Review Jurnal

Jurnal 1 : Isolation and identification of Salmonella from diarrheagenic infants and

young animals, sewage waste and fresh vegetables (Amruta Nair, et al. 2015)
Jurnal 2 : Isolation and identification of Salmonella from curry samples and its
sensitivity to commercial antibiotics and aqueous extracts of Camelia sinensis (L.)
and Trachyspermum ammi (L.) (Tanesh Gunasegaran, et al. 2011)

Pengantar
Penyakit bawaan pada makanan dengan kompleksitas klinis adalah ancaman kesehatan
masyarakat di seluruh dunia dan memiliki dampak ekonomi yang besar di seluruh dunia. penyakit bawaan
makanan disebabkan oleh sekitar 250 patogen termasuk bakteri, virus, dan organisme parasit. spesies
Salmonella adalah yang paling sering dilaporkan menyebabkan penyakit bawaan makanan di kedua
manusia dan hewan. Gastroenteritis yang disebabkan oleh Salmonella non-tipoid kontribusi untuk beban
kesehatan masyarakat global dengan sekitar 93.800.000 kasus per tahun. Infeksi Salmonella sebagian
besar diklasifikasikan menjadi empat jenis klinis. Pertama, gastroenteritis yang disebabkan oleh
Salmonella enterica serovar Typhimurium; kedua, Bakteremia, osteomyelitis, artritis reaktif karena
Salmonella Typhimurium dan infeksi Salmonella enteritidis; ketiga, demam enterik yang disebabkan oleh
Salmonella Typhi dan Salmonella Paratyphi dan terakhir, sebagai carrier pada orang dengan infeksi
sebelumnya. Salmonella non-tipoid berada di peringkat kedua di kontribusinya terhadap penyakit bawaan
makanan dalam negeri diperoleh dan rekening untuk 35% dari rawat inap dan 28% kematian. Dari
berbagai serotipe Salmonella, Salmonella enteritidis, dan Salmonella Typhimurium adalah serotipe yang
paling umum dilaporkan dari kasus klinis pada manusia. Di negara-negara berkembang seperti India,
penyakit karena makanan sebagian besar di bawah dilaporkan; Namun dalam 29 tahun terakhir (19802009) 3485 orang telah terpengaruh dari 37 Salmonella terkait wabah. Mayoritas infeksi pada manusia
dari Salmonella adalah terkait dengan konsumsi makanan yang terkontaminasi seperti unggas, daging
sapi, daging babi, telur, susu, keju, makanan laut, buah-buahan, jus dan sayuran. Sebuah estimasi global
dengan WHO menunjukkan bahwa pada tahun 2005, hampir 1,8 juta orang meninggal karena penyakit
diare terutama karena konsumsi makanan yang terkontaminasi dan air minum. Umumnya non-tipoid
Salmonellosis pada manusia biasanya membatasi diri membatasi untuk saluran pencernaan, tetapi ketika
infeksi menyebar di luar usus, atau ketika orang dengan sistem kekebalan yang terpengaruh,
membutuhkan intervensi terapi yang sesuai dengan antibiotik. Dalam beberapa kali, perhatian utama lain
adalah terjadinya resistensi multi-obat antara Salmonella di bahan makanan. Hal ini diduga bahwa
penggunaan ekstensif antibiotik, terutama dalam produksi ternak, mungkin telah mengakibatkan
meningkatnya angka kejadian resistensi antibiotik dalam makanan karena Salmonella. Terjadinya

resistensi multi-obat yang luas seperti di antara berbagai bakteri patogen, menyajikan keadaan jauh di
dalam pilihan obat. Infeksi Salmonella telah diakui di semua negara, namun tampak lebih menonjol di
bidang peternakan intensif hewan, terutama unggas, sapi, dan ternak babi. Secara umum, kontaminasi
Salmonella adalah terlibat dalam berbagai macam produk dari hewan dan tumbuhan asal. Host utama
untuk Salmonella non-tipoid termasuk ternak, babi, unggas, burung liar (burung camar), dan hewan
peliharaan yang mengeluarkan organisme ini dalam kotoran, yang pada gilirannya, dapat mencemari
berbagai sumber makanan dan lingkungan. Banyak ternak asimtomatik memainkan peran sebagai
pembawa patogen manusia dan kotoran mereka mungkin mengandung konsentrasi tinggi dari organisme
yang jarang terdeteksi selama pemeriksaan ante-mortem rutin. Di India, untuk yang terbaik dari
pengetahuan kita, penelitian mengatasi isolasi, identifikasi dan distribusi Salmonella serotipe dari
berbagai sumber sangat sedikit dan karenanya penelitian ini dilakukan dengan tujuan untuk menentukan
prevalensi dan distribusi pola serotipe Salmonella penting dalam manusia diarrheagenic bayi dan hewan
muda, limbah limbah dan sayuran segar.
Jurnal pertama bertujuan untuk menentukan prevalensi, distribusi, dan identifikasi serotipe
Salmonella pada bayi diarrheagenic dan hewan muda, termasuk limbah limbah dan sayuran segar.
Sedangkan pada jurnal kedua untuk mengetahui prevalensi Salmonella dalam kari dan ciri sensitivitas
antibiotik terhadap isolat. Selain itu, penelitian ini difokuskan pada evaluasi ekstrak tanaman terhadap
makanan ditanggung Salmonella menunjukkan resistensi obat.

Bahan dan metode

Untuk jurnal pertama terlebih dahulu dilakukan persetujuan etis yaitu semua prosedur telah
dilakukan sesuai dengan pedoman yang ditetapkan oleh Komite Etika Kelembagaan dan sesuai dengan
hukum dan peraturan setempat. Dalam kasus bayi manusia, sampel tinja diare secara acak dikumpulkan,
terutama dari perguruan tinggi medis, rumah sakit anak, dan pengaturan rumah, di mana kasus diare yang
diamati. Organisasi Kesehatan Dunia (2009) kriteria untuk episode diare akut dipenuhi oleh semua anak
dievaluasi di rumah sakit, fasilitas perawatan kesehatan, dan rumah. Sampel dikumpulkan hanya setelah
memperoleh informed consent baik dari orang tua bayi atau dengan bantuan praktisi medis. Sampel tinja
diare dari hewan muda dikumpulkan dari apotik Kedokteran Hewan, terorganisir atau peternakan
terorganisir setelah persetujuan yang tepat dari pemilik hewan. Setelah dilakukan persetujuan etis
kemudian dilakukan pengumpulan sampel yaitu sebanyak 550 sampel, dari Telangana, Chennai,
Maharashtra, Goa, Uttar Pradesh, dan Rajasthan terdiri dari 400 sampel tinja dari bayi diarrheagenic (<5
tahun), 50 sampel tinja dari hewan muda diare, 50 sampel sayuran segar yaitu, daun mint, tomat, daun
ketumbar dan 50 sampel dari kotoran, dikumpulkan dan disaring dalam penelitian ini. Semua sampel
kecuali sayuran mentah segar dikumpulkan secara aseptik menggunakan Cary Blair (Hi Media Labs,

Mumbai, India) dan diangkut ke laboratorium dalam waktu seminggu untuk studi isolasi dan identifikasi
lebih lanjut.
Selanjutnya diakukan isolasi Salmonella : Isolasi Salmonella dilakukan seperti yang
direkomendasikan oleh FDA. Secara singkat, 1ml sampel diambil menggunakan swab lalu diinokulasi di
9 ml buffer pepton air (Hi Media) dan diinkubasi pada 37 C selama 18 jam untuk pra-pengayaan.
Selanjutnya, untuk pengayaan selektif 0,1 ml inokulum pra-diperkaya dipindahkan ke 10 ml RappaportVassiliadis kaldu (Hi Media) dan diinkubasi pada 42 C selama 24 jam. Setelah pengayaan, ose yang
penuh (10 ml) inokulum kemudian melesat dari lisin desoxycholate (XLD) agar xylose (Hi Media) dan
diinkubasi pada 37 C selama 24 jam. Koloni Salmonella dugaan (4-5 koloni / piring) muncul lingkaran
merah sedikit transparan dengan pusat hitam dikelilingi oleh zona merah muda-merah pada XLD agar
disaring lebih lanjut untuk karakterisasi biokimia. Selanjutnya identifikasi Salmonella, namun sbelumnya
dilakukan karakterisasi biokimia : Koloni dugaan Salmonella yang lebih mengalami tes biokimia yaitu,
tiga gula besi (TSI), orto-nitrophenyl galaktosidase (ONPG), urease kaldu, indol, metil merah, VogesProskauer dan uji Citrate (IMViC) sesuai standar protokol pengujian yang dijelaskan dalam bakteriologi
Analytical Pedoman FDA. Setelah itu barulah kemudian dilanjutkan dengan Identifikasi isolat genus
Salmonella menggunakan polymerase chain reaction (PCR) : Isolat Salmonella biokimia positif
dikonfirmasikan untuk genus Salmonella dengan menggunakan PCR menargetkan genus spesifik inv A
gen, dengan ukuran amplikon dari 423 bp, menggunakan primer yang dirancang sendiri (Tabel-1). Secara
singkat, DNA diekstraksi dari Salmonella isolat menggunakan ekstraksi kit QIAamp DNA sesuai
petunjuk yang direkomendasikan oleh produsen. amplifikasi gen yang ditargetkan oleh PCR dilakukan
dengan mengikuti campuran reaksi PCR, yang terdiri dari 2,5 ml 10 penyangga PCR (100 penyangga
mM Tris-HCl, pH 8,3 yang mengandung 500 mM KCl, 15 mM MgCl2, dan 0,01% gelatin), 1 ml dari 2,5
mM dNTP mix (konsentrasi akhir 1 mM), 1 ml 50 mM MgCl2, dan 10 pmol dari maju dan mundur
primer (Eurofins Pvt. Ltd, Bangaluru), 1 U Taq DNA polymerase (3B Hitam bio, Spanyol), 4 ml DNA
sebagai template, dan nuklease air gratis untuk membuat volume reaksi 25 uL. PCR amplifikasi dilakukan
di Mastercycler Pro thermocycler (Eppendorf, Jerman). Kondisi bersepeda setelah gradien PCR
dioptimalkan dengan denaturasi awal pada suhu 94 C selama 5 menit, diikuti oleh 35 siklus denaturasi
pada 94 C selama 30 s, anil pada 56 C selama 1 menit, dan ekstensi pada 72 C untuk 1 menit 30
detik, diikuti oleh 10 menit perpanjangan akhir pada 72 C dan tahan pada 4 C. produk PCR diperkuat
diselesaikan dengan elektroforesis gel agarosa, menggunakan 1,5% agarose gel diwarnai dengan ethidium
bromide (0,5 mg / ml) dan divisualisasikan dan didokumentasikan menggunakan sistem UV dokumentasi
gel (UVP Gel Seq Software, Inggris). Kehadiran amplikon di 423 bp dikukuhkan sebagai genus
Salmonella. Dan yang terakhir identifikasi serotipe isolat Salmonella oleh multipleks PCR : Identifikasi
serotipe yaitu Salmonella enteritidis, Salmonella Typhi, dan Salmonella Typhimurium untuk Salmonella

