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17.1 INTRODUO
As plantas so um valioso recurso natural para obteno, de diversos produtos qumicos
com aplicaes medicinais, na indstria alimentar, na indstria de detergentes, de
curtumes, pesticidas, tintas entre outras. Usualmente estes compostos so obtidos por via
extractiva em que a indstria qumica tem tido um papel determinante. Cerca de 25% dos
medicamentos farmacuticos que hoje se utiliza, so obtidos por extraco qumica a
partir da planta in vivo. Estes produtos so, em geral, compostos com uma estrutura
qumica no-proteica e complexa. Os compostos de origem vegetal mais interessantes do
ponto de vista comercial so aqueles em que a sntese qumica, devido complexidade da
estrutura molecular, pouco vivel quer por razes tecnolgicas ou econmicas, ou em
que a sntese realizada por microrganismos no seja possvel.
A utilizao da tecnologia de culturas de clulas vegetais aparece como uma via
alternativa produo dos chamados produtos naturais obtidos por sntese qumica ou
microbiana e, particularmente, no caso em que a espcie vegetal seja rara ou se encontre
em extino. As culturas de clulas em suspenso representam um importante recurso
para a obteno de produtos vegetais de valor acrescentado elevado, desde que a
viabilidade econmica do processo seja demonstrada.
A possibilidade de obter em laboratrio produtos naturais, em condies controladas e
reprodutveis, independentemente da sazonalidade dos ciclos agrcolas e com uma
tecnologia mais limpa do que a sntese qumica, so importantes vantagens que permitem
encarar esta via com potencial inovador na indstria biotecnolgica. Contudo, apenas um
reduzido nmero de compostos tem sido produzido e comercializado a partir da cultura de
clulas em suspenso.
Na tabela 17.1 esto indicados alguns produtos vegetais e respectivos processos
biotecnolgicos, que se encontram actualmente comercializados ou em via de
comercializao. Uma reduzida actividade molecular do composto, ou aspectos da
engenharia do bioprocesso tem condicionado os valores de produtividade volumtrica que
podem variar desde 0,05g/L.dia para a berberina at 0,75g/L.dia para o taxol.
A utilizao de clulas vegetais na biotransformao (Yokoyama, 1996), na produo de
protenas recombinantes, anticorpos e fragmentos de anticorpos recombinantes e
protenas de elevado valor teraputico, como a interleucina humanas IL-2 e IL-4
(Magnuson et al.,1998), ricina (Sehnke & Ferl, 1999) e a 1-antitripsina humana
LIDEL Edies Tcnicas Lda.
Produto
Espcie Vegetal
Aplicao
Berberina
Coptis japonica
STR, 6000 L
Mitsui,
Chemicals.Inc.,Japo
Nino Denk
Corporation, Japo
Samyang Genex Corp,
Coreia
Phyton Inc. USA,
Alemanha.
Mitsui Chemicals, Inc,
Japo
Coop. Res. Centre Ind.
Plant Biopolymers
Kao Corporation,
Japo
Novo Nordisk,
Dinamarca
Medicinal
Mitsui,
Chemicals.Inc.,Japo
Cosmticos
Ginseng
Panax ginseng
(ginseng)
Paclitaxel-genexol Taxus spp.(teixo)
STR, 20 000L,
25 000 L
STR, 32 000 L
Paclitaxel-Taxol
STR, 75 000 L
STR, 200 L
Polissacardeos
Polianthes
tuberosa
-amilase
Glycine max.
STR, 10 000 L
(soja);
Hordeum vulgare
(cevada)
Lithospermum
STR, 200 L,
erythorhizon
750 L
Chiconina
ALR, 1000 L
STR, 4 000 L,
10 000 L
Suplemento
alimentar
Medicinal
Aditivos
alimentares,
medicinal,
cosmticos
Fabrico de
po
Figura 17.1 Clulas em suspenso de Morinda citrifolia (A) (Jeffers et al., 2003) e Centaurea calcitrapa
(B) (Raposo, 2003), com 7 dias de cultura, cultivadas em Erlenmeyer.
30
Dia 0
Frequncia (%)
25
Dia 3
20
Dia 5
15
Dia 7
10
5
7
79 9
-1
10 0 0
01
12 26
61
15 58
82
20 00
02
25 51
13
3 1 17
73
39 99
95
50 02
26
63 33
379 7 9 7
710 100
04 4
12 126
65 5
-1
59
3
63
-
50
-
63
10
60 rpm
Peso Seco (g/L)
250 rpm
6
4
2
0
0
10
12
14
16
18
Tempo (dias)
Figura 17.3 Variao do peso seco ao longo do ciclo de crescimento das clulas em suspenso de C.
calcitrapa, para diferentes condies de agitao e arejamento constante, em reactor biolgico de 2 L
mecanicamente agitado.
