Microb Geral PDF

Microbiologia Geral
Darlene Ana de Paula Vieira

Nayara Cludia de Assuno Queiroz Fernandes
INSTITUTO FEDERAL DE
EDUCAO, CINCIA E TECNOLOGIA
GOIS
Campus Inhumas
Inhumas - GO
2012
Presidncia da Repblica Federativa do Brasil

Ministrio da Educao
Secretaria de Educao Profissional e Tecnolgica
Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia de Gois
Este Caderno foi elaborado em parceria entre o Instituto Federal de Educao,
Cincia e Tecnologia de Gois/IFG-Inhumas e a Universidade Federal de Santa
Maria para o Sistema Escola Tcnica Aberta do Brasil Rede e-Tec Brasil.
Equipe de Elaborao Instituto Federal de
Educao, Cincia e Tecnologia de Gois/
IFG-Inhumas
Reitor
Paulo Csar Pereira/IFG-Inhumas
Diretor Geral
Cleiton Jos da Silva/IFG-Inhumas
Coordenao Institucional
Daniel Aldo Soares/IFG-Inhumas
Professor-autor
Darlene Ana de Paula Vieira/IFG-Inhumas
Nayara Cludia de A. Queiroz Fernandes/IFG-Inhumas
Equipe Tcnica
Renata Luiza da Costa/IFG-Inhumas
Rodrigo Cndido Borges/IFG-Inhumas
Shirley Carmem da Silva/IFG-Inhumas
Viviane Margarida Gomes/IFG-Inhumas
Comisso de Acompanhamento e Validao

Colgio Tcnico Industrial de Santa Maria/CTISM
Coordenador Institucional
Paulo Roberto Colusso/CTISM
Coordenao Tcnica
Iza Neuza Teixeira Bohrer/CTISM
Coordenao de Design
Erika Goellner/CTISM
Reviso Pedaggica
Andressa Rosemrie de Menezes Costa/CTISM
Francine Netto Martins Tadielo/CTISM
Marcia Migliore Freo/CTISM
Reviso Textual
Daiane Siveris/CTISM
Lourdes Maria Grotto de Moura/CTISM
Vera Maria Oliveira/CTISM
Reviso Tcnica
Josiane Pacheco Menezes/CTISM
Diego Pascoal Golle/CTISM
Ilustrao
Rafael Cavalli Viapiana/CTISM
Diagramao
Gustavo Schwendler/CTISM
Leandro Felipe Aguilar Freitas/CTISM
Mara Rodrigues/CTISM
Muren Fernandes Massia/CTISM
Ficha catalogrfica elaborada por Maria Aparecida Rodrigues de Souza

CRB 1/1497 bibliotecria do IFG Campus Inhumas
Vieira, Darlene Ana de Paula
V658m Microbiologia Geral / Darlene Ana de Paula Veira, Nayara
Cludia de Assuno Queiroz. Inhumas: IFG; Santa Maria:
Universidade Federal de Santa Maria, 2012.
100 p. : il.
Bibliografia.
INSTITUTO
FEDERAL
RIO GRANDE
DO SUL
Caderno elaborado em parceria entre o Instituto Federal de

Educao, Cincia e Tecnologia de Gois/IFG-Inhumas e a
Universidade Federal de Santa Maria para o Sistema Escola
Tcnica Aberta do Brasil e-Tec Brasil.
1. Microbiologia Geral. 2. Microrganismos. 3. Fernandes,
Nayara Cludia de Assuno Queiroz. I. Ttulo.
CDD 579
Apresentao e-Tec Brasil

Prezado estudante,
Bem-vindo ao e-Tec Brasil!
Voc faz parte de uma rede nacional pblica de ensino, a Escola Tcnica
Aberta do Brasil, instituda pelo Decreto n 6.301, de 12 de dezembro de
2007, com o objetivo de democratizar o acesso ao ensino tcnico pblico, na
modalidade a distncia. O programa resultado de uma parceria do Ministrio da Educao, por meio das Secretarias de Educao a Distncia (SEED)
e de Educao Profissional e Tecnolgica (SETEC), as universidades e escolas
tcnicas estaduais e federais.
A educao a distncia no nosso pas, de dimenses continentais e grande
diversidade regional e cultural, longe de distanciar, aproxima as pessoas ao
garantir acesso educao de qualidade e ao promover o fortalecimento
da formao de jovens moradores de regies distantes dos grandes centros
geogrfica e ou economicamente.
O e-Tec Brasil leva os cursos tcnicos a locais distantes das instituies de
ensino e para a periferia das grandes cidades, incentivando os jovens a concluir
o ensino mdio. Os cursos so ofertados pelas instituies pblicas de ensino,
e o atendimento ao estudante realizado em escolas-polo integrantes das
redes pblicas municipais e estaduais.
O Ministrio da Educao, as instituies pblicas de ensino tcnico, seus
servidores tcnicos e professores acreditam que uma educao profissional
qualificada integradora do ensino mdio e da educao tcnica, capaz
de promover o cidado com capacidades para produzir, mas tambm com
autonomia diante das diferentes dimenses da realidade: cultural, social,
familiar, esportiva, poltica e tica.
Ns acreditamos em voc!
Desejamos sucesso na sua formao profissional!
Ministrio da Educao
Janeiro de 2010
Nosso contato
etecbrasil@mec.gov.br
e-Tec Brasil
Indicao de cones
Os cones so elementos grficos utilizados para ampliar as formas de
linguagem e facilitar a organizao e a leitura hipertextual.
Ateno: indica pontos de maior relevncia no texto.
Saiba mais: oferece novas informaes que enriquecem o

assunto ou curiosidades e notcias recentes relacionadas ao
tema estudado.
Glossrio: indica a definio de um termo, palavra ou expresso
utilizada no texto.
Mdias integradas: sempre que se desejar que os estudantes
desenvolvam atividades empregando diferentes mdias: vdeos,
filmes, jornais, ambiente AVEA e outras.
Atividades de aprendizagem: apresenta atividades em diferentes
nveis de aprendizagem para que o estudante possa realiz-las e
conferir o seu domnio do tema estudado.
e-Tec Brasil
e-Tec Brasil
Tecnologia da Informtica
Sumrio
Palavra do professor-autor
Apresentao da disciplina
11
Projeto instrucional
13
Aula 1 Principais reas da microbiologia e microscopia

1.1 Apresentao
15
15
1.2 Microbiologia bsica
15
1.3 Microbiologia aplicada
16
1.4 Caractersticas dos principais grupos de microrganismos 16

1.5 Microscopia
Aula 2 A clula
2.1 Apresentao
17
23
23
2.2 A clula: unidade fundamental da vida que se ligam ao DNA. 23

2.3 Diferenas entre organismos procariontes e eucariontes
26
2.4 Citoplasma
27
2.5 Organelas citoplasmticas
27
Aula 3 Bactrias: morfologia e estruturas

3.1 Apresentao
37
37
3.2 Bactrias
37
3.3 Morfologia: tamanho, forma e arranjos bacterianos
37
3.4 Estruturas externas da clula bacteriana
41
3.5 Membrana plasmtica modelo mosaico fluido
47
3.6 Estruturas internas da clula bacteriana
48
Aula 4 Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento

4.1 Apresentao
51
51
4.2 Reproduo bacteriana
51
4.3 Nutrio das bactrias
55
4.4 Crescimento das bactrias
56
e-Tec Brasil
Aula 5 Fungos (leveduras): morfologia e estruturas

5.1 Apresentao
61
61
5.2 Fungos
61
5.3 Leveduras
62
5.4 Estruturas da clula da levedura
64
Aula 6 Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento 67

6.1 Apresentao
67
6.2 Reproduo das leveduras
67
6.3 Nutrio das leveduras
69
6.4 Crescimento das leveduras
70
Aula 7 Metabolismo e cintica dos microrganismos

7.1 Apresentao
7.2 Metabolismo
73
7.3 Microrganismos para aplicao em processos industriais
78
7.4 Cintica dos processos fermentativos
79
7.5 Mtodos para quantificao do crescimento
84
Aula 8 Provas bioqumicas e cultura de microrganismos

8.1 Apresentao
87
8.3 Prova da motilidade
90
8.4 Meios de cultivo
91
8.5 Tcnicas de semeadura
92
8.6 Mtodo do Nmero Mais Provvel (NMP)
96
Currculo do professor-autor
87
87
8.2 Provas bioqumicas
Referncias
e-Tec Brasil
73
73
99
100
Palavra do professor-autor
A disciplina de microbiologia, juntamente com a matemtica, a qumica e a
fsica, constitui um dos ramos fundamentais das cincias bsicas. O conhecimento e o estudo detalhado dos microrganismos e de suas funes permitem
estabelecer seu uso em aplicaes muito variadas, desde o campo mdico,
alimentar e ambiental, agrcola e industrial. Desse modo, a microbiologia
consolida-se como um dos pilares da biotecnologia.
Neste caderno apresentaremos a microbiologia geral, que voltada para o
estudo da morfologia, seus arranjos e reaes aos processos de colorao,
fisiologia, metabolismo, caracterizao e identificao dos microorganismos.
Ao adentrar o universo microbiolgico, voc ter condies de multiplicar seu
conhecimento, mas como em toda disciplina, no sero esgotados os assuntos
aqui iniciados, proporcionando a retomada e a complementao dos assuntos
abordados atravs de atividades e sugestes de estudo no ambiente virtual de
ensino-aprendizagem do curso. Uma fonte importante de consulta sero os
stios eletrnicos sobre microbiologia. Tambm, para que se possa aproveitar
melhor o presente material, sugerimos caro estudante, que voc faa uma
leitura cuidadosa do texto, explorando tambm as figuras que acompanham
e ilustram as explicaes.
Como em todo curso, ou em qualquer situao nova, existiro momentos
desafiadores, que nos levaro a mudanas, as quais so imprescindveis para
a nossa formao.
Bons estudos.
e-Tec Brasil
Apresentao da disciplina
No se pode ensinar tudo a algum,
pode-se apenas ajud-lo a encontrar por si mesmo.
Galileu Galilei
A microbiologia [do grego: mikros (pequeno), bios (vida) e logos (cincia)] o estudo dos organismos microscpicos e de suas atividades. Preocupa-se com a forma, a estrutura, a reproduo, a fisiologia, o metabolismo e
a identificao dos microrganismos. Assim a microbiologia envolve o estudo de
organismos procariotos (bactrias, archaeas), eucariotos inferiores (algas,
protozorios, fungos) Figura A.
A microbiologia teve incio com o polimento de lentes, feitas a partir de
peas de vidro, combinadas at produzir aumentos suficientemente grandes
que possibilitassem a visualizao dos microrganismos. Os relatos de Robert
Hooke e Antony van Leeuwenhoek possibilitaram as primeiras observaes
de bactrias e outros microrganismos. Embora no tenha sido, provavelmente, o primeiro a ver as bactrias e os protozorios, o holands Antony
van Leeuwenhoek (1632-1723) foi o primeiro a relatar suas observaes, com
descries precisas e desenhos. Embora van Leeuwenhoek seja considerado
o pai da microbiologia, os relatos de Hooke, descrevendo a estrutura de
um bolor, foram publicados anteriormente aos de Leeuwenhoek. Assim, esses
dois pesquisadores so considerados os pioneiros nessa cincia.
11
Para saber mais sobre a forma

de algumas bactrias e a histria
da microbiologia, acesse:
http://www.portalsaofrancisco.
com.br/alfa/microbiologia/
microbiologia-3.php
e-Tec Brasil
Figura A: Exemplos de microorganismos: (a) Archeae; (b) Bactria; (c ) Fungo Penicilium;

(d) Alga; (e) Protozorio Tripanossoma cruzi e (f) Vrus HIV
Fonte: (a) www.microbiologybytes.com
(b) http://www.sciencemusings.com/blog/uploaded_images/Bacteria-772833.jpg
(c ) http://faculty.clintoncc.suny.edu
(d) http://lectoracorrent.blogspot.com
(e) http://cbme.usp.br
(f) http://pathmicro.med.sc.edu/lecture/hiv9.htm
e-Tec Brasil
12
Palavra instrucional
Projeto
do professor-autor
Disciplina: Microbiologia Geral (carga horria: 60h).
Ementa: Morfologia, estrutura celular e reproduo de bactrias e leveduras.
Bioqumica das fermentaes. Velocidade de reaes fermentativas e fatores que
as influenciam. Fatores que influenciam no desenvolvimento de microorganismos. Procedimentos bsicos de anlises microbiolgicas. Unidades de medidas,
sistemas de unidades e fatores de converso para expressar os resultados das
anlises efetuadas.
AULA
OBJETIVOS DE
APRENDIZAGEM
MATERIAIS
CARGA
HORRIA
(horas)
1. Principais reas
da microbiologia e
microscopia
Reconhecer a importncia da
microbiologia nas diferentes reas
biolgicas.
Compreender as principais caractersticas
dos microrganismos.
Compreender a importncia da
microscopia no estudo da microbiologia,
reconhecendo as principais partes e os
tipos de microscpio.
Entender como as imagens so ampliadas.
Apostila didtica, composta

de introduo, objetivos e um
roteiro de estudo, composto
por textos, figuras, exemplos,
equaes, links, mdias integradas, questionamentos, reflexes,
lembretes, atividades de aprendizagem e sntese. No ambiente
virtual sero disponibilizadas
atividades complementares, bem
como fruns para discusso.
04
Compreender que as clulas so

unidades fundamentais da vida.
Diferenciar clulas procariontes de
clulas eucariontes.

05
Conhecer as bactrias: seu tamanho e

sua morfologia.
Compreender as estruturas das clulas
bacterianas.
Entender e diferenciar bactrias Gram
positivas de Gram negativas.
Identificar estruturas da membrana e do
citoplasma bacteriano.

07
2. A clula
3. Bactrias: morfologia e estrutura
13
e-Tec Brasil
MATERIAIS
CARGA
HORRIA
(horas)
Compreender os tipos de reproduo

bacteriana.
Conhecer as formas de obteno de
energia das bactrias.
Entender e diferenciar macro de
micronutrientes.
Compreender as fases da curva de
crescimento das bactrias.
Compreender os fatores que limitam o
crescimento das bactrias.

07
Conhecer os fungos: suas principais

caractersticas.
Conhecer a importncia das leveduras
nos processos industriais.
Identificar as formas e os arranjos
morfolgicos das leveduras.
Compreender as estruturas das clulas
das leveduras.

08
6. Fungos (leveduras): reproduo,

nutrio e crescimento
Compreender os tipos reprodutivos das

leveduras.
Conhecer as formas de obteno de
energia das leveduras.
Entender a nutrio das leveduras.
Compreender a curva de crescimento e
os fatores que limitam o crescimento das
leveduras.

10
7. Metabolismo
e cintica dos
microrganismos
Compreender o metabolismo e a cintica

dos microrganismos.
Diferenciar e entender anabolismo e
catabolismo.
Conhecer tipos fermentativos.
Entender o rendimento energtico na
respirao e na fermentao.
Entender os clculos do tempo de
gerao e a taxa de crescimento.

10
Conhecer princpios e procedimentos de

diversas provas (testes) bioqumicas usadas na identificao de microrganismos.
Conhecer tcnica de enumerao e
deteco de microrganismos Mtodo
do Nmero Mais Provvel (NMP).

