Professional Documents
Culture Documents
PRIMERA PRCTICA
PREPARACION, FIJACION Y COLORACION BACTERIAS
Pgina 1 de 3
DEFINICIN
Para observar las bacterias teidas es necesario, en primer lugar, hacer un
frotis de las bacterias y fijarlo.
Para hacer un frotis, cuando se parte de un cultivo de bacterias en medio
lquido, se toma una o varias cargas directamente con el asa y se extienden
sobre el portaobjetos. Si se parte de un cultivo en medio slido, debe
depositarse previamente una gota de agua sobre el portaobjetos. A
continuacin, se toma con el asa una pequea parte de la colonia y se dispersa
en la gota de agua, realizndose la extensin como en el caso anterior.
La fijacin tiene por objeto provocar modificaciones en la composicin fsicoqumica de la bacteria (coagulacin de las protenas, etc.) de forma que sta
conserve definitivamente una estructura similar a la que tena en vivo, sin
deformarse como consecuencia de los tratamientos a que se ver sometida
durante la tincin. Por otra parte la fijacin impide el arrastre de los
microorganismos al quedar estos adheridos al portaobjetos y hace que la pared
celular sea ms permeable a los colorantes.
Para la fijacin pueden utilizarse agentes qumicos (formol, metanol) o el calor.
Empleando el calor, una vez seco, se pasa dos o tres veces sobre la llama, con
la preparacin hacia arriba, para no quemarla. Hay que procurar que el calor
nunca sea excesivo, pues se alteraran las estructuras de la bacteria: en ningn
momento el portaobjetos, colocado sobre el dorso de la mano, debe quemar.
MATERIALES
Portaobjetos.
Mechero Bunsen.
Asa de siembra.
Tubos con cultivos de bacterias Gram-positivas y Gram-negativas.
Cubetas de tincin o similar.
Colorantes para las tinciones: Cristal violeta, Lugol, Alcohol-Acetona (1:1) y
Fucsina.
c)
Observaciones al microscopio
1. Limpiar cuidadosamente los objetivos y el ocular del microscopio
2. Colocar los portaobjetos en la platina y empezar a localizar la
preparacin con el objetivo de 10x, posteriormente pasar al de 40x.
Para observar con el objetivo de 100x colocar previamente una
pequea gota de aceite de inmersin sobre la preparacin
3. Al finalizar las observaciones, limpiar cuidadosamente el objetivo con
el papel adecuado para eliminar el exceso de aceite.
RESULTADOS
Reportar las observaciones de forma, agrupacin, color y tamao relativo
completando el cuadro. Realizar los dibujos de la morfologa de cada uno de
los microorganismos y colorearlos.
10x
TINCION SIMPLE
Descripcin
cultivo:
Forma:
Agrupamiento:
40x
100x
TINCION DE GRAM
Descripcin
cultivo:
Forma:
Agrupamiento:
Reaccin
de
Gram:
TINCION
DE
ENDOSPORAS
Descripcin
cultivo:
Forma:
Agrupamiento: