You are on page 1of 16

APLICACIÓN DE LA ELECTROFORESIS

CAPILAR
PARA
EL
ANÁLISIS
Y
SEGUIMIENTO
DEL
GRADO
DE
MADURACIÓN DE QUESOS DE OVEJA Y
MEZCLA.

Pero también tienen limitaciones como en la detección de muestras de concentración elevada. Una de las alternativas posibles para técnicas analítica es la electroforesis capilar (EC) para alcanzar un alto poder de resolución. Las principales ventajas de la aplicación de la técnica de electroforesis capilar son: la eficacia en las separaciones. .Fundamentos La complejidad y diversidad de los alimentos genera una gran demanda de técnicas que puedan ser utilizadas en el análisis de los mismos. el bajo consumo de disolvente y su fácil manejo.

macromoléculas. coloides. células vivas como bacterias o materia inerte como arcilla. El tamaño de una molécula esta determinado por su peso molecular y por su estructura tridimensional. Estas partículas cargadas pueden ser muy variadas: iones simples o complejos. . dependiendo de su relación cargatamaño.Electroforesis Capilar Es una técnica de separación que se basa en la migración diferencial (en sentido y velocidad) de partículas cargadas (analitos) en un campo eléctrico establecido. Cuando a una solución que contiene moléculas cargadas se le aplica un campo eléctrico. estas moléculas comenzaran a moverse.

la movilidad electroforética debida al potencial eléctrico aplicado (µpe) puede ser expresado como: µpe = q / 6 πƞr donde: q = carga neta ƞ = la viscosidad r = radio iónico La aplicación del campo eléctrico y la diferencia en la movilidad electroforética hará que los aniones migren hacia el polo positivo (ánodo ) y los cationes haca el polo negativo (cátodo) en igual cantidad. .Haciendo un balance entre las fuerzas de electromovilidad y de fricción.

. longitudes de 20 a 100 cm y están externamente cubiertos por una sustancia polimérica que confiere al capilar una enorme flexibilidad. Los capilares de sílice empleados en EC tienen un diámetro interno de 20 a 100 µm (375 µm de diámetro externo). está asociado con varias ventajas por encima de los métodos sólidos estándares de separación. Las características físicas de los capilares estrechos perforados los hace ideales para la electroforesis. el cual de otro modo seria frágil.El uso de capilares como un canal de electromigración para la separación de analitos. incluyendo macromoléculas biológicas.

La elevada relación entre superficie-volumen en un capilar con estas dimensiones. Como resultado. controlando el calor generado. Con capilares típicos de EC. por lo tanto se requiere el uso de tampón (reactivo) en cantidad de mililitros . permite una eficaz disipación del calentamiento generado por campos aplicados altos. las separaciones electroforéticas se pueden llevar a cabo fácilmente a 300. mediante la utilización de un refrigerante activo sobre la pared externa del capilar.000 voltios. las pequeñas dimensiones rinden volúmenes totales en columna del orden de microlitros.

Isotacoforesis capilar (CITP): técnica que implica el movimiento de las moléculas cargadas en un campo eléctrico y que está definido por la movilidad del ión de movimiento más rápido. . .Electroforesis capilar en zona libre (ECZ): es la más universal de las técnicas y se ha mostrado útil para la separación de un amplio conjunto de analitos de variado tamaño y carácter.Isoelectroenfoque capilar (CIEF): permite separar moléculas en bandas según el punto isoeléctrico de las mismas sobre un gradiente de pH. .Cromatografía capilar micelar electrocinética (MEKC): técnica que permite separar compuestos neutros y de movilidad electroforética similar.Electroforesis capilar en gel (CGE): empleo de capilares.Las principales modalidades de la EC son: . . con paredes recubiertas y rellenos de una matriz polimérica reemplazable. .

Electroforesis Capilar Zonal .

la cual neutraliza las cargas del capilar eliminando a su vez el flujo electroósmotico. .Métodos  Se utilizaron dos capilares:  Capilar sin recubrimiento interior De sílice fundida: en la superficie recubrimiento de poliacrilamida.  Capilar neutro hidrofilicamente recubierto eCap: Con una capa de poliacrilamida en la superficie interior.

Soluciones tampón.  Tampón universal de Theorell y Stenhangen (citrato-fosfato-borato/HCl) [T1]  Tampón fosfato 50 mM [T2]  Tampón fosfato 50 mM con HPMC (hidroxipropilmetil celulosa) [T3]  Tampón de carrera cítrico-citrato [T4]  Tampón de lavado cítrico-citrato. [T5] .

ditiotreitol (DTT) 10 mM y como marcador el trípéptido Lys-Tyr-Lys 1mM.Preparación de la muestra  Para disociar las caseínas y los productos insolubles de su hidrólisis todas las muestras se disolvían en el tampón de muestra que consistía en una solución de tampón fosfato 10 mM (pH 8). el cual contenía urea 8M. Condiciones de separación  La inyección de la muestra en el capilar se realizaba hidrodinámiamente a presión (5 psi) durante 5 segundos en el extremo anódico y la separación se llevaba a cabo del ánodo al cátodo. . La muestra se mantenía al menos 1 h a temperatura ambiente antes de ser filtrada.

se secaba con N2 aprox. . seguido de NaOH 0.  Electroforesis capilar en zona libre con HPMC  La migración de proteína se realizaba con el tampón fosfato [t3] que contenía HPMC durante un tiempo de 50 min. el voltaje aplicado fue un valor constante y oscilaba entre 15-30 Kv.Capilar de sílice fundida  La migración se llevó a cabo a 23°C.03-1M durante 2 min.  El lavado del capilar se llevó a cabo con HCl y agua y se equilibró con el tampón de separación.  Electroforesis capilar en zona libre sin aditivo  Se utilizo el tampón universal [T1] y el tampón fosfato [T2]. 2 min y por último se equilibraba con el tampón de separación durante 4 min. el capilar se lavaba primeron con agua durante 2 min.  Se conseguía una separación satisfactoria en 40 min.

Temperatura entre 23-45°C y Voltaje 18.  El lavado se llevo a caco con HCl 0.  La separación se llevo a cabo durante 60 min y a una temperatura y voltaje constantes. ambos tampones a un pH de 3.  Los tampones empleado fueron el tampón de citrato [T4] para correr las muestras. que contenían un 0.05% p/v de HPMC. y el tampón citrato [T5] para efectuar el lavado del capilar.Capilar neutro hidrofílicamente recubierto.5-30 Kv.1 N (2 min). seguido de un lavado con agua (2 min) y finalmente con un tampón de lavado (5 min) con el fin de equilibrar el capilar .

85 segundos en recorrer una distancia de 12 micrómetros a lo largo de uno de los niveles estacionarios de la celda.05 micrómetros de diámetro en una solución acuosa de cloruro de potasio 0.1 M a 25°C tarda 0.99x10^-8 m. . La constante dieléctrica del agua es de 78. A) Calcular la movilidad electroforética de la partícula. una partícula esférica de 0. b) el potencial Z de la partícula y c) el valor de la densidad de la carga de la superficie si la distancia entre capas es de 0. siendo el gradiente de potencial de 10 volts/cm.9x10^-4 kg/m s .PROBLEMA  En un experimento de electroforesis.5 y su coeficiente de viscosidad es de 8.

?0 = ??? ??????????? ?? ?? ????? ?2 −12 = 8.854 ∗ 10 ??2 ? = ??? ??????????? ??? ????? ?? = ????????? ??????????????? ? = ????????? ?? ???????ó? ? = ????????? ????? ????? ?? = ???????? ?? ????? .