn de Lodos .DQ0/g SSV * d 1 Actividad 0.80 0.60 0.40 0.20 9g. SSV/L Jodo © Primera Alimentacién © Tercera Alimentacion FIGURA 18 Actividad metanogénica del Lodo granular, durante on ensayo de Gigestién anaerébica cono una funcién de la concentracién de TaeSSu.” EL experimento fu realizado con el sistena de ceai ros seeclado Cinteritente: agitacién por sus segundos ceda 3 merutee).. La coneentracién de AGV se suministré Gnicanente al Tomienso de La alinentacién, @ una concentracién de 2.64 9 DOO/L y La conposicién de los AGV fué C):C32C, = 24334241 % Deo (De Jong, 1986). C18ACTIVIDAD METANOGENICA _» en funcidn de la Concentracidn de AGV y Agitacion 100 Porcentaje:de Actividad Maxima 80 60 40 } Aparente Ks 20 o 72 3 45 67 8 9 10 114 12 Concentracidn-de AGV g DQO/L 015g SSV/L 4109 SSV/L Sin aaitacién Con. aaitacién FIGURA 19 La actividad de un. Lodo granular metanogénico, durante un ense : yo de flujo discontinuo de digestién anaerdébica, como una fun cién de la concentracién de AGV. El experimento fué realizado con 1.5 9 de SSV/L y con sistema sin aitacién; La concentra cién de AGV. sobre el eje "X", indica la concentracién suminis trada al comienzo de la digestién, con flujo discontinuo, ta composicién de AGV fué CpiC,2C, = 24234241 (x DAO) y el Lodo fué previanente adaptado“po? 3‘neses, 2 los AGV. (Field, datos no publicados). El experimento con 10 9 de SSV/L se realiz6 con régimen mezclado Cintermitente: agitacién por 6 segundos cada 15 minutos). La concentracién de AGV sobre el eje ndica La concentra cién que se mantuvo con réaimen estatico hasta que se termind la digestién por tandas. La composicién de los AGV fué 24:34: 41 y el Lodo se adapté previamente a los AGV por una semana (De Jong, 1986). c-19"1.2 anb Jokew sas upiques aqap 2035961 yap UaUN}OA 19 “AV AP 11004 6 4, O°2 4 OP} OP 1.7 ASS 6 ¢ UOD UpsoEILBe ap ews! 18 asn sao woaug “2 "PASS 18 H9onq 6 °9 anb Jouew Jas e eA opoy ns ap ‘pepyat3zoe &) anb evadsy yx 2 Hd © opezpjeugnan c-20 svete s*L BOL wea16e us oy 8 Ore ors 80% wo open By INGUTUSaNS 3d WWSISTS VOINSSONVIAN QVGIATLOV Jd OAVSNA 73 WU¥d OGVGNAHOIAY ADV 3d OLVYLSNS 3d NOTDWYANIINOD A Od01 Ob YIE¥L3.1.3 ‘Composicién de los AGV del Sustrato.- La composicién de los 3.1.4 3.1.5 AGV del sustrato tienen un gran efecto sobre las medidas de ac tividad. En 1a Tabla 11 se informan resultados de actividad, Jos cuales indican la gran diferencia cuando el acido acético, C), es el principal componente de los &cidos grasos volati les del sustrato “ comparados con otros sustratos con ma yor concentracién de fcido propiénico, C3, y n-butirico, C,. Por lo tanto, la composicién de los AGV tendré efecto sobre los resultados de la actividad, y se deberé escoger una composicién de AGV que sea similar a le composicién de los AGV del afluente acidificado a ser usado en el estudio UASB. De igual manera se deber& informar 1a composicién de los AGV del sustrato usado. Adaptacién del Sustrato.- La actividad esta asi mismo relaciona da con la cantidad de tiempo que el lodo tiene para adaptarse a los AGV del sustrato usado. Generalmente durante la primera ali mentacién de los AGV, el lodo est& adaptandose asi mismo @ los AGV del sustrato. Casi siempre como se muestran en 1a Tabla 11, Ja actividad que se mide en la primera alisientacién es menor que 1a de 1a segunda alimentacién. Después de la adaptacién, se deber& observar un aumento continuo en la actividad para alimenteciones adicionales, pero los aumentos son pequefios, debido al crecimiento de nuevas bacterias metanogénicas en el lodo. Comparar la dife reneia'en actividad entre la tercera y segunda alimentecién, repor ‘tadas en 1a Tabla 12, con la diferencia entre la primera y segunda alimentacién. Si el aumento en actividad, entre alimentaciones excede el aumento esperado, usted probablemente est& confirmando el crecimiento debido a adaptacién. pH.- Los AGV del sustrato deben ser preparados como una solucién madre, neutralizada a pH = 7,0con NaOH ya que se necesitaran apro ximadamente la misma cantidad de equivalentes de NaOH como equiva lentes de AGV, la concentracién de Na* en 1a solucién madre deber& c-21"C996 © oquapteuaseWye 9p sesow 2) de>}}IP}Ie ULs OYDIseP UB OPEALaIN? PUOUIaOY y (9,8) Csuazueuaseuye ap oye un ap Spu UoD OD)2ReN OpOT + upp9e316e uLs = euaists ! ve = ud 99 Of = eungevaduay p-1000 5 = ADH UpHoBUgUadUOD pT ASS 6 ost . = poy 1: sto = TOA 0p0) 19P PEPEALIOV y SAVANSWTYIdX] S3NOTITANOD ECL wONOHUION., 7528225 ouvisns oda NOTOVTRY ‘aUBHON SMES OTT {aeo} 19nd urs “BuoH) VOTO3W VOTN3DONVLGW GVGIATIOY V7 3UG0S ADY 30 OLVULSNS “134 NOTOISOAWOD VI ad O1Dada 1a Lt View.3.1.6 3.1.7 - 3.1.8 ser igual al 25 - 35% de 1a concentracién de DQO=AG¥S— Por lo tanto con concentraciones muy altas de ACV neutralizados © 15 g DQO/L) se puede tener inhibicién por sodio, Nat, de las Dacterias metanogénicas. Los AGV de la solucién madre deben ser neutralizados, puesto que si no es asi, entonces el PH bajo y la alta fraccién de AGV no ionizados, causarén una severa inhibicién de la metanogénesis. Solucién madre de sustrato.~ La concentracién de 1a solucién ma dre recomendada es 100 g DQ0/Kg. La solucién se prepara por peso ¥ no se debe olvidar medir la densidad de 1a solucién si la adicién de los AGV al experimento se va a realizar volumétricamente. La re lacién en peso de g DQ0/g para Cy, C, y C, es 1.067, 1.514 y 1.818 respectivanente. Procedimiento.