http://en.wikipedia.

org/wiki/Luciferase
Luciferase adalah istilah generik untuk kelas enzim oksidatif yang digunakan dalam
bioluminescence dan berbeda dari sebuah photoprotein. Salah satu contoh yang terkenal
adalah luciferase kunang-kunang (EC 1.13.12.7) dari pyralis Photinus kunang-kunang.
[1] ("luciferase Firefly" sebagai reagen laboratorium biasanya mengacu pada luciferase
pyralis P. meskipun luciferases rekombinan dari beberapa spesies kunang-kunang juga
komersial tersedia.)
Reaksi

kimia

Dalam reaksi luminescent, cahaya dihasilkan oleh oksidasi sebuah luciferin (pigmen a):
*

Luciferin

O2

oxyluciferin

cahaya

Reaksi paling umum luminescent rilis CO2 sebagai produk. Tingkat ini reaksi antara
luciferin dan oksigen sangat lambat sampai mereka dikatalisis oleh luciferase, kadangkadang dimediasi oleh kehadiran kofaktor seperti ion kalsium atau ATP. [2] Reaksi
dikatalisis oleh luciferase kunang-kunang berlangsung dalam dua langkah:
*
*

Luciferin
Luciferyl

+
siklase

ATP
+

O2

luciferyl

oxyluciferin

siklase
+

AMP

+
+

PPi
cahaya

Reaksi ini sangat penuh semangat efisien: hampir semua input energi ke dalam reaksi ini
berubah menjadi cahaya. Sebagai perbandingan, bola lampu pijar kehilangan sekitar 90%
dari energi panas.
[3]
[Sunting]

Spektrum

perbedaan

di

luciferase

bioluminescence

Perbedaan struktural halus dalam luciferase telah ditemukan menjadi penyebab dari
perubahan warna bioluminescence emisi dari kuning-hijau menjadi merah. Struktur
luciferase wild type dan mutan merah (S286N) luciferase-Genji dari Jepang Botaru

(Luciola cruciata) di komplek dengan analog menengah 5'-O-[dehydroluciferyl N-()sulfamoyl adenosine] (DLSA) diperiksa dan studi menunjukkan bahwa luciferase wild
type complexed dengan DLSA dipamerkan sebuah 'bentuk tertutup' dari situs aktif, di
mana rantai samping dari asam amino isoleusin 288 bergerak ke arah cincin
benzothiazole dari DLSA, menciptakan kantong hidrofobik kaku. The 'luciferase bentuk
tertutup' wild type mengikat keadaan tereksitasi dari oxyluciferin dalam mikro yang
sangat kaku dan nonpolar, energi meminimalkan rugi sebelum memancarkan cahaya
kuning-hijau. The S286N luciferase complexed dengan DLSA menunjukkan sebuah
'bentuk terbuka' dari situs aktif, di mana sisi rantai asam amino isoleusin 288 tidak
bergerak ke arah cincin benzothiazole dari DLSA, menciptakan lingkungan mikro yang
tidak terlalu kaku dan kurang hidrofobik. The 'bentuk terbuka' luciferase S286N memiliki
mikro kurang kaku sehingga kehilangan sebagian energi dari keadaan tereksitasi dari
oxyluciferin,
[Sunting

yang

menghasilkan

emisi

rendah

energi

cahaya

merah.

[4]

Contoh]

Berbagai organisme mengatur produksi cahaya mereka menggunakan luciferases berbeda

dalam berbagai reaksi pemancar cahaya. Yang paling terkenal adalah kunang-kunang [5],
meskipun enzim ada pada organisme seperti jamur yang berbeda sebagai Jack-O-Lantern
(Omphalotus olearius) dan banyak makhluk laut. Dalam kunang-kunang, oksigen yang
diperlukan diberikan melalui tabung di perut yang disebut trakea abdomen. The
luciferases kunang-kunang - yang ada lebih dari 2.000 spesies - dan dari Elateroidea
(kunang-kunang, klik kumbang dan kerabat) secara umum - yang cukup beragam akan
berguna dalam filogeni molekul. Yang paling lengkap luciferase dikaji adalah bahwa dari
kunang-kunang Photinus Photinini pyralis, yang memiliki pH optimum 7,8. [6]
Juga baik ditinjau adalah luciferase dari reniformis Renilla. Dalam organisme ini,
luciferase yang erat terkait dengan mengikat protein luciferin serta hijau fluorescent
protein (GFP). Kalsium memicu rilis luciferin (coelenterazine) dari luciferin protein
mengikat. substrat tersebut kemudian tersedia untuk oksidasi oleh luciferase, mana yang
rusak ke coelenteramide dengan rilis resultan energi. Dengan tidak adanya GFP, energi
ini akan dibebaskan sebagai foton cahaya biru (panjang gelombang emisi 482 nm