05
AULA
4. Bactrias: reproduo, nutrio e

crescimento
5. Fungos (leveduras): morfologia e

estruturas
8. Provas bioqumicas e cultura de

microrganismos
e-Tec Brasil
14
OBJETIVOS DE
APRENDIZAGEM
Aula 1 Principais reas da

microbiologia e microscopia
Meditai se s as naes fortes podem fazer

cincia ou se a cincia que as torna fortes.
Oswaldo Cruz
Objetivos
Reconhecer a importncia da microbiologia nas diferentes reas
biolgicas.
Compreender as principais caractersticas dos microrganismos.
Compreender a importncia da microscopia no estudo da microbiologia, reconhecendo as principais partes e os tipos de microscpio.
Entender como as imagens so ampliadas.
1.1 Apresentao
As informaes aqui apresentadas auxiliaro na compreenso de algumas
reas de atuao da microbiologia, assim como na apreenso das principais
caractersticas dos microrganismos. Existem numerosos aspectos no estudo
da microbiologia, que dividido em duas reas: a microbiologia bsica e a
microbiologia aplicada.
1.2 Microbiologia bsica

A Microbiologia Bsica estuda:
A natureza e as propriedades dos microrganismos (morfolgicas, fisiolgicas, bioqumicas, etc.).
Caractersticas morfolgicas (tamanho e forma das clulas, composio
qumica, etc.).
Aula 1 - Principais reas da microbiologia e microscopia
15
e-Tec Brasil
Caractersticas fisiolgicas (nutrio e condies de crescimento e reproduo).

Atividades bioqumicas (obteno de energia pelos microrganismos).
Caractersticas genticas (hereditariedade e variabilidade das caractersticas).
Caractersticas ecolgicas (microrganismos no ambiente e sua relao
com outros organismos).
Potencial patognico dos microrganismos.
Classificao (relao taxonmica entre os grupos dos microrganismos).
1.3 Microbiologia aplicada

A microbiologia aplicada estuda o controle e o uso dos microrganismos de
maneira benfica (processos industriais, controle de pragas e de doenas,
produo de alimentos, etc.).
Para saber mais
sobre a importncia da
microbiologia, acesse:
com.br/alfa/microbiologia/
microbiologia-2.php
Na rea industrial, os microrganismos so utilizados na sntese de substncias

qumicas como cido ctrico, antibiticos mais complexos e enzimas.
Na rea ambiental, os microrganismos so usados como agentes de biodegradao e de limpeza ambiental, no controle de pragas, etc.
A microbiologia mdica trata dos microrganismos causadores de doenas e
da preveno e controle das mesmas.
A microbiologia dos alimentos est relacionada com doenas transmitidas por
alimentos, controle de qualidade e produo de alimentos (queijos, bebidas,
pes, etc.).
1.4 Caractersticas dos principais grupos

de microrganismos
Os microrganismos procariontes compreendem as bactrias, que se dividem
em eubactrias e arqueobactrias, e os microrganismos eucariontes, que
compreendem os protozorios e alguns fungos. (Quadro 1.1)
e-Tec Brasil
16
Microbiologia Geral
Quadro 1.1: Caractersticas dos principais grupos de microrganismos

Microrganismos
Caractersticas
1. Vrus
Acelulares; menores e mais simples, em estrutura que as bactrias; contm geralmente

apenas um tipo de cido nuclico (DNA ou RNA), protegido por uma capa protica;
podem multiplicar-se apenas dentro das clulas vivas. Porm, poucos vrus de DNA, como
o citomegalovrus e o vrus da hepatite B, podem iniciar a sntese de molculas de RNA
enquanto ainda esto se formando, de modo que a partcula viral contm os dois tipos de
cidos nuclicos (DNA e RNA).
2. Bactrias
So procariontes; no possuem membrana nuclear (carioteca) e estruturas membranosas intracelulares organizadas; so divididas em dois grupos: Eubactrias e Arqueobactrias.
Eubactrias
Apresentam vrias formas (esfrica, bastonete e espirilo), aparecem isoladas ou em formas de colnias; variam de 0,2 5,0 m; so unicelulares e algumas apresentam flagelos.
Arqueobactrias
So semelhantes s eubactrias, mas apresentam diferenas importantes quanto a sua

composio qumica, habitam ambientes extremos como os de altas concentraes salinas, os de acidez e os de temperatura.
3. Protozorios
So eucariontes; unicelulares, no apresentam parede celular rgida, no contm clorofila; alimentam-se por ingesto; alguns movem-se por meio de flagelos ou clios e so
amplamente distribudos na natureza.
4. Fungos
So eucariontes; com parede celular rgida; uni ou pluricelulares; desprovidos de clorofila; alimentam-se por absoro. So conhecidos como bolores, leveduras e cogumelos.
Bolores
So fungos multicelulares e produzem estruturas filamentosas (hifas e miclios).
Leveduras
So fungos unicelulares e apresentam formas variadas (esfrica a ovide; elipside a

filamentosos).
5. Algas
So eucariontes; contm clorofila (realizam fotossntese); podem ser uni ou pluricelulares; apresentam parede celular rgida; crescem em diversos ambientes, mas a maioria
aqutica.
DNA
cido desoxirribonuclico.
RNA
cido ribonuclico.
procariontes
Seres unicelulares que no
possuem carioteca.
carioteca
Membrana que separa o material
gentico do citoplasma.
eucariontes
Seres uni ou pluricelulares que
possuem carioteca.
Classificao dos seres vivos

http://vsites.unb.br/ib/cel/
microbiologia/intromicro/
intromicro.html#classificacao
Fonte: Adaptado de Amabis e Martho, 2004
1.5 Microscopia
O microscpio um instrumento indispensvel para os trabalhos laboratoriais,
tornando possvel a observao de estruturas invisveis a olho nu.
Os microscpios so classificados dependendo do princpio no qual a ampliao baseada. Eles podem ser:
pticos empregam dois sistemas de lentes, ocular e objetiva, atravs das
quais a imagem ampliada obtida. (Figura 1.1)
Eletrnicos empregam um feixe de eltrons para produzir a imagem ampliada.
O microscpio ptico utilizado para observar clulas procariotas e eucariotas,
e o eletrnico, detalhes celulares e vrus.
17
e-Tec Brasil
Figura 1.1: Partes do microscpio ptico

Fonte: CTISM
1.5.1 Partes mecnicas do microscpio

P (1) d suporte ao microscpio, garantindo a estabilidade.
Brao (3) haste vertical ou inclinvel fixada base.
Platina (4) plataforma na qual se colocam as preparaes a serem observadas. Apresenta no centro, uma abertura por onde passam os raios luminosos.
Revlver (6) suporte das objetivas, fixado extremidade inferior do tubo,
serve para facilitar a substituio de uma objetiva por outra, colocando-as por
rotao em posio de observao.
e-Tec Brasil
18
Microbiologia Geral
Canho (7) suporte cilndrico da ocular.

Parafuso macromtrico ou dos grandes deslocamentos (2) permite
movimentos de grande amplitude e rpidos, por deslocamento vertical da
platina. indispensvel para fazer as focagens.
Parafuso micromtrico ou de focagem lenta (3) permite movimentos
lentos do deslocamento da platina para focagens mais precisas.
1.5.2 Partes pticas do microscpio

Sistema de ampliao consiste na associao de dois conjuntos de lentes
(objetiva e ocular), constituindo u m sistema ptico composto. A ampliao
total resulta do produto da capacidade de ampliao da objetiva pela capacidade de ampliao da ocular. Veja a Tabela 1.1.
Tabela 1.1: Produtos da ampliao do microscpio ptico
Ampliao
Ampliao final
Objetiva
Ocular
Objetiva x ocular
4x
10x
40x
10x
10x
100x
45x
10x
450x
100x
10x
1000x
Fonte: Adaptado de http://www.mundodacana.com
Objetiva aumenta a imagem do objeto.

Objetiva de imerso a lente que fornece maior aumento, muito usada
em laboratrio de microbiologia. necessrio leo de imerso para assegurar
um trajeto do raio luminoso opticamente homogneo entre a lmina e a lente
objetiva. Depois do uso, devem-se limpar as superfcies pticas com papel
absorvente com um pouco de xilol, pois restos de leo podem danificar o
sistema ptico do microscpio.
Ocular lente que aumenta a imagem recebida da objetiva.
Sistema de iluminao consiste na associao de trs peas fundamentais:
Espelho duplo ou fonte de luz destina-se a refletir para a platina a
luz que recebe da fonte luminosa.
19
e-Tec Brasil
Diafragma regula a intensidade de luz no campo visual do microscpio.

Condensador distribui regularmente no campo visual do microscpio
a luz refletida pelo espelho ou diretamente da fonte luminosa.
Quadro 1.2: Comparativo de diferentes tipos de microscpios
Tipo de microscpio
Campo claro
Campo escuro
Fluorescncia
Ampliao
mxima til
Observao
do espcime
1.000 2.000
Microrganismos e tecidos
corados ou descorados; as
bactrias, geralmente coradas,
aparecem com a cor do
corante
Caractersticas morfolgicas
grosseiras de bactrias,
leveduras, bolores, algas e
protozorios
1.000 2.000
Microrganismos vivos sem

prvia preparao; aparecem
brilhantes ou iluminados
sobre um campo escuro
Microrganismos que exibem

algumas caractersticas morfolgicas especiais quando vivos
e em suspenso fluida; por
exemplo, as espiroquetas
1.000 2.000
Luminoso e corado; cor do

corante fluorescente
Tcnica de diagnstico em
que o corante fluorescente
fixado ao organismo revela a
sua identidade
Graus variveis de
iluminao
Exame de estruturas
celulares em microrganismos
maiores e vivos; por exemplo,
leveduras, algas, protozorios
e algumas bactrias
Observado em tela fluorescente
Exame das ultra-estruturas

das clulas Microbianas e
de vrus
Contraste de fase
1.000 2.000
Eletrnico
200.000 400.000
Aplicaes
Fonte: Pelczar et al, 1996
Tendo em vista que a base desta disciplina trabalhar com microrganismos,

importante ter uma noo da escala de tamanho e das diferentes unidades
de comprimento.
Quadro 1.3: Unidades de comprimento utilizadas
Unidade
de comprimento
Smbolo
Micrmetro
mm
milsima parte do milmetro
Nanmetro
nm
milsima parte do micrmetro
Angstrom
Equivalncia
dcima parte do nanmetro
Fonte: Raven et al, 2001
Unidades mtricas usadas em microbiologia so: micrmetro e nanmetro.
e-Tec Brasil
20
Microbiologia Geral
Resumo
Nessa aula estudamos as reas de atuao da microbiologia; os grupos de
microrganismos e suas caractersticas; e os principais tipos de microscpios.
Dentre os microrganismos daremos destaque nas prximas aulas s bactrias
e aos fungos, em especial s leveduras.
Atividades de aprendizagem
1. O que estuda a microbiologia e qual a sua importncia?
2. O que estuda a microbiologia bsica? E a microbiologia aplicada?
3. Cite dois exemplos da utilizao dos microrganismos em processos
industriais.
4. Qual a diferena entre as eubactrias e as arqueobactrias?
5. Como so classificados os fungos?
6. Como constitudo o sistema de ampliao de um microscpio?
7. Se voc estiver observando uma estrutura ao microscpio ptico em que a
ocular fornece aumento de 10 vezes e a objetiva de 25 vezes, em quanto
estar sendo aumentado o seu objeto de estudo?
8. Explique de forma simplificada, o que se consegue analisar utilizando um
microscpio de campo claro e um microscpio de contraste de fase.
21
e-Tec Brasil
Aula 2 A clula
A honestidade foi e ser sempre a arma decididamente mais forte

para todas as lutas da humanidade que vive e progride.
Enrico Fermi
Objetivos
Compreender que as clulas so unidades fundamentais da vida.
Diferenciar clulas procariontes de clulas eucariontes.
2.1 Apresentao
As informaes aqui apresentadas ajudaro voc a compreender melhor que
a clula a unidade bsica da vida, e entender as diferenas entre uma clula
procarionte e uma clula eucarionte, que de fundamental importncia para
o estudo dos microrganismos.
2.2 A clula: unidade fundamental da vida

que se ligam ao DNA
A clula a unidade estrutural e funcional dos organismos vivos, ou seja,
todos os seres vivos so formados por clulas. Os menores so constitudos
por uma nica clula, os maiores por bilhes. A percepo de que todos os
organismos so compostos por clulas foi um dos mais importantes avanos
cientficos. A palavra clula no sentido biolgico foi usada, pela primeira vez,
pelo cientista ingls Robert Hooke no sculo XVII.
As clulas surgem de outras clulas preexistentes. As formas mais simples
de vida so clulas solitrias (organismos unicelulares), enquanto as formas
superiores contm associaes de clulas, constituindo colnias de organismos
unicelulares ou constituindo organismos pluricelulares mais complexos. As
clulas podem apresentar estrutura e forma variadas.
Aula 2 - A clula
23
e-Tec Brasil
membrana plasmtica
Membrana que separa os
contedos celulares do
ambiente externo.
histonas
So protenas que se
ligam ao DNA.
Todas as clulas compartilham dois aspectos essenciais. O primeiro uma

membrana externa, a membrana plasmtica. O outro o material gentico
(informao hereditria) que regula a atividade da clula, possibilitando a sua
reproduo e a passagem das suas caractersticas para a sua descendncia.
A organizao do material gentico uma das caractersticas que separa as
clulas procariontes das clulas eucariontes. Nas clulas procariontes, o material gentico (DNA) est na forma de uma grande molcula circular, conhecida
como cromossomo. Em clulas eucariontes, o DNA linear e fortemente ligado
a protenas especiais, conhecidas como histonas, formando certo nmero de
cromossomos complexos.
As clulas dos microrganismos podem ser divididas em duas categorias: Clulas Eucariticas apresentam um ncleo separado do citoplasma por uma
membrana nuclear (carioteca); Clulas Procariticas apresentam material
nuclear sem membrana. Veja as Figuras 2.1, 2.2 e 2.3.
Figura 2.1: Clula bacteriana

Fonte: CTISM
e-Tec Brasil
24
Microbiologia Geral
Os procariontes consistem de duas linhagens distintas: Bactria (ou eubactria) e Archea. So os menores organismos e os mais simples estruturalmente.
Em termos evolutivos, eles so tambm os mais antigos organismos da Terra
(foram encontrados fsseis de cerca de 3,5 bilhes de anos).
Figura 2.2: Clula vegetal

Fonte: CTISM
Aula 2 - A clula
25
e-Tec Brasil
Figura 2.3: Clula animal

Fonte: CTISM
2.3 Diferenas entre organismos

procariontes e eucariontes
O Quadro 2.1 apresenta as principais caractersticas das clulas de procariontes

e de eucariontes.
Quadro 2.1: Diferenas entre clulas procariontes e clulas eucariontes
Caractersticas
Glicoclice
Zona rica em carboidratos na
superfcie das clulas.
e-Tec Brasil
Clulas procariontes
Clulas eucariontes
Grupos pertencentes
Bactrias e cianobactrias
Protozorios, algas, fungos, vegetais

e animais
Tamanho da clula
0,2 - 5,0 m
10 - 100 m
Ncleo
Ausente ausncia de carioteca