~ Se afiade agua hasta la mitad del volumen del reci Piente digestor o de la botella. Se adiciona la cantidad deseada de AGV de 1a solucién madre (Tabla 10), se agrega 1a solucién con centrada de nutrientes y extracto de levadura, de acuerdo a Ja Ta bla 9. Se afiade 1a cantidad deseada de lodo (Tabla 10). Se llena el digestor hasta el volumen efectivo (este volumen debe ser igual a1 90% del volumen del recipiente). Se burbujea Ny gaseoso : © CH, (biogas tratado con NaOH) a través del liquido por 3 minutos. En este momento se inicia el experimento. Se registra diariamente a produccién de gas, hasta que el 80% del sustrato ha sido utili zado. Se mide la actividad en una segunda alimentacién de AGV, fiadiendo la misma concentracién de AGV de 1a solucién madre adi cionados en la primera alimentacién. Se continuan las medidas dia rias de gas, hasta que ocurra la produccién del 80% del gas espe rado a partir del nuevo sustrato. Perfodo de Actividad. Se desea calcular 1a tasa de produccién de gas metano durante le alimentacién.| El periodo de tiempo debe r& cubrir al menos, alrededor del 50% de los AGV usados y no c-233.1.8 3.1.9 deberé ser un perfodo pequefio, cuando fimicamente una cantidad may chice del sustrato se ha usado. En Ja Figura 20 estén los datos de produccién de gas, usados para calculer las actividades reportados en la Tabla 11. Los periodos de actividad con "a" en 1a Figura fueron las partes de le gréfica, donde fue determinada Ja pendiente promedio de 1a curva de produccién de gas. Calculos.- A partir de la pendiente promedio durante el periodo de actividad, se puede obtener 1a tesa (R) en mL CH,/h, Este va lor puede ser convertido a la actividad metanogénica especifica (AME) eri g Wey, _/g SSV x d como sigue (R# 24) / (FC # V © S.S.V) donde : R= tesa de produccién en mL CH,/h 24 = h/d FC = Factor de conversién en ml. CH,/g COD (Tabla 7) V_ = Volumen efectivo liquido en el digestor en L. SSV = Concentracién del lodo en g SSV/L. Aumento esperado de 1a actividad entre Alimentaciones.- La ac tividad metanogénica especifica de la segunda alimentacién de AGV, probablemente ser4 significativamente mayor que la de la pri mera alimentacién. Se desea determinar si el aumento fue debido principalmente a crecimiento en cuyo caso la actividad de la pri mera alimentacién es 1a actividad correcta del lodo, o se puede encontrar que la mayor parte del aumento se debié a la adaptacién de las bacterias a los AGV del sustrato, en cuyo caso la activi dad ‘de la segunda alimentacién es la actividad correcta del lodo. C24ACTIVIDAD METANOGENICA lodo granular" Nadelco" CHq acumulado (m1) rrodicion de nuevos AGV Primera z Segunda Alimentacién Alimentacicn ° © 60 120 180 240 300 360 420 480 540600 Tiempo. (horas) ACTIVIDAD METANOGENICA lodo gronulor “Roermond’ CHg acumulado (mt) {rvadlicion de. nuevos AGV " Segunda Alimentacidn | 04080720160 200 340280 320 360400 Tiempo (horas) a 2ag4at © 732304 C234 203.04 Nota: Rélacidh de C2 C3y C4 DQO/Sustracto AGV FIGURA 20 Curva de La produccién acumulada de metano, durante el ensayo Ge digestién anaerébica por tandas de AGV como sustrato, para la determinacién de la actividad metanogénica de los lodos de “Nedelco" y "Roermond". (Hong, datos no publicados). El perio do de actividad principal del C,, de los AGV del sustrato, E42C,:C, = 73224704 % DQO, esta°marcado como “A1".y asi mismo ef réla¢ionado con los AGV del sustrato principalmente del C. ¥ C,, estén marcados como "AZ". En la Tabla 11 se dan detaltes de Ste experinento. c-25El incremento teérico esperado del aumento de actividad (ITEAA), debidé a crecimiento pueda calcularse como sigue + ITEAA = (0.02 * DQ gy * 3-0)/(SSV * AMB)); (a T= 30°C) TTEAA = (0,02 # DQO ,cy “*2-5)/(SSV “# AME,) ; (a T = 20°C) donde : 0.02 = produccién celular de metano-bacterias (gSSV/g DQ0). DQ acy = Concentracién de AGV en el sustrato,usados duran te la primera alimentacién (g DQ0/L). 3.0 (6 1.5)= Activided celular de las metano-bacterias puras. & Woy, D/g SSV x 4). SSV = Concentracién del lodo en el ensayo (g SSV/L). AME = Actividad metanogénica especifica del lodo, me 4ida durante le primera alimentacién (g DQ, / 4 g SSV x d). El incremento observado en Aumento de Actividad (IOAA) se puede celcular como sigue : TOAA = (AME, ~ AME,)/ AME, donde = AME] = Actividad Metanogénica Especifica del lodo, me dida durante la primera alimentacién (g DQO-CH,/ ssV x 4). c-26AME, = Actividad Metanogénica Especifica del lodo, me dida durante 1a segunda alimentacién ( g DQOgy '-/ 6 g SSV x 4). Si TOAA > 2 ® ITBAA entonces el aumento observado en la actividad se debe principalmente a le adaptacién y 1a actividad de 1a segunda alimentacién, es la activided del 1odo. Si TOAA <2 * ITEAA, entonces el aumento observado en la actividad, se debe principalmente al crecimiento esperado de las bacterias meta nogénicas y la actividad de 1a primera alimentacién es 1a actividad del lodo. En el ejemplo de 1a Tabla 12, el aumento de actividad observado fue 2 veces mayor que el aumento esperado en crecimiento y 1a actividad correcta del lodo es 1a de 1a segunda alimentacién. 