puncak). Namun, karena terkait erat GFP, energi yang dilepaskan oleh luciferase adalah
bukan digabungkan melalui transfer energi resonansi ke fluorofor dari GFP, dan
kemudian dirilis sebagai sebuah foton cahaya hijau (emisi panjang gelombang puncak
510
*

nm).

Reaksi

Coelenterazine

O2

katalis
coelenteramide

adalah:
+

foton

[7]
cahaya

CO2

luciferases lebih baru baru-baru ini telah diidentifikasi bahwa, tidak seperti Renilla atau
luciferase Firefly, molekul dikeluarkan secara alami. Salah satu contoh tersebut adalah
luciferase Metridia (MetLuc) yang berasal dari laut Metridia copepoda Longa. The longa
Metridia luciferase disekresi mengkodekan gen protein 24 kDa mengandung peptida
sinyal N-terminal sekretori dari 17 residu asam amino. Sensitivitas dan intensitas sinyal
tinggi molekul ini membuktikan luciferase menguntungkan dalam studi banyak
wartawan. Beberapa manfaat penggunaan molekul reporter dikeluarkan seperti MetLuc
adalah protokol yang tidak-lisis yang memungkinkan seseorang untuk dapat melakukan
tes

sel

hidup

dan

beberapa

tes

[Sunting]

pada

sel

yang

sama

[8],.

Aplikasi

Luciferase dapat diproduksi di laboratorium melalui rekayasa genetik untuk beberapa

tujuan. Luciferase gen dapat disintesis dan dimasukkan ke dalam organisme atau
transfected ke dalam sel. Tikus, ulat sutera, dan kentang yang hanya beberapa organisme
yang

telah

direkayasa

untuk

memproduksi

protein.

[9]

Pada reaksi luciferase, cahaya dipancarkan luciferase bertindak ketika pada substrat
luciferin sesuai. Emisi foton dapat dideteksi dengan alat sensitif ringan seperti
luminometer atau diubah mikroskop optik. Hal ini memungkinkan observasi proses
biologi.

[10]

Dalam penelitian biologi, luciferase umumnya digunakan sebagai reporter untuk menilai
aktivitas transkripsi dalam sel yang transfected dengan membangun genetik yang
mengandung gen luciferase bawah kendali promotor kepentingan. [11] Luciferase juga

dapat digunakan untuk mendeteksi tingkat ATP seluler pada sel tes tes kelayakan atau
untuk aktivitas kinase. [11] [12] Selain itu molekul proluminescent yang dikonversi
menjadi luciferin atas aktivitas enzim tertentu dapat digunakan untuk mendeteksi
aktivitas enzim dalam tes luciferase digabungkan atau dua langkah. substrat tersebut telah
digunakan untuk mendeteksi aktivitas caspase dan aktivitas sitokrom P450, antara lain.
[10]

[11]

Seluruh pencitraan hewan (disebut sebagai in vivo atau, kadang-kadang, ex vivo

imaging) adalah teknik yang kuat untuk mempelajari populasi sel pada hewan hidup,
seperti tikus. [13] Berbagai jenis sel (misalnya sel-sel induk sumsum tulang, T-sel ) dapat
direkayasa untuk mengekspresikan luciferase memungkinkan visualisasi non-invasif
dalam hewan hidup menggunakan kamera biaya-pasangan perangkat sensitif (CCD
kamera) Teknik ini telah digunakan untuk mengikuti tumorigenesis dan respon tumor
terhadap pengobatan pada model binatang.. [ 14] [15] Namun, faktor lingkungan dan
gangguan terapi dapat menyebabkan beberapa perbedaan antara tumor beban dan
intensitas bioluminescence sehubungan dengan perubahan aktivitas proliferasi. Intensitas
sinyal diukur dengan di vivo imaging mungkin tergantung pada berbagai faktor, seperti
penyerapan D-luciferin melalui peritoneum, aliran darah, sel permeabilitas membran,
ketersediaan co-faktor, pH intraselular dan transparansi jaringan atasnya, di samping
jumlah

luciferase.

