SALUD Getepris [p> Comision de Control Analtco y Amplacén de Cobertura Cae ceccen Gules para la aprobacn de méodos alternatives. Hoja t de 19 VIGENTE APARTIRDE FECHADEPROXMAREVISION | Suattye 20130715 20160715 DOCUMENTO NUEVO 4. OBJETIVO Deseribir los criterios para la aprobacion del uso de Métodos Alternativos Microbiologicos. 2. ALACANCE £ . En este documento se establece el principio general y criterios tecnicos paré{ llevar a\cabo el estudio de comparacion entre los métodos altemativos con respectaa los miétodos de referencia, en el campo del analisis microbiolégico de alimentos en alcagce He: wi" ‘© _Ladeterminacién rapida de microorganismos patégenos en rea ten + Siel método alterativo se utiiza de rutna en el laboratoio,Yuelonado como un barrdo, aportando resultados cualitativos ylo cuanttativos pre Este documento contiene los requerimientos ee ran cumpli los métodos 820) alternatives a ser aplicados por los laboratorios de la aceptacién e incorporacién rutinaria de métodos alternativos ae 3. DEFINICIONES < ) Para fines de este documento se 3.1. Exactitud: al grado de concondancia ehtre los resultados de ensayo y el valor de referencia aceptado x 412, Seago: al derenciareates ores esperads de ensayo l valor de referencia aceptado 3.3. Limite de DetecBi¢h Relative. al minimo nimero de microorganismos que puede ser detectado en Un os métodos alternativos y de referencia. 34. Unaakg § la.Capacidad del método para dar un esuitado que esté en proporcién ala cantifad de"analito presente en la muestra, esto significa que un incremento en el analito, cr nd? a un incremento proporcionalo lineal en resultado, Una parte dela validacion t ia verficacién de la calibracién que da una curva de calibracin final ajustando la n entre las mediciones modificadas y los valores de referencia correspondlentes, con Jae sistema, Con las mismas escalas en los eles, esta curva debe ser lineal, teniendo tuna intercepcién nula (mismos valores bajos) y una pendiente de 1 (mismas unidades en los ejes) y con caracteristcas bien estimadas de propagacion. La extrapolacién por arriba y Coated ERI T Elaboro: Revisd: Autores: ‘Nombre ‘Quimico Analista ‘Supervisor sis YResarrollo de cap LlayAgio Ramirez | BP Eloy Torres infante ices ) \ : { Ferrets | AIS, 2018015 | 2013, WsSALUD : Cave! Comision de ContolAnaitico y Ampliacién de Cobertura SEvaCieRTan Gulas par la aprobacion de métodos alemativos Hoja 2 de 19 VIGENTE APARTIRDE FECHADEPROXINAREVISION | Sustluyea 2013-07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO por debajo de las concentraciones probadas, no se deben realizar, excepto sies necesario examinar el comportamiento cercano a la concentracion cero, 3,5. Niveles criticos (LC): a la minima cantidad que se puede detectar (0 nula) aunque no se ‘cuantifica como un valor exacto, Por debajo de este valor, no se puede estar seguro de que el verdadero valor no es nulo. 3.6. Limite de deteccién (LOD): a la probablidad que tiene que ser mas del ve Roun ‘contar con 95% de deteccién, 3.7. Limite de cuantificacion (LOQ). A la cantidad més pequefias de ara x Xs hiimero mas bajo real de microorganismos), que puede ser medido y cui ts precision y exactud defniéndose en las condiciones expermentales poy! élodb en proceso de validacion bajo las condiciones experimentales, 3.8. Especificidad: es el grado para que un método (fo no) por os otros componentes presentes en una muestra compuest de wiicomponentes. Es decir la habilidad de un método para medir exactamente if do, 0 estas cantidades, en ta muestra sin inteferencias de componentes po blangos, ales como un efecto de fa matriz 0 ruido de fondo. Los crterios no son apli ra in Sone viable total i para detectar un analito de