3.2 ENSAYOS DE BIODEGRADABILIDAD ANAEROBICA 3.2.1 Objetivo.- El objetivo de este experimento es determinar 1a biode gradabilidad anaerébica de 1a DQO de un agua residual. La biodegra dabilidad anaerébica DQpp) es comparable con la DBO. Sin embargo Ja DQgy es generalmente mayor ya que 1a prueba de DBO es realizada @ concentraciones muy bajas (tasa limitante), con menos inéculo y muchas veces a menores temperaturas. Durante la prueba de biode gradabilidad la DQO acidificada (DQ0,,), se mide directamente (DQO-CH, + DQO-AGV) y 1a produccién celular (DQ0_.,) se calcula por balance de masa o un estimativo, basado sobre la produccién celular por fermentacién y metanogénesis. La DQgy es 1a DQO consumida por las bacterias y es igual a le sume de DQO-CH, + DQO-AGV + DQO..)- c-27coquaqu}9au9) 210 quppoeqdepe) 65°. oavaaasa oavAuasao VIARUd NOTOVINGWIW 3d QVGIATLOV 30 NOTIIvUS AVOTATLOY.N3OUNSWOV (2gS) eauajueuacewze ap sasau ¢ azUBUED{UN OD 09]9paN OPO7 + ugpae3i6e uLs 2 29 Of botnetoe j-Tow 6 o [eT Ass 8 g9rt 7 sto » — avOTATLOW = ewaysis = ud = eunjzesadwa) 25 oa uptseies) ASY upLotsoduoy = ASW UpLoes3UBIU0D = por = "On + S3WANSWTY3dX3 S3NOTITANOD euaavaL epunbag esautad pass , 6 Mona 6 NOTOVINWTW Caeopjgnd ups ‘saburssts A uty) ASV 3 SWATLAOISNOD SSNOTIVLNAWITV S3Y1 NOD ..0273903N,, YVINNVYD 0401 73d VIINAQONVLSW QVOTATLOV V1 = 2b Wievt c-283.2.2 3.2.3 3.2.4 Periodo de Tiempo del ensayo,- E1 ensayo de biodegrabilidad anaeré bica, depende del tiempo permitido para que ocurra la digestion y por lo tanto siempre se debe informar el nfmero de dias en que se © llevé a cabo el experimento para obtener resultados de Dp. Para predecir 1a biodegradabilidad en un reactor UASB, por- experiencia he encontrado que un perfodode7dias de ensayo, a la temperatura del UASB es representativo. Sin embargo, después de largos perfodos de un buen manejo y operacién de reactores UASB, podrian ser posible, desarrollar bacterias que pueden romper le resistencia del complejo material al cual el lodo inicial no estaba dispuesto a degradar. Este tipo de adaptacién, solamente puede predecirse,por un largo en sayo de biodegradabilidad de 1 mes o mas, o repetidas alimentaciénes al mismo lodo. (Siempre que 1a concentracién del agua residual proba da durante el ensayo sea relativamente no inhibidor El lodo-Control.~ La prueba de biodegradabilidad anaerdbica, requiere que 1a biodegrabilidad del lodo sea evaluada. La acidificacién de Ja DQO del agua residual se calcula a partir de le DQO ecid. tanto del lodo cono del agua residual, menos 1a DQO Acidé del lode solamen te. Nosotros estemos interesados en evaluar la biodegradabilidad del agua residual, por lo tanto debemos estar seguros que el lodo con trol es completa y biolégicamente estable. Si al final del experimen to, 1a DQO Acids del lodo control es 20% mayor que 1a DQO dcida del agua residual, el lodo introduciré muchos errores en el experimento. Por lo tanto la DQO acid: del lodo-control deberé ser medida, después de 1 a 4 semanas de digestién, para estar seguros que este valor es bajo, antes de usar el lodo para ensayos de biodegradabilidad. Si el Jodo no es estable, es necesario digestarlo anaerébicamente por 1 mes pera estabilizarlo. Concentracién del Lodo.- La concentracién del lodo deberé ser lo suficientemente alta para afiadir un exceso de indculo, pero lo sufi cientemente baja que el lodo no contribuya con mas del 20% de la c-293.2.6 3.2.7 3.2.8 78 QO &cid. del agua residual. Generalmente se recomienda una con centracifn de: 5gSSV/L. Si el lodo tiene una alta actividad meta nogénica (> 0,2 g DQOgy, /g SSV x 4) entonces se puede usar menos odo, pero la minima cantidad de lodo deberé ser 1.5 g SSV/L. Concentracién de 1a DQO del agua residual.~ La concentracién de 1a DQO del agua residual deberé ser tan alta que el CH, y los AGV, puedan medirse exactamente y tan baja que no cause severa inhibicién (si es inhibidora ). Generalmente se recomienda, una concentracién de.egua residual de 5 g DQO/L. Si el agua residual contiene toxinas metanogénicas, solamente podrian usarse 2 g DQO/L y un recipiente grande de digestién (> 2 L). Amortiguadores.- La formacién de AGV durante la digestién, pueden causar una elevada acumilaciéa de acidos no neutralizados en el me dio..En orden a prevenir una caida en el pH se debe afadir aproxima damente 1 g de NaHCO, por g DQgy del ogua residual. Si no se puede calcular la biodegradacién aproximada de la DQO,, se debe afiadir 1 g de NeHCO, por g de DQ del agua residual. : Procedimiento.- Al recipiente de digestién del agua residual en "Tratamiento", se afiade el lodo y la cantidad de agua residual, que pueda dar 1a concentracién deseada de DQO en el volumen efectivo. Se agrega la solucién concentrada de nutrientes y extracto de levadura, de acuerdo @ 1a Tabla 9 y 1a cantidad de NaHCO, necesaria para tampo nar 1a DQO;y del agua residual. Se adiciona luego agua hasta el vo lumen efectivo. Al recipiente de digestién del lodo-control, se aia de 1a misma cantidad de lodo usado en el “Tratamiento” agrega agua hasta el volumen efectivo. Se burbujea por ‘3: minutos, gas No 0 CH, (biogés tratado con NaOH) a través del 1iquido de ambos recipiéntes : el Tratamiento y el control. ehsegiiida se Horario de muestreo.