ESPECTROFOTOMETRIA

DEFINICION
La espectrofotometra es un mtodo analtico que utiliza los efectos de la interaccin de las
radiaciones electromagnticas con la materia (tomos y molculas) para medir la absorcin o la
transmisin de luz por las sustancias.
O La espectrofotometra se refiere a los mtodos, cuantitativos, de anlisis qumico que utilizan la
luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Se conocen como mtodos
espectrofotomtricos y, segn sea la radiacin utilizada, como espectrofotometra de absorcin
visible (colorimetra), ultravioleta, infrarroja.
FUNDAMENTO
La espectrofotometra es uno de los mtodos de anlisis ms usados, y se basa en la relacin que
existe entre la absorcin de luz por parte de un compuesto y su concentracin. Cuando se hace
incidir luz monocromtica (de una sola longitud de onda) sobre un medio homogneo, una parte de
la luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida, como consecuencia de la intensidad del
rayo de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad
del rayo de luz transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorcin a medir, la muestra
puede estar en fase lquida, slida o gaseosa. En las regiones visibles y ultravioleta del espectro
electromagntico, la muestra es generalmente disuelta para formar una solucin. Cada sustancia
tiene su propio espectro de absorcin, el cual es una curva que muestra la cantidad de energa
radiante absorbida, Absorbancia, por la sustancia en cada longitud de onda del espectro
electromagntico, es decir, a una determinada longitud de onda de la energa radiante, cada sustancia
absorbe una cantidad de radiacin que es distinta a la que absorbe otro compuesto (Fig. 1)
ESPECTROSCOPIA VISIBLE
La espectroscopia visible es una de las tcnicas ms ampliamente y ms frecuentemente empleadas
en el anlisis qumico.
Para que una substancia sea activa en el visible debe ser colorida: el que una substancia tenga color,
es debido a que absorbe ciertas frecuencias o longitudes de onda del espectro visible y transmite
otras ms. Por ejemplo: una solucin es amarilla debido a que dentro de la regin visible absorbe
radiacin en el rango de 435 a 480 nm. En este rango de longitud de onda se encuentra el color azul
del visible, por lo que este compuesto absorbe el color azul y transmite los colores complementarios
que dan origen al color amarillo de la solucin mencionada.
La absorcin y transmisin de las longitudes de onda de la regin visible de esta parte del espectro
no es la misma en substancias que den diferentes tonalidades de amarillo, por lo que podemos tener
una gama diferente de tonalidades como: amarillo canario, amarillo limn, amarillo plido, etc.
ESPECTROFOTMETRO
La palabra espectrofotmetro se deriva de la palabra latina spectrum, que significa imagen, y de la
palabra griega phos o photos, que significa luz. El espectrofotmetro, construido mediante procesos
avanzados de fabricacin, es uno de los principales instrumentos diagnsticos y de investigacin
desarrollados por el ser humano. Utiliza las propiedades de la luz y su interaccin con otras
sustancias, para determinar la naturaleza de las mismas. En general, la luz de una lmpara de
caractersticas especiales es guiada a travs de un dispositivo que selecciona y separa luz de una
determinada longitud de onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad de la luz que sale de la
muestra es captada y comparada con la intensidad de la luz que incidi en la muestra y a partir de
esto se calcula la transmitancia de la muestra, que depende de factores como la concentracin de la
sustancia.

PROPSITO DEL EQUIPO

El espectrofotmetro se usa en el laboratorio con el fin de determinar la concentracin de una
sustancia en una solucin, permitiendo as la realizacin de anlisis cuantitativos.
PRINCIPIOS DE OPERACIN
Como principio bsico se considera que la luz es una forma de energa electromagntica, que en el
vaco tiene una velocidad constante [C] y universal de aproximadamente 3 x 108 m/s. En cualquier
otro medio (transparente) por el que pase la luz, su velocidad ser ligeramente
inferior y podr calcularse mediante la siguiente ecuacin:
Donde:
v = velocidad a travs del medio por el que pasa la luz
n = ndice de refraccin del medio, cuyo valor oscila, por lo general, entre 1,0 y
2,5
La energa electromagntica dispone de una muy amplia gama de longitudes de onda (espectro
electromagntico).
La luz, al pasar o interactuar con diversos medios, presenta una serie de fenmenos, entre los que
destacan la reflexin, refraccin, difraccin, absorcin, difusin, polarizacin y otros que son
utilizados en diversos instrumentos y dispositivos. La siguiente tabla muestra los rangos de longitud
de onda en donde se utiliza el espectro luminoso para realizar pruebas de espectrofotometra.
Regin del espectro
luminoso
Ultravioleta
Ultravioleta cercano
Luz visible
Infrarrojo cercano
Infrarrojo medio
Infrarrojo lejano

Rango de la longitud
de onda
10-200 nm (nanmetros)
200-280 nm
380-780 nm
780-3 000 nm
3 000-20 000 nm
30 000-300 000 nm

Con respecto a la interaccin de la luz con la materia, el siguiente esquema ayuda a entender la
complejidad de los fenmenos que ocurren:

Interaccin de la luz con la materia

LEY DE BEER LAMBERT.