interés en 3.9. Inclusividad: es la habilidad de un tun rango de cepas, 3.10. Exclusividad: es la fata de ae cae una serie de cepas no blanco del método alternativo, 4, DOCUMENTOS APLIC: me 441, 180-16140, Inter andard "Microbiology of food and animal feeding stuffs ~ Protocol for the NS live methods” 5. RESPO} 5A. YI coresponde a una guia para que los equipos altemativos jos cumplan 0 no con los requerimientos minimos que deben de ser derados en la adquisicion de estos. Tesponsabilidad del fabricante emitir la documentacion que avale los lineamientos blecidos en la presente guia, 5.3. Sera responsabilidad del fabricante presentar documentacién actualizada que tenga en cuenta cualquier modificacién hecha al producto, que pueda afectar las instrucciones para e/ uso del metodo y/o la realizacion de este. 5.4. Métodos de analisis. Es responsabilidad del laboratorio revisar ylo verificar el método de analisis, que cumpla las caracteristicas requeridas; si esto no se posible el proveedor DEBE “ow ‘SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SI HA SIDO MODIFICADASALUD Gefepris [> Cave: Comision de Cont Analiio yAmplaco de Cobetura CCAYAC-CR-0200 Guias para la aprobacion de métodos alternatives Hoja 3 de 19 VIGENTE A PARTIR DE! FECHADE PROXIMAREVISION | Sustiuye a 2013-07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO tendra la responsabilidad de emitir protocolos de analisis conforme a su certificado de vvalidacién; basado en su sistema de calidad nacional y/o intemacional. 5.5, Para los laboratorios que solicten autorizacién en el uso de métodos atemativos posterior ala fecha de publicacion, deberan cumplir con éstos criterios desde el inicio. 5,6, Estos criterios se aplicaran en todos los procesos de evaluacién que se realicen a los 180 dias naturales, a partir de la fecha de publicacion del documento en la paging.web de la COFEPRIS. < 5.7. LACCAYAC, manifiesta su apertura para recibir comentarios a la presenti, cuales deben ingresarse como sugerencias en la secretaria técnica de la mis Goris ‘ 6. CRITERIOS DE LA ACTIVIDAD ce \Y Cy 6.41, Justificacion Recientemente se ha detectado la necesidad de los laboratori6g crane la calidad mmicrobiologica de los alimentos para dar respuesta répida’arta Jas emergencias sanitaias, asi ‘como también el estado microbioldgico de las mateyias biimas)y productos terminados para evaluar el procedimientos de fabricacién, ha levado\al desarolo y perfeccionamiento de los ‘métodos microbiol6gicos alterativos de analsisplos e caracterizan por ser répidos yo mas fécil de realizar que el método de refer rrespondiente, la caracteistica es que la ‘mayoria de estos son automatizados. a Entre estos métodos alternatives, pidden dar resultados que son equivalentes a las th previstas por el método de ns ‘que otros pueden dar lugar a resultados que difieren notablemente es poc*ella qUb*Se hace necesario llevar a cabo un estudio de ‘comparaci6n entre el méto ia con respecto al método alternativo. 6.2, METODOS CU, 6.24. Prot or fe validacion comprende principalmente de la comparacién de un creca itémativo contra el método de referencia, levado a cabo en el laboratorio (de sito Las reglas técricas para el desarrolo del estudio de método de 4 ~Yeawerecon ‘estan dadas por la naturaleza cualitativa y/o cuantitativa del mismo. =\6.2.2,.Categorias de Alimentos Q y Es de alta prioridad utilizar muestras naturalmente contaminadas con el analito para \/ [a validacion de métodos altemativos. Tomando en cuenta que el rango de distribucion de la contaminacién de la muestra debe ser representativa de los niveles usualmente encontrados en el producto. idio DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SIHA SIOOMODIFICADA > &SALUD ‘Comisién de Control Analtico y Ampiacibn de Cobertura eo NeEODN Guias para la aprobacion de mélodos altemativas Hoja 4 de 19 VIGENTE A PARTIR DE FECHADE PROXMAREVISION | Susttuye a 2013.07.15 2016-07-15, DOCUMENTO NUEVO Es deseable que el muestreo cumpla tanto como sea posible con una buena distribucién, con el propésito de reducir el error analitico y ampliar el rango de validacion en productos locales. Si no se contara con la cantidad suficiente, es aceplable trabajar con muestras arifcialmente contaminadas; siempre y cuando estas presenten un nivel de contaminacion similar alas naturalmente contaminades. El procedimiento de fa contaminacin artificial de las muestras de othe ser escrito en el reporte de estudio. \ ‘Si el método alternativo busca validar todas las matrices limentos, puede agrupar en 5 categorias; sin embargo; pueden reducirg"a 1N2, 3)o 4 categoias a solcitud del cliente, Es apropiado que las muestras wees ‘sean incluidas en otras categoria. Ver Anexo |. Clasiicacién de los tos de mue: tualos de validacion 6.2.3, Ntimero de muestras. Qo Por cada categoria de alimento, el total de andlisis debera ser 60 porciones, de las cuales se podra selecc ategorias representativas analizando 20 porciones de cada una, tanto pdr.el Inétodo alternative como el de referencia; por ejemplo: x) crag delaPesca | Total: 60 pruebas ido 20 pruebas Jongelados 20 pruebas Deshidratados Fermentados 20 pruebas. fas naturalmente contaminadas seguir el diagrama 1 u 2 segin = rmuestras arfciclmente contaminadas se debera alustar el inoculo de tal ‘manera que se loge una recuperecén de al menos un 50% de postvos y un 50% cde negativos por alguna de fos dos métodos. Sin embargo este porventaje es una Nz recomendacién; no siendo un porcentaje absoluto, a condicién de que alga nimero de las porciones probadas sean positvos y alguns sean negatvos. 6.2.4. Proparacién de la muestra ‘DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SI HA SIDO aeSALUD Getepris > Comision de Control Analitco y Ampliacion de Cobertura [ESieam (Gules para a aprobecin de métodos altematvos | Hoja 5 ge 19 VIGENTE APARTIRDE: FECHADEPROXIWA REVISION | Susie & 201807-15 201607-15 DOCUMENTO NUEVO 6.2.4.1. El andlsis para el método de referencia y alternativo se llevara a cabo cexactamente de la misma muestra, dividiendo porciones, que dependeré de {as condiciones de metodologia descrita a continuacién: 6.2.4.2, Sila primera etapa de pre-enriquecimiento de los dos métodos es la misma ‘seguir como en el diagrama 1 Diagrama 1. Cuando todas las condiciones de la primera etapa de cultivo,de\Wmbos métodos son idéntic Homogenizacién oy w ni ferencia Método alternativo Sequnda etapa, ete, v Continuar cada anélisis de acuerdo a este protocolo, 6.2.4.3. Si la sitacién anterior no es el caso, es decir, que el medio de pre- ‘enriquecimiento, metodologia o las diluciones son diferentes; se debera DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR S1HA SIDO MODIFICADA neGofepris[s> = a 5 Clave: Comision de Control Analtico y Ampliacion de Cobertura eaten ‘Guias para la aprobacién de métodos atemativos Hoja 6 de 19 VIGENTE A PARTIR DE: FECHADEPROXIMAREVISION | Susttuye a 2013-07-45 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO prepara porciones de la muestra en paralelo para lo cual se describen las siguientes metodologias: 6.2.4.4, Mezclar un peso doble de la muestra con un mismo volumen de agua ester U otro diluyente sustituible y homogenizar adecuadamente. Dividir en dos porciones teniendo cuidado, en aumentar la concentracién del tenriquecimiento primario (en un 10%) esto para compensar,¢! Siete. de la dilucién, homogenizando la muestra. AS 6.2.45.La segunda opcién es inocular