(membrana nuclear)
Presente presena de carioteca

(membrana nuclear)
Organelas membranosas
Ausentes
Presentes
Glicoclice ou glicoclise
Presente
Presente em clulas animais
Parede celular
Presente e complexa bioquimicamente

(parede celular bacteriana tpica
apresenta peptidoglicano)
Quando presente simples quimicamente (apenas plantas e fungos)
Ribossomos
Distribudos no citoplasma
Distribudos no retculo endoplasmtico, na mitocndria e no cloroplasto
26
Microbiologia Geral
Caractersticas
Clulas procariontes
Clulas eucariontes
DNA
Cromossomo nico, circular, sem

histona
Cromossomos mltiplos, linear, com

histona
Grupos pertencentes
Bactrias e cianobactrias
Protozorios, algas, fungos, vegetais

e animais
Diviso celular
Fisso binria
Mitose e meiose
Fonte: Junqueira & Carneiro, 2005
2.4 Citoplasma
O citoplasma o espao intracelular (dentro da clula) preenchido por uma
matriz semifluida que tem a consistncia de gel, denominada hialoplasma,
na qual est mergulhado tudo o que se encontra dentro da clula, tal
como molculas e organelas. O citoplasma constitudo principalmente de
gua (80%), mas tambm contm ons, sais minerais e molculas, tais como
protenas, carboidratos e o RNA, que correspondem aos 20% restantes.
2.5 Organelas citoplasmticas

Como vimos os organismos procariontes no possuem ncleo organizado
e geralmente so pequenos. Caracterizam-se por no possurem organelas
envoltas por membranas, tais como o retculo endoplasmtico, o complexo de
Golgi, as mitocndrias e os plastos. As clulas eucariontes so mais complexas
e so tpicas de protozorios, fungos, animais e vegetais.
Uma organela citoplasmtica pode ser definida como uma determinada parte
do citoplasma responsvel por uma ou mais funes especiais. As organelas
mais importantes esto citadas abaixo.
Ribossomos
Mitocndrias
Complexo de Golgi
Centrolo
Lisossomo
Retculo endoplasmtico liso
Aula 2 - A clula
27
e-Tec Brasil
Retculo endoplasmtico rugoso

Cloroplastos
Flagelos
2.5.1 Ribossomos
So responsveis pela sntese de protena. Eles no so limitados por membranas e, portanto, ocorrem tanto em procariontes quanto em eucariontes. Os
ribossomos de eucariontes so ligeiramente maiores que os de procariontes.
Eles so compostos por duas subunidades de tamanhos diferentes. Bioquimicamente, o ribossomo consiste em RNA ribossmico (RNAr) e umas 50 protenas
estruturais. Veja na Figura 2.4.
Figura 2.4: Estrutura de um ribossomo

Fonte: CTISM
2.5.2 Mitocndrias
So formadas por duas membranas, uma externa e outra interna. Enquanto
a membrana externa lisa, a membrana interna possui inmeras pregas,
chamadas cristas mitocondriais. A cavidade interna das mitocndrias preenchida por um fluido, denominado matriz mitocondrial, que contm grande
quantidade de enzimas dissolvidas, necessrias para a extrao de energia dos
nutrientes. Figura 2.5.
As mitocndrias so de fundamental importncia no processo de respirao
celular e no fornecimento de energia a partir da quebra da glicose.
e-Tec Brasil
28
Microbiologia Geral
Figura 2.5: Estrutura de uma mitocndria

Fonte: CTISM
2.5.3 Complexo de Golgi

So estruturas membranosas, formadas por bolsas achatadas e empilhadas
cuja funo elaborar e armazenar protenas advindas do retculo endoplasmtico. abundante em clulas secretoras. Figura 2.6.
Figura 2.6: Estrutura do complexo de Golgi

Fonte: CTISM
2.5.4 Centrolos
formado por um par de cilindros cuja parede constituda por nove conjuntos de trs microtbulos cada, e, geralmente, ocorrem aos pares nas clulas.
Os centrolos so desprovidos de membrana, sua constituio de natureza
protica. Os centrolos originam estruturas locomotoras, denominadas clios
e flagelos, que diferem entre si quanto ao comprimento e nmero por clula.
Figura 2.7.
Aula 2 - A clula
29
e-Tec Brasil
Figura 2.7: Estruturas dos centrolos

Fonte: CTISM
2.5.5 Lisossomos
So pequenas bolsas portadoras de enzimas digestivas. Elas so liberadas pelo
complexo de Golgi, com a finalidade de promover a digesto de substncias
englobadas pelas clulas. Pode tambm digerir componentes da prpria clula,
promovendo a morte celular para uma contnua renovao. Figura 2.8.
Figura 2.8: Ao dos lisossomos

Fonte: CTISM
2.5.6 Retculo endoplasmtico liso

uma rede de estruturas tubulares e vesiculares achatadas e interligadas
formada por uma membrana dupla, amplamente distribuda pela clula e em
comunicao com a membrana plasmtica ou com a carioteca. No apresenta
ribossomos aderidos membrana externa. responsvel pela sntese de todos
os lipdios que constituem a membrana plasmtica, incluindo fosfolipdios e
colesterol. Figura 2.9.
e-Tec Brasil
30
Microbiologia Geral
Figura 2.9: Representao do retculo endoplasmtico liso

Fonte: CTISM
2.5.7 Retculo endoplasmtico rugoso

De formato achatado e com ribossomos aderidos, o retculo endoplasmtico
rugoso est presente em maior nmero nas clulas especializadas na secreo
de protenas. Figura 2.10.
Figura 2.10: Representao do retculo endoplasmtico rugoso

Fonte: CTISM
2.5.8 Cloroplasto
So delimitadas por duas membranas lipoproticas uma externa lisa e outra
interna que forma dobras para o interior da organela. Esse conjunto bem
organizado de membranas formam pilhas unidas entre si, chamadas de grana.
Cada elemento da pilha, que tem o formato de moeda, o tilacide. Todo esse
conjunto de membranas encontra-se mergulhado em um fludo gelatinoso
que preenche o cloroplasto, o estroma, onde h enzimas, DNA, pequenos
ribossomos e amido. As molculas de clorofila localizam-se nas membranas
Aula 2 - A clula
31
e-Tec Brasil
dos tilacides, tal sistema , portanto, a sede das reaes fotoqumicas responsveis pela captao e transformao da energia luminosa em energia qumica.
Figura 2.11: Partes do cloroplasto

Fonte: CTISM
2.5.9 Flagelos
Os flagelos das bactrias (procariontes) so compostos por uma protena
chamada flagelina, os de eucariontes, so extenses filamentosas citoplasmtica, frequentes em protozorios, esponjas e gametas mveis. O flagelo
de eucarionte completamente diferente do flagelo bacteriano, tanto em
termos de estrutura como em origem evolucionria, mas a funo em ambos
a mesma: criar movimentos.
Figura 2.12: Diferenas entre flagelos bacterianos e flagelos animais

Fonte: CTISM
No Quadro 2.2, verifique as principais estruturas celulares, suas funes e

ocorrncias.
e-Tec Brasil
32
Microbiologia Geral
Quadro 2.2: Organelas citoplasmticas

Organela
Aula 2 - A clula
Funo
Procarionte
Eucarionte
Responsvel pela
sntese (produo)
de protenas
Presente
Presente
Responsvel pela
respirao celular
Ausente
Presente
Armazena e
secreta diversas
substncias
Ausente
Presente
Atua na diviso
celular
Ausente
Presente, exceto
em vegetais e
fungos
Digesto
intracelular
Ausente
Presente
33
e-Tec Brasil
Quadro 2.2: Organelas citoplasmticas

Organela
Funo
Procarionte
Eucarionte
Transporte de
substncias e
produo de
esterides
Ausente
Presente
Transporte de
substncias e
sntese de
protenas
Ausente
Presente
Atua
na fotossntese
Ausente
Presente
em vegetais
e algas
Deslocamento
celular
Presente
Presente
apenas em animais
(gametas)
esterides
So hormnios responsveis
pela harmonia das funes
no organismo.
Para saber mais sobre clula

como unidade biolgica, acesse:
com.br/alfa/citologia/
citologia-3.php
Resumo
Nessa aula estudamos a clula, unidade fundamental dos seres vivos. Vimos
que as clulas dos microrganismos podem ser procariontes (no apresentam
ncleo definido) ou eucariontes (com ncleo definido). Alm disso, tambm
estudamos as principais diferenas entre esses tipos celulares.
e-Tec Brasil
34
Microbiologia Geral
1. Defina clulas procariontes e clulas eucariontes.
2. Quais as principais diferenas entre uma clula procarionte e uma
eucarionte?
3. Que grupos pertencem aos procariontes? E aos eucariontes?
4. Qual a constituio do citoplasma da clula?
5. Qual organela citoplasmtica est presente nos procariontes?
6. Qual a diferena entre o DNA dos procariontes e o DNA dos eucariontes?
7. Quais as duas linhagens de procariontes?
8. Qual a constituio do citoplasma?
9. As bactrias so seres procariontes por que:
a) Podem apresentar formas de resistncia que so os esporos.
b) Possuem uma parede celular espessa, constituda de polissacardeos, protenas e lipdios.
c) No possuem ncleo organizado envolto pela carioteca.
d) Possuem estruturas locomotoras denominadas flagelos.
e) Podem reproduzir-se sexuadamente por conjugao.
Aula 2 - A clula
35
e-Tec Brasil
10. Numere os elementos da coluna da direita com os seus correspondentes

da coluna da esquerda.
Estrutura celular
Funo
(1) Retculo endoplasmtico

liso
(__) Responsvel pela respirao aerbica.

(__) Responsvel pela sntese de protenas.
(2) Lisossomo
e-Tec Brasil
(3) Mitocndria
(__) Responsvel pelo transporte de substncias e produo de esterides.
(4) Aparelho Golgiense
(__) Promove a digesto intracelular.
(5) Ribossomo
(__) Mantm a seletividade das clulas.
(6) Membrana plasmtica
(__) Realiza sntese e transporte de substncias.
36
Microbiologia Geral
Aula 3 Bactrias: morfologia e estruturas
O que sabemos uma gota,

o que ignoramos um oceano.
Isaac Newton
Objetivos
Conhecer as bactrias: seu tamanho e sua morfologia.
Compreender as estruturas das clulas bacterianas.
Entender e diferenciar bactrias Gram-positivas de Gram-negativas.
Identificar estruturas da membrana e do citoplasma bacteriano.
3.1 Apresentao
As anlises das caractersticas morfolgicas das bactrias so importantes
para classificao preliminar e para o conhecimento de algumas propriedades
importantes do ponto de vista industrial.
3.2 Bactrias
So organismos unicelulares. Podem ser encontrados de forma isolada ou em
colnias; so constitudos por uma clula (unicelulares), no possuem ncleo
celular definido (procariontes) e no possuem organelas membranosas.
3.3 Morfologia: tamanho, forma e

arranjos bacterianos
As bactrias so variveis quanto ao tamanho e quanto s formas que apresentam.
Aula 3 - Bactrias: morfologia e estruturas
37
e-Tec Brasil
3.3.1 Tamanho bacteriano

A unidade de medida das bactrias o mm (micrmetro) que equivale a 103 mm.
Muitas bactrias medem de 2 a 6 mm de comprimento e 1 a 2 mm de largura.
Tamanho varivel: 0,1 0,2 m 5,0 mm
3.3.2 Morfologia das bactrias: formas e

arranjos bacterianos
Embora existam milhares de espcies bacterianas, elas podem ser agrupadas
em trs tipos morfolgicos gerais: cocos, bacilos e espiralados.
a) Formas de cocos (esfricas) o grupo de bactrias mais homogneo
em relao ao tamanho. Os cocos tomam denominaes diferentes de
acordo com o seu arranjo (Figura 3.1).
Micrococos cocos.
Diplococos cocos agrupados aos pares.
Ttrades agrupamentos de quatro cocos.
Sarcina agrupamentos de oito cocos em forma cbica.
Estreptococos cocos agrupados em cadeias.
Estafilococos cocos agrupados em grupos irregulares, lembrando cachos de uva.
e-Tec Brasil
38
Microbiologia Geral
Figura 3.1: Diferentes arranjos de bactrias esfricas (cocos): (a) Coco: Methanococcus
sp; (b) Diplococo: Neisseria sp (gonococo); (c) Ttrade: Deinococcus sp; (d) Sarcina:
Methanosarcina sp; (e) Estreptococo: Streptococcus sp e (f) Estfilococo: Staphylococcus sp
Fonte: (a) http://microbewiki.kenyon.edu/images/2/22/methanococcus_6.gif
(b) http://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/labmanua/lab1/dkngon.html
(c) http://fpslivroaberto.blogspot.com/2009_08_01_archive.html
(d) http://faculty.ksu.edu.sa/3822/picture%20library%2002/forms/allitems.aspx
(e) http://www.britannica.com/ebchecked/topic/48203/bacteria/39338/capsules-and-slime-layers?anchor=toc39338
(f) http://staphylococcusaureustreatment.com
b) Forma de bastonete so clulas cilndricas em forma de bastonete;

apresentam grande variao na forma e no tamanho entre gneros e
espcies (Figura 3.2).
Figura 3.2: Exemplos de bastonetes: (a) Halobacterium e (b) Salmonella, causadora

de aguda infeco intestinal em humanos
Fonte: (a) http://www.foxnews.com/scitech/2010/05/07/aliens-saturn-titan/
(b) http://www.icb.ufmg.br/big/vacinas/Salmonella.htm
39
e-Tec Brasil
As clulas bacterianas cilndricas ou em bastonetes (bacilos) no apresentam

a mesma disposio dos cocos, mas podem apresentar-se isolados, aos pares
(diplobacilos) e em cadeias (estreptobacilos). Em alguns casos esses arranjos
no constituem padres morfolgicos caractersticos, mas devido s etapas
de crescimento ou s condies de cultivo.
De um modo geral, essas duas formas de bactrias (cocos e bacilos) so as
mais comuns entre as contaminantes nas indstrias de acar e de lcool.
c) Formas espiraladas caracterizadas por clulas em espiral; dividem-se em:

Espirilos possuem corpo rgido e movem-se custa de flagelos externos. Ex.: Gnero Aquaspirillium (Figura 3.3).
Espiroquetas so flexveis e locomovem-se geralmente por contraes
do citoplasma, podendo dar vrias voltas completas em torno do prprio
eixo. Ex.: Gnero Treponema (Figura 3.3).
Figura 3.3: Exemplos de bactrias com formas espiraladas: (a) espirilo e (b) espiroqueta Leptospira interrogans, causadora da leptospirose
Fonte: (a) http://mikroby.blox.pl/html/1310721,262146,21.html?341847
(b) http://mac122.icu.ac.jp/gen-ed/higher-plants-etc.html
Observao
Alm desses trs tipos morfolgicos, existem algumas formas de transio
(Figura 3.4).
Bacilos muito curtos: cocobacilo.
Unidades celulares que se assemelham a uma vrgula: vibrio.
e-Tec Brasil
40
Microbiologia Geral
Figura 3.4: Formas bacterianas de transio: exemplos de vibries (a) Vibrio cholerae,
causador da clera em humanos e (b) Vibrio vulnificus, agressiva bactria carnvora
Fonte: (a) e (b) http://visualsunlimited.photoshelter.com
3.4 Estruturas externas da clula bacteriana

O tamanho, a forma e o arranjo das bactrias constituem sua morfologia,
sua aparncia externa; a observao interna das estruturas celulares permite
conhecer um pouco o funcionamento da bactria no ambiente.
3.4.1 Parede celular

A parede celular uma estrutura rgida que est presente em quase todas
as bactrias e localiza-se acima da membrana citoplasmtica. Ela contm
polmeros complexos conhecidos como peptidioglicanos, que so responsveis pela sua rigidez. A parede celular impede que a clula estoure em
decorrncia do grande turgor, atua como uma barreira de proteo contra
determinados agentes qumicos e fsicos externos e funciona como suporte
de antgenos somticos bacterianos.
polmeros
Macromolculas formadas a
partir de unidades estruturais
menores.
As bactrias podem ser divididas em dois grandes grupos, com base na capacidade de suas paredes celulares fixarem o corante violeta cristal: as Gram-positivas
(que coram em roxo) e as Gram-negativas (que coram em vermelho).
A parede celular de bactrias Gram-positivas composta basicamente por
peptideoglicano, que constitui uma espessa camada ao redor da clula. Outros
polmeros, tais como cidos lipoteicicos e polissacardeos, tambm podem
estar presentes nessa camada (Figura 3.5).
41
e-Tec Brasil
delgada (ou delgado)

Fina ou fino
Nas bactrias Gram-negativas o peptideoglicano constitui uma camada basal

delgada, sobre a qual se encontra outra camada, denominada membrana
externa que composta por lipoprotenas, fosfolipdios, protenas e lipopolissacardeos (Figura 3.6). O processo de colorao de Gram consiste basicamente em tratar bactrias sucessivamente com cristal violeta, lugol, lcool e
fucsina (Figura 3.7). O cristal violeta e o lugol penetram tanto nas bactrias
Gram-positivas quanto nas Gram-negativas, formando um complexo de cor
roxa. O tratamento com lcool a etapa diferencial; nas Gram-positivas, o
lcool no retira o complexo cristal violeta+lugol, pois a sua ao desidratante
faz com que a espessa camada de peptideoglicano torne-se menos permevel,
retendo o corante. Nas Gram-negativas, devido pequena espessura da
camada de peptideoglicano, o complexo corado extrado pelo lcool, deixando as clulas descoradas. O tratamento com fucsina no altera a cor roxa
das Gram-positivas, ao passo que as Gram-negativas descoradas pelo lcool
tornam-se avermelhadas (Figura 3.7).
A colorao de Gram amplamente utilizada para identificar e classificar
bactrias.
O processo de colorao de Gram usado para classificar as bactrias em

Gram-positivas ou Gram-negativas, conforme fixam ou no o corante.
Essa classificao importante, pois as bactrias Gram-positivas so mais
sensveis penicilina e sulfa. Este processo de colorao um dos mais
importante mtodos realizados em laboratrio de microbiologia.
e-Tec Brasil
42
Microbiologia Geral
Figura 3.5: Parede celular de bactria Gram-positiva

Fonte: CTISM
Figura 3.6: Parede celular de bactria Gram-negativa

Fonte: CTISM
43
e-Tec Brasil
Figura 3.7: Processo de colorao do Gram

Fonte: Adaptado de http://pathmicro.med.sc.edu/fox/gram-st.jpg
Figura 3.8: (a) Micrografia da parede celular de bactria Gram-negativa; (b) indicao
de suas partes; (c) micrografia da parede celular de bactria Gram-positiva e (d) indicao de suas partes
Fonte: (a) e (c) http://visualsunlimited.photoshelter.com
(b) e (d) CTISM
3.4.2 Flagelos
So organelas especiais (apndices delgados) responsveis pela locomoo das
bactrias. De acordo com o nmero e distribuio dos flagelos, as bactrias
podem ser classificadas como: atrquias (sem flagelos), monotrquias (um nico
flagelo), anfitrquias (um flagelo em cada extremidade), lofotrquias (um tufo
e-Tec Brasil
44
Microbiologia Geral
de flagelos em uma, ou ambas as extremidades) e peritrquias (apresentando

flagelos ao longo de todo o corpo bacteriano), veja Figura 3.9.
Figura 3.9: Exemplos de bactrias com flagelos: (a) monotrquia Pseudomonas

aeruginosa; (b) anfitrquia Fetus venerealis; (c) lofotrquia Spirillum volutans e (d)
peritrquia Salmonella
Fonte: (a), (b), (c) e (d) http://visualsunlimited.photoshelter.com
Algumas bactrias movimentam-se por outros meios, diversos da atividade

flagelar, tais como o deslizamento provocado pelo fluxo protoplasmtico ou
pela resposta txica (fototaxia, quimiotaxia).
3.4.3 Plos (fmbrias)

So apndices finos, retos e curtos que esto presentes em muitas bactrias
Gram-negativas. So encontrados tanto nas espcies mveis como nas imveis e, portanto, no desempenham papel relativo mobilidade. Os plos
originam-se de corpsculos basais na membrana citoplasmtica e sua funo
parece estar relacionada com a troca de material gentico durante a conjugao bacteriana (fmbria sexual) com a aderncia s superfcies mucosas. As
fmbrias podem ser removidas sem comprometimento da viabilidade celular
e regeneram-se rapidamente (Figura 3.10).
45
e-Tec Brasil
Figura 3.10: Exemplos de bactrias fimbriadas: (a) bactria Escherichia coli recoberta
de fmbrias e (b) com fmbrias e flagelos
Fonte: (a) e (b) http://visualsunlimited.photoshelter.com
3.4.4 Glicoclice
formado por uma substncia mucilaginosa ou gelatinosa (viscosa) e fica
ligada parede celular como um revestimento externo. Se o glicoclice estiver
organizado de maneira definida e acoplado firmemente parede celular,
recebe o nome de cpsula (Figura 3.11); se estiver desorganizado e sem qualquer forma frouxamente acoplada parede celular, recebe o nome de camada
limosa. O glicoclice pode ser de natureza polissacardica (um ou vrios tipos
de acares como galactose, ramnose, glicana, etc.) ou polipeptdica (cido
glutmico). O glicoclice desempenha papel importante na infeco, permitindo que a bactria patognica se ligue a tecidos especficos do hospedeiro.
Acredita-se que o glicoclice possa proteger as bactrias da dessecao.
e-Tec Brasil
46
Microbiologia Geral
Figura 3.11: Micrografia eletrnica com destaque para a cpsula de uma bactria
Fonte: http://visualsunlimited.photoshelter.com
3.5 Membrana plasmtica modelo

mosaico fluido
Fina membrana que separa a parede celular do citoplasma. Sua espessura
da ordem de 7,5 nanmetros e composta principalmente por uma bicamada
de fosfolipdeos (20 a 30%) e protenas (50 a 70%); desempenha importante
papel na permeabilidade seletiva da clula (Figura 3.12). A membrana o stio
da atividade enzimtica especfica e do transporte de molculas para dentro
e para fora da clula.
Para saber mais sobre estrutura

de membrana, acesse:
microbiologia/morfologia1/
morfologia1.html#ultraestrutura
Ela difere da membrana plasmtica das clulas eucariticas por:

no apresentar esterides em sua composio;
ser sede de numerosas enzimas do metabolismo respiratrio das bactrias (mesmas funes das cristas mitocondriais);
controlar a diviso bacteriana atravs dos mesossomos.
Os mesossomos so invaginaes da membrana plasmtica que podem ser
simples dobras ou estruturas tubulares ou vesiculares. Alguns autores associam
ainda aos mesossomos o valor funcional das mitocndrias, atribuindo a eles
o papel na respirao bacteriana.
47
e-Tec Brasil
Figura 3.12: Representao esquemtica da membrana plasmtica

Fonte: CTISM
3.6 Estruturas internas da clula bacteriana

3.6.1 Citoplasma
Para saber mais sobre morfologia
da membrana, acesse:
microbiologia/morfologia3/
morfologia3.html
composto pela poro fluida e contm substncias dissolvidas e partculas,

tais como ribossomos, e material nuclear ou nucleide, rico em DNA.
3.6.2 Incluses citoplasmticas

As incluses so formaes no vivas existentes no citoplasma, como gros
de amido, gotas de leo, chamadas de grnulos, e podem servir como fonte
de material de reserva ou energia.
3.6.3 Nucleide e plasmdeos

As clulas bacterianas no contm o ncleo tpico das clulas animais e vegetais. O cromossomo bacteriano consiste de um cromossomo nico e circular
e ocupa uma posio prxima ao centro da clula. Pode ser chamado de
nucleide. Vrias bactrias apresentam tambm molculas de DNA extracromossomal, denominadas plasmdeos, as quais so geralmente circulares,
contendo muitas vezes genes que conferem caractersticas adaptativas vantajosas ao microrganismo.
As bactrias so importantes nos processos biotecnolgicos na indstria,
agricultura e na medicina.
e-Tec Brasil
48
Microbiologia Geral
Resumo
Ao final dessa aula compreendemos a morfologia e a estrutura das clulas
bacterianas. Na aula seguinte, abordaremos os processos de reproduo,
nutrio e crescimento, fundamentais nas indstrias que utilizam os potenciais
microbiolgicos.
1. Qual o conceito de bactrias?
2. Qual a unidade utilizada para medir as bactrias?
3. Como as bactrias so divididas quanto forma e ao arranjo?
4. De acordo com a parede celular bacteriana, como as bactrias so classificadas?
5. Qual a principal substncia que compe a parede celular das bactrias?
Qual sua funo e como podemos diferenciar a parede celular de bactrias Gram+ das Gram-?
6. De acordo com o nmero e distribuio dos flagelos, como as bactrias
podem ser classificadas?
7. Qual a funo dos plos nas bactrias?
8. Qual a funo do glicoclice?
9. O que compe a membrana citoplasmtica das bactrias? O que a diferencia da membrana citoplasmtica das clulas eucariticas?
10. Cite e comente as estruturas internas da clula bacteriana.
49
e-Tec Brasil
Aula 4 Bactrias: reproduo,

A diferena entre o possvel e o impossvel
est na vontade humana.
Louis Pasteur
Objetivos
Compreender os tipos de reproduo bacteriana.
Conhecer as formas de obteno de energia das bactrias.
Entender e diferenciar macro de micronutrientes.
Compreender as fases da curva de crescimento das bactrias.
Compreender os fatores que limitam o crescimento das bactrias.
4.1 Apresentao
A diviso dessas aulas (3 e 4) em duas partes deve-se ao grande volume
de informaes exigido para compreender a morfologia e a fisiologia das
bactrias. Nessa aula veremos os processos reprodutivos, de nutrio e do
crescimento bacteriano.
4.2 Reproduo bacteriana

As bactrias geralmente reproduzem-se assexuadamente por fisso binria
ou cissiparidade. Nesse processo reprodutivo ocorre replicao do cromossomo e uma nica clula divide-se em duas; em seguida ocorre a diviso do
cromossomo bacteriano replicado e o desenvolvimento de uma parede celular
transversal (Figura 4.1). A fisso binria no o nico mtodo reprodutivo
assexuado entre as bactrias. Tambm pode ocorrer esporulao e brotamento.
Aula 4 - Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento
51
Para saber mais sobre

reproduo, acesse:
microbiologia/divisao/divisao.
html#fissao
e-Tec Brasil
Figura 4.1: (a) Fisso binria e (b) exemplo de diviso binria em bactria Moraxella catarrhalis
Fonte: (a) CTISM
(b) http://www.avelox.com/scripts/pages/en/microsites/electronmicrographs/index.php?page=3
Embora no ocorra reproduo sexuada, pode ocorrer troca de material

gentico entre as bactrias. Tal recombinao gentica pode ocorrer por
transformao, conjugao ou transduo.
a) Transformao incorporao de fragmentos de DNA perdidos por outra bactria que se rompeu. Esse mecanismo demonstra formalmente
que o DNA a base qumica da hereditariedade (Figura 4.2).
Figura 4.2: Transformao bacteriana

Fonte: CTISM
e-Tec Brasil
52
Microbiologia Geral
b) Conjugao duas clulas bacterianas geneticamente diferentes trocam

DNA atravs de plo sexual (Figura 4.3).
Figura 4.3: (a) Conjugao bacteriana e (b) exemplo de conjugao entre bactrias
Fonte: (a) CTISM
(b) http://www.focus.it/Salute/fotodelgiorno/Cellule_mortali_ma_immortali.aspx
c) Transduo molculas de DNA so transferidas de uma bactria para

outra usando os vrus como vetores (bacterifagos). Quando o bacterifago entra numa clula bacteriana, o DNA do vrus mistura-se com uma
parte do DNA bacteriano, de modo que o vrus passa a carregar essa parte do DNA. Se o vrus infecta uma segunda bactria, o DNA da primeira
pode misturar-se com o DNA da segunda. Essa nova informao gentica
ento replicada a cada nova diviso (Figura 4.4).
53
e-Tec Brasil
Figura 4.4: Transduo bacteriana

Fonte: CTISM
d) Tempo de gerao o tempo necessrio para que uma clula bacteriana se divida ou para que a populao duplique. Esse tempo pode
variar de 15 a 20 minutos ou at algumas horas. O tempo de gerao
depende da espcie bacteriana e das condies ambientais, ou seja, as
bactrias so capazes de crescer numa ampla faixa de condies fsicas,
podendo utilizar alimentos muito diferentes. Contudo, seu crescimento
requer condies especficas para uma dada espcie.
e) Endsporos (esporos) formas dormentes de clulas bacterianas so
produzidas por certas espcies de bactrias em situaes de escassez
de nutrientes (Figura 4.5). Os esporos representam uma fase latente
(repouso) da clula: so extremamente resistentes aos agentes fsicos e
qumicos adversos, demonstrando uma estratgia de sobrevivncia. O
endsporo resiste at que as condies melhorem e muitos resistem at
mesmo gua fervente. A indstria de alimentos preocupa-se em tomar
providncias para que os endsporos no estejam presentes durante o
e-Tec Brasil
54
Microbiologia Geral
processo de acondicionamento dos alimentos. Todas as bactrias dos gneros Bacillus e Clostridium produzem endsporos.
Figura 4.5: (a) Formao do endsporo; (b) e (c) exemplos de endosporos

Fonte: (a) CTISM
(b) http://www.technolog.friko.pl/neoalmanach/5.mikrobiologia/4.html
(c) http://visualsunlimited.photoshelter.com
4.3 Nutrio das bactrias