dikonfirmasi isolat dilakukan dengan menggunakan multipleks PCR seperti dijelaskan sebelumnya
dengan sedikit modifikasi. Secara singkat, campuran reaksi PCR yang optimal terdiri dari 2,5 ml 10
penyangga PCR, 3 ml 50 mM MgCl2, 3 ml 2,5 mM campuran dNTP, 1 U Taq polymerase, 10 pmol
masing-masing set maju primer, dan 10 pmol masing-masing set primer terbalik (Eurofins Pvt. Ltd,
Bangaluru), 5 ml dari DNA sebagai template dan nuklease air gratis untuk membuat 25 ml volume reaksi.
Kondisi bersepeda PCR diprogram dengan denaturasi langkah awal dari 5 menit pada 94 C; diikuti oleh
35 siklus, masing-masing dengan denaturasi pada 94 C selama 30 s, anil pada 57 C selama 1 menit.,
ekstensi pada 72 C selama 1 menit 30 detik dan akhirnya ekstensi akhir dilakukan pada 72 C selama 7
menit dan tahan pada suhu 4 C. produk PCR diperkuat diselesaikan dengan elektroforesis gel agarosa,
menggunakan 1,5% agarose gel diwarnai dengan ethidium bromide (0,5 mg / ml) dan divisualisasikan
dan didokumentasikan menggunakan sistem UV dokumentasi gel (UVP Gel Seq Software, Inggris).
Untuk jurnal kedua dilakukan pengumpulan sampel : sebanyak 50 sampel kari dikumpulkan
dari 18 warung makanan yang berbeda di Sungai Petani, Kedah Darul Aman, Malaysia. Sampel tidak
dikumpulkan dalam kantong plastik pra-disterilkan; sebaliknya, semua sampel dikumpulkan
menggunakan kantong plastik yang disediakan oleh mereka restoran dan warung. Metode ini diadopsi
dengan tujuan termasuk kontaminasi mungkin selama penanganan dan kemasan. Kemudian, sampel
tersebut segera dibawa ke laboratorium untuk analisis mikrobiologi. Setelah itu dilakukan isolasi
Salmonella : Setiap sampel dicampur dan diinokulasi ke Salmonella-Shigella (SS) agar menggunakan
penyeka steril dan kemudian diinkubasi pada 35 C selama 48 jam. Koloni Salmonella dugaan kemudian
sub-dibudidayakan oleh melesat ke SS segar agar menggunakan loop inokulasi yang steril dan diinkubasi
selama 48 jam pada 35 C. Identifikasi isolat Salmonella ; sejak media selektif digunakan untuk isolasi,
isolat Salmonella dugaan diidentifikasi oleh dua tes biokimia konfirmasi, triple-gula-besi (TSI) test agar
dan uji urease. Koloni Salmonella dugaan yang langsung menusuk ke TSI agar miring. sampel diinokulasi
diinkubasi dengan topi masih tersisa selama 24 jam pada 35 C. Untuk tes urease, 2 ose penuh koloni
Salmonella murni dan baik terisolasi diinokulasi ke dalam kaldu urea. tabung yang diinokulasi terguncang
lembut dan diinkubasi dengan topi masih tersisa selama 48 jam pada 35 C dalam inkubator. TSI agar
diperiksa untuk produksi hidrogen sulfida (H2S) gas dan alkalinitas, sedangkan uji urease diperiksa untuk
degradasi urea di urea broth [6]. Koloni Salmonella yang hidrogen sulfida gas positif pada TSI agar,
urease negatif sub-kultur ke SS segar agar piring. Kemudian koloni tunggal dipindahkan ke dalam 20 mL
kaldu nutrisi (Media pengayaan) dan diinkubasi selama 18 jam pada 35 C untuk studi lanjut. Pengujian
kerentanan antimikroba : Isolat diuji untuk kerentanan terhadap ampisilin (10g), tetracycline (30 mg),
kloramfenikol (30 mg), kanamisin (30 mg) dan penisilin (10 U) dari Mueller-Hinton piring agar dengan
metode difusi disk. budaya semalam, tumbuh di kaldu nutrisi (budaya disesuaikan dengan 0,5 unit
McFarland), yang tersebar merata di Mueller-Hinton agar. Masing-masing antibiotik cakram ditempatkan

