ENZIMAS REGULADORAS

Enzimas que catalizan la reaccin mas lenta de la ruta

metablica= etapa limitante
Controlan toda la ruta metablica
ENZIMAS REGULADORAS
Tipo de control
Tema 13 (I)
a) a nivel de S b) Por retroaccin c) Control gentico
Alosterismo (feed back)

MECANISMOS DE REGULACIN ENZIMTICA Clases de enzimas reguladoras

1. E alostricas
1. Control a nivel de sustrato
2. E reguladas por modificacin covalente
2. Inhibicin reversible por productos (retroalimentacin)

3. Control gentico

4. Activacin/inhibicin alostrica (nivel celular)

5. Modificacin covalente (supracelular):

Reversible: fosforilacin, metilacin,
acetilacin,
ADP-ribosilacin, etc.
Irreversible: activacin proteoltica

1
 1. Enzimas alostricas Enzimas alostricas

Reguladas por metabolitos = modulador efector

Se unen al E por enlace no covalente de forma reversible
Se unen a un sitio regulador o centro alostrico Centro de
(distinto al centro activo) fijacin del S Centro activo
catalitico
Etimolgicamente:
-allos= otra
-steros= forma
Centro alostrico
(unin del modulador)

Centro Centro Centro

Centro
activo alostrico activo
alostrico

s i s

En ausencia de Cuando el inhibidor ocupa

inhibidor, el sustrato se
fija normalmente al
centro activo
Inhibicin alostrica
el centro alostrico, tiene
lugar un cambio conformacional
en el centro activo que impide la
fijacin del sustrato
(Jacob y Monod, 1960)

2
 La unin del efector cambio conformacional del E

Activador:
Afinidad del E por el S
Efector Inhibidor:
Afinidad del E por el S

Tipos de Enzimas alostricas

Enzimas Homotrpicas (modulada por el S, presentan
cooperatividad de unin al S)
Enzimas Heterotrpicas (modulada por efectores y el S)

HOMOALOSTERISMO HETEROALOSTERISMO
ENZIMAS HOMOTRPICAS: el modulador y el sustrato ENZIMAS HETEROTRPICAS: el modulador es distinto al
son idnticos. sustrato. El sitio regulador es distinto del centro cataltico

Bioqumica Mathews, van Holde y Ahern. Addison Wesley 2002

La unin de inhibidores o activadores alostricos no afecta a la

Vmx, per si altera la Km
Bioqumica Mathews, van Holde y Ahern. Addison Wesley 2002

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 Tipos de Enzimas alostricas
Rutas metablicas controladas por retroalimentacin
Enzimas Homotrpicas

El propio S es el modulador modifica la estructura del E

Ruta Enzima Inhibidor
Ejerce efecto positivo: > afinidad. Cooperatividad (+).
Curva sigmoidea Gliclisis Fosfofructoquinasa ATP
Gluconeognesis FBPasa AMP
Ejerce efecto negativo: < afinidad. Cooperatividad(-). Bios. cs. Grasos AcetilCoA carboxilasa AcilCoA
Curva hiperblica Bios. Colesterol HMGCoA reductasa Colesterol
Bios. Purinas PRPP sintetasa AMP,GMP,IMP

Introduccin a la regulacin alostrica

Un sistema alostrico clsico es la Hemoglobina:

Protenas alostricas son oligomricas

Eje de simetra en la estructura espacial de los protmeros
Cada protmero posee solamente un sitio de unin para 1. La fijacin de su sustrato, O2, es de tipo sigmoide
cada uno de los diferentes ligandos que pueden ser:
S; activadores; inhibidores. 2. La fijacin del sustrato puede inhibirse por efectores
La protena puede existir en dos estados conformacionales (H+, CO2, 2,3-BPG) que no actan sobre el Centro Ac-
R y T, siempre en equilibrio tivo (grupo hemo)
L 3. Las subunidades, por separado, presentan cintica
R T
L: cte de equilibrio = [R]/[T] michaeliana en la fijacin de O2
Todos los cambios de R T son concertados.

4
 Cinticas michaeliana y sigmoide:
Mioglobina y Hemoglobina
Efecto del 2,3-bisfosfoglicerato (2,3-BPG)
sobre la saturacin de la hemoglobina
1.0
100
Y
0.8 Mioglobina
80

Saturacin de O2, %
0
0.6 60 0.1 mM
1 mM

0.4 40

Hemoglobina
20
0.2

0
0.0 0 20 40 60 80 100
0 2 4 6 8 10 12
PO2, mmHg
s

Tipos de Enzimas alostricas

Inhibidores y activadores
alostricos Enzimas Heterotrpicos
El modulador es distinto al S
1.0 Disminuyen la Km ap
Y (+)
( Activador)
El sitio regulador es distinto al centro cataltico
El modulador efector produce un efecto + sobre la
0.8
V+ afinidad del E por el S.