100
80
60
40
60 rpm
250 rpm
20
0
0
10
12
14
16
18
Tempo (dias)
Figura 17.4 Viabilidade relativa das clulas em suspenso de C. calcitrapa, para 60 e 100 rpm de agitao,
em reactor biolgico de 2 L mecanicamente agitado.
Com este procedimento obtm-se uma pr-cultura em condies de ser utilizada como
inculo do reactor biolgico de produo de taxol.
Os meios nutrientes utilizados na produo do taxol podem ser os normalmente utilizados
nas culturas de clulas vegetais tais como, o meio Murashige & Skoog (1962), meio
Linsmaier & Skoog (1965), meio Woody Plant (1980), meio Gamborg's B-5 (1976) e
meio Schenk & Hildebrandt (1972), entre outras.
Nestes meios esto presentes fito-hormonas, fonte de carbono, compostos inorgnicos,
vitaminas e aminocidos. As fito-hormonas normalmente usadas so auxinas, como o
cido indolactico (IAA), cido naftaleno-actico (NAA) e o cido 2,4diclorofenoxiactico (2,4-D); as citocianinas usadas so a cinetina, zeatina e a dihidro
zeatina. (0,01-10 M). Como fonte de carbono utilizaram-se dissacardeos, como a
sacarose, maltose e lactose; monossacardeos, como a glucose, frutose e galactose; amido;
ou uma mistura de dois ou mais aucares, usualmente na concentrao de 2-3% (p/v).
Os elementos inorgnicos normalmente usados so fsforo, azoto, potssio, clcio,
magnsio, enxofre, ferro, mangans, zinco, boro, cobre, molibdnio, cloro, sdio, iodo e
cobalto. As vitaminas mais utilizadas so a biotina, tiamina (vitamina B1), piridoxina
(vitamina B6), cido pantotnico, inositol, cido nicotnico. Os aminocidos, so a
glicina, leucina, glutamina, cistena e a fenilalanina (0,1-100 mg/L).
O taxol foi produzido em reactor mecanicamente agitado, equipado com agitadores em
hlice ou de ps, com uma agitao de 40-120 rpm e arejamento de 0,05 vvm. O dimetro
do agitador foi do dimetro interno do vaso e a altura da p do agitador foi da altura
ocupada pelo lquido.
A durao da cultura varia de 15-30 dias, decorrendo a uma temperatura de 25 C. O
coeficiente volumtrico de transferncia de massa de oxignio foi estabelecido no
intervalo de valores entre 1550 h-1, de forma a garantir a oxigenao necessria
produo do composto. Para valores superiores a 50 h-1 verificou-se danificao celular.
O oxignio dissolvido no seio da cultura no dever ser inferior a 30%, sendo a produo
de taxol favorecida para concentraes entre 50-75%. Os valores de agitao e do
coeficiente volumtrico de transferncia de massa estabelecidos esto dependentes da
volumetria do tanque e do tipo de agitador.
Para aumentar a produtividade volumtrica do taxol foi adicionado um precursor do
metabolismo, cido jasmnico ou um derivado metilado deste cido, na concentrao de
100 M.
No final do ciclo de crescimento celular a biomassa separada por filtrao e liofilizada.
O taxol extrado da cultura de clulas utilizando como solvente orgnico, o metanol e
quantificado por HPLC.
A dimenso do tanque
O reactor air-lift tem sido muitas vezes utilizado em cultivo de clulas vegetais. A sua
principal vantagem reside em provocar reduzidas foras de tenso na cultura de clulas
associado ao facto de uma grande simplicidade de operao. Tem uma maior capacidade
de manuteno de assepsia, ao longo do tempo de produo, comparativamente com o
reactor mecanicamente agitado. No entanto, a homogeneizao da cultura pode ser
insuficiente neste tipo de reactores quando se utiliza uma escala industrial ou pr-industrial.
Os reactores air-lift no so adequados para meios celulares de elevada densidade de
biomassa, superiores a 30 g PS/L, visto a baixa eficincia de mistura neste tipo de reactor
poder conduzir a limitaes na homogeneizao do meio e na transferncia de oxignio,
essencial para uma boa resposta biolgica do sistema e elevadas produtividades. Tm tido
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BIBLIOGRAFIA
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