Do ponto de vista nutricional, as bactrias podem ser divididas em classes
fisiolgicas dependendo da forma de obteno de fontes de energia e carbono
para a realizao de suas atividades vitais:
Fototrficos so organismos que utilizam a energia radiante (luz)
como fonte.
Bactrias auttrofas: fotossintetizantes e quimiossintetizantes.
55
e-Tec Brasil
Quimiotrficos so organismos incapazes de utilizar a energia radiante;

dependem da oxidao de compostos qumicos para a obteno de energia.
Bactrias hetertrofas: quimiossintetizantes.
4.3.1 Nutrientes
So as substncias encontradas no ambiente, que participam do metabolismo
celular (anabolismo e catabolismo), podendo ser divididos em dois grandes
grupos: macronutrientes, que so necessrios em grandes quantidades e
micronutrientes, necessrios em pequenas quantidades (Quadro 4.1).
Principais macronutrientes Carbono, Nitrognio, Hidrognio, Fsforo, Enxofre, Potssio, Magnsio, Clcio, Sdio e Ferro.
Principais micronutrientes Cobalto, Zinco, Molibdnio, Cobre, Mangans e Nquel.
Quadro 4.1: Macronutrientes
Principais elementos
Forma em que so encontrados
CO2 e composto orgnico
H2O e composto orgnico
H2O e O2
NH3, NO3 e composto orgnico
PO4
H2S, SO4 e composto orgnico
K+
Mg
Mg+2
Ca
Ca+2
Na
Na+
Fe
Fe+3 e composto orgnico
Fonte: http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/nutricao/nutricao.html#nutricao
4.4 Crescimento das bactrias

um somatrio dos processos metablicos progressivos, que normalmente
conduz diviso (reproduo diviso binria ou brotamento) com produo
de duas clulas-filhas a partir de uma bactria. Dessa forma, o crescimento
exponencial (crescimento logartmico). Em microbiologia, o termo crescimento refere-se a um aumento do nmero de clulas e no ao aumento das
dimenses celulares.
e-Tec Brasil
56
Microbiologia Geral
Curva de crescimento bacteriano tem quatro fases, conforme a Figura 4.6.
Figura 4.6: Curva de crescimento bacteriano

Fonte: CTISM
4.4.1 Fatores limitantes do crescimento bacteriano

A oferta de nutrientes o principal fator que limita o crescimento bacteriano.
Outros fatores importantes no crescimento bacteriano so: temperatura, pH,
disponibilidade de O2 e quantidade de gua.
Temperatura algumas bactrias crescem melhor em temperaturas baixas, outras em temperaturas intermedirias e outras em temperaturas
altas. A temperatura tima de crescimento aquela em que o microrganismo cresce mais rapidamente. Em temperaturas mais favorveis para
o crescimento, o nmero de divises celulares por hora, chamada de
taxa de crescimento, dobra para cada aumento de temperatura de 10C.
H trs temperaturas importantes a conhecer: mnima, tima e mxima
(nessa ltima as enzimas so danificadas pelo calor e a clula para de
crescer).
De acordo com a temperatura de crescimento, possvel distinguir, pelo
menos, trs grupos fisiolgicos de bactrias: as psicrfilas tm tempera-
57
e-Tec Brasil
tura tima de crescimento entre 15 - 25C; as mesfilas tm temperatura

tima de crescimento entre 25 - 45C; e as termfilas tm temperatura
tima de crescimento entre 45 - 80C.
pH quanto tolerncia ao pH, as bactrias podem ser acidfilas, neutroflicas e alcalfilas. Normalmente, o pH timo bem definido para
cada espcie e a maioria das bactrias no cresce em valores de pH acima
ou abaixo de seu pH timo.
Tabela 4.1: Classificao das bactrias quanto a tolerncia ao pH
Bactrias
Crescimento faixa de pH
Acidfilas
0,1 a 5,4
Neutrfilas
5,5 a 8,5
Alcalfilas
8,5 a 11,5
Fonte: http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/nutricao/nutricao.html#nutricao
Oxignio quanto respirao, as bactrias podem ser: aerbias estritas (necessitam de O2 para crescer), anaerbias estritas (s crescem na
ausncia de O2), microaeroflicas (precisam de O2, mas em presso inferior atmosfrica) e anaerbias facultativas ou aerotolerantes (crescem
na presena ou ausncia de O2). Veja Figura 4.7.
Figura 4.7: Cultura de microorganismos com diferentes necessidades de O2: (a) aerbios;
(b) anaerbios estritos; (c) anaerbios facultativos; (d) microaerfilos e (e) anaerbios
aerotolerantes
Fonte: CTISM
e-Tec Brasil
58
Microbiologia Geral
gua essencial a qualquer microrganismo; embora a necessidade seja

variada, somente endsporos bacterianos podem sobreviver sem gua.
Resumo
Nessa aula, tivemos a compreenso dos tipos reprodutivos, as formas de
obteno de energia, macro e micronutrientes, as fases de crescimento e os
fatores que limitam o crescimento bacteriano. Na prxima aula, iniciaremos
o estudo dos fungos, em especial as leveduras.
1. Defina reproduo assexuada por cissiparidade ou fisso binria.
2. Explique, por meio de esquemas com texto explicativo, o processo de
recombinao gentica por transformao.
3. Descreva a reproduo em que uma bactria transmite a outra bactria
material gentico atravs de plos sexuais.
4. Represente esquematicamente o processo de recombinao gentica por
transduo.
5. O que se entende como endsporo ou esporo bacteriano?
6. Do ponto de vista nutricional, como as bactrias podem ser divididas?
7. Diferencie macronutrientes de micronutrientes e d exemplos de cada um.
8. Comente sobre as fases de crescimento das bactrias, caracterizando
cada uma delas.
9. Quais os principais fatores limitantes do crescimento bacteriano?
10. De acordo com a temperatura e as necessidades de oxignio, como as
bactrias podem ser classificadas?
11. D a classificao das bactrias de acordo com o timo de pH.
12. Diferencie bactrias aerbias de bactrias anaerbias.
59
e-Tec Brasil
Aula 5 Fungos (leveduras):

morfologia e estruturas
A persistncia o caminho do xito.
Charles Chaplin
Objetivos
Conhecer os fungos: suas principais caractersticas.
Conhecer a importncia das leveduras nos processos industriais.
Identificar as formas e os arranjos morfolgicos das leveduras.
Compreender as estruturas das clulas das leveduras.
5.1 Apresentao
Os fungos so importantes nas indstrias qumicas, farmacuticas, de alimentos e tambm na agricultura.
Voc j ouviu falar de leveduras, bolores, cogumelos, orelhas de pau. Todos
so seres vivos que possuem caractersticas semelhantes, prprias do reino dos
fungos. Nesta aula e neste caderno daremos nfase s leveduras.
5.2 Fungos
Os fungos so organismos eucariontes, aclorofilados, heterotrficos e
absorve componentes orgnicos como fonte de energia. So aerbicos em sua
grande maioria, mas alguns so anaerbicos estritos e facultativos. Podem ser
uni ou multicelulares e reproduzem-se sexuada ou assexuadamente. Possuem
parede celular rgida que pode ser composta de celulose, glicanas, mananas
ou quitina e membrana celular com esteris presentes. Seu principal material
de reserva o glicognio.
aclorofilados
Que no possuem clorofila.
Clorofila: grupo de pigmentos
fotossintticos presente nos
cloroplastos (organelas presentes
nas clulas das plantas e algas,
ricos em clorofila), responsvel
pela colorao verde das plantas.
Os fungos estudados em microbiologia compreendem as leveduras e os bolores. As leveduras so unicelulares, no-filamentosas, apresentam em mdia de
Aula 5 - Fungos (leveduras): morfologia e estruturas
61
e-Tec Brasil
1 a 5 m de dimetro e de 5 a 30 m de comprimento. Elas so geralmente

ovais, podendo apresentar morfologia alongada ou esfrica. As leveduras no
possuem flagelos, so imveis.
Os bolores so organismos pluricelulares, que se apresentam filamentosos ao
microscpio ptico a fresco com baixa ampliao. Ao exame macroscpico
apresentam crescimento caracterstico com aspecto aveludado ou cotonoso
(algodo) ou como borra de caf (Aspergillus niger).
5.3 Leveduras
So fungos da classe dos ascomicetos, os quais pertencem ao filo Ascomycota.
Este filo caracteriza-se por possuir fungos nos quais a produo de esporos
ocorre em esporngios especficos, denominados de ascos.
5.3.1 Caractersticas
So microrganismos eucariontes, unicelulares, desenvolvem-se na fermentao
alcolica. Apresentam membrana celular bem definida, pouco espessa em
clulas jovens, e rgidas em clulas adultas. As leveduras no formam filamentos, so imveis, quimio-heterotrficos e aerbios facultativos (metabolismos
oxidativo e fermentativo). Reproduzem-se assexuada e sexuadamente. No
so capazes de utilizar amido e celulose como fonte de carbono.
5.3.2 Importncia
Nas indstrias, as leveduras apresentam os seguintes pontos de interesse:
so utilizadas na produo do lcool industrial e de todas as bebidas
alcolicas destiladas ou no;
so utilizadas na panificao;
so prejudiciais conservao de frutos e de sucos vegetais, pois so
agentes de fermentao;
algumas espcies so patognicas s plantas, animais e ao homem.
5.3.3 Tamanho das clulas das leveduras

O tamanho das clulas de leveduras variado, mas, numa cultura jovem, os
tamanhos das clulas podem ser bem uniformes em algumas espcies ou
extremamente heterogneos em outras. Estas disparidades podem ser usadas
e-Tec Brasil
62
Microbiologia Geral
para fazer a diferenciao entre as espcies e algumas vezes at mesmo entre

linhagens da mesma espcie. De maneira geral, as leveduras industriais variam
consideravelmente no que se refere a suas dimenses.
A unidade de medida das leveduras assim como das bactrias o m (micrmetro), que equivale a 10-3 mm.
Muitas leveduras tem de 5 a 30 m de comprimento e de 1 a 5 m de largura.
5.3.4 Morfologia das leveduras

A clula da levedura pode apresentar vrias formas, as quais podem ser o
resultado da maneira de reproduo vegetativa, bem como das condies de
cultivo e da idade da cultura. Veja alguns exemplos na Figura 5.1.
Figura 5.1: Forma de leveduras

Fonte: CTISM
63
e-Tec Brasil
5.4 Estruturas da clula da levedura

A maioria das investigaes feitas sobre as estruturas da clula de levedura
baseada em trabalhos com Saccharomyces cerevisiae. As informaes sobre a
citologia da levedura tm sido feitas por observaes diretas ao microscpio
ptico, por tcnica de colorao da clula para componentes especficos, por
microscopia eletrnica de transmisso, bem como por microscopia de varredura.
Assim, possvel verificar que as principais estruturas das leveduras so: parede
celular, membrana plasmtica, ncleo, mitocndrias e vacolos (Figura 5.2).
Figura 5.2: Estrutura da levedura Sacharomyces cerivisiae

Fonte: CTISM
5.4.1 Parede celular das leveduras
quitina
Polissacardeos encontrados na
parede celular dos fungos e no
exoesqueleto dos artrpodos.
e-Tec Brasil
A parede celular responsvel pela forma da levedura. No caso das Saccharomyces

cerevisiae, a parede formada por glicano (30 a 34%) e manano (30%). Ela
fina nas clulas jovens e espessa nas adultas. As protenas tambm esto
presentes nas paredes celulares das leveduras, cerca de 6 a 8%; os lipdeos
variam de 8,5 a 13,5%. A quantidade de quitina varia conforme a espcie,
sendo que Saccharomyces cerevisiae apresenta entre 1 a 2% desse composto.
5.4.2 Membrana citoplasmtica

A membrana citoplasmtica est localizada abaixo da parede celular e sua
funo permitir a entrada seletiva de nutrientes e proteger a levedura da
perda de pequenas molculas, por vazamento do citoplasma. A composio
qumica da membrana composta por glicoprotenas, lipdeos e ergosterol
(diferente das membranas dos mamferos que contm colesterol).
64
Microbiologia Geral
5.4.3 Estruturas de superfcie

Algumas leveduras so cobertas por um material limoso, viscoso e aderente,
que a substncia capsular. A maior parte das cpsulas de leveduras constituda de polissacardeo.
5.4.4 Citoplasma
O citoplasma composto pela poro fluida na qual as organelas esto localizadas. Ele contm enzimas, carboidratos de reserva (glicognio e trealose)
e grandes quantidades de ribossomos e polifosfato. De 1 a 5% do DNA das
leveduras pode estar presente no citoplasma.
5.4.5 Ncleo
O ncleo das clulas das leveduras facilmente observado no campo claro
do microscpio ptico. Ele bem definido, pequeno esfrico ou reniforme,
circundado por uma membrana semipermevel e com funes metablicas
e reprodutivas.
reniforme
Que tem a forma de um rim.
5.4.6 Vacolos
Quando as clulas de leveduras so vistas ao microscpio de contraste de fase,
pode-se observar um ou mais vacolos de tamanhos diferentes (0,3 a 3,0 mm
de dimetro). Eles tm aparncia esfrica e so mais transparentes a um feixe
de luz que o citoplasma que os circunda. Ao microscpio eletrnico pode-se
observar que o vacolo cercado por uma membrana simples e a sua constituio est relacionada ao transporte de substncias que so armazenadas no
vacolo, tais como enzimas, aminocidos livres e lipdeos. Os vacolos tambm
servem como vesculas de armazenamento para vrias enzimas hidrolticas.
5.4.7 Mitocndrias
So organelas membranosas, no gnero Saccharomyces, elas esto geralmente
bem prximas da periferia da clula, mas em leveduras aerbias apresentam-se
distribudas pelo citoplasma. O nmero de mitocndrias pode variar de um
a vinte por clula. Essas organelas so envolvidas por membranas externas e
internas; a membrana interna forma as cristas mitocondriais. Elas so importantes nos processos de converso aerbios de energia.
As leveduras so clulas eucariontes. As clulas eucariontes so mais complexas que as clulas procariontes (bactrias).
65
e-Tec Brasil
Resumo
Nessa aula estudamos as caractersticas, a importncia das leveduras nos
processos industriais, a morfologia (forma), o tamanho e as estruturas que
compe uma clula de levedura. Na aula seguinte, veremos a reproduo, a
nutrio e o crescimento das leveduras.
1. D as principais caractersticas dos fungos.
2. Quais os fungos que so estudados em microbiologia?
3. Microscopicamente, quais as caractersticas tpicas das leveduras?
4. Quais os principais tipos morfolgicos das leveduras?
5. Qual a composio da parede celular nas leveduras?
6. D a composio qumica da membrana plasmtica das leveduras.
7. Qual a composio da cpsula das leveduras?
8. Quais os carboidratos de reserva que so encontrados no citoplasma de
uma clula de levedura?
9. Quais as funes do vacolo nas leveduras?
10. Descreva as mitocndrias presentes nas leveduras.
11. Esquematize uma clula de uma levedura com todas as suas estruturas.
e-Tec Brasil
66
Microbiologia Geral
Aula 6 Fungos (leveduras): reproduo,

A melhor maneira de ter uma boa idia ter muitas idias.
Linus Pauling
Objetivos
Compreender os tipos reprodutivos das leveduras.
Conhecer as formas de obteno de energia das leveduras.
Entender a nutrio das leveduras.
Compreender a curva de crescimento e os fatores que limitam o
crescimento das leveduras.
6.1 Apresentao
Nessa aula, estudaremos a reproduo das leveduras, sua nutrio e seu
crescimento, importantes nos processos industriais.
6.2 Reproduo das leveduras