drectamente el alimento, conun’inoculo inicial suiciente para permit a recuperacion fra fen la porcién de ensayo y continuar el andi cién puede ser preferble implementarla en productos iq @s aceplable para ‘cualquier tipo de alimento siempre y cu fenice correctamente \ bisrana 2. cuando apne tp clo do lo oe itd on rnin ve DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SI HA SIDO wooreanSALUD Gefepris[s>> Conlin eGo acs yanpectnce coare [Sc cmaan ‘Guias para la aprobacion de métodos altemativos Hoja 7 de 19 VIGENTE A PARTIR DE: FECHA DE PROXIMA REVISION | Sustituye a: 2013-07-15 2016-07-15, DOCUMENTO NUEVO. Para productos liquidos Para productos no lqudos 50 mide la muesta de almento (= aaceeeee 50 mide agua u oto auyenta susttibe a \ by ‘Completamente homogenizada - lamezcla, Ss) { ic DIVISION Método de referencia, ‘Método atteratvo T {50 g del homogenizado (0 25 g X, cams para productos. liquidos) + ara productos liquidos) + medio de culvo para dar una medio de cultvo para dar una See) (OY [sem (=e 6.25. Pre icibn era contener lo siguiente: una misma categoria de aimento, lizar 5 microorganismos “objetivo®(dependiendo del alcance de la validacin) posible; ocupar un microorganism ‘objetivo’ asociado con cada tipo de alimento para cada categoria 9 ‘* _Preferiblemente ensayar 5 niveles de deteccin, o como minimo 3 niveles para Ss 4 cada microorgenismo “objetivo” por alimento, de los cuales se describen a continuaci6n: Primer nivel: Deberd ser el contol negativo ‘Segundo nivel: Deberé ser el nivel tedrioo de deteccién DDEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SIA SIDO MODIFICADA eoSALUD Ciave: Comisién de ContolAnaltico y Ampliacion de Cobertura ACen Guias para la aprobacion de métodos atlerativos Hoja 6 de 19 VIGENTE A PARTIR DE: FECHADEPROXIMAREVISION | Sustiuye a 201307-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO ‘Terver nivel: Deberd ser un nivel de deteccién por arriba del nivel teérico Cuarto y Quinto nivel: Deberan ser mayores que el nivel de deteccién anterior. ‘© Replicar cada combinacion (tipo de alimento, nivel de contaminacién) 8 veces or ambos métodos. Realizar la preparacion de la muestra como se describe en punto siguiente, 4.2.3 referencia, incluyendo la preparecién de la muestra. * Aplicando el procedimiento completo del método alternativo cye de © Reportar todas las diferencias signifcativas entre los métodl, alimehtos, cepas ylo niveles.. 6.26. Célculo e Interpretacién 6.2.6.1. Tratamiento de los datos: Tabular los datos del par de resultados, i referencia junto con el método altemativo, asi como calc arametros 2 continuacién descritos por cada categoria e ee muestras) de acuerdo a la siguiente Tabla 1. Result a del metodo de referencia y alterativo, Tabla. ee /del método de referencia y altemativo: Respuestas ferencia postive | Método de referencia negative (R) Método alternativo posi ~~ positva (PA) | -/+ Desviacién posttiva (PD) (R- RNle i) +/- Desviacién negativa (ND) | !- Concordancia negativa (NA) ‘Método alternati J (AdR#) S DEBE CONFIRMARSE SU Expresar los tres criteros dela siguiente manera: Exactitud relatva, especticidad relatva y sensibiidad relatva Exactitud relativa: AC = (PA+NAYIN x 100% Esspecficidad relativa: SP: NAIN. x 100% ‘Sensibilidad relativa: SE: PAIN.x 100% Dende: YQ Nes el nde total de muestas (NAFPA*PD+ND) VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SI HA SID0 raatSALUD CGpefepris[s> . it Cave: Comision de Control Analtico y Ampliacion de Cobertura cone GGuias para la aprobacion de métodos alterativos Hoja 9 de 19 VIGENTE A PARTIR DE: FECHADE PROXIMAREVISION | Susituye a 2013.07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO Nes el nimero total de resultados negativos con el método de referencia (NA+P0) ‘Nz 5 el niimero total de resultados positivos con el método de referencia (PA ND) Por cada porcentaje de AC, SE y SP. Calcular los intervalos de confianza. = Siel 10% SALUD Gefepris [s> Clave Comision de Control Anaitico y Amplacion de Cobertura COAYAC-OR-O20 Guias para la aprobacion de métodos atemativos Hoja 10 de 19 VIGENTE A PARTIR DE: FECHADEPROKMAREVISION | Sustiuye & = la 2013-07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO Y= PD +ND (por Ejemplo PD = 2, ND = 10, entonces Y = 12) Rovisar si los dos métodos pueden ser diferentes para el balance de sensiblidad contra especificidad: = Para Y< 6 (menos que 6 desacuerdos): prueba no disponible = Para 6S Y < 22 (por ejemplo: entre 6 y 22 desacuerdosf; \. \ La prueba no es disponible; determinar m como el més Dequefo de los dos valores de PD y ND (por ejemplo m = PD = 2, porgaa, POG NAY usa la ley binomial de acuerdo a la siguiente tabla. (> N sot) ‘Sim 3,841 } La prueba de x2 corresponde al minimo d por cada ¥ de la siguiente tabla 4 Con una a < 0,05 (Es decir para un dado Y, d, debe ser igual o superior respecto al valor v dado en la tabla 4 para concluir que los dos métodos son diferentes), Tabla 4, - d valores para Y desacuerdos (Y > 22) v DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SI HA SIDO MODIFICADA al WWSALUD Goefepris [s> Clave: ‘Comision de Control Analitico y Ampliacion de Cobertura CCAYAC-CR-0210 Guias para la aprobacion de métodos alternativos Hoja 11 de 19 VIGENTE A PARTIRDE FECHADDE PROKINA REVISION | Sustluyes 2013-07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO Disagreements Y=PD+ND [221026 [27031 | 221037 | se1044 [451051 | S205 a= [PD-NOl> of[sfleflesel[e«|s 6.2.7, Resumen de Célculos A Y Todos los calculos deberén resuirse en la siguiente tabla: S, NW Tabla 5. Resumen de céloulos Ne sum x | wee woe | pa }na} no | po |S") a0 een axa 00x PAENA) 100%PA cl ae 6.2.7.4. Interpretacién. Ena tabla se demuestra todos los resultados postvos y negatvos. Teniendo en cu ibmero de desviaciones positvas y negatives, aportara la método alternativo, para proporcionar mas 0 menos ivos con respecto a la evaluacién del método de refere el fel BStudio deberdinclur y cistinguir los resultados obtenidos con ralmente contaminadas de aquellas muestras artiiciaimente 8. 6 Cy Para cada nivel Li a3) y para cada combinacién alimento/cepa (j=1 al 5), comprar ambos métodos basandose en la siguiente tabla: XN Tabla 6. Tabla de Comparaciones: Resultados: Negativos ] | Positives (+) Total Referencia a Nea n=6 Método Alternativo 2 Nb n=6 total a+b 2n - (e+) n= 12 DEBE CONFIRARSE SU GENGIA ANTES DE HACER USO DEESTA VERSION, PORSIWASIBOMODFICADAClave: ‘Comisién de Control Analtco y Ampliacion de Cobertura CCAYAC-CR.COID Guias para fa aprobacién de métodos alternatives Hoja 12de 19 VIGENTE A PARTIR DE: FECHA DE PROXIMAREVISION | Sustituye a 2013-07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO Si el alimentolcepa parece ser comparables, la misma prueba es valida con n> 6 en un grupo de alimentos para cada nivel Li. Reportar todas las diferencias significativas entre los métodos alimentos! cepas y/o niveles. . 