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Orgnica

Gua de Prcticas de Biologa General

PRACTICA N 6
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE MOHOS CAUSANTES DE
ENFERMEDADES POSTCOSECHA
La mayora de los hongos viven libres en el suelo o en el agua y obtienen
su energa por respiracin o fermentacin de materiales orgnicos solubles
presentes en estos ambientes.
El aire no es un medio en el que pueden desarrollarse los microorganismos
pero es el portador de aerosoles biolgicos como polvo, gotitas de agua y
otros, que pueden estar cargados de los diversos grupos de
microorganismos.
De las capas de aire se han encontrado eesporas de hongos que proceden
principalmente del suelo, de la vegetacin y del mar. Algunos de los
gneros ms comnmente aislados del aire son Penicillium, Aspergillus,
Rhizopus, Mucor y Cladosporium entre otros.
Todos los hongos se reproducen por esporulacin. Cuando la espora se
encuentra en un medio nutritivo adecuado, se hincha y germina emitiendo
uno o ms tubos germinativos que se alargan distalmente hasta constituir
filamentos delgados y largos que se denominan HIFAS, las cuales pueden
ramificarse despus. En algunas especies se forman septas a lo largo de la
hifa, quedando entonces dividida en pequeos compartimentos como una
caa de bamb llamndose entonces HIFA SEPTADA, otras veces no hay
septacin y el protoplasma fluye continuamente a lo largo de la hifa,
describindose entonces como HIFA NO SEPTADA CENOCITICA. En la
mayora de los hongos las hifas son septadas. A medida que las hifas se
siguen dividiendo se forma un crecimiento algodonoso o filamentoso de
hifas entrelazadas llamado MICELIO. El conjunto de micelio se conoce
como TALO. En algunas formas superiores las hifas se unen formando
cuerpos fructferos grandes y de estructura compleja como es el caso de
las setas. La parte del micelio que penetra en el substrato y absorbe
substancias nutritivas se llama MICELIO VEGETATIVO, la parte que se
proyecta sobre la superficie del substrato origina el MICELIO AEREO, que
a su vez da origen a esporas asexuales llamadas CONIDIAS, cuya misin
es la de dispersar el hongo a nuevos hbitats.
Algunos hongos tambin producen esporas sexuales formadas como
resultado de la reproduccin sexual. Las que estn encerradas en una
especie de saco (Asca) se llaman ASCOSPORAS y las que se forman en el
extremo de un basidio se denominan BASIDIOSPORAS. Las propiedades
de las esporas sexuales son un criterio importante en la clasificacin e
identificacin de los hongos.

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Aunque los hongos constituyen un grupo grande y diverso, prcticamente

hay tres grupos importantes: Los mohos, las levaduras y las setas. Los
mohos son hongos filamentosos que estn ampliamente distribuidos en la
naturaleza y son habituales en pan viejo, queso, frutas o cualquier tipo de
alimento. Presentan una gran variedad de formas y tamaos. Las
levaduras son hongos unicelulares y la mayora son Ascomicetos.
Normalmente tienen forma oval o cilndrica y su principal forma de
reproduccin es la gemacin, se desarrollan bien en hbitats con
abundante azcar tales como frutas, flores, e incluso la corteza de los
rboles. Las levaduras tienen gran importancia biotecnolgica en la
industria cervecera y de la panificacin y en la produccin de protena de
origen unicelular (Biomasa). El principal agente de la fermentacin
alcohlica es Sacharomyces cerevisiae. Las setas son hongos filamentosos
pertenecientes a los Basidiomycetes que forman cuerpos fructferos
denominados setas y que producen basidiosporas como esporas
sexuales. Una actividad ecolgica muy importante de los Basidiomycetes,
es la descomposicin de la madera, papel, ropa y otros derivados de
productos naturales. Estos Basidiomycetes, por tanto, son capaces de
producir Celulasas con actividades degradantes de lignina que utilizarn
como fuente de carbono y energa. Debido a que muchas setas como
Pleurotus ostreatus, son comestibles, su produccin en gran escala es una
actividad econmicamente importante, aunque las hay tambin
venenosas como Amanita virosa y Amanita phalloides.
Cada hongo tiene ciertas caractersticas macro (morfologa colonial,
pigmentacin) y microscpicas (tipos de hifas, de conidias, etc.) que
permiten clasificarlo.
Caracterstica macro y microscpicas de los principales gneros
de hongos ambientales
1. Aspergillus
Caractersticas Macroscpicas: El color es la principal caracterstica macroscpica para la
identificacin de los grupos de aspergilos. Poseen distintos tonos de verde, pardo, amarillo,
blanco, gris y negro.
Caractersticas Microscpicas: Presenta un conidiforo erecto septado en cuya parte apical se
encuentran las cabezuelas conidiales que presentan bajo el microscopio cuatro formas bsicas:
globosa, radiada, columnar o claviforme. Los conidios constituyen cadenas alrededor de la
Cabezuela hemisfrica
cabezuela y que se originan a partir de las filides.
Cabezuela globosa

