PENGGUNAAN AYAM PETELUR
SEBAGAI BIOREAKTOR hens as ingredient kit quick detection of
PENGHASIL ANTIBODI UNTUK
MENDETEKSI MALARIA
Kadri Abdullah
Abstract
Malaria, often referred to as the "King of
Diseases" caused by Plasmodium
falciparum, is a disease that afflicts 300-
500 million people in the tropics and about
1-3 million people died every year.
Although numerous attempts have been
made at Indonesia relief but growing the
endemic region. It even gives rise to
Unusual (plague)in some areas which had
previously been successful doing
countermeasures. Technique fast and
accurate detection of indispensable to
prevent the high death rate and the
emergence of drug resistance to malaria.
The method immunochromatography a
rapid detection method has high sensitivity
and specificity. However, some
commercial kits in Indonesia obtained
from abroad. To that end, the use of local
materials that are easily obtained and
continuously available it is very important
to do. In this proposed activity to produce
antibodies that can be used as a material
for making rapid detection kits. For these
purposes, laying hens productive age 6
(six) months be immunized with 100 g
pLDH mixed with an equal volume of
Adjuvant Freud intramuscular in full under
the chest muscle. After 14 days, the
booster using the antigen in the amount
and in the same way using Adjuvants fraud
incomplete. After 12 days, the booster did
again. After the fourth booster, chicken
eggs are collected for the tested content of
IgY against pLDH. More will be done
collection, purification, and
characterization of antibody (IgY) laying
malaria. The advantages of the use of
chickens to produce antibodies, especially
because the antibody in eggs obtainable
from chickens that have been in
immunization, blood collection so that it
can be avoided. In addition, the antibody
productivity of chicken a lot more
compared to other animals in the same
weight.
1. PENDAHULUAN
Malaria yang disebabkan oleh
Plasmodium falciparum merupakan
penyakit yang menimpa 300-500 juta
orang di wilayah tropis dan sekitar 1-3 juta
orang meninggal dunia setiap tahun.
Walaupun berbagai upaya penanggulangan
telah dilakukan di Indonesia, namun dalam
beberapa tahun terakhir tetap menunjukkan
bertambahnya luasnya daerah endemis.
Bahkan sampai menimbulkan Kejadian
Luar Biasa (KLB) pada daerah-daerah
yang telah berhasil ditanggulangi
(Syarifruddin et al.,2003).
Permasalahan gejala penyakit
malaria dengan gejela penyakit-penyakit
lainnya telah mempersulit pemberantasan.
Pengunaan obat-obatan di pedesaan
terhadap semua pasien dengan penyakit
bergajala demam akibat tidak tersedianya
alat deteksi malaria yang akurat telah
menyebabkan resistensinya terhadap obat-
obat antimalaria (Ali et al.,2013;
syarifruddin et al., 2003). Untuk
menanggulangi menyebarnya resisteni
serta tingginya angka kematian, maka
diperlukan metode yang cepat untuk
mendiagnosis.
 Pengacatan giemsa merupakan
metode mendiagnosis histopatologi pada
malaria yang bersifat standar untuk deteksi
malaria.Namun metode terbsebut
membutuhkan tenaga terampil untuk analis
mikroskop serta tidak tersedianya alat di
pedesaan, terutama diaerah yang bukan
endemis.Namun terdapat metode yang
lebih cepat yang dapat merpermudah untuk
mendiagnosis yaitu metode
imunokromatografi. Metode
imunokromatografi merupakan metode
deteksi cepat yang memilikki sensitifitas
dan spesifisitas tinggi (Ali et al., 2006).
Namun, beberapa kit komersial yang
terdapat di Indonesia yang memiliki
populasi sekitar 230 juta jiwa dengan
dengan wilayah yang bersifat endemik
malaria,sensivitas, sepesifisitas dan
akurasi kit-kit tersebut bervariasi (Taylor
et al., 2002). Untuk itu, penggunaan
metode berbasis bahan-bahan lokal yang
mudah diperoleh dan tersedia secara
kontinyu sangat penting untuk dilakukan.