~ Durante la prueba se debe medir la produccién c-303.2.9 acumulada de metano y 1a concentracién de AGV, tanto del.1odo-control como del "Tratamiento". Si 1a DQO del agua residual es principal mente soluble, se debe medir la DQ0 filtrada. Se debe asegurar, que Ja medicién del metano producido se hace al tiempo que se toma una pequefia muestra para medir los AGV y 1e DQO filtrada. Si el experi mento se realiza en un sistema de régimen est&tico, no se debe olvi dar, mezclar el liquido, antes de tomar las muestras. Los AGV se de ben medir el dia 0 (cero), cuando se arranca el experimento. Las mediciones deberdn ser realizadas el filtimo dia (después de 1 semana para experimentos cortos), pero asi mismo ellos puedan medirse en dias seleccionados antes del filtimo dia, para obtener informacién so bre la biodegradabilidad a diferentes tiempos de digestién. Célculo de 1a DQO soluble del agua residual.- La primera etapa del c&lculo es convertir los datos de produccién acumulada de CH,a mg de cu, J como sigue : 1000 * (Z CH,/FC)/V donde + E CH, = produceién acumulada de CH, (nl) producidas después de un tiempo de digestién. FC = Factor de conversién (mL CH,/g DQ0). Table 7. V = Volumen efectivo (L) del recipiente de digestién. 1000 = mg/g. Los datos de concentracién de dcidos grasos volatiles,deberén ser convertidos a mg DQ0/L, si los resultados estan en meq/L. Si se conoce 1a relacién C, : C; : C,,ae-rkel factor de conversién marcado “gfluente UASB", en la Tabla 8. La mejor manera de eliminar errores 34por estimacién errada de la relacién C, : C, : C,, es usar un lodo con una actividad metanogénica alta, de tal manera que 1a contribu cién de AGV a 1a DQO,,.,1 en cualquier tiempo dado de digestién, sea pequefio. La DQ0-4cid en mg DQO/L se puede calcular .sunivido mg DQ0-CH,/L mas mg DQO-AGV/L a cada tiempo de digestién. Los datos de DQO filtrada se deberdn informar como mg DQO/L. Ahora que todos los datos estan en unidades de mg DQO/L, el siguien te paso del célculo es corregir los datos del “tratamiento”, restan do los datos del "control", para obtener los datos corregidos, como se muestra para un ejemplo real en las Tables 13 y 14 donde 1a bio degradabilidad de un agua azucarada fue estudiada. Los datos corregi dos deberén ser divididos por la concentracién corregida de 1a DQ del agua residual al tiempo o (cero) (DQ,.9)- Para obtener los % de metanogénesis (% DQO-CH, 0 % M) % de AGV presentes (% DQO-AGV 0% AGV), % de acidificacién (% DQ0-ecid. o Z A) y % de DQO filtrada renanente (% DQ0 filtrada) o sea que atin permanece a un tiempo dado de digestién (tx) se procede como sigue : %M = (DQ-CH,/0,_o) ¥ 100 BA= (DW- acid, /DQW,_5) #100 % AGV= (DQO-AGY/DCO, 5) # 100 % DQO £ilt = (DQOEILe, /000,_9)* 100 Luego se calcula la DQO filtrada removida (Z DQ,,,_ removida o %R como sigue : %R = 100 - % DQ filtreda. Los % de biodegradabilidad de 1a DQO del agua residual (% DQOgy o c-32one = H¢ pre oo = ooHen up 9e}16y Qo Of = eunzevaduaL Ts = TIA 2 STTVANSMTYRX3 S3NOTIIONOD oom 969s bese S998 geez aSeb 0 O ed oe se10H PPE 9g PH Vong poy PPE og PH Yong poy OATAVTONNOY NOILS39I0 wOANSTAVLVEL wTOWLNOD4, 3 OdWaTL (sey jgnd urs’ “Bu0H) JOULNOD, A WOLNATWVLVUL, TB N32 UVIANYYD 0007 3d | _7 ASS 6 Sut NOD A ,OLNSTWVAVEL,, 12 NB UVOAZY 3 | 7 Odd 8 CODY NOI COVULSINTHNS OLNSHTYSAKA NN Ad NOTOVZINADONVLAW A NOTDVITATOTIV ‘aVarTravavUoIGoTa V1 3d OTNITV) Ta VU¥d | SOLVd 3d VrOH SL WIBVS c-3350197179 $0] e4ed 03x93 12 Ja, ¥ om 126 gL $°96 ol rae 070 oro 581}92 (030 B -nnn——— x -———— sv1n139 A *svinaa ¥ ae wanna nne nnn Yeo mma nan= 1 080 Bib nnnnnnnmnnm ses0y L ova Yong aN OATLVINWNOW NoT1s3910 OHIaSa0 bd % wOQT93Y09,, 30 OdWATL epesa its 7 (Sb Wav. 1 .Na SaTW1aG) UVINZY Taq VITEOUAYNY avOT WHevavHORGOTE V1 Vuvd 2 SOLVa 30 VTOH YL VIBVE c-343.2.10 % BD) y las eélulas producidas como un porcentaje de 1a DQO del agua residual (% DQ0,,, 0 % células) se calculan como siguen ? KBD =ZR+% AGy % célilas = % BD-%Ao % células=%R- 2M. La produccién especifica celular (Y celular : g DQ0.,4/g DW) es: Yoo] = % células/ % BD. cel Ejemplo de estos chlculos se muestran en la Tabla 14 para el expe ximento citado. Los resultados completos se mestran en le Figura 21. La produccién promedio celular en todo el experinento fue 0.18 (en la Tabla no se muestran todos los resultados). El azicar es completamente biodegradable y por lo tanto en este ex perimento no hubo ninguna medida de DQO resistente (DQ0,,,). El % de DQ... el filtimo dia se puede calculer asi : ‘TDM. = 100 - % BD. Célculo de 1a DQ insoluble del agua residual. Para medir la DQO Angoluble se necesita un sistema de régimen mezclado, En este caso, se miden los mismos parametros pero el célculo es diferente, puesto que no se puede medir directamente 1a DQO removida (el lodo y el sustrato no se pueden separar por filtracién). Los 2M, % AGV, ZA ¥ DWzi3¢, S¢ calculan como se indicé antes, usando le concentracién de 1a DQ0 insoluble adicionada al comienzo como DQ0,_). Estos datos se mestran en la Tabla 15 para un experimento real donde se estudid la biodegradacién de la celulosa. c-35BIODEGRADABILIDAD ANAEROBICA DE AZUCAR Glucoso Monomérica (soluble) Porcentaje de Azucor- DQO 120 400 —— 80 ==—eeo* 60 40 20 °9 700 F200 INI HI300. Tiempo (horas) +Biodegradado @ Acidificade © Metanogenizado FIGURA 21 Biodegradabilidad anaerébica del azucar, durante un ensayo de flujo discontinuo de digestién anaerdbica (Hong, sin publicar). En la Tabla 13 se dan detalles d¢ este experimento. c-36a La produccién celular no puede ser calculada, sin los datos de % R. Por 1o tanto se necesita estimar el 2 DQO,,;, usendo Yoo) (8 PW.)