As leveduras reproduzem-se assexuadamente por brotamento ou gemulao.
Nesse tipo de reproduo, na superfcie da clula-me, forma-se uma pequena
protuberncia (broto) que se transforma em uma clula-filha. Cada broto
que se separa pode tornar-se uma nova levedura ou pode permanecer ligada
clula-me, formando uma cadeia. Durante sua vida, uma clula madura
produz, por gemulao, uma mdia de 24 clulas-filhas. As gemulaes
sucessivas so sempre formadas em locais diferentes na superfcie celular,
permanecendo cicatrizes das gmulas como resultado desse processo de
reproduo. Veja exemplos de brotamento na Figura 6.1.
Aula 6 - Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento
67
e-Tec Brasil
Figura 6.1: Reproduo de levedura por brotamento: (a) etapas do desenvolvimento

do broto em uma levedura; (b) e (c) micrografias eletrnicas mostrando o brotamento
e as cicatrizes decorrentes do mesmo
Fonte: (a) CTISM
(b) http://www.scientistlive.com/European-Food-Scientist/Ingredients/Eliminate_&lsquo%3Benemy&rsquo%3B_yeast/19429/
(c) http://www.microbiologyonline.org.uk/about-microbiology/introducing-microbes/fungi
Alm da reproduo assexuada por brotamento ou gemulao, as leveduras

podem reproduzir-se assexuadamente por cissiparidade ou diviso binria,
forma pela qual os organismos unicelulares reproduzem-se pela simples diviso
da clula (igual reproduo que ocorre nas bactrias).
haplide
Clulas com ncleo com n
cromossomos.
diplide
Clulas com ncleo 2n
cromossomos.
e-Tec Brasil
As leveduras tambm se reproduzem por esporos a formao de esporos

sexuados de grande importncia biolgica. A esporulao constitui uma
fase do ciclo sexual da levedura, isto , a alternncia da condio haplide e
diplide. Esse ciclo permite levedura sofrer recombinaes genticas, mutao, hibridao e seleo, processos esses que levam a mudanas evolutivas
(melhoramento gentico). Para que a esporulao ocorra, so necessrias
condies de aerobiose, uma vez que pouco ou nenhum esporo formado sob
68
Microbiologia Geral
condies de anaerobiose (fermentao). J na fisso a levedura aumenta de

tamanho ou se alonga, o ncleo divide-se e so formadas duas clulas-filhas.
Durante os perodos de rpida multiplicao, as clulas podem dividir-se sem
separar-se, formando cadeias de clulas.
6.3 Nutrio das leveduras

Os fungos (leveduras) so seres heterotrficos e retiram os nutrientes do meio
ambiente circundante. Atravs da digesto enzimtica externa, transformam
as substncias de maneira que possam ser absorvidas. Se o substrato for completamente oxidado, diz-se que h respirao; se o substrato for parcialmente
degradado, acarretando a formao de metablitos, diz-se que h fermentao.
A levedura como entidade independente realiza a fermentao do acar
com o objetivo de conseguir a energia qumica necessria sua sobrevivncia,
sendo o etanol apenas e to somente um subproduto desse processo. Se o
homem pretende beneficiar-se dessa habilidade metablica, ele deve buscar
os conhecimentos que lhe permitam propiciar s leveduras, condies ideais
para que as mesmas trabalhem a seu favor, isto , com maior eficincia na
produo do etanol. A clula de levedura possui estruturas para a adequao
de sua atividade metablica; a fermentao alcolica (gliclise anaerbia)
ocorre no citoplasma, enquanto que a oxidao total do acar (respirao)
d-se na mitocndria.
De maneira geral, as leveduras necessitam de quatro elementos bsicos:
Carbono, Hidrognio, Nitrognio e Oxignio, alm de outros em menor quantidade: Fsforo, Enxofre, Ferro, Zinco, Cobre, Potssio, Magnsio e Clcio.
Alguns fungos necessitam ainda de determinados fatores de crescimento,
como por exemplo, a tiamina. As leveduras, para crescer, necessitam de uma
fonte de carbono e de uma fonte orgnica ou inorgnica de nitrognio.
Necessidades nutricionais as leveduras necessitam dos mesmos elementos qumicos que as outras formas de vida.
Fatores de crescimento as leveduras necessitam de determinados fatores
de crescimento tais como vitaminas.
69
e-Tec Brasil
6.4 Crescimento das leveduras

As leveduras precisam de acares para crescer. Atravs da metabolizao dos
acares, elas produzem lcool e dixido de carbono. Por isso, as leveduras
tornam-se importantes na indstria de alimentos.
O crescimento das leveduras pode ser considerado um aumento no nmero
de clulas. Dessa forma, igual ao crescimento das bactrias, o crescimento
exponencial (crescimento logartmico).
A curva de crescimento das leveduras, assim como a das bactrias, tem quatro
fases, conforme a Figura 6.2.
Figura 6.2: Curva de crescimento das leveduras

Fonte: CTISM
6.4.1 Fatores limitantes do crescimento

das leveduras
Quase todos os fungos, quando cultivados em condies favorveis e de
abundncia de alimentos de fcil assimilao, crescem rapidamente e, quando
o alimento tende a diminuir, o crescimento tambm diminui. Outros fatores
e-Tec Brasil
70
Microbiologia Geral
importantes no crescimento dos fungos, em especial das leveduras, so:

temperatura, pH, luz e quantidade de gua.
Temperatura a temperatura tem efeito marcante nos fungos; de uma
maneira geral, o timo para todos os fungos est entre 20C 30C, embora diferentes espcies tenham outros timos de temperatura. Psicrfilos so organismos com timo de temperatura abaixo de 20C; alguns
continuam crescendo mesmo em temperaturas muito baixas (organismos
marinhos e aqueles que causam deteriorao em alimentos congelados).
Mesfilos, inclui a maioria, tem timo entre 20C e 45C. Termfilos tem
timo de temperatura acima de 45C, incluem fungos de compotas, pilhas de feno em fermentao e fontes termais.
pH as leveduras crescem em variao de pH entre 2,5 e 8,5, mas, de
maneira geral, o pH timo neutro, sendo que as mesmas no toleram
pH alcalino.
Oxignio as leveduras so capazes de crescimento anaerbio facultativo. Elas podem utilizar o oxignio ou um composto orgnico como
aceptor final de eltrons, isso permite que esses fungos sobrevivam a
vrios ambientes. Em presena de oxignio, as leveduras respiram aerobicamente para metabolizar carboidratos e formar dixido de carbono
e gua; na ausncia de oxignio elas fermentam os carboidratos e produzem etanol e dixido de carbono.
gua indispensvel para o crescimento dos fungos. Pouqussimos
fungos podem desenvolver-se em pequeno grau de umidade.
Resumo
Nessa aula, tivemos a compreenso dos tipos reprodutivos, a nutrio, as
fases de crescimento e os fatores que limitam o crescimento das leveduras.
Na aula seguinte, iniciaremos o estudo do metabolismo e da cintica dos
microrganismos.
71
e-Tec Brasil
1. Descreva a reproduo assexuada que ocorre nas leveduras.
2. Quando ocorre o processo de formao de esporos nas leveduras?
3. Descreva o processo nutricional das leveduras.
4. Quais os produtos que so formados durante a fermentao?
5. Onde ocorre o processo de fermentao alcolica no interior das clulas?
E o processo de respirao?
6. Compare o crescimento das leveduras com o crescimento das bactrias.
7. Comente de forma explicativa os fatores que limitam o crescimento das
leveduras.
e-Tec Brasil
72
Microbiologia Geral
Aula 7 Metabolismo e cintica

dos microrganismos
A primeira e melhor vitria conquistar a si mesmo.
Plato
Objetivos
Compreender o metabolismo e a cintica dos microrganismos.
Diferenciar e entender anabolismo e catabolismo.
Conhecer tipos fermentativos.
Entender o rendimento energtico na respirao e na fermentao.
Entender os clculos do tempo de gerao e a taxa de crescimento.
7.1 Apresentao
Nessa aula, estudaremos sobre o metabolismo e a cintica dos microrganismos. Como j vimos nas aulas anteriores, o crescimento dos microrganismos
depende de vrios fatores, tais como disposio de nutrientes e pH. Conheceremos tambm as principais caractersticas dos microrganismos utilizados
nos processos industriais.
7.2 Metabolismo
Conjunto de todas as reaes bioqumicas que ocorrem em uma clula ou
organismo, indispensveis para a manuteno da estrutura e da fisiologia.
Essas reaes so responsveis pelos processos de sntese e degradao dos
nutrientes na clula e constituem a base da vida, permitindo o crescimento e
a reproduo das clulas. O metabolismo catalisado por sistemas integrados
de enzimas que mediam reaes que requerem energia e constitudo pelo
anabolismo e pelo catabolismo.
Aula 7 - Metabolismo e cintica dos microrganismos
73
e-Tec Brasil
Metabolismo do grego metabole: mudana, transformao.

So dois tipos gerais de reaes:
Aquelas envolvidas na utilizao de energia anabolismo.
Aquelas que envolvem liberao de energia catabolismo.
sntese
Produo.
O metabolismo a manuteno das atividades vitais de uma clula; a sntese

de compostos orgnicos, componentes estruturais e funcionais, e a degradao de compostos orgnicos para a sntese de ATP.
ATP
Adenosina trifosfato.
Neste material que aborda os microrganismos, metabolismo so todas as

atividades qumicas realizadas pelos microrganismos.
7.2.1 Anabolismo
o conjunto de todas as reaes de sntese de compostos orgnicos estruturais
(protenas da membrana plasmtica, glicoprotenas) e funcionais (enzimas,
hormnios) de uma clula; a sntese de molculas complexas a partir de
molculas simples; h consumo de ATP, que foi liberado pelo catabolismo e
que no foi usado; so reaes endoenergticas (absorve energia); exemplos
disso a fotossntese e a quimiossntese. Essas reaes so importantes para
o crescimento, a construo e o reparo de estruturas celulares.
Fotossntese a sintese de carboidratos a partir de gua (H2O) e dixido
de carbono (CO2), utilizando energia luninosa, que absorvida pela clorofila
e transformada em energia qumica (ATP), Figura 7.1.
e-Tec Brasil
74
Microbiologia Geral
Figura 7.1: Equao da fotossntese

Fonte: CTISM
A equao acima mostra o processo de sntese de compostos orgnicos a

partir de substncias inorgnicas (gua, que absorvido pelas razes, e dixido
de carbono, retirado do ar atmosfrico pelas folhas). A energia luminosa
transformada em energia qumica, com auxlio da clorofila.
Quimiossntese um processo de sntese de substncias orgnicas que
utiliza o dixido de carbono (CO2) como fonte de carbono, mas em vez
de utilizar a energia luminosa, usa a energia proveniente da oxidao de
substncias inorgnicas, como a amnia, o enxofre, os nitritos e o ferro.
7.2.2 Catabolismo
o conjunto de todas as reaes de degradao dos compostos orgnicos
complexos em compostos orgnicos mais simples, com liberao de ATP.
Fornece energia requerida para os processos vitais, incluindo movimento,
transporte e sntese de molculas complexas; exemplos disso so a respirao
celular (aerbica) e a fermentao.
75
e-Tec Brasil
Respirao aerbica quebra de molculas orgnicas, geralmente a glicose, em presena de O2 com liberao de energia, dixido de carbono e gua.
A energia liberada armazenada em molculas de ATP. mais eficiente na
obteno de energia do que a fermentao.
A respirao aerbica se desenvolve em trs etapas:

Gliclise ocorre no hialoplasma da clula, o conjunto de reaes iniciais
da degradao (quebra) da glicose. Tem incio com a ativao da glicose,
que recebe dois grupos fosfato, fornecidos pelo ATP, que se transforma
em ADP.
Ciclo de Krebs ocorre na matriz mitocondrial. Basicamente, nesta segunda fase, opera-se a ciso (oxidao) da molcula de triose (acar de
trs carbonos) em trs molculas de dixido de carbono, com liberao
de eltrons e prtrons, que so temporariamente capturados por transportadores especficos: os NAD e os FAD.
Cadeia respiratria ocorre no interior das cristas mitocondriais, o hidrognio liberado nas vrias etapas combina-se com o oxignio e forma
gua. Tal reao libera uma grande quantidade de energia, que armazenada sob forma de molculas de ATP.
Quadro 7.1: Rendimento energtico da respirao aerbica
Etapa
Local
Produo
Gasto
Gliclise
Hialoplasma
4 ATP
2 ATP
Ciclo de Krebs
Matriz mitocondrial
2 ATP
---
Cadeia Respiratria
Cristas mitocondriais
32 ATP
---
LUCRO: 36 ATP
Na respirao uma molcula de glicose gera 36 a 38 ATP
Fonte: Raven, 2001
e-Tec Brasil
76
Microbiologia Geral
Figura 7.2: Etapas da respirao aerbica

Fonte: CTISM
Fermentao conjunto de reaes qumicas (na ausncia de oxignio)

controladas por enzimas. A fermentao conduz, geralmente, ciso parcial
da molcula de glicose, resultando em disponibilidade energtica inferior
se comparada respirao aerbia. Esse processo tem grande importncia
econmica, sendo utilizado na fabricao de lcool combstivel, de bebidas
alcolicas, pes e outros alimentos.
Na fermentao uma molcula de glicose gera 2 ATP.
A fermentao depende do tipo de microrganismo presente. Veja alguns
exemplos:
77
e-Tec Brasil
Fermentao alcolica produzido, como produto final, o etanol e

o dixido de carbono, produtos utilizados pelo homem na produo de
lcool combustvel, vinho, cerveja e outras bebidas alcolicas, e tambm
na produo dos pes.
Fermentao lctica produzido, como produto final, geralmente a
partir da lactose do leite. O acmulo de cido lctico abaixa o pH e causa
a coagulao das protenas, formando coalho, usado na fabricao de
queijos e iogurtes.
Fermentao actica o produto final o cido actico que causa o
azedar do vinho e dos sucos de frutas, transformando-os em vinagre.
A presena de leveduras contaminantes (selvagem) tem trazido srios problemas para a fermentao, tanto na produo de vinhos como na fabricao de
cerveja. Os problemas referem-se ao processo fermentativo e, principalmente
deteriorao do produto final, provocando o aparecimento de sabores e
aromas que descaracterizam a bebida. Na produo de lcool, a partir do
melao e/ou do caldo-de-cana, a presena de leveduras contaminantes tem
sido pouco ou raramente mencionada.

metabolismo microbiano, acesse:
microbiologia/metabolismo/
metabolismo.html
Aplicaes dos processos fermentativos os processos fermentativos so

utilizados industrialmente na produo de etanol, vinagres, cidos orgnicos,
bebidas alcolicas, tais como vinho, cerveja, sidra, aguardente, e tambm
alimentos fermentados.
7.3 Microrganismos para aplicao em

processos industriais
Para que um microrganismo seja aplicado na indstria, necessrio que ele
tenha as seguintes caractersticas:
no ser patognico;
apresentar elevada eficincia na converso do substrato em produto;
no exigir condies de processo muito complexas;
e-Tec Brasil
78
Microbiologia Geral
no exigir meio de cultura muito dispendioso;

apresentar constncia quanto ao comportamento fisiolgico;
permitir a rpida liberao do produto para o meio, etc.
7.4 Cintica dos processos fermentativos