Penggunaan ayam untuk
menghasilkan dalam 20 tahun terakhir
menunjukkan peningkatan (Muller et
al.,2015). Hal ini disebabkan karena
produksi antibody pada mamalia memiliki
beberapa kelemahan, diantaranya i)
memerlukan multi injeksi (booster) antigen
dengan adjuvant, ii) memerlukan biaya
mahal karena dibutuhkan antigen dan
adjuvant yang lebih banyak, iii) membutuh
prosedur sampling darah yang berulanng-
ulang (Hau dan Hendriksen, 2005). Lebih
lanjut dijelaskan keuntungan penggunaan
ayam untuk menghasilkan antibodi,
terutama karena antibodi diporoleh pada
telur dari ayam yang telah di imunisasi,
sehingga koleksi darah dapat dihindari.
Selain itu, produktifitas antibody dari ayam
jauh lebih banyak dibandingkan dengan
hewan lain dalam berat badan yang sama.
Untuk memenuhi kebutuhan
deteksi malaria di wilayah endemis seperti
Indonesia, penggunaan IgY dari telur ayam
sangat penting dilakukan. (Mudili et al.,
2015) telah menggunakan IgY dari ayam
yang telah di imunisasi dengan enterotoxin
B rekombina dari stapilococcus untuk
mengevaluasi pangan dari kontaminasi
staphylococcus aureus.
2. GAGASAN
Kondisi Terkini
Malaria merupakan jenis penyakit
tropis yang disebabkan oleh protozoa dan
genus Plasmodium.Penyakit ini menjadi
salah satu tantangan terbesar bagi
kesehatan manusia yang mempengaruhi
40% dari populasi dunia (Greenwood dan
Mutabingwa, 2002). Penyakit ini
menyerang 300-500 juta orang dan
membunuh 1,5-2,7 juta orang tiap tahun
(Philips, 2001). WHO memperkirakan
pertumbuhan 16% pada kasus malaria
setiap tahun.Ini memperkirakan peringkat
malaria sebagai salah satu dari tiga
penyakit menular yang menyebabkan
kematian.
Kejadian Luar Biasa (KLB) malaria
masih terjadi di beberapa daerah di
Indonesia. Bahkan KLB tersebut terjadi
pada daerah-daerah yang sebelumnya telah
berhasil melalukan penaggulanagn
(Syafrudddin etal., 2003). Pada tahun 2009
kasus Malaria KLB dalm 10 provinsi
dalam 20 desa yang terjangkit,dengan
jumlah penderita positif Malaria sebesar
869 penderita dan 11 diantaranya
meninggal dunia. Setiawan (2010)
melaporkan bahwa sebanyak 424 dari 576
kabupaten/kota di Indonesia (73,6%)
merupakan wilayah endemik. ehingga
sebanyak 45% dari penduduk Indonesia
memliki resiko terinfeksi malaria.
 Spesies-spesies Plasmodium
menyebabkan penyakit terhadap manusia
adalah Plasmodiumvivax, Plasmodium
falciparum, Plasmodium malairae, dan
Plasmodiumovale.Data Riskesdas 2010
mendapatkan 86,4% penyebab malaria
adalah Plasmodiumfalciparum, dan
Plasmodium vivax sebanyak 6,9%. Selain
itu. P. falciparum merupakan parasit yang
paling banyak memberikan komplikasi
dengan masa inkubasi yang cukup ganas,
mudah resisten dengan pengobatan,
gejalanya muncul tiap 24-48 jam dan
merupakan kausalitas malaria tropika.