/ 7 DQ0gp), derivado de 1a Tabla 1, como sigue : Acidificacién Y,,, = 0.196 Metanogénesis Y_.) = 0.028 El % de 1a DQO insoluble del agua residual, convertido a células (al tiempo t,), se puede calcular como sigue : & celulas * acidif= [(% A,,)/(1 - 0.196)] - @ Ay) % células * Metanog = [(% M,,)/(1- 0.028)] - M,,) % células toteles = % células x acidif. + % células x metanog. El % de biodegradabilidad (% BD) y el 2 de hidrélisis (Z H) de 1a DQO insoluble de un agua residual se puede ahora calcular. ZBD = 2A4+Z Gélulas totales ZH = Z BD + (% DO fil. - 2 ACV) El sustrato hidrolizade pero no acificado (sustrato monomérico) es (% DQO filt. - % ACV). La Tabla 15 muestra los resultados de estos cAlculos, # partir del = experimento de 1a celulosa, usando el factor de produccién celu Jer Y.¢, de le Tabla 1. La Figura 22 mestra los resultados com = pletos cuando el promedio de produccién celular, Y¥..,, fue usedo del experimento de aziicar citado. 3.2.11 DQO soluble e insoluble en el agua residual. Si 1a DQO del agua residual se compone de ambas; DQO soluble e insoluble, las fracciones a c-37epews3s3, 2, SvTNTED PAI g BEN IOSNE OHIISIA OV 30 ArVANIIYOd Le one = Hd 8» = fooHen up19eq.6y dy Of = eunaevoduoy 1st = "TOA + S3WINAWTU3dX3 S3NOTITONOD bez eet 6g oseuzay 22 edeaa oo sesoH OATLYINNNDY Noris39ta 3 OdWaTL "0 OdWaIL W vSOINT39 34 Oba v1 30 APVANSIUOd NN OWOD SOGVSAYdXa A TOYLNOD 12 YOd SOTDAYYOD VA NOS INDY SOGVINISIYd Sova $07 “C424 IaNd UPS “BUOH) 4 TOYLNOD, A uOLNATHVLVEL, “TB _N3 YVTANVYD 0007 30 |_7 ASS 6 $1 NOD A wOLNATHVLVUL. “TZ -N3 | _71 ¥SOINTAI OBA 6 OOOy NOI OGVELSINIWNS OLNIWIYIdXI NN 30 STSTTONGTH a NOTDVZINGOONVIAW “NOLIVIIITATOW “QVGTTIavavuD3GOIG V1 30 OTNDID 73 WYvd SOLVa 3d VfOH SL WievL -38BIODEGRADACION ANAEROBICA DE CELULOSA Glucosa Polimérica (insoluble) Porcentaje de Celuloso DQO 100 80 60 40 20 0 100 200 300 Tiempo (horas) +Biodegradabi- — @ Acidificada OMetanogenizada A Hidrolizada lidad FIGURA 22 La biodegradabilidad anaerdbica y ta hidrélisis de la celulo sa, durante un ensayo de digestién por tandas (Hong, sin pu blicar). En la Tabla 15 se dan detalles de este experimento.solubles e insolubles (o DQO filtrada y DQO, ,) deber4n ser separa das y se debe estudiar 1a biodegradabilidad para cada fraccién. 3.3 ENSAYOS DE TOXICIDAD METANOGENICA 3.3.1 3.2.2 3.3.3 Objetivo.- El objetivo de esta prueba de toxicidad es determinar el porcentaje de 1a actividad metanogénica que se pueda perder debi -do @ compuestos inhibidores, La toxicidad se determina comparando Ja actividad del lodo alimentado {inicamente con sustrato con la ac tividad del lodo alimentado con el mismo sustrato mas el compuesto téxico sospechoso. Estudios de Toxicidad de Sustratos no Inhibidores.- Casol: Si el compuesto inhibidor no suministra sustrato al medio, entonces el experimento se estructura en 1a misma forma que la prueba de ac tividad (seccién c 3.1). El "control" recibe como sustrato sola mente &cidos grasos volétiles, AGV, y el "tratamiento", recibe ademas de los AGV, concentraciones variables del compuesto inhibidor. Si el compuesto inhibidor produce en el "tratamiento" un pH diferen ‘te del pH del control con AGV, el pH del medio del "Tratamiento" de beré ajustarse al mismo valor de pl! del control. Estudios de Toxicidad de Sustrate Inhibidores.- Caso 2: Si el com puesto inhibidor o el agua residual con compuestos inhibidores sumi nistran sustrato al medio, entonces el ensayo de toxicidad debe mo dificarse. Si el suministro de sustrato metanogénico (DQ0-acid) de 1 compuesto inhibidor o agua residual con inhibidores es menor que 1 50% de 1a DQO-AGV de los acidos grasos volatiles del control, el experimento se realiza en forma similar a 1a prueba de actividad: 1 control recibe dinicamente AGV como sustrato, el “tratamiento” recibe los mismos ‘AGV que el control mas el sustrato que contiene el inhibidor. Se debe incluir la adicién de bicarbonato de sodio, c-403.3.3 3.3.4 NaHCO, en el "Tretamiento" (pero no en el control) basado en.la re Jacién 1 g de NaHCO, por g. DQz) del inhibidor o agua residual siministrada> Estudios de Toxicidad de sustratos inhibidores.- Caso 3: Si los inhibidores’o el agua residual con inhidores suministra mas que el 50% de 1a DQ0-acid. proporcionada por los AGV del control, el ensayo de toxicidad no se puede hacer como 1a prueba de actividad. En este caso cada concentracién del inhibidor o agua residual con inhibidores debe tener un control de AGV separado. Los “tratamientos" se aiiaden junto con el NaHCO, y no se adicionan AGV. El “control” para coda tra tamfento” debe Hever una cantidad de AGV neutralizaios igual a la DQ0-ecid.’ del “Tratamiento” (no se agrega NaHiCO,). La composicién de los AGV del control se debe hacer, aproximandola relacién C, : C3 : G, ala re lacién de 1a DQ0 del "Tratamiento" acidificado. Si no se conoce es ta filtima relaciém se puede usar le siguiente C) : C, : C,+ 73: 23: 04, Primera alimentacién o Alimentacién de exposicién.