A cintica do crescimento microbiano permite o conhecimento das condies
favorveis para conduzir e controlar os processos fermentativos.
So dois os objetivos da cintica do crescimento microbiano:
medir as velocidades de transformaes que ocorrem durante os processos fermentativos, como o consumo de substratos, acmulo de produtos
e de biomassas;
estudar a influncia de fatores como a temperatura, pH, gua, oxignio, etc.
O crescimento do microrganismo ocorre em diversos ambientes fsicos e
qumicos. Os microrganismos desenvolvem suas atividades vitais em meios
de elevada complexidade, transformando substncias em outras, podendo
conduzir a resultados de interesse econmico.
O processo fermentativo consiste numa complexa transformao de nutrientes
de um meio de cultura, pela ao metablica dos microrganismos presentes,
em produtos e mais clulas microbianas (Figura 7.3).
79
e-Tec Brasil
Figura: 7.3: Representao grfica de um processo fermentativo qualquer

Fonte: CTISM
O crescimento dos microrganismos ocorre somente quando certas condies

fsicas e qumicas so satisfeitas, tais como: pH, temperatura e nutrientes, e
pode ser definido como um aumento ordenado dos seus constituintes qumicos, caracterizado por um aumento no nmero de clulas e/ou acrscimo
da massa celular.
Como j vimos nas aulas anteriores, o crescimento microbiano tem quatro
fases (fase lag ou de espera, fase log exponencial, fase estacionria e fase
de morte ou de declnio).
Um modelo de crescimento microbiano pode apresentar os mais variados graus
de complexidade, dependendo da situao fsica e da cintica pretendida.
Relembrando que, quando falamos em crescimento microbiano, nos referimos
ao nmero e no ao tamanho das clulas.
7.4.1 Crescimento microbiano tempo de gerao

Durante a fase exponencial, cada microrganismo divide-se em intervalos
constantes. Assim, a populao duplicar num intervalo especfico de tempo
chamado tempo de gerao (g), o tempo necessrio para uma populao
e-Tec Brasil
80
Microbiologia Geral
microbiana duplicar em massa ou em nmero. Varia conforme o tipo de

microrganismo, a idade, a espcie, as condies do meio, dentre outros fatores.
7.4.2 Expresses matemticas para a determinao

dos parmetros de crescimento microbiano
7.4.2.1 Clculo do tempo de gerao (g)
Se um tubo de cultura for inoculado com uma clula que se divide com um
tempo de gerao de 20 minutos, a populao ser de 2 clulas ao fim de 20
minutos, 4 clulas ao fim de 40 minutos, etc. Como a populao duplica em
cada gerao, o aumento populacional dado por 2n, onde n o nmero
de geraes.
O tempo de gerao pode ser calculado quando uma cultura encontra-se em
fase exponencial. Tratando-se de bactrias e leveduras que se multiplicam
por diviso binria, temos:
Onde:
Nt = nmero de microrganismos ao final no tempo t;
N0 = nmero inicial de clulas;
n = nmero de geraes no tempo t.
Tabela 7.1: Crescimento microbiano exponencial
Tempo (minuto)
N de divises
2n
Populao
(N02n)
log Nt
20 = 1
0.000
20
21 = 2
0.301
40
22 = 4
0.602
Logritimizando a expresso N = N0.2n temos que:
Resolvendo para n temos que:
81
e-Tec Brasil
Como log2 = 0.301 ento temos:
A partir dessa equao, possvel calcular o nmero de geraes (n) que

ocorreram em uma cultura se o nmero inicial de clulas for conhecido.
Exemplo
Calcular o nmero de gerao de uma cultura cuja populao celular passa
de 103 para 108 aps 5 horas de cultivo.
n = (log Nt - log N0) / 0,301
n = (8 - 3) / 0,301, ento n = 16,6 geraes
O nmero de geraes 16,6 geraes
O nmero de geraes n pode tambm ser dado por:

Onde:
t = tempo de cultura ou tempo de crescimento;
g = tempo de gerao;
n = nmero de geraes no tempo t.
Tendo o valor de (n) pode-se calcular o tempo de gerao (g):

Exemplo
Calcular o tempo de gerao de uma cultura cuja populao celular passa de
103 para 108 aps 5 horas de cultivo.
e-Tec Brasil
82
Microbiologia Geral
n = (log Nt - log N0) / 0,301

n = (8 - 3) / 0,301, ento n = 16,6 geraes
g = t/n
g = 5/16,6, ento g = 0,3 horas
O tempo para duplicar a populao celular foi de 0,3 horas
O tempo de gerao varivel para os diferentes microrganismos e depende
dos fatores genticos, nutricionais e ambientais.
A taxa de crescimento num sistema fechado pode ser expressa por meio de
uma constante mdia da taxa de crescimento (k), ou seja, o nmero de geraes por unidade de tempo muitas vezes expresso em geraes por hora.
k = 1/g ou g = 1/k

crescimento, acesse:
microbiologia/crescimento/
crescimento.html
k = (log Nt - log N0)/0,301.t ou g = 0,301.t/ (log Nt - log N0)

t = tempo
Exemplo
Uma populao bacteriana aumenta de 103 clulas para 109 clulas em 10
horas. Calcule a taxa de crescimento e o tempo de gerao.
k = (log Nt - log N0)/0,301.t
k = (9 3)/0,301.10
k = 2 geraes/hora
g = 1/k
g = 1/2
g = 0,5 horas
83
e-Tec Brasil
7.5 Mtodos para quantificao

do crescimento

quantificao do
crescimento, acesse:
microbiologia/crescimento/
crescimento.html#medidas
Existem diferentes processos para medir o crescimento microbiano, determinar

a taxa de crescimento e o tempo de gerao. A massa microbiana e o nmero
de clulas podem ser seguidos porque o crescimento conduz a um aumento
de ambos. Os principais mtodos so:
a) Quantificao direta:
Contagem em placas;
Filtrao;
Contagem direta ao microscpio.
b) Quantificao indireta:
Turbidimetria;
Turbidimetria
Refere-se aos mtodos de
anlise de solues coloidais
ou de suspenses, baseado na
medio da absoro de luz.
Atividade metablica.
Resumo
Nessa aula foi possvel compreender os processos metablicos que ocorrem
nos microrganismos, conhecer os tipos de fermentaes e o rendimento
energtico nesses processos. Tambm vimos um pouco sobre cintica das
fermentaes, tempo de gerao e taxa de crescimento.
1. O que metabolismo?
2. Diferencie anabolismo de catabolismo.
3. O que so reaes endoenergticas?
4. Qual o rendimento energtico na respirao celular e na fermentao?
5. Diferencie fermentao alcolica, lctica e actica.
e-Tec Brasil
84
Microbiologia Geral
6. Quais os objetivos da cintica do crescimento microbiano?

7. Calcule o nmero de gerao de uma cultura cuja populao celular passa de 102 para 1010 aps 4 horas de cultivo.
8. Calcule o tempo de gerao de uma cultura cuja populao celular passa
de 105 para 1015 aps 5 horas de cultivo.
9. Uma populao bacteriana aumenta de 102 clulas para 1012 clulas em
10 horas. Calcule a taxa de crescimento e o tempo de gerao.
85
e-Tec Brasil
Aula 8 Provas bioqumicas e cultura

de microrganismos
Na natureza nada se perde, nada se cria,tudo se transforma.
Antoine Lavoisier
Objetivos
Conhecer princpios e procedimentos de diversas provas (testes)
bioqumicas usadas na identificao de microrganismos.
Conhecer a tcnica de enumerao e deteco de microrganismos
Mtodo do Nmero mais Provvel (NMP).
8.1 Apresentao
Nesta aula, estudaremos a investigao das atividades metablicas dos microrganismos in vitro, chamada de provas (testes) bioqumicas, que auxiliam
na identificao de grupos ou espcies de bactrias ou leveduras atravs da
verificao das transformaes qumicas, que ocorrem num determinado
substrato, pela ao das enzimas. Como muitas vezes um determinado microrganismo possui um sistema enzimtico especfico, promovendo transformao
bioqumica especfica, as provas bioqumicas podem ser utilizadas na prtica
para a sua caracterizao. Tambm sero estudadas algumas tcnicas de
enumerao e deteco dos microrganismos.
8.2 Provas bioqumicas

8.2.1 Prova de catalase
A catalase uma enzima que decompe o perxido de hidrognio (H2O2) em

gua e oxignio. produzida por muitos microrganismos, e usualmente empregada para diferenciar Staphylococcus, catalase positivos, de Streptococcus,
catalase negativos.
Observao
A prova considerada positiva quando h borbulhamento ou efervescncia
devido liberao do oxignio.
Aula 8 - Provas bioqumicas e cultura de microrganismos
87
e-Tec Brasil
8.2.2 Prova da citocromo-oxidase

citocromos
uma pequena protena heme.
Sistema enzimtico relacionado com os citocromos da cadeia respiratria de

alguns microrganismos. A prova considerada positiva quando, na mistura
do reagente com a massa bacteriana, desenvolve-se a cor prpura em at 1
minuto. Na reao negativa, no h desenvolvimento de cor prpura.
8.2.3 Utilizao de fontes de carbono

a) Provas fermentativas (glicose, lactose, sacarose, manose, xilose, sorbitol, etc.).
Um determinado carboidrato pode ser fermentado e originar diferentes
produtos finais, o que depende do microrganismo envolvido. Isso pode
gerar gs, que pode ser detectado pela presena de bolhas no tubo de
Durham, e cidos orgnicos, que podem ser detectados pela mudana
de cor do indicador.
Mesmo com uma reao negativa, o microrganismo pode ter utilizado outros
nutrientes do meio de cultura do teste, como a peptona. As leituras devem
ser feitas em, no mximo, 24h, uma vez que uma incubao prolongada
pode mascarar a produo de cido, pois ocorre produo de substncias
alcalinas resultantes da ao enzimtica sobre outros substratos.
b) Hidrlise do amido
As molculas de amido so constitudas por amilose e amilopectina as
quais so rapidamente hidrolisadas por algumas bactrias, que usam as
suas a-amilases, originando dextrinas, glicose e maltose. Utiliza-se uma
soluo de iodo para indicar a presena de amido. Quando o iodo entra
em contato com o amido, forma um complexo azul acastanhado. O amido hidrolisado no produz alterao de cor. Se aparecer uma zona clara
aps a adio de iodo a um meio que contenha amido e crescimento
bacteriano, porque a a-amilase foi produzida pela bactria. Se no
ocorrer uma zona clara, o amido no foi hidrolisado.
8.2.4 Provas IMViC (Indole, Methyl-red,

Voges-proskauer, Citrate)
Estas provas permite diferenciar os principais grupos de Enterobacteriaceae,
pois so baseadas nas propriedades bioqumicas e nas reaes enzimticas
na presena de substratos especficos.
e-Tec Brasil
88
Microbiologia Geral
a) Prova do Indol
O indol produzido a partir do triptofano existente no meio de cultura sob
a ao da triptofanase, h tambm a produo de cido pirvico e amnia. O indol pode ser detectado pela formao de um anel rosa, pink,
na parte superior do tubo, aps a adio de p-dimetilaminobenzaldedo
(reativo de Erlich).
b) Prova do Vermelho de Metila (VM)
Esta prova avalia a capacidade do microrganismo de oxidar a glicose
com produo e estabilizao de altas concentraes de produtos finais cidos. Serve para diferenciar organismos entricos, em particular,
Escherichia coli de Escherichia aerogenes. Embora todas as enterobactrias fermentem glicose, alguns microrganismos, durante a fase final
de incubao, convertem esses cidos em produtos no cidos como o
etanol, o que resulta num pH mais elevado (pH 6). O indicador de pH o
vermelho de metila que, em pH abaixo de 4,4 vermelho e acima de 6
amarelo.
c) Prova de Voges-Proskauer (VP)
H bactrias que utilizam a fermentao butilenogliclica. Elas fermentam a glicose, produzindo acetil-metil-carbinol (acetona), butilenoglicol
e pequenas quantidades de cidos. Quando KOH (4 gotas do Barrit II)
adicionado e na presena de O2 atmosfrico, a acetona oxidada a diacetil. A adio de alfa-naftol (10 gotas do Barrit I), nessa reao, catalisa
a produo de um anel vermelho tijolo, aps 10-15 minutos. Adicionar
primeiro o Barrit I, depois o Barrit II e agitar o tubo para expor ao oxignio.
d) Citrato
Este teste determina se a bactria capaz de utilizar o citrato de sdio
como nica fonte de carbono para o seu metabolismo e crescimento.
Deve ser utilizado o meio Citrato de Simmons, composto por citrato de
sdio, fosfato de amnia e por azul de bromotimol. Com a facilidade do
transporte de citrato pela citrato-permease, ela utilizada pela citrase
com produo de hidrxido de amnia, o que eleva o pH fazendo com
que a reao torne-se azul. Nesse teste, utilizam-se tubos com meio inclinado para ter mais acesso ao oxignio, necessrio para a utilizao do
citrato. O CO2 produzido reage com o sdio do citrato formando carbonatos de reao alcalina.
89
e-Tec Brasil
8.2.5 Utilizao de fontes de protenas,

aminocidos e enzimas
a) Prova do sulfureto de hidrognio (H2S)
Algumas bactrias so capazes de degradar compostos que contm enxofre (como o tiossulfato de sdio e a cistena das peptonas), atravs
da tiossulfato redutase, produzindo H2S que incolor. Este reage com o
ferro (indicador) e forma um precipitado preto (sulfeto ferroso). Para que
esta reao ocorra, necessrio que o meio esteja cido.
b) Hidrlise da gelatina
O objetivo desta prova determinar a capacidade do microrganismo de
excretar uma enzima hidroltica extracelular, chamada gelatinase, capaz
de degradar a gelatina. A gelatina uma protena produzida pela hidrlise do colgeno. Abaixo dos 25C mantm as suas propriedades de gel
e slida, enquanto acima dos 25C lquida. Determinados microrganismos tm capacidade de produzir a gelatinase, que atua hidrolisando
a gelatina em aminocidos. Se a degradao ocorre, no se conseguem
restaurar as caractersticas de gel da gelatina, mesmo a baixas temperaturas (fica lquido). A hidrlise da gelatina uma caracterstica importante na diferenciao dos microrganismos e pode tambm ser usada para
determinar a sua patogenicidade.
8.3 Prova da motilidade

A prova da motilidade indica, indiretamente, a produo de flagelos. No
uma prova bioqumica, e sim fisiolgica, mas auxilia na identificao de bactrias. A prova efetuada inoculando-se, em linha reta, atravs da tcnica da
puntura (com agulha), 2/3 de um meio semisslido. A prova indica motilidade
quando os microrganismos crescem deslocando-se da linha de inoculao,
turvando o meio. A prova negativa quando os microrganismos ficam restritos
ao local da inoculao sem, contudo, turvar o meio.
Observao
O objetivo da prova de motilidade determinar se um microrganismo mvel
ou imvel, ou seja, se tem ou no flagelo.
e-Tec Brasil
90
Microbiologia Geral
8.4 Meios de cultivo

