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HUMANO EN LIMA METROPOLITANA. Marchand Pajares, Edgar O.

III.- MATERIAL Y MTODOS

Tesis UNMSM

El trabajo se realiz en la Ciudad de Lima Metropolitana entre los meses

de Junio y Diciembre del ao 2000.
Se tom en consideracin el agua de consumo humano que proviene de
las Aguas superficiales del Ro Rmac y es tratada mediante procesos fsicos y
qumicos en la Planta de La Atarjea. El agua es distribuida a los inmuebles de
la ciudad a travs de la Red pblica. Los inmuebles que tienen uno o dos pisos
carecen de almacn de agua, los que tienen ms pisos reciben el agua en una
cisterna del subsuelo de donde es impulsada a un tanque elevado para luego
ser distribuida mediante una red interna de tuberas a los grifos de los
diferentes pisos.
A su vez, se tom en consideracin el agua de consumo humano
proveniente de pozos subterrneos que es distribuida por camiones cisterna a
zonas urbano-marginales.
1. - INSPECCIN HIGINICO-SANITARIA
En el caso de agua de inmuebles se realiz un muestreo aleatorio en
edificaciones (viviendas, restaurantes, hoteles, instituciones pblicas, fbricas,
etc.) que contaban con sistemas de almacenamiento y distribucin de agua
(tanques y cisternas). El estudio incluy la Inspeccin higinico-sanitaria del
Sistema de Almacenamiento y distribucin para lo cual se elabor una ficha de
inspeccin tomando en cuenta puntos crticos como presencia de tapa
adecuada, presencia de reborde, estado higinico de los almacenes de agua,
etc. En el caso de agua de pozo, se realiz un muestreo aleatorio de pozos,
surtidores, camiones cisterna y reservorios de agua extradomiciliarios en zonas
urbano marginales de los Conos Norte, Sur y Este de la Gran Lima. Se
realizaron inspecciones higinico-sanitarias en los lugares de muestreo para lo

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cual se elaboraron fichas de inspeccin higinico-sanitaria tomando en

consideracin puntos crticos tales como material de construccin de los pozos
y reservorios de agua, profundidad y el estado higinico de los mismos.
Adems se evaluaron las condiciones higinico-sanitarias del ambiente
circundante tomando en consideracin aspectos como presencia de letrinas,
aguas servidas, animales domsticos, basurales y tipo de suelo. As mismo en
las viviendas se evaluaron las condiciones de almacenamiento del agua. En
ambos casos (inmuebles y pozos) se dejaron recomendaciones para lograr
mejorar las deficiencias higinico-sanitarias.
2. -MUESTREO
Se tomaron las muestras de agua de acuerdo al Standard Methods for
the Examination of Water and Wastewater de la APHA (APHA, 1995). Se midi
el Cloro Libre residual in situ mediante la tcnica del DPD (N, N dietil-pfenildiamina)-Aquamerck 11100 y el pH. Se tomaron muestras de agua (200
mL aproximadamente) en frascos estriles con tapa rosca SCHOTT DURAN
que contenan 0,1 mL de Tiosulfato de Sodio al 10%.
2.1.- AGUA DE INMUEBLES
El muestreo se realiz en los distritos de Rmac, San Martn de Porres,
Cercado, Lince, La Victoria, Miraflores y Surco.
Se tomaron muestras correspondientes al agua de la Red pblica que
descarga en la cisterna y muestras de grifo de diferentes pisos del inmueble
dependiendo de la complejidad del sistema. Se desinfectaron los puntos de
descarga con alcohol para luego dejar fluir el agua durante 2 a 3 minutos,
tiempo suficiente para permitir limpiar la lnea de servicio.

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2.2.- MUESTRAS PROVENIENTES DE POZOS DE AGUA SUBTERRNEA.

El muestreo se realiz en zonas rurales de Comas, Puente Piedra,
Carabayllo, San Juan de Lurigancho, Chorrillos, San Juan de Miraflores, Villa
Mara del Triunfo, Villa El Salvador, Lurn y Pachacamac.
El muestreo se realiz introduciendo el frasco en el fondo del pozo con
ayuda de una cuerda o soguilla, en surtidores al igual que en camiones
cisterna se tomaron muestras directamente de la manguera de descarga. En
muestras de agua almacenadas en tanques extradomiciliarios, se tomaron
muestras

del

punto

de

descarga

del

almacn

utilizando

el

mismo

procedimiento que en inmuebles.