[16]

Luciferase dapat digunakan di bank darah untuk menentukan apakah sel darah merah
yang mulai rusak. peneliti forensik dapat menggunakan larutan encer yang mengandung
enzim untuk menemukan jejak darah yang tersisa pada permukaan di TKP. Luciferase
adalah protein yang sensitif panas yang digunakan dalam studi di denaturasi protein,
pengujian kapasitas pelindung protein heat shock. Kesempatan untuk menggunakan
luciferase terus memperluas

http://www.panomics.com/index.php?id=product_44
Reporter

Luciferase

Vektor

Wide array reagen dioptimalkan dengan hati-hati dirancang untuk merangsang faktorfaktor

transkripsi.

Dengan Panomics Reporter Luciferase Vektor, Anda dapat memantau dan bahkan
mengukur aktivitas pengikatan faktor transkripsi. Setiap Vector Reporter berisi elemen
cis-acting pengikatan DNA yang diakui oleh TF tertentu. Binding di situs ini
menghasilkan ekspresi luciferase kunang-kunang, sebuah enzim yang mampu
mengkatalisis reaksi bercahaya kuat. Cahaya dipancarkan dari reaksi kimia berbanding
lurus dengan jumlah enzim dinyatakan dan dengan demikian kegiatan pengikatan TF
yang

ditargetkan.

Seperti gel-shift kit kami EMSA, yang Panomics Reporter Vectiors yang ideal untuk
memvalidasi hasil yang diperoleh menggunakan protein / DNA Arrays. Tapi sementara
EMSA hanya memungkinkan di verifikasi vitro dari hasil tersebut, penggunaan Reporter

Luciferase Vektor memungkinkan TF kegiatan yang akan dimonitor dalam sel hidup.
Jangan puas dengan jawaban dari tabung percobaan; menyelidiki TF mengikat di mana
hal itu terjadi!

http://millar.bio.ed.ac.uk/lucifer.html
Luciferase
Bibit
Luciferases adalah enzim-enzim yang memancarkan cahaya. Sekelompok beragam
organisme menggunakan bioluminescence luciferase-dimediasi untuk mengejutkan
predator atau untuk menarik mangsa atau pasangan. The luciferase dari Amerika Utara
rilis kunang-kunang lampu hijau selama oksidasi substrat kimia, luciferin. Organisme
lain, termasuk tanaman, yang menyatakan luciferase (LUC) gen juga akan menyala hijau
samar-samar

ketika

disertakan

dengan

luciferin.

cahaya ini banyak digunakan sebagai assay untuk ekspresi LUC, yang bertindak sebagai
reporter "" untuk kegiatan elemen apapun peraturan yang mengontrol ekspresinya.
Luciferase terutama berguna sebagai reporter dalam sel hidup dan organisme. gen fusi
LUC menyediakan jendela "" pada mekanisme yang mengatur aktivitas gen-gen tertentu,
dalam khusus, sel-sel hidup. bunga kami adalah dalam mekanisme peraturan berirama
pada tumbuhan tingkat tinggi: wartawan luciferase berirama-dinyatakan merupakan salah
satu alat utama kami. Foto bioluminescence dari kami CAB: LUC tanaman Arabidopsis
ditampilkan di bagian atas halaman ini (di kotiledon dua bibit), dan pada halaman depan
(pabrik,

roset

lebih

tua).

Gen LUC + dari Promega Corporation adalah urutan besarnya di Arabidopsis cerah dan
tidak memiliki kelemahan pada spesies lain, jadi kami sekarang menggunakan ini secara
rutin. protein adalah sitoplasma, sedangkan LUC asli adalah peroxisomal.
http://www.iscid.org/encyclopedia/Luciferase

Luciferase adalah setiap enzim yang dapat digunakan di alam untuk bioluminescence,
atau produksi cahaya yang dihasilkan dari makhluk hidup. Nama ini berasal dari Lucifer,
akar

yang

berarti

pembawa

cahaya

(Ferre

lucem).

