DETERMINACIN DE PROTENAS POR MICRO-KJELDAHL

FUNDAMENTO
El mtodo de micro-kjeldahl es una simplificacin hecha por HACH en el proceso
Kjeldahl tradicional. Realizando el mismo anlisis en un tiempo corto y con pequeas
muestras.
Se funda en la transformacin del nitrgeno presente en las protenas a nitrgeno
inorgnico. Para ello se siguen tres etapas claramente diferenciadas
1. En la primera, se digiere el material por accin del cido sulfrico en presencia de
oxidantes fuertes (perxido de hidrgeno), de esta manera todo el carbono presente
se libera como CO2 y nitrgeno como NH3, luego este se combina con el exceso
de cido sulfrico para dar sulfato de amonio.
2. En la segunda se destila el amonio, previamente liberado por la accin de un lcali
fuerte Na(OH), el amoniaco liberado se recibe en una solucin de cido dbil en
presencia de colorante indicador.
3. En la tercera se titula la solucin con un cido fuerte cuantificando el nitrgeno
presente.
Luego se aplica la relacin siguiente:
%N =

ml . N . fc . meq .100
peso de muestra

dnde: ml.N.fc.meq = peso de nitrgeno en la muestra

ml = gasto de cido sulfrico en la titulacin (ml)
N. normalidad del cido
Fc. Factor de correccin del cido
meq.= peso del miliequivalente del nitrgeno
Suponiendo que la muestra solo contiene protenas simples con 16% de N, el
porcentaje de protenas ser:

Protena=6.25N

MATERIAL Y EQUIPO
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Balanza analtica
Digestor
Embudo
Fiola de 100 ml.
Equipo de destilacin
Bureta de 25 ml.
Vasos precipitados de 50 ml.

REACTIVOS
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cido sulfrico cc. al 98%

Solucin de cido sulfrico 0.1 N
Perxido de hidrogeno al 50%
Agua destilada
cido borrico al 4%
indicador azul de metileno y rojo de metilo
hidrxido de sodio al 50%

PROCEDIMIENTO
El proceso de determinacin se hace en tres etapas:
DIGESTIN.

Medir 4 ml de muestra liquida (o 0.25 g si es slido) y colocar en el matraz

de digestin

Agregar 4 ml de cido sulfrico concentrado al matraz

Verificar que el control automtico del digestor este en 440C y que haya
succin en la columna de fraccionamiento.

Digerir la muestra por 4 min despus de haber alcanzado la temperatura

indicada.

Aadir 10 ml de perxido de hidrgeno al 50% a la muestra a travs de un

embudo de la columna de fraccionamiento. Si el digesto no se torna incoloro,
aadir porciones adicionales de 5 ml hasta que el digesto se aclare.

Retirar el matraz del calentador y dejarlo enfriar. Quitar la columna de

fraccionamiento, y colocar el matraz sobre un bloque y tapar hasta que se
haya enfriado.

Diluir el digesto con 50 ml de agua destilada.

DESTILACIN

El digesto obtenido y diluido a 50 ml se traslada a un baln de destilacin.

Preparar un vaso de 100 ml que contenga 12.5 ml de cido borrico al 4% ( en

volumen) adicionndole indicador azul de metileno y rojo de metilo, dando
una coloracin violeta.

El baln de destilacin que contiene el digesto se aade 13 a 15 ml de

hidrxido de sodio al 50% v/v y 2 a 3 granallas de zinc.

Conectar el equipo de destilacin y destilar el digesto durante unos 10 a 20

min (hasta que el vaso receptor tenga una coloracin verdusca y su volumen
sea ms o menos 3 veces del volumen inicial)

TITILACIN.

Preparar una solucin de cido sulfrico 0.1 N y valorizarla.

Titular el contenido del matraz receptor hasta que vire de verde a violeta

CLCULOS Y EXPRESIN DE RESULTADOS

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