Cadena de conidias

Filides
Hifa septada

Cabezuela
claviforme
2

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Fig. 1. Gnero Aspergillus

2. Penicillium
Caractersticas Macroscpicas: Las colonias del gnero Penicillium son
circulares si no hay impedimento alguno para su crecimiento. ste es
generalmente blanco, pero en algunas especies es amarillo, anaranjado,
prpura o pardo claro. La superficie de la colonia madura, o sea con sus
conidios formados, puede ser: aterciopelada, ligeramente algodonosa o
con pequeos haces (fascculos) de conidiforos.
Caractersticas Microscpicas: Este gnero se caracteriza por formar
conidias en una estructura ramificada semejante a un pincel. Los
filamentos o hifas alcanzan un dimetro entre dos o tres micrmetros y
tienen septos. Presenta conidiforo erecto en cuya parte aplica se
encuentras las filides distribuidas en varias ramificaciones. Los conidios
son esfricos o elipsoidales, unicelulares, hialinos que en masa se ven de
color verde, verde azulado, verde aceituna o gris. La pared de los conidios
es lisa o rugosa segn las especies.

Filides muy ramificadas o sin ramificacin

Cadena de conidias

Conidiforo

Fig. 2. Gnero Penicillium

3. Rhizopus
Caractersticas macroscpicas: Colonias algodonosas laxas, que cubre
completamente la caja de Petri y logra empujar la tapa hacia arriba. Inicia

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de color blanco y se torna gris con puntos negros que corresponden a los
esporangios.
Caractersticas microscpicas: Hifas gruesas y aseptadas, abundantes
rizoides prominentes de color caf, de los que salen esporangiforos
largos, no ramificados, de color caf, cada uno con un esporangio caf con
esporangiosporas espiculadas. Dependiendo de la especie puede poseer
estolones o puentes de comunicacin entre los rizoides.
Esporangio

Esporangiosporas

Esporangiforo

Estoln

4. Mucor

Rizoides

Fig. 3. Gnero Rhizopus

Caractersticas macroscpicas: Colonias algodonosas laxas, que cubre
completamente la caja de Petri y logra empujar la tapa hacia arriba.
Presenta colonias Amarillo marrn plido.
Caractersticas microscpicas: Presenta esporangiforos largos sin
ramificar o cortos ramificados que en ocasiones se curvan hacia abajo. Los
esporangios son de color marrn plido. Las esporangiosporas son de de
forma elipsoidales y de pared lisa. Se distingue de Rhizopus por la
ausencia de rizoides.

Esporangio

Esporangiospo
ras
Estoln

Esporangifor
o

Fig. 4. Gnero Mucor

Objetivo:
- Aislar e identificar los principales hongos ambientales causantes del
deterioro de los alimentos de acuerdo a sus caractersticas macro y
microscpicas.

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Materiales y sustancias
- Placas Petri conteniendo medio de cultivo Agar Papa Dextrosa (APD).
- Asa de Kohle
- Alambre de nicrn en punta
- Lminas portaobjetos
- Papel lente
- Alcohol 70
- Agua destilada estril.
- Colorante Azul algodn de Lacto-fenol
- Cinta scotch
- Mechero Bunsen
- Encendedor
- Microscopio
- Plumn marcador
- Diversos tipos de alimentos con visible desarrollo fngico en la
superficie: frutos, cereales, granos, hortalizas, pan, etc.
Procedimiento
I. Observacin
directa
de
las
estructuras
vegetativas
y
reproductivas asexuales de los hongos
1. A partir de las muestras de alimentos con desarrollo fngico sobre su
superficie colocar la parte adherente de un trozo de cinta scotch y
presionar con cuidado para favorecer la adhesin de las estructuras.
2. Colocar una gota del colorante azul de algodn de lacto-fenol sobre una
lmina portaobjeto.
3. Colocar sobre la gota del colorante el trozo de cinta scotch adhiriendo
con cuidado las estructuras fngicas previamente tomadas del alimento
deteriorado.
4. Examinar al microscopio con objetivo de menor aumento para buscar
estructuras reproductivas representativas y posteriormente cambiar a
un objetivo de mayor aumento para observar con mejor detalle las
caractersticas de las estructuras seleccionadas procurando que stas
presenten la arquitectura completa del hongo para facilitar su
identificacin.
5. Reconocer la morfologa que conforman parte del talo vegetativo: tipo
de hifa septada o cenoctica, estoln, rizoide, etc. y, del talo
reproductivo
asexuales:
esporangiforo,
conidiforo,
filides,
esporangio, esporas, vescula o cabezuela, etc.
6. Realizar la Identificacin preliminar del gnero del hongo
7. Dibujar las observaciones realizadas
II. Aislamiento en medio de cultivo de hongos a partir de los
alimentos deteriorados

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1. Seleccionar en el alimento deteriorado una zona con el desarrollo de un

solo tipo de hongo: pigmentacin, tipo de crecimiento del micelio
(algodonoso, velloso, pulverulento, etc.), etc.
2. Coger un pequeo trozo del micelio seleccionado con la ayuda del asa
de kohle y depositarlo en el centro de una placa Petri conteniendo APD.
Realizar este proceso a la altura del mechero bajo condiciones estrictas
de esterilidad.
3. Rotular la placa Petri indicando el tipo de alimento utilizado.
4. Incubar por 7 das a temperatura ambiente.
5. Observar la presencia de colonias filamentosas de diversos tipos y
colores por muestra de alimento utilizado.
6. Anotar las caractersticas de las colonias: Forma, aspecto del micelio
(algodonoso, velloso, pulverulento u otro), pigmentacin, elevacin,
consistencia, etc.
7. Realizar la relacin con las estructuras reproductivas asexuales
observadas al microscopio para la identificacin del gnero del hongo
observado.
8. Dibujar las observaciones realizadas.
9. Indicar el gnero del hongo observado.

Recomendaciones
Antes y despus del trabajo en el microscopio limpie los lentes de los
objetivos y oculares utilizando papel lente y alcohol de 70.
Cuestionario
1. Explicar cul es el mecanismo de accin de los gneros Aspergillus,
Penicillium y Rhizopus para causar el deterioro de los alimentos y
mencionar ejemplos de alimentos que son comnmente atacados por
estos hongos.
2. Dibujar las estructuras vegetativas y reproductivas asexuales y/o
sexuales de 3 hongos de diferente gnero de importancia agroindustrial,
diferentes a lo visto en la prctica.
3. Describir otra tcnica de aislamiento de hongos.
4. Mencionar la importancia de los hongos en Microbiologa Agroindustrial.
5. A qu se denomina micosis? Mencione dos de las ms importantes y
haga hincapi en la prevencin y el tratamiento.