- Durante la pri mera alimentacién (alimentacién de exposicién), el lodo esta expues to a los compuestos inhibidores. La actividad del control se deter mina en la misma forma que para la prueba de actividad. Generalmen te en los dfas iniciales de la primera alimentacién no se ha liegado a expresar completamente 1a inhibicién de los "tratamientos". La ac tividad del ensayo se determina a partir del periodo de actividad siguiente a la primera indicacién de reduccién de actividad. El pe riodo de actividad del "tratamiento" puede no ser siempre el mismo periodo de la actividad del control. En el ejemplo de 1a figura 23 (Na* = Caso 1), el perfodo de actividad del control durante 1a ali mentacién de exposicién estuvo entre 0 ~ 72 horas y el periodo de actividad del "tratamiento" como sal estuvo entre 104-292 horas. En otros ejemplos, Figura 24 (resina de pino = Caso 1) y Figura 25 (ex tracto de corteza = Caso 2), los pérfodos de actividad del control y del “ensayo” cainciden. 44800 600 200 TOXICIDAD DEL SODIO S@BRE LA ACTIVIDAD METANOGENICA. Sustrato = mezcla de C2,CsyCq sol media removida Metano Acumutado (mi) {7 sal fibre media adicionada Exposicién _e—_ ——* ° 4100 200 300 400 500 600 Tiempo (horas) + Ogl 4 BG 9 12 G9 © 18 GL & 28 QL Nota: Concentracién de Sodio durante el periodo de exposicicn FIGURA 23. Curva de produccién acumulada de metano, durante un ensayo de tratabilidad de digestign anaerébica por tandas (Caso 1) de 4 ¢ de D@O/L de AGV como sustrato (a 20:C, = 24:34:41 % DGO) con "tratamientos" con sodio (Nat). “La°coficentracién del Lodo fué 1.36 g SSV/L de lodo de "Nedalco", el cual fué adaptado previa mente por una semana a los AGV del sustreto. EL experimento, fué realizado con régimen estétice y a una temperatura de 30°C (Hong, sin publican). C42TOXICIDAD DE LA RESINA DE PINO SOBRE LA ACTIVIDAD METANOGENICA Sustrato =mezcla de C2,Csy C4 remocion media de resina Metono Acumalado (mi) resina libre media adicionada 800 pa a Exposicion Récuperacién 600 400 200 300 A 600 Tiempo (horas) 100 200 + 0000 4 0070 © 6140 @ 0280 4 0.700 Nota: Concentracién de resina de pino (g/L) durante el periodo de exposicién FIGURA 24 Curva de produccién acumulada de metano, durante ensayos de toxi cidad por digestién anaerébica con flujo discontinuo (Caso 1) de 4g DQO/L de AGV como sustrato (C:C,2C, = 24:34:41 % DQO) con “tratamientos" de extracto alcalifio de fadera de pino. La con centracién det todo fué 1.36 g SSV/L de todo de “Nedalco”, el cual no fué adaptado previamente al sustrato de AGV. El experi mento se realizé con régimen estético y a una temperatura de 30°C (Field et al, 1987). c-43TOXICIDAD DEL EXTRACTO DE CORTEZA DE PINO SOBRE LA ACTIVIDAD METANOGENICA Sustrato: Mezcla C2 C3 yCq extracto removid extracto libre me aH -Recuperacign Metanio Acumulado (mi) 800 & adicionado 600 400 200 Tiempo (horas) * 0.00 a 0.75 ° 1.50 @ ~225 & 3,00 Nota: Concentracién de extrocto de corteza de pino g DOQO/L-durante ‘el. periodo de exposicién FIGURA 25 Curva de produccién acumulada de metano, durante un ensayo de toxicided por digestién anaerdbica (Caso 2) de 4 9 Da0/L de AGV como sustrato (CpzC, 24 % DQ0) con “tratanientos” de extracto acuoso df cSrtdza de pine (toxieidad debida a tor ta ninos). La concentracién del todo fué 1.36 g SSV/L de Lodo "Ne dalco", et cual no estaba previanente adaptado a los AGV del sus treto.” Para neutralizar la D00,ciq de ta fraccién biodegradable de los extractos, se afiadieron 2 g/L de NaHCO, a todos los “tra tanjentos” y el “control”. El experinento fub realizado con ré ginen estético y 2 una temperatura de 30°C (Field et al, 1987). CHG3.3.5 3.3.6 Segunda Alimentacién o Alimentacién de Recuperacién.- Al final de Ja alimentacién de exposicién, se deja sedimentar el lodo tanto en Jos "tratamientos” como en el "control", se decanta el sobrenadante y se descarta. Se prepara un nuevo medio de igual manera que el me dio usado para el control, con AGV como sustrato y se vierte en am bas botellas : control y “tratamiento, La alimentacién de recupera cién puede entonces iniciarse. La actividad de los "tratamientos" se determina a partir de los mis mos perfodos de actividad del control. La actividad siguiente a la exposicién, es la verdadera actividad residual del lodo. Esta acti vidad es la actividad medida directamente después de remover el in hibidor que contiene el medio. En este punto la alimentacién de re cuperacién est& terminada. Sin embargo vale la pena continuar mi diendo 1a produccién de metano por algin tiempo, después del periodo de actividad para ver si le actividad del “tratamiento” mejora des pués del perfodo de actividad. Si se observa un mejoramiento, el lo do esté "recuperaciénsu actividad.” Alimeatacién para exposicién continuada.