3. METODE
Pemanfaatan Imunoglobulin Y
sebagai sumber antivodi terhadap antigen
tertentu memiliki beberapa keuntungan
keuntungan yaitu: a) biaya pemeliharaan
ayam relatif lebih murah, b) kandungan
Ig Y tinggi di dalam telur dan dapat
diproduksi dalam jumlah besar, c)
immunoglobulin Y menghasilkan respon
imun yang lebih spesifik dan tidak
memiliki efek samping karena tidak
bereaksi dengan Ig G mamalia d)
memiliki daya simpan yang lebih lama,
e) jarak filogenik antara unggas dan
mamalia sangat jauh sehingga tidak
menunjukkan reaksi silang dengan
komponen jaringan mamalia. Beberapa
kelebihan yang dimiliki Ig Y akan
menjadi hal pendukung pot ensi ayam
sebagai inang untuk memproduksi Ig Y
spesifik terhadap antigen tertentu
sehingga dapat digunakan sebagai
perangkat imunodiagnostik dan imuno
terapi. Beberapa tahapan yang harus
dilakukan antara lain :
1) Isolasi dan Produksi Antigen pLDH
(malaria)
Antigen yang digunakan untuk
imunisasi dalam penelitian ini adalah
antigen pLDH yang pada penyakit malaria
yang diperoleh dari darah pasien yang
terinfeksi plasmodium fivax. Antigen
berasal dari parasite plasmodium
diproduksi dan diisolasi enzim pfLDH
(Parasite falciparum Laktat
Dehydrogenase) yang mana dimodifikasi
protein pfLDH yang dapat selanjutnya
disimpan dalam tabung mikro dengan
volume 1,5 ml pada suhu -20 C sampai
digunakan sebagai antigen untuk
imunisasi ayam.
2) Imunisasi Ayam Coba
Imunisasi dengan antigen pfLDH
dilakukan terhadap 10 ekor ayam betina
umur 24 minggu dengan interval
vaksinasi dua mingu. Penyuntikan antigen
(imunisasi) pada ayam dilakukan melalui
rute intravena dan subcutan dengan dosis
150 g/ekor.
3) Teknik Pengambilan Darah dan
Pengumpulan Kuning Telur
Pengambilan darah ayam
dilakukan satu minggu setelah imunisasi
ketiga melalui vena brachialis sebanyak
1.5 ml menggunakan spuit 3 ml. Darah
yang dikoleksi diletakkan dengan posisi
miring dan diinkubasi selama 30 menit
sampai 1 jam pada suhu ruang. Darah
disimpan pada suhu 4 C selama 24 jam.
Setelah serum terbentuk selanjutnya
dipanen dengan menyimpannya dalam
tabung mikro pada suhu -20 C sampai
digunakan. Seiring dengan pengambilan
darah juga dilakukan pengumpulan telur
ayam bila ada yang bertelur. Setiap
butir telur diberi label nomor ayam dan
tanggal pengeluaran telur. Kuning telur
dari masing-masing telur yang dipanen
dipisahkan dari put ih telur lalu
disimpan di freezer (refrigator -20 C)
dan diberi tanda.
4) Pembuatan antigen terlarut
Antigen dan antibodi harus harus
dapat berdifusi dengan baik dalam uji
presipitasi menggunakan media agar.
Difusi dalam media agar dapat terjadi
bila komponen antigen tersebut dalam
ukuran kecil sehingga mudah terlarut.
Antigen E/S Fasciola gigantica agar
dapat terlarut harus dipecah molekulnya
agar menjadi ukuran molekulnya lebih
kecil. Pemecahan molekul dilakukan
menggunakan alat sonikator Bioruptor
. E/S Fasciola gigantica sebanyak 2.5 ml
dimasukkan ke dalam tabung sonifikasi
lalu dimasukkan dalam sonikator
Bioruptor yang berisi air bersuhu 4
C. Hal ini bertujuan untuk
mendinginkan tabung dan mencegah
kerusakan antigen karena panas yang
ditimbulkan selama proses berlangsung.
Proses sonikasi dilakukan selama 5 menit
dengan frekuensi 50000 Hz.