di piring budaya. Piring diinkubasi pada 35 C selama 24 jam dan zona inhibisi diukur. Sensitivitas dan
resistensi dari isolat terhadap antibiotik ditentukan sesuai kriteria Komite Nasional Standar Laboratorium
Klinis (NCCLS). Kemudian uji konsentrasi hambat minimum (MIC) : Dipilih Salmonella isolat yang
sensitif terhadap antibiotik yang berbeda, sasaran studi MIC dengan metode kaldu dilusi. Untuk setiap
antibiotik, larutan stok (100 ug / mL) disiapkan dan digunakan untuk seri pengenceran dalam kaldu
nutrisi (NB). Isolat Salmonella ditumbuhkan di NB dan diinkubasi pada 35 C selama 18 jam. suspensi
sel ini (OD disesuaikan dengan 0,5 unit McFarland) ditambahkan ke tabung NB serial diencerkan dengan
antibiotik. Tabung diinkubasi pada 35 C selama 24 jam dan diamati untuk kekeruhan. Persiapan ekstrak
tumbuhan : Daun kering dan bubuk dari Camelia sinensis (Theaceaea) (daun teh) dan Trachyspermum
ammi (Apiaceae) (ajwain atau omum biji) biji bubuk yang digunakan untuk mempersiapkan ekstrak air.
Sekitar 250 g bahan tanaman yang ditambahkan ke 650 mL air mendidih suling ganda dalam 2 L gelas
dan dibiarkan meresap selama 5 jam secara terpisah. Ekstrak tertuang, disaring dan terkonsentrasi di
evaporator berputar. Dan terakhir Isolat diuji untuk kerentanan terhadap kedua ekstrak tanaman dengan
menggunakan metode difusi cakram pada agar Mueller Hinton. Salmonella isolat tumbuh dalam kaldu
nutrisi pada 35 C selama 12 jam (budaya disesuaikan dengan 0,5 unit McFarland), yang tersebar merata
di Mueller-Hinton agar menggunakan penyeka kapas steril. Steril 6 mm Whatman Filter cakram kertas
yang diresapi dengan 20 uL dari ekstrak tanaman, yang dilarutkan dalam dimetil sulfoksida (DMSO).
Efek penghambatan mungkin pada DMSO juga dievaluasi dengan menempatkan cakram steril diresapi
dengan pelarut. Lempeng disimpan pada suhu kamar untuk memfasilitasi difusi ekstrak ke dalam agar
yang mengandung isolat tersebut. Selanjutnya, piring diinkubasi pada 35 C selama 24 jam. Lempeng
yang diamati untuk zona penghambatan setelah inkubasi dan zona inhibisi tercatat di mm

Diskusi
Pada jurnal pertama, prevalensi keseluruhan Salmonella pada bayi manusia diarrheagenic
adalah 1,2% dan 4% pada hewan muda diare, yang jelas berada di sisi yang lebih rendah dibandingkan
dengan studi sebelumnya. Di samping ini, dalam penelitian ini, serotipe yaitu Salmonella enteritidis dan
Salmonella Typhimurium diidentifikasi dari bayi manusia dan sayuran segar. serotipe isolasi / identifikasi
Salmonella enteritidis dan Salmonella Typhimurium serupa juga telah dilaporkan oleh beberapa penulis
dari bayi dan sayuran manusia. Hampir semua isolat pulih dari hewan dan limbah limbah dianggap
sebagai serotipe lainnya Salmonella karena hanya tiga serotipe penting yaitu Salmonella enteritidis,
Salmonella Typhimurium dan Salmonella Typhi yang terdeteksi oleh multipleks PCR yang digunakan
dalam penelitian ini. Hasil ini sesuai parsial dengan peneliti lain di mana selain Salmonella enteritidis dan
Salmonella Typhimurium, serotipe lain Salmonella juga telah diidentifikasi pada hewan dan limbah
limbah. Ada dapat beberapa faktor di balik ketidakhadiran mereka, tapi yang paling penting akan menjadi
jumlah terbatas sampel disaring dalam penelitian ini dan selanjutnya telah juga melaporkan bahwa hewan

yang sakit mengeluarkan Salmonella sebentar-sebentar, dan karena itu minimal 5 budaya tinja negatif
berturut-turut dianjurkan sebelum menyatakan hewan negatif untuk Salmonellosis. Dalam penelitian
kami, Salmonella isolat juga pulih dari sayuran segar (tomat, daun ketumbar), yang di sebagian besar
negara termasuk India sering dikonsumsi mentah. Dengan demikian, kehadiran patogen ini dalam sayuran
tersebut adalah keprihatinan dari titik keamanan pangan pandang. laporan serupa di deteksi Salmonella
dari sayuran segar juga telah dilaporkan oleh beberapa penulis. Secara umum, bakteri patogen yang
dibawa ke dalam lingkungan akuatik terutama melalui diobati atau tidak diobati rilis air limbah, aliran air
permukaan, dan pencucian tanah yang pada gilirannya menimbulkan risiko besar terjadinya meluasnya
penyakit. Selain itu, Salmonella juga memiliki kemampuan untuk melampirkan jaringan tanaman dan
dapat bertahan hidup dalam kondisi suhu yang merugikan karena kemampuan pembentukan biofilm
efektif.
Sementara pada jurnal kedua menunjukkan terdapat Salmonella dalam sampel kari, yang selalu
merupakan bagian dari asupan harian oleh orang-orang khususnya di negara-negara Asia. Laporan ini
mungkin salah satu di antara sedikit investigasi untuk menunjukkan kontaminasi Salmonella pada sampel
kari. Penelitian ini juga telah mengkonfirmasi prevalensi pola resistensi obat bervariasi antara Salmonella
isolat. Hal ini mungkin karena adanya lebih dari satu serovar Salmonella pada sampel kari. Meningkatkan
resistensi antibiotik dapat membatasi pilihan terapi yang tersedia untuk dokter untuk kasus klinis yang
memerlukan pengobatan antibiotik. Oleh karena itu, ada kebutuhan untuk menemukan strategi untuk
meminimalkan resiko penyebaran resistensi antimikroba antara populasi hewan dan manusia. Dalam
pengobatan rakyat tradisional, ramuan teh dianggap meringankan gastritis untuk beberapa
memperpanjang terutama pada infeksi sembuh sendiri. Demikian pula, benih ammi Trachyspermum lebih
populer di kalangan keluarga India di seluruh dunia sebagai benih telah digunakan sebagai aditif makanan
selama berabad-abad. Dalam pengobatan tradisional India, rebusan siap dengan benih ini telah digunakan
secara tradisional untuk meringankan gastritis dan diare. Ekstraksi air lebih disukai sebagai bahan
tanaman ini dikonsumsi dalam bentuk rebusan teh dan sebagai aditif makanan dimasukkan selama
memasak. Penelitian ini juga mengungkapkan sifat antimikroba dari bahan tanaman ini terhadap isolat.
Dan studi farmakologi rinci tentang tanaman ini akan mengungkapkan potensi penggunaan senyawa
antimikroba.
Secara umum, penanganan makanan yang tepat dan praktek persiapan makanan higienis harus
diikuti. Sebuah pengawasan melanjutkan wabah keracunan makanan akan membatasi terjadinya dan
penyebaran Salmonellosis antara penduduk melalui kontaminasi lingkungan. Pencantuman jamu dalam
persiapan makanan terutama pada mereka daging yang melibatkan hewan ternak dapat meminimalkan
kemungkinan kontaminasi patogen makanan ditanggung.

Kesimpulan
Pada Jurnal pertama isolasi Salmonella spp. terutama dari limbah kotoran dan sayuran segar
adalah masalah keprihatinan besar dari titik pandang kesehatan masyarakat karena sumber-sumber ini
memang berfungsi sebagai tempat transmisi Salmonella spp. untuk hewan dan manusia. Namun, dalam
terang hasil dari penelitian ini, studi epidemiologi mengatasi sumber penularan pada manusia dan hewan
perlu dirancang dan dieksekusi. Selanjutnya, studi intervensi lebih terfokus diperlukan untuk
mengendalikan patogen ini dalam limbah limbah dan sayuran segar. Sedangkan Untuk Jurnal kedua
menunjukkan bahwa terdapat Salmonella dalam sampel kari, dan menunjukkan resistensi obat yang
signifikan terhadap sebagian besar antibiotik yang tersedia secara komersial, kecuali kanamisin. Efek
antimikroba dari ekstrak tanaman terhadap Salmonella makanan-tulang menunjukkan bahwa diet
termasuk jamu akan menjadi salah satu strategi untuk mengelola makanan patogen..

Tugas Individu
Review jurnal Mikrobiologi Klinik

NAMA

: A. ENDANG KUSUMA INTAN

NIM

P2500216031

FAKULTAS FARMASI
PASCASARJANA UNIVERSITAS HASANUDDIN
MAKASSAR
2016