- Al final del periodo de exposicién se puede decidir si se continfia con la experiencia para determinar si el lodo se estd adaptando al compuesto téxico. EL medio de la alimentacién de exposicién, se decanta y se descarta. Se prepara un nuevo medio para los,"tratamientos", en la misma for ma que se preparé el medio para el primer periodo de exposicién. Para,los controles se prepara un nuevo medio‘ en\igual forma que se preparé el sustrdtode AGV usado para la primera alimentacién de exposicién del "control". La actividad de los ensayos se determina del mismo periodo de ac tividad del control. Esta es la verdadera actividad del lodo con exposicién continuada. Este actividad es la actividad medida di rectamente después de suministrar de nuevo el inhibidor al conte nido del medio. Vale la pena continuar las mediciones de c-45;TOXICIDAD POR SODIO 50% Concentracion del inhibidor js A 400 porcentale de Actividad del_control 80 40 20 0 10 20 30 Concentracion de Sodio g/I «4 PERIODO DE 4 PERIODO DE EXPOSICION RECUPERACION FIGURA 26 Determinacién de La concentracién de sodio (Na*) que produce el 50% de inhibicién, Este experimento se describe con detalle en la leyenda de la Figura 23. Inhibicién = 100-% de actividad del control. c-46TOXICIDAD DE RESINA DE PINO 50% Concentracion del inhibidor Porcentaje de la Actividad de! contro! s80Fk 60 40 20 SA ° : = © 0.10 020 030 040 050 060 0.70 Concentracion de Resina de Pino g/t * PERIODO DE * PERIODO DE EXPOSICION RECUPERACION FIGURA 27 Determinacién de La concentracién de resina de madera de pino, que produce el 50% de inhibicién. Este experimento se describe con detaloe en la Leyenda de la Figura 24. Inhibicién = 100-2 de actividad del control. c-47_ TOXICIDAD DEL EXTRACTO DE CORTEZA DE PIN 50% Concentracién del inhibidor 4100 Porcentaje de Actividod del_control 80 40 20 0 1 2 3 4 Concentracién del Extracto de Corteza-de pino g DQO/I 4 PERIODO DE “ PERIODO DE EXPOSICION RECUPERACION FIGURA 28 determinacién de La concentracién de la D@0 del extracto de cor teza de.pino, que produce el 50% de inhibicién. Este experimen to se describe con detatle en la leyenda de la Figura 25+ Inhi bicidén = 100% de actividad det control. c-48PRIMERA ALIMENTACION TEMPO FIGURA 29 Modelos bdsicos de toxicidad. (La curva hipotética de produc cién acumulada de metano se describié en la Tabla 16). c-493.3.7 3.3.8 produccién de metano por algun tiempo después del periodo de acti vidad, pra ver si la actividad del "tratamiento" mejora después del periodo de actividad. Si se observa un mejoramiento, el lodo se esté "adaptando” al téxico. Célculo de le Inhibicién.- Para calcular la inhibicién, se deben determinar las actividades metanogénicas (ACT) del control (C ) y de los tratamientos( T\),de acuerdo a los célculos resefiados para le prueba de actividad (numeral £,331). El porcentaje de actividad “(% ACT) comparado con el sustrato~control’ se calcula como sigue : % ACT = (ACTy/ACT,) * 100 El porcentaje de inhibicién (Z INHIB) es : % INHIB = 100-% ACT El 50% de’la concentrecién de inhibicién de un compuesto inhibidor o de un agua residual se determina, trazando sobre una gréfica el % ACT vs concentracién del “tratamiento” y determinando la activi dad a le cual el 50% intercepta la linea de actividad. Esto se muestra en las Figuras 26, 27 y 28 para los ejemplos antes citados. El 50% de la concentracién de inhibicién no se puede calcular exac tamente si la mayor concentracién de inhibicién del "ensayo" es menor que el 50%. Tampoco se podré determinar exactamente, si la menor concentracién de inhibicién del ensayo es mayor que el 802. Interpretacién.- La figura 29, muestra una curva hipotética de produccién de metano, 1a cual ilustra el patrén de toxicidad basico durante la prueba,. Le Table 16 auestra 1a explicacién del modelo bésico de toxicidad. Una toxina metabélica, interfiere con un pro ceso metabélico pero no produce ningin dao a 1a bacteria. Tan pronto como la toxina sea-retirada de la bacteria, la actividad se c-50ug,oeqdepe on, yeuopoeyqod eos 69101514 8217 9qe70W = NoTOWidvay 3a S¥WuOd eproquaqoeg eor6p] 04S 14 eat ipqeaeH 4 avarTXo1 3¢ s¥W¥Od O2LK93 ON ‘oyeu3sns ap yo4;U09 + SO9TXOL ON SO73¢0W menn== 62 €4NB}J &) UB O}apoH -—-------——-. VQVANTLNOD NOTIISOdx3. Noravuadnoay visandxa NOD NOTOVINSWITW "ez NOTOVLNAWIW "ez NOTDVLNAWIW “ey QVQTIIXOL 30 OdTL (62 WUNDTA VI_3d SYANNI WBA) QVAIDTXOL 3d OAVSNA 13d NOTIVLBYGURINI 91 VIBVL c-51recupera. Es evidente 1a inhibicién en 1a alimentacién de expo sicién, pero le actividad residual de 1a alimentacién de recupera cién no se inhibe. La sal de sodio (Na) es un ejemplo de una to xina metabélica. (Figura 23). Una toxina fisiolégica es la causante que el sistema fisiolégico de la célvla (menbranas, enzinas intraceluleres) empiecen a dafiar se. Sin embargo la bacteria no mere directamente. La inhibicién es evidente en 1a "alimentacién de exposicién”, ast como para la actividad residual de 1a “alimentacién de recuperacién. Ser& obvia una recuperacién de le actividad si se permite que la alimentacién de recuperacién continue después del periodo de activided. EL tiem po para esta recuperacién se relaciona con el tiempo necesario para que las bacterias vivientes reconstruyan el sistema metabélico dafia do. Un ejemplo de toxicidad fisiolégica se muestra en le figura 24 para bajas concenttaciones de resinas de pino. Nétese que la pen diente de la curva de produccién de metano, pare 0.07 y 0.14 g de resina/L aumenta después del periodo de actividad de 1a alimenta cién de recuperacién. Una