5) Uji Agar Gel Presipitation Test
(AGPT) Sebagai Uji Spesifitas
Antigen
Pengujian spesifitas Ig Y anti-
pfLDH dilakukan dengan uji presipitasi
agar (AGPT) untuk melihat adanya
presipitasi yang terjadi antara Ig Y anti-
pfLDH dengan pfLDH yang diuji.
Medium agar AGPT dibuat dari
campuran 1 gram agarose, 50 ml PBS,
pH 7.2 dan 50 ml aquadest. Campuran
dipanaskan hingga mendidih, kemudian
didinginkan sampai suhunya turun
menjadi 60 C. Larutan agar lalu
dituang ke gelas objek sebanyak 4 ml
pada setiap slide-nya dan dibiarkan pada
suhu ruang hingga agar memadat. Agar
yang telah memadat dibuat lubang
dengan menggunakan perforator agar.
Antigen dan antibodi yang diuji
diteteskan ke dalam masing-masing
lubang yang telah ditentukan
sebelumnya. Selanjutnya agar disimpan
pada suhu kamar selama 24 jam. Garis
presipitasi akan terbentuk bila dalam
kuning telur atau serum terdapat antibodi
yang homolog dengan antigen yang
diujikan.
6) Pemurnian Ig Y dari Kuning Telur
Kuning telur yang menunjukkan
hasil positif pada uji AGPT, selanjutnya
dimurnikan Ig Y-nya dari kuning telur
menggunakan kit eggstract Ig Y
(PROMEGA). Kuning telur dilarutkan
dalam larutan Presipitat A sebanyak tiga
kali volume kuning telur. Larutan
tersebut diaduk dengan stire selama lima
menit. Selanjutnya larutan tersebut
disentrifuse pada kecepatan 10000 g pada
suhu 4 C selama 15 menit. Lalu
supernatan disaring dengan kasa steril 4
lapis. Filtrat hasil penyaringan
ditambahkan larutan presipitat B dan
diaduk. Selanjutnya disentrifuse pada
kecepatan 10000 g pada suhu 4 C
selama lima belas menit. Filtrate hasil
sentrifuga si dibuang dan pellet hasil
sentrifuse resuspensi dengan PBS
sampai volume awal. Hasil dari
proses ini merupakan Ig Y dengan
kemurnian 60 %. Ig Y dengan
kemurnian 90 % didapat apabila
dilakukan dengan melakukan langkah
yang sama sebanyak 2 kali. Hasil
pemurnian tersebut merupakan Ig Y
anti-E/S F. gigantica. Konsentrasi Ig
Y dihitung dengan spektrofotometer
pada panjang gelombang 595 nm dengan
metode Bradford.
7) Rapid Test Malaria

Pembuatan rapid tes malaria yaitu

dengan teknik imunokromatografi dimana
antigen yang berikatan dengan antibody
sehingga dapat mengetahui hasil suatu tes
dari darah pasien apakah positif (+) atau
negative (-).

Imunokromatografi adalah suatu

teknik untuk memisahkan dan
mengindentifikasi antigen atau antibody
yang terlarut dalam sampel. Dengan
prinsip yaitu serum yang diteteskan pada
bantalan sampel bereaksi dengan partikel
yang telah dilapisi dengan anti HBs
(antibody). Campuran ini selanjutnya akan
bergerak sepanjang strip membrane untuk
berikatan dengan antibodi spesifik. Pada
daerah tes, sehingga menghasilkan garis
warna.

Dasar teori : HBsAg meruapakan suatu

tahap secara kualitatif yang menggunakan
serum atau plasma dimana bertujuan
untuk mendeteksi adanya plasma
membrane yang dilapisi denga anti-
HBsAg antibody pada daerah garis test
selama proses pemeriksaan, sampel serum
atau plasma bereaksi dengan partikel yang
ditutupi dengan anti HBsAg antibody.
Prinsip kerja seperti penggunaan dengan
tespek.