6.2.8.2. Interpretacion. ®, i 5 a E. Tite. do doteccén relaiva se enoventa ente dda nige® de contaminacién con 50% de deteccién respectivamente. ELimite de deteccién relativa es por lo tanto expresado como up raf Inclusividad y Exclusividad Se elige una ampiia gama de microorganismos para es) io. Cada cepa debe ser caracterizada bioquimicar ‘ogicamente y si es relevante genéticamente, de preferencia deberg"Seralslad0 el almento. A continuacion se enlistan las me) deben tener los grupos de microorganismo “objetivo" y ‘no objetiyo". Categorias de grupos “objetvo"s © Grupo indefinido para el co, ejemplo: coliformes, levaduras, bacterias acido lacticas. + Farilia por ejemplo derceee + Género, por ee imonella, Pseudomonas, Listeria etc ‘© Especie, por ei isteria_ monocytogenes, Staphylococcus aureus Escherichier mesure objetivo": Los siguientes deberan cumplir con las siguientes cat \ > ‘ipos “no objetivo" (es decir aquellos esperados para ser negativos y ser ara pruebas cruzadas) deben ser especificos de acuerdo al grupo Cy una famila: Se deben incur a dstntos géneros. xan Por ejemplo: Familia Enterobacteriaceae, Salmonella, (microorganismo XY) “objetivo E. col (microorganism ‘no objetivo") ‘© Cuando el grupo ‘objetivo’ es un género: deben incluirse otros. géneros considerados para ser similares al ‘objetivo’. Por ejemplo: Salmonella typhimurium, (microorganism “objeio") Salmonella entérica (microorganismo “no objetivo". \ 6.29.1. Microorganismos “objetivo” DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HAGER USO DE ESTA VERSION, POR SIHA SIDO| baseSALUD. Getepris [s> = Cave: Comisién de Control Analitco y Ampliacion de Cobertura Seneca Guia para la aprobacion de métodos altemativos Hoja 13 de 19 VIGENTE A PARTIR DE FECHADE PROXIMAREVISION | Susttuye a: 2013-07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO Seleccionar al menos 50 culvos puros de microorganismos tipicos para el método alternativo y el alimento a probar excepto para Salmonella Para el método de Salmonella seleccionar al menos 30 cultvos puros de microorganismos, Microorganisms “no objetivo" Seleccionar al menos 30 cultvos puros de oepas que se conozcan causen interferencia con los microorganisms objetivo yo cepas ake estén presentes de manera natural para cada alimento. 6.29. Inoculacién NO Cada andlisis debera realizarse una sola vez. Ulizande,Wo“éultivo de la ‘cepa, en la dilucién de trabajo, Sin muestra afadida, ‘+ Microorganismos ‘objetivo’. El nivel de inoculacién deberé ser de el nivel minimo de detecoién para el método alternati ra ejecutar el protocolo completo, aun utlizando medi nriquecimiento. Cusndo es detectado un falso negativo, se deberé reper la prueba con el método de referencia. . + Microorganismo ‘no o EI nivel de inoculo imilar al mayor nivel de contaminacién esperado en el alimento Baprpbar. La exclusivi r establecida si el medio de enriquecimiento es selective mplazado por un caldo no selective. Cuando el metodg, al roporciona un resultado positive 0 dudoso con un no objetivo. La prueba debera ser repetida utiizando el ipleto, E método de referencia debera ser realizado una sola 6.2.9.3. Expresi6n de Resultados WS DEBE CONFRIMARSE SU GENGIA ANTES DEWACERUSO DEESTA VERSION, PORSIHASIDOMODFICADA.SALUD Comisién de Control Analtico y Ampliacion de Cobertura oT eed probacén de métodesatemativos Hoja 14 de19 VIGENTE APARTIRDE: FECHADE PROXMAREVSION | Sustiuyea: 2013.07.45 2016-07-15, | DOCUMENTO NUEVO. Los resultados deberan ser resumidos tabla: Tabla 7. Presentacién de resultados de selectividad, co Tabi ates Reaiaia Eps Resvaaa Aea Festa 6.2.9.4. Interpretacion La interpretacion debera ser reali 2; jratoro lider 0 la CCAYAC, | cual deberd tomar en cuenta aspecios Gualilativos y cuanttativos. 6.3, METODOS CUANTITATIVOS El método de referencia cuantitativo mui do 8s la cuantiicacién de colonias en placa, fatos discreto son muy comunmente truncados; s con no mas de 300 colonias y aplicando el factor ultado final. Por esta razén y por algunos factores fe Bstos microorganismos, los datos obtenidos de las cuentas a logartmos para poder obtener de esla manera una cercana a esta, Con lo que conlleva a realizar un analisis de togramas 30 datos o mas bajo las mismas condiciones. 