toxicidad bactericida, produce la muerte de la bacteria. Pro bablemente no se recuperaré de 1a inhibicién, durante la alimenta cién de recuperacién excepto a muy baja tasa relacionada con el nuevo crecimiento. La alta concentracién de resina de pino en la Figura 24 es un ejemplo de una toxicidad bactericida. Notese que 7 para (0.28 y 0.70 g de resina/L) no aumentan después del perfodo de actividad de 1a alimentacién de recuperacién. Ja pendiente de estos "ensayo: La Tabla 16 asi mismo muestra las interpretaciones del modelo de adaptacién. Una adaptacién metabdlica ocurre si desde antes 1a bacteria tiene un metabolismo para degradar (o detoxificar) el in hibidor. La inhibicién se evidencia timicamente durante unos pocos c-52dias, hasta que el inhibidor se modifica o degrada y 1a inhibicién entonces desaparece. Una adaptacién fisiolégica es la habilidad de las bacterias exis tentes para producir un nuevo sistema metabélico, el cual pueda degradar el inhibidor o el cual pueda funcionar en presencia del inhibidor. La inhibicién desapareceré, La Tabla 16 asi mismo muestra las interpretaciones del modelo de adaptacién, Una adaptacién metabélica ocurre si desde antes le bacteria.tiene un metabolismo para degradar (o detoxificar) el in hibidor. La inhibicién se evidencia dnicamente durante unos pocos dias, hasta que el inhibidor se modifica o degrada y Ja inhibicién entonces desaparece. Una adaptacién fisiolégica es 1a habilidad de las bacterias exis tentes para producir un nuevo sistema metabélico, él cual pueda degradar el inhibidor o el cual pueda funcionar en presencia del inhibidor. La inhibicién desapareceré subitamente después’ del periodo de tiempo usado para producir las nuevas posibilidades me tabélicas. Una adaptaciéa de los microorgenismos ocurre cuando la poblacién bacterial cambia su composicién como resultado de la inhibicién. La adaptecién por un cambio en la poblacién bacterial generalmen te ocurre en un largo perfodo de tiempo. El tiempo se relaciona con el crecimiento de las nuevas bacterias que puedan degradar el inhibidor o puedan funcionar en presencia del inhibidor. c-534 PERFIL DE LODOS 41 42 43 OBJETIVO La cantidad de lodo en el reactor se puede determinar por un perfil de lodos, Si se conoce la actividad metanogénica del lodo y 1a can tidad del lodo presente, se puede predecir la maxima carge organica. Debe comprenderse que el contenido y le-actividad’ del lodo estén sujetos a muchos cambios durante la operacién del reactor. Después de alcanzar condiciones de estabilidad, la actividad del lodo deberé permanecer constante pero el contenido del lodo aumentaré regularmen te. EQUIPOS Para la determinacién del contenido de lodo en un reactor, es itil tener unos cuantos sitios de muestreo a diferentes alturas en el reac tor. Para la determinacién de los sélidos suspendidos volatiles, S.S.V. se debe tener una centrifuga (5000 rpm), una estufe para secado y una Pequefia mfla (para 600°C). ‘MUESTREO El punto mas critico en la determinacién de 1a cantidad de lodo en un reactor es el muestreo. Cuando se abre 1a valvula de muestreo se debe descartar el primer volumen que sale de los conductos antes de colectar c-54Je muestra, La muestra se debe pesar en lugar de medir directanen te un volumen de ella (se asume 1 gr/al). 4.4 PROCEDIMIENTO Medida del contenido de $.S.V. del lodo : 4.4.1 Se mide la muestra y se registra el peso. 4.4.2 Se centrifuga la muestra, se descarte el’ sobrenadante 'y se registra el peso del Lodo himedo. .” 4.4.3 Se vierte el lodo hfmedo en un crisol de procelana (todo el lodo de 4.4.2) y se somete a sequedad por un dia, en un horno a 105°C, Se regis tra el peso del lodo después de secado. 4.4.4 Se coloca el crigol sobre un mechero de gas y se quema hasta carbo nizar la mayor parte de materia orgénica (se debe usar campana de extraccién). 4.4.5 Se coloca el crisol en 1a mufla (Previomente calentada a 600°C), por 20 minutos o mas. Se enfria en un desecador y se registra el peso de las cenizas. 4.5 CALCULO DE LOS S.S.V. DE LAS MUESTRAS Los S.S.V (g/L) del liquide muestreado del reactor se calculan como sigue : [ peso lodo seco (105%C) - peso lodo incinerado (600°C)/peso nuestra]x10> c-5546 CANTIDAD CALCULADA DE S.S.V. EN EL REACTOR La concentracién de S.S.V. debe ser trazada sobre una gréfica de conc. S8.8.V. contra altura del sitio de muestreo (perfil de lodos), como se muestra para un ejemplo hipotético en la Figura 30. La altura de los sitios de muestreo del reactor, se pueden convertir a volumen del reac tor. El drea bajo la curva, representa el contenido total de lodos en el reactor. El contenido total de lodos del reactor dividido por el volumen total del reactor es 1a concentracién promedio de S.S.V. en el reactor. -56CONCENTRACION DE LODO (gssv o ss/L) a ALTURA 0 VOLUMEN del REACTOR FIGURA 30 Un ejemplo tipico de perfil de un Lodo. La cantidad del lode ce curva del perfil. En la of@ rresponde al drea sombreada bajo la fica al Lado izquierdo, las muestras se representan por barras y los puntes-datos: se unen con Lineas. En La gréficay al lado de the Ge muestra una curva redondeada conectando Los datos en le tual se calcula aproximadanente 2% més Lodo que et calculado @ le izquierda. c-57