Os meios de cultivo, tambm chamados meios de cultura, consistem em
material nutritivo, preparado em laboratrio, que se destina ao cultivo artificial
de microrganismos. Os meios de cultivo devem conter as substncias exigidas
pelas bactrias para o seu crescimento e multiplicao. Para que possam fazer
a sntese de sua prpria matria nutritiva, devem dispor de fontes de carbono
(protenas e acares), fontes de nitrognio (peptonas) e fontes de energia. So
tambm necessrios alguns sais inorgnicos, vitaminas e outras substncias
que favorecem o crescimento. Alm de nutrientes, igualmente necessrio
que as condies de oxignio (presena ou ausncia), pH e presso osmtica
sejam adequadas ao cultivo do microrganismo.
8.4.1 Classificao dos meios de cultivo

a) Quanto ao estado fsico
Meios lquidos so aqueles em que os nutrientes esto dissolvidos em
uma soluo aquosa. O crescimento bacteriano, nesse meio, muda seu
aspecto, ou seja, o meio sofre uma turvao.
Meios semisslidos so aqueles que possuem, na sua composio,
alm dos nutrientes, uma pequena porcentagem de gar, polissacardeo
proveniente de algas marinhas. So geralmente utilizados em tubos e, a
partir desse tipo de cultura, possvel observar a motilidade bacteriana.
Meios slidos so aqueles que possuem uma porcentagem maior de
gar (2%), alm dos nutrientes. Podem ser dispostos em tubos ou em
Placas de Petri, dependendo da finalidade. Atravs do meio slido em
placas de Petri, possvel, utilizando-se a tcnica do esgotamento, conseguir o isolamento de colnias bacterianas. o meio ideal para que seja
feito o estudo da morfologia colonial. J a cultura em gar inclinado,
fornece somente o crescimento bacteriano com a obteno de uma biomassa de microrganismos.
b) Quanto funo
Meios simples possuem os componentes essenciais para o crescimento de microrganismos pouco exigentes. Ex.: caldo simples.
Meios complexos so adicionadas ao meio simples substncias enriquecedoras como sangue, soro, ovo, extrato de leveduras, etc. Ex.: gar
sangue.
91
e-Tec Brasil
Meios seletivos so aqueles que favorecem o desenvolvimento de

determinados microrganismos em detrimento de outros, geralmente
pela adio de substncias inibidoras. Ex.: gar Salmonella-Shigella.
Meios diferenciais permite o desenvolvimento de grupos de microrganismos com caractersticas relativamente definidas, o que permite diferenciar
um grupo ou uma espcie de microrganismo. Ex.: gar MacConkey.
Observao
Os meios de cultivo so preparados e armazenados seguindo um rigoroso
controle de qualidade, pois devem ser mantidas todas as suas propriedades
nutricionais e garantida a esterilidade at o momento de sua utilizao.
8.5 Tcnicas de semeadura

A escolha da tcnica para o cultivo de microrganismos em condies laboratoriais varia de acordo com o tipo de meio de cultura e a finalidade do cultivo,
porm algumas regras devem ser seguidas nas inoculaes:
a) A agulha e ala bacteriolgica devem ser esterilizadas por flambagem antes e aps qualquer cultivo. Deve-se tomar cuidado para esfri-las antes
da coleta.
b) Os recipientes devem sempre ser abertos prximos chama do bico de
Bunsen.
c) Deve-se evitar ao mximo que as tampas dos tubos e placas fiquem abertos sob a bancada durante o cultivo.
Observao
Nunca se deve colocar o tampo do tubo sobre a bancada.
As alas e agulhas bacteriolgicas so feitas de fio de platina ou nquel-cromo.
e-Tec Brasil
92
Microbiologia Geral
8.5.1 Semeadura da amostra em superfcie

a) Tcnica I Meio lquido
Primeiro, mergulha-se a ala de platina esterilizada na cultura bacteriana.
Em seguida, a ala carregada de bactrias deve ser mergulhada no tubo
com o meio de cultivo e agita-se a ala (Figura 8.1).
O objetivo dessa tcnica observar a respirao das bactrias.
Figura 8.1: Esquema da tcnica de semeadura em meio lquido

Fonte: CTISM
b) Tcnica II Meio semisslido

Primeiro, mergulha-se a agulha de nquel-cromo esterilizada na cultura
bacteriana. Em seguida, feita uma injeo com a agulha carregada
de bactrias no meio de cultivo semisslido (Figura 8.2).
O objetivo dessa tcnica observar a motilidade das bactrias.
93
e-Tec Brasil
Figura 8.2: Esquema da tcnica de semeadura em meio semisslido

Fonte: CTISM
c) Tcnica III Meio slido (gar inclinado)

Primeiro, mergulha-se a ala de platina esterilizada na cultura bacteriana;
depois, encosta-se levemente a ala no tubo com o meio de cultura na
parte mais baixa do plano inclinado e eleva-se, fazendo estrias na superfcie do gar (Figura 8.3).
O objetivo dessa tcnica obter uma concentrao de massa bacteriana.
Figura 8.3: Esquema da tcnica de semeadura em meio slido (gar inclinado)

Fonte: CTISM
e-Tec Brasil
94
Microbiologia Geral
d) Tcnica IV Meio slido (placa de Petri tcnica do esgotamento)

Divide-se a placa de Petri em trs partes, fazendo linhas com a caneta
retroprogetor na parte de baixo da placa.
Mergulha-se a ala de platina esterilizada na cultura bacteriana.
Devem ser feitas estrias em cada diviso, respeitando as linhas e utilizando da melhor forma possvel toda a superfcie da placa (Figura 8.4).
O objetivo dessa tcnica obter (isolar) culturas puras de amostras que
contenham microbiota mista, sendo igualmente til para o estudo da
morfologia colonial.
Figura 8.4: Esquema da tcnica de semeadura em meio slido (placa de Petri tcnica
do esgotamento)
Fonte: CTISM
e) Tcnica V Meio slido (placa de Petri tcnica de Pour-Plate)

Semear, com pipeta esterilizada, 0,1ml de suspenso contendo bactrias, no fundo da placa de Petri esterilizada.
Verter o meio de cultura (gar simples) dissolvida a 40 45C.
Submeter a placa a movimentos rotatrios suaves, com a finalidade de
misturar o inculo com o gar.
Esperar solidificar o meio.
95
e-Tec Brasil
O objetivo da tcnica de semeadura em Pour-Plate obter colnias isoladas (qualitativo) ou realizar contagem de colnias em placas (quantitativo).
Nessa tcnica, deve-se tomar cuidado para no adicionar o meio em temperatura elevada sobre o inculo, pois isso poder matar as bactrias.
8.6 Mtodo do Nmero Mais Provvel (NMP)

O mtodo do NMP permite calcular o nmero de um microrganismo especfico
numa amostra, utilizando tabelas de probabilidade.
Diluies decimais da amostra so inoculadas em sries de tubos contendo
meio lquido seletivo (Figura 8.5). Os tubos so positivos quando tm crescimento e/ou produo de gs de fermentao.
Figura 8.5: Diluies decimais da amostra inoculadas em sries de tubos contendo

meio lquido seletivo
Fonte: CTISM
e-Tec Brasil
96
Microbiologia Geral
A densidade bacteriana determinada pela combinao de resultados positivos e negativos numa tabela designada NMP.
Esse mtodo constitudo por trs testes:
a) Teste presuntivo;
b) Teste confirmativo;
c) Teste completo.
O teste presuntivo fornece uma estimativa preliminar da densidade do grupo
bacteriano baseada no enriquecimento em meio minimamente restritivo. Os
resultados deste teste no podem ser usados sem confirmao posterior.
O teste confirmativo a segunda etapa do NMP. Os tubos considerados
positivos no teste anterior so inoculados em tubos de meio mais seletivo e
inibidor. As reaes positivas so lidas e a densidade calculada com a ajuda
da tabela NMP.
O teste completo a terceira etapa. utilizada apenas na determinao do
nmero de coliformes totais. Os tubos positivos do teste anterior so submetidos a testes adicionais para isolamento e identificao dos microrganismos.
Devido morosidade deste teste, ele, normalmente, no utilizado.
Resumo
Nessa aula, tivemos a compreenso de como realizar algumas provas bioqumicas e tcnicas de enumerao e deteco dos microrganismos, as quais
exigem uma boa carga de conhecimento em microbiologia.
1. Para que servem as provas bioqumicas?
2. Quando a prova de catalase considerada positiva?
3. Quando a prova da citocromo-oxidase considerada positiva?
4. Por que as leituras das provas fermentativas devem ser feitas em, no
mximo, 24 horas?
97
e-Tec Brasil
5. Comente sobre a prova vermelho de metila (VM).

6. Descreva a prova de motilidade.
7. O que so meios de cultivos ou meios de cultura?
8. Classifique os meios de cultivos:
a) Quanto ao estado fsico.
b) Quanto funo.
9. Cite as regras que devem ser seguidas durante as inoculaes.
10. Diferencie as tcnicas de semeaduras em meio lquido, em meio semisslido e em meio slido.
11. Comente sobre o mtodo do nmero mais provvel (NMP).
e-Tec Brasil
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Microbiologia Geral
Referncias
ALBERTS, B.; BRAY, O.; JOHNSON, A.; LEWIS, J.; RAFF, M.; ROBERTS, K.; WALTER, P.
Fundamentos da Biologia Celular. 2. ed. Porto Alegre: Artmed, 2006.
AMABIS, J. M.; MARTHO, G. R. Biologia. 2 srie. V. 2. So Paulo: Moderna, 2004.
BIER, O. G.; MOTTA, W. D.; VAZ, N. M. Imunologia Bsica e Aplicada. 2. ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, 1977.
BIER, O. G. Microbiologia e Imunologia. 3. ed. So Paulo: Melhoramentos, 1984.
BLACK, J. G. Microbiologia: fundamentos e perspectivas. 4. ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2002.
DAVIS, S.; BURNS, R. G. Decolorization of Phenolic Effluents by Soluble and
Immobilized Phenol Oxidases. Applied Microbiology and Biotechnology, 1990. V. 32,
p. 721-726.
JAWETZ, E.; MELNICK, J. L.; ADELBERG, E. A. Microbiologia Mdica. 21. ed. Rio de
Janeiro: Guanabara Koogan, 2000.
JUNQUEIRA, Luiz C.; CARNEIRO, Jos. Biologia Celular e Molecular. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 2005.
MADIGAN, M. T.; MATINCO, J. N.; PARKER, J. Brock Biology of Microorganisms. Upper
Saddle River, New Jersey: Prentice Hall, 2003.
PELCZAR Jr, M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia: conceitos e aplicaes. V.
1. So Paulo: Makron Books, 1996.
PELCZAR Jr., M. J.; CHAN, E. C. S.; KRIEG, N. R. Microbiologia: conceitos e aplicaes. V.
2. So Paulo: Makron Books, 1997.
PUTZKE, J.; PUTZKE, M. T. L. Os Reinos dos Fungos. Santa Cruz do Sul: EDUNISC, 1998.
RAVEN, P. H.; EVERT, R. F.; EICHHORN, S. E. Biologia Vegetal. 6. ed. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 2001, 728p.
RIBEIRO, M. C.; SOARES, M. M. S. R. Microbiologia Prtica: roteiro e manual bactrias
e fungos. So Paulo: Atheneu, 1993.
TORTORA, J. Microbiologia. 8. ed. Porto Alegre: Artmed, 2005.
TRABULSI, L. R.; ALTHERTHUM. F.; GOMPERTZ. O. F.; CANDEIAS, J. A. N. Microbiologia.
4. ed. So Paulo: Atheneu, 2005.
TRABULSI, L. R.; TOLEDO, M. R. F. de. Microbiologia. 2. ed. So Paulo: Atheneu, 1996.
99
e-Tec Brasil
Currculo do professor-autor
Darlene Ana de Paula Vieira Professora do Instituto Federal de Educao,
Cincia e Tecnologia de Gois IFGois, atuando na rea biolgica. Formada
em biologia pela Pontifcia Universidade Catlica de Gois (1998), com
mestrado em Biologia pela Universidade Federal de Gois (2006). Acumulou
experincia profissional de mais de 14 anos na rea de educao. Iniciou as
suas atividades profissionais em 1994, como professora da rede estadual
de educao.
Nayara Cludia de Assuno Queiroz Fernandes atua como Tcnica em
Laboratrio de Cincias no Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia
de Gois. Possui graduao em Farmcia pela Universidade Federal de Gois
(2005), com especializao em Cincias Biolgicas pelas Faculdades Integradas
de Jacarepagu (2009). Acumulou experincia profissional na rea de Farmcia
Clnica, com aperfeioamento em Farmacologia Clnica pelo Instituto de Ensino
Ethosfharma (2006).
e-Tec Brasil
100
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Darlene Ana de Paula Vieira

Presidncia da Repblica Federativa do Brasil

Comisso de Acompanhamento e Validao

Ficha catalogrfica elaborada por Maria Aparecida Rodrigues de Souza

Caderno elaborado em parceria entre o Instituto Federal de

Apresentao e-Tec Brasil

Saiba mais: oferece novas informaes que enriquecem o

Aula 1 Principais reas da microbiologia e microscopia

1.2 Microbiologia bsica

1.3 Microbiologia aplicada

1.4 Caractersticas dos principais grupos de microrganismos 16

2.2 A clula: unidade fundamental da vida que se ligam ao DNA. 23

2.5 Organelas citoplasmticas

Aula 3 Bactrias: morfologia e estruturas

3.3 Morfologia: tamanho, forma e arranjos bacterianos

3.4 Estruturas externas da clula bacteriana

3.5 Membrana plasmtica modelo mosaico fluido

3.6 Estruturas internas da clula bacteriana

Aula 4 Bactrias: reproduo, nutrio e crescimento

4.2 Reproduo bacteriana

4.3 Nutrio das bactrias

4.4 Crescimento das bactrias

Aula 5 Fungos (leveduras): morfologia e estruturas

5.4 Estruturas da clula da levedura

Aula 6 Fungos (leveduras): reproduo, nutrio e crescimento 67

6.3 Nutrio das leveduras

6.4 Crescimento das leveduras

Aula 7 Metabolismo e cintica dos microrganismos

7.3 Microrganismos para aplicao em processos industriais

7.4 Cintica dos processos fermentativos

7.5 Mtodos para quantificao do crescimento

Aula 8 Provas bioqumicas e cultura de microrganismos

8.3 Prova da motilidade

8.4 Meios de cultivo

8.5 Tcnicas de semeadura

8.6 Mtodo do Nmero Mais Provvel (NMP)

8.2 Provas bioqumicas

Para saber mais sobre a forma

Figura A: Exemplos de microorganismos: (a) Archeae; (b) Bactria; (c ) Fungo Penicilium;

Apostila didtica, composta

Compreender que as clulas so

Apostila didtica, composta

Conhecer as bactrias: seu tamanho e

Apostila didtica, composta

3. Bactrias: morfologia e estrutura

Compreender os tipos de reproduo

Apostila didtica, composta

Conhecer os fungos: suas principais

Apostila didtica, composta

6. Fungos (leveduras): reproduo,

Compreender os tipos reprodutivos das

Apostila didtica, composta

Compreender o metabolismo e a cintica

Apostila didtica, composta

Conhecer princpios e procedimentos de

Apostila didtica, composta

4. Bactrias: reproduo, nutrio e

5. Fungos (leveduras): morfologia e

8. Provas bioqumicas e cultura de

Aula 1 Principais reas da

Meditai se s as naes fortes podem fazer

1.2 Microbiologia bsica