3. - ANLISIS MICROBIOLGICO
Las muestras fueron llevadas al laboratorio en una caja trmica (cooler)
a 4C, para realizar la deteccin y numeracin de grmenes siguiendo las
recomendaciones de los Mtodos Standard (APHA, 1995), considerndose los
siguientes parmetros: Bacterias Heterotrficas por el mtodo de recuento en
placa,

Numeracin

de

Coliformes

Totales

Coliformes

fecales

(Termotolerantes) por el mtodo de Tubos Mltiples (NMP), Numeracin de

Estreptococos fecales y Enterococos por el mtodo de Tubos mltiples (NMP) y
Deteccin y numeracin de Pseudomonas aeruginosa por el mtodo de tubos
mltiples (NMP).

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3.1. - RECUENTO DE BACTERIAS HETEROTRFICAS (APHA, 1995)

Se utiliz la tcnica de incorporacin (pour plate method). El mtodo
consisti en adicionar un volumen de 1 mL de la muestra y/o sus diluciones a
una placa petri estril de 15mm X 100 mm (por duplicado) para luego verter
agar plate count licuado y temperado (a 45C) a la placa, homogeneizar de
acuerdo a los mtodos de rotacin, dejar solidificar e incubar las placas
invertidas a 35C durante 48 horas.
3.2. - NUMERACIN DE COLIFORMES TOTALES Y TERMOTOLERANTES
POR EL MTODO DE TUBOS MLTIPLES (NMP). (APHA, 1995)
El mtodo consisti en utilizar como medio de cultivo para la prueba
presuntiva, Caldo Lauril Triptosa en volmenes de 10 mL de concentracin
simple (X), para inculos de 1 mL y de doble concentracin (2x) para inculos
de 10 mL.
Luego de inoculada la muestra y/o sus diluciones, se incub a 35C por
24-48 horas, considerndose como positivos los tubos con presencia de gas y
turbidez.
De los tubos positivos, se transfiri una asada a tubos con Caldo Brila y
Caldo EC. Se incub

a 35C por 24-48 horas los tubos de Caldo Brila y a

44,5C durante 24 horas los tubos con Caldo EC.

La formacin de gas en tubos de Caldo Brila y Caldo EC, se consider
como positivo para Coliformes Totales y Coliformes Fecales (Termotolerantes)
respectivamente. Luego se hizo la lectura del Nmero ms Probable (NMP) en

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las tablas correspondientes, estimndose como Nmero ms probable (NMP)

de Coliformes Totales por 100 mL y NMP de Coliformes Fecales por 100 mL.

3.3. - NUMERACIN DE ESTREPTOCOCOS FECALES Y ENTEROCOCOS

POR

EL

MTODO

DE

TUBOS

MLTIPLES

(NMP).

(APHA

1995,

modificado por Vergaray y Mndez (2001))

Se inocularon series de tubos con Caldo Azida Glucosa (de concentracin

doble y simple) de igual forma que para el grupo coliforme, incubndose a
35C durante 24-48 horas. Las lecturas positivas correspondieron a tubos con
presencia de turbidez y sedimento. Para la prueba confirmativa, de los tubos
positivos, se sembr el contenido por estras en placas con Agar MEnterococos, incubndose a 35C durante 24-48 horas.
Se

escogieron

colonias

tpicas

(pequeas,

rosadas)

para

luego

transferirlas a tubos con Caldo BHI con NaCl al 6,5%, pH 9,6, crecimiento a
10C y 45C. Los tubos con crecimiento (turbidez) se consideraron positivos
para luego calcular el NMP de Enterococos por 100 mL (FLUJOGRAMA 3).
3.4. - NUMERACIN DE Pseudomonas aeruginosa POR EL MTODO DE
TUBOS MLTIPLES (NMP). (APHA, 1995)

Para la prueba presuntiva se utiliz Caldo Asparragina (doble y simple

concentracin) procediendo de la misma forma que la tcnica para coliformes.
Se incub a 35-37C durante 24-48 horas. Las lecturas se realizaron con
ayuda de luz Ultravioleta de onda larga (357 nm.) registrndose como
positivos aquellos tubos que produjeron pigmento verde o fluorescencia.

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Con ayuda de un asa de sembr por estras el contenido de los tubos

positivos de la prueba presuntiva en Agar Cetrimide, incubndose a 41,5C
durante 24-48 horas.

De Agar Cetrimide se seleccionaron colonias tpicas (verde azuladas y

fluorescentes a la luz UV), las colonias seleccionadas fueron transferidas a un
cepario con Agar Tripticasa de Soya (TSA) incubndose a 35C por 24 horas.
De cada cepario se realizaron pruebas de catalasa y

oxidasa,

seleccionndose aquellas que dieron reaccin positiva en ambas. A partir de las

cepas Oxidasa (+) y Catalasa (+) se realizaron las siguientes pruebas
Bioqumicas: crecimiento a 4C, crecimiento a 41,5C, reduccin de nitratos y
Produccin de Piocianina. De las cepas positivas se calcul el Nmero ms
probable (NMP) reportndose como NMP/100 mL de Pseudomonas aeruginosa.
(FLUJOGRAMA 4).

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