Penggunaan paling terkenal dari luciferase ditemukan dalam kunang-kunang. Dalam

makhluk bercahaya kunang-kunang dan lainnya, cahaya yang dihasilkan oleh oksidasi
pigmen luciferin. Intensitas dari interaksi ini diperkuat oleh keterlibatan ATP. Laju reaksi
luciferin dengan oksigen sangat lambat sampai luciferase merangsang atau mengkatalisis
itu, kadang-kadang dengan bantuan ion kalsium; tindakan ini mirip dengan energi yang
digunakan

untuk

merangsang

kontraksi

otot.

Hampir semua energi yang dimasukkan ke dalam reaksi luciferase diubah menjadi
cahaya. Hal ini sangat energi efisien; manusia sudah sangat sedikit yang cocok itu.
Selain kunang-kunang itu, jamur Jack-O-Lantern, glowworm itu, kumbang klik, dan
berbagai macam makhluk laut (terutama dari laut yang dalam) menggunakan bentuk
luciferase untuk menghasilkan bioluminescence. Beberapa dapat menghasilkan warna
yang berbeda bioluminescence juga. Luciferase dapat diproduksi di laboratorium melalui
rekayasa genetik, dan digunakan untuk melacak dan visualisasi proses biologi yang
berbeda. Saat ini, tikus, ulat sutera, dan kentang telah rekayasa genetika untuk
bioluminesce dengan cara ini.

http://www.worthington-biochem.com/lu/default.html
Luciferase
I.U.B.:

1.14.14.3

luciferase bakteri (LU) mengkatalisis oksidasi mononukleotida flavin tereduksi (FMNH2)

dan aldehida rantai molekul panjang dengan oksigen untuk menghasilkan FMN, asam

yang sesuai, H2O dan cahaya. (Baldwin et al 1975;. Balny dan Hastings 1975; Becvar
dan

Hastings

1975).

rumus
Lihat juga Hastings et al. (1966); aldehida tidak penting untuk reaksi namun memiliki
efek yang mencolok pada luminescence tersebut. The FMN dapat dikurangi dengan
hidrogen molekul dengan Pt atau katalis Pd, atau dengan pengobatan dengan ditionat,
tetapi karena FMNH2 begitu cepat teroksidasi oleh udara, penggunaan NADH adalah
sebuah metode laboratorium yang lebih bisa dilaksanakan dan lebih bermanfaat dalam
aplikasi analitis. Mekanisme yang berfungsi luciferase bakteri untuk menghasilkan
cahaya dipelajari oleh kelompok Dr J. Woodland Hastings '. Dalam sebuah artikel yang
menjelaskan pemurnian parsial dan cepat LU menggunakan kromatografi afinitas, Waters
et al. (1974) menggambarkan aktivitas spesifik luciferase sangat dimurnikan sebagai 1,4
X 1014 kuanta per detik per miligram. Brolin dkk. (1971) mengembangkan tes yang
sangat sensitif untuk melacak intermediet metabolisme yang dapat terlibat dalam piridin
nukleotida reaksi dehidrogenase tergantung menggunakan luciferase bakteri. Lihat juga
Chappelle dan Picciolo (1971) untuk digunakan dalam pengujian FMN dan FAD. Lihat
Aflalo dan Deluca (1987) untuk yang memantau penggunaan ATP. Tinjauan penggunaan
luciferase kunang-kunang sebagai alat dalam molekul dan biologi sel ditawarkan oleh
Gould dan Subramani (1988). Peninjauan aplikasi klinis untuk enzim diberikan oleh
Kricka
Karakteristik

(1988).
Luciferase

dari

fischerii

Photobacterium:

Catatan: Di laboratorium Hastings 'strain bakteri asal tidak pasti, tetapi dengan luciferase
berbeda, diisolasi dan diberi label MAV. Sejumlah kertas mengacu pada enzim MAV.
Hastings et al. (1969) telah membandingkan dua luciferases. Galur MAV baru-baru ini
telah diidentifikasi sebagai bakteri Beneckea harveyi (Tu et al. 1975).