1.- Ley de Lambert. :
Esta ley establece que cuando pasa luz monocromtica por un medio homogneo, la disminucin de
la intensidad del haz de luz incidente es proporcional al espesor del medio, lo que equivale a decir
que la intensidad de la luz transmitida disminuye exponencialmente al aumentar aritmticamente el
espesor del medio absorbente (Fig. 2):
La Ley de Lambert dice que la cantidad de luz absorbida por un objeto depende de la distancia
recorrida por la luz.
2.- Ley de Beer :
La intensidad de un haz de luz monocromtica disminuye exponencialmente al aumentar
aritmticamente la concentracin de la sustancia absorbente, cuando este haz pasa a travs de un
medio homogneo (Fig. 3).
La Ley de Beer afirma que la cantidad de luz absorbida por un cuerpo depende de la concentracin
en la solucin.
Por ejemplo, en un vaso de vidrio tenemos agua con azcar disuelta y en otro vaso tenemos la
misma cantidad de agua pero con mayor cantidad de azcar en solucin. El detector es una celda
fotoelctrica, y lo que se mide es la concentracin de la solucin de azcar.
LEY DE LAMBERT-BEER
Es el resumen de dos leyes que nos permiten relacionar la fraccin de radiacin absorbida con la
concentracin del analito y el espesor del medio. Se cumple para cualquier proceso de absorcin en
cualquier zona del espectro y se basa en que cada unidad de longitud a travs de la cual pasa la
radiacin absorbe la misma fraccin de radiacin. Identifica la relacin existente entre la
concentracin de la muestra y la intensidad de la luz transmitida a travs de la misma.
Con relacin a la ley en mencin hay implcitos dos conceptos:
TRANSMITANCIA [T]. La transmitancia se define como la cantidad de energa que atraviesa un
cuerpo en determinada cantidad de tiempo.
ABSORBANCIA [A]. Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo traslcido, una parte de esta
luz es absorbida por el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho cuerpo. A mayor cantidad de
luz absorbida, mayor ser la absorbancia del cuerpo, y menor cantidad de luz ser transmitida por
dicho cuerpo.
Si tenemos una sustancia cualquiera, X, que absorbe en el rango visible, debido a su configuracin
electrnica no lo har a una nica energa sino que podr absorber en un rango de energas con
distinta eficiencia en cada una de ellas, esto da lugar al espectro de absorcin de esta sustancia que
indica la intensidad de luz absorbida de cada longitud de onda o energa.
Cada sustancia tiene un espectro de absorcin caracterstico que depender de la configuracin
electrnica de la molcula, tomo o in y de los posibles trnsitos electrnicos que se puedan
producir con la radiacin que incide sobre ella.
COMPONENTES DEL ESPECTROFOTMETRO
El esquema que se presenta a continuacin describe la interrelacin de los diversos componentes de
un espectrofotmetro. Los ms importantes son los siguientes:
1. La fuente luminosa
2. El monocromador
3. El portador de muestras
4. El sistema detector
5. El sistema de lectura

Se recuerda que los componentes mencionados corresponden a los bsicos o generales de este
instrumento y no a los que hayan sido incorporados por diversos fabricantes como consecuencia del
avance tecnolgico. Una breve explicacin de los mismos se encuentra a continuacin del esquema.

APLICACIONES
- Determinar la cantidad de concentracin en una solucin de algn compuesto utilizando las
frmulas ya mencionadas.
- Para la determinacin de estructuras moleculares.
- La identificacin de unidades estructurales especficas ya que estas tienen distintos tipos de
Absorbancia (grupos funcionales o isomeras).
- Determinar constantes de disociacin de indicadores cido-base.
BIBLIOGRAFIA
- http://www.espectrometria.com/espectrometra_ultravioleta-visible
- https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/FQpractica4.pdf
- http://www.uhu.es/tamara.garcia/quimI/apuntes/TEMA%203.pdf
- http://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR
%C3%8DA.pdf
- http://www.ugr.es/~quiored/espec/uv.htm
- http://materias.fi.uba.ar/6305/download/Espectrofotometria.pdf
- http://campus.usal.es/~quimfis/apoyo/Carmen/Practicas/Espectrofotometria.PDF
- http://ocw.uc3m.es/ingenieria-quimica/quimica-ii/practicas-1/PR-F-Anexos.pdf
- http://sstti.ua.es/es/instrumentacion-cientifica/unidad-de-rayos-x-de-monocristal-yespectroscopias-vibracional-y-optica/espectroscopia-ultravioleta-visible.html
- http://www.basculasbalanzas.com/instrumentos-de-medicion/espectrofotometria-visible.html
- https://www.thermoscientific.es/products/ultraviolet-visible-visible-spectrometry-uv-visvis.html
- https://www.uam.es/docencia/qmapcon/QUIMICA_GENERAL/Practica_4_Colorimetria_Le
y_de_Lambert_Beer.pdf