6.34. Categoria’ de Alimentos. ‘describe en el Anexo |. Clasiicalén dels tpas de muestra para estudlas Los alimentos se divden en & categoriss; sin embargo, pueden ser ducidas a 1, 2.0 3 categoria, 9 Las muestras deben ser naturalmente contaminadas con el analto bajo estudio. Es deseable que el muestreo cumpla con una buena distribucién tanto como sea posible con el propésito de reducir el error analitico y ampliar el rango de validacion en productos locales. x 5 DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SI HA SID0 MODIFICADA GgSALUD Cefepris [ss CComisién de Control Anaitico y Amplecién de Cobertura CR 5 cabana GGuias para la aprobacién de métodos atemativos Hoja 15 de 19 VIGENTE A PARTIR OE: FECHA DE PROXIMA REVISION | Sustituye a: 2013-07-45 2016.07.15 DOCUMENTO NUEVO Si no se tiene la cantidad sufciente, es aceptable trabajar con muestras articialmente contaminadas; siempre y cuando se trabajen de tal manera que se obtenga un nivel de contaminacin similar a las naturalmente contaminadas. El protocolo deberé de contemplar que por cada una de las 5 categorias de alimento se debera probar al menos 5 niveles de concentracién del analto y ser medidos tanto por el método alternative como el de referencia, cada mues Wears ser anaizada por duplcado, que representan globalmente de 10 a S0/mgdilfnes por imétodo y categoria de alimento, ‘ Si el resultado obtenido sugiere que la matriz no es ogre debida a variaciones en la concentracién del anaito, se examinargfm. mays Después de la evaluacién independiente por cada ‘véfegorla de alimento, ta ‘evaluacién global de la curva de calibracion a mes las categorias es un ejercicio itl para identficar cualquier sue el ajuste de aplicacion, la exactitud y la Repetiblidad propagada dente tado/el rango del anaito. } 3 Protocolo de Medicién, Curva de calbracién. Para la ifcacion de la curva de calbracién se requiere de varias muestra i yel numero de dosis o concentraciones son una funcion del rango dé to vi n para ser usado en practica, Para establecer Lge aac se requiere un minimo de 5 niveles del analito, Los ce Sivas rango de interés: un minimo (cero), un punto central, un més ees inlermedios. La eleccion de la escala tiene que ser wn > Comisin de Control Aalto y Ampliaion de Cobertura Che eph Guia para la aprobaion de méladosateratvos Hoja 16 de 19 VIGENTE A PARTIR DE FECHADE PROXIMAREVISION | Sustluye = 2013-07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO. Si el material de referencia no estuviera disponible, no sera posible estimar la exactitud del método alternative, solo se obtendra la exactiud relativa por ‘mediciones de las mismas sub-muestras con el método de referencia, 6.33. Muestras. Realizar por lo menos 6 (preferiblemente 10) determinaciones de myes 00, las cuales deben tener como caracterstica principal ser rgd sis 0 cercana a cero) para estimar la linea base o el umbral de propagacién. 6.3.3.1. Calculos / En caso general el nivel crtico y el limite de edG@vaabvcan dos tipos de errores estadisticos: 1. Detecta diferencia’ existonte: {falso positivo) y 2. B (para no detectar una diferencia (clso negativo). 1-8 es la probabilidad para detectar significatival valor mas grande que LC. 6.3.4, Deteccién y Limites de Sunnie, ) La siguiente caractristca implica fa gilded de la sofa o respuesta obtenida — ffa concentracién cero, comparada con el ie ermina el sesgo en el extremo inferior de la con el metodo alternativo par método de referencia concentracion. El ru few tal es generalmente determinado con 6 muestras blancos independ < sp 6.35, Sensibilidad Relative” Se definésconf6 la Bapacidad del método altemativo para detectar dos diferentes cant ae ito medidos por el método de referencia sin el alimento a ensayar, ne = valor promedio especifico de concentracién, o en todo el rango de Fmediciop es deci; es la minima variacién cuantficada (Icremento de la jem \condentracion del analito X) que da como respuesta una variacion significante de la ( seal medida (respuesta Y), La estimacion de la sensiblidad es con el fin de cerciorarse que los valores dados por el método alternativo no dfieran notablemente del método de referencia (menos | 30% de diferencia). 6.3.6. Inclusividad y Exclusividad, En microbiologia (excepto para el recuento total de la placa) la inclusividad y exclusividad son establecidas por los analsis de: o \\ DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SIA SID0 mereSALUD | (7); Gefeprispss- , Clave: ‘Comision de Control Analico y Ampiacion de Cobertura Convho“ezaan ‘Gulas para la aprobacién de métodos alterativos Hoja 17 de 18 VIGENTE A PARTIR DE: FECHADE PROXIMAREVISION | Susttuye a: 2013-07-15 2016-07-16 DOCUMENTO NUEVO ‘+ Porlo menos 30 cepas puras positives (analto a estudio) + Por lo menos 20 cepas puras negativas (otros anaitos) las cuales deben cuplir como caracteristica que cominmente causan interferencias con el analito “blanco”, ‘Seleccionar cepas postvas y negativas que regularmente contaminan los productos bajo andiisis. 2 Para cepas que no pertenecen a una coleccién, levar una identiicagi de les cepas de ensayo, Asi como también el origen real de una cepade ‘alimento deberd ser conocido. « La inclsividad y exclusividad del método de referencia stan estar establecidas sin ya son conacidas. ~ Cy 6.3.7. Caracteristicas Adicionales del Método Al ‘Acerca del método alternativo se debera d pertinentes que afectan el funcionamient las demas caracteristioas por ejemplo, la estabilidad, la 7.4, Anexo |. Categorias de aliment alimentaria 8 a los principales patogenos de transmisién fiabllidad, robustez etc., <, 7. PUNTOS ADICIONALES SY Teams] You] Corie at | Sacoae |S anes] Ganatea | Sainale | Basie peace | asm | m (at | awous centioure | 96 on | cous Dongen 4 £ res cs cow ies ie ‘ir c od ec y ro ei ea aaa roast tems Conga rads \ tes Saas DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SIHA SIDO sonmcion SeSALUD 5 ; Cave Comision de Control Analitico y Ampliacion de Cobertura CCATRO GROIN. Guias para la aprobacion de métodos alterativos Hoja 18 de 19 VIGENTE A PARTIR DE FECHADEPROXIVAREVISION | Sustituye a: 2013-07-15 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO. 7.2, Anexo ll Categ patogenos, pe Toe rece i Conga Ferra Cad Te Bross es ‘Cergiss ‘i Tate Proceso a Anas DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SIHA SID0 MODIFICADA oa Fea epi x Taras Pa * jentos pertenecientes a los principales microorganismos no Sacra ines —_[ Coen Ta rds cas x x x Fanatoy Proc a x x x Fara x ie \ALUD Gefepris[s> CComisién de Control Analtco y Ampliacion de Cobertura cates GCAYAC-CR.000 Guias para a aprobacin de métodosatleatvos Hoja 19 de19 VIGENTE A PARTIRDE: FECHADE PROXMAREVISION | Sustiuye a 2013-07-15, 2016-07-15 DOCUMENTO NUEVO Dies Cae Proceso Be Sec Femeriaioe Sado Conan Bap oe de aes ‘ee ‘cases Proce mis ongeos Formers Seco ‘es Choa Pasa ‘Boe coi nese Sis ‘es Tone ‘Aiea peas Mayors Pasa DEBE CONFIRMARSE SU VISENCIA ANTES DE HAGER USO DE ESTA VERSION, POR SI HA IDO MODIFICADA & Se! /SALUL Cpfepris > ‘COMISION DE CONTROL ANALITICO Y AMPLIACION DE COBERTURA ‘CONTROL DE CAMBIOS DE DOCUMENTOS DEL SISTEMA DE GESTION DE LA CALIDAD pera ‘Guia para a agrobacion de métodos atematvos NAS ‘CLAVE: CCAYAC-CR.02/0 DOCUMENTO NUEVO PAGINA |NUMERAL | CAMBIOS: PARRAFO, a ‘ CCAYAC-F-001/4 Pagina 4 de 4 DEBE CONFIRMARSE SU VIGENCIA ANTES DE HACER USO DE ESTA VERSION, POR SI HA SIDO MODIFICADA