0.6
Se produce cambio conformacional del E
(sin efectores)
V0 Km ap
+ Efectores + V
0.4 mx igual
V activacin
( Inhibidor) Aumentan la Km ap Curva se transforma en
(-) hiprbola

Km ap
0.2
V-
s Efectores - Vmx igual
0.0
inhibicin Curva se transforma en
0 2 4 6 8 10 12
- sigmoidea
[S]

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 Tipos de Enzimas alostricos Cintica de los Enzimas alostricos . Ecuacin de Hill
Enzimas Heterotrpicos
E + nS E (S)n E + nP
Unin del S y modulador (+)
cintica sigmoidea
n= coef. de Hill. Parmetro emprico
Sitio de fijacin R Sitio de fijacin Vmx [S]n n se sitios de unin que presenta el
C v=
del S del modulador E para el S
K+ [S]n
Sitio cataltico Sitio regulador
Diferentes subunidades
Enzima inactivo V K1/2 = K0,5 = K

M+ M+ Corresponde a la [S] que produce

una
S C R M
v =1/2 Vmx
Se representa como [S0,5]n [S1/2]n
Enzima Sustrato activo K [S]

Reordenando la ecuacin Vmx [S]n log

V
V= +1
K+ [S]n Vmax V
Pendiente= n
V(K+ [S]n) = [S]n . Vmx
0
n> 1 cooperatividad +
VK+ V[S]n = [S]n . Vmx Curva sigmoidea
-1
VK= [S]n . Vmx - V [S]n -3 -2 -1 +1 +2 +3
0
log[S]
VK= [S]n ( Vmx V) log[S1/2] V
log =0
V [S]n Vmax V
= Aplicando logaritmos log[S1/2] = 0
Vmx V K n log[S]= log K

Ecuacin de una recta

logK logK1/n
V log[S] =
log = n log [S] log K n=1 Ec.Hill se transforma en Ec.M-M n =
Vmx V n=pendiente
No cooperatividad log[S] = log[S1/2]
- log K su ordenada en
el origen Vmax [S] Vmax [S]
y= bx - a V=
Vmax [S]
= =
K+ [S] [S1/2]+ [S] Km+ [S]
n > 1 cooperatividad

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 Cintica de los Enzimas alostricos Cintica de los Enzimas alostricos
Enzimas Heterotrpicos
Enzimas Homotrpicos -
El S acta < la afinidad del E por el S Como el modulador es distinto al S es difcil

Ec. de Hill representa cintica n<1 generalizar la curva de saturacin con el S

Existe cooperatividad pero no se obtienen curvas
sigmoideas
Tipos de Enzimas Heterotrpicos
n>1
n=1
v n>1 1/v n<1 a) Clase K
n=1
n<1 b) Clase V

[S] 1/[S]

Enzimas Heterotrpicos Enzimas Heterotrpicos

Clase K Clase K
Los mas abundantes
Activador (+) hace que la Presencia de Sin modulador
curva sigmoidea se vaya v activador(+)
Activador positivo(+)
aproximando a una Vmx
hiprbola( v de reaccin para
la misma [S])
K 0,5 desciende
Presencia de
Vmx no se altera
activador(-)

Activador (-) hace que la curva

Activador negativo(+) sea sigmoidea pronunciada
K 0,5 mayor
Vmx no se altera K0,5(+) K0,5 K0,5(-) [S]

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 Enzimas Heterotrpicos Efectos alostricos de moduladores positivo y negativo
Clase V Menos numerosas (al no ser cintica michaeliana no se puede usar el trmino
Activador (+) > la Vmx Km, sino el K0,5)
Activador (-) < la Vmx
K 0,5 constante
Vmx varia
Presencia de activador(+) Modulador alostrico
Positivo (+): favorece la forma R
Vmax
Sin modulador El sustrato es
modulador positivo

Presencia de activador(-) Modulador alostrico

Negativo(-): favorece la forma T

K 0,5 ( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed.

Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

Modelos que explican el comportamiento cintico de Enzima tetramrica

los enzimas a) Modelo simtrico concertado Modelo MWC
a) Modelo simtrico concertado (Monod, Wyman y Changeux)
Forma R
s s s s s s s
+S +S
s s
T
inactiva
T R R R R s
I
La unin de S al E L (Cte. de equilibrio)
Estado T
Estabilizado por
Inhibidor (I)
I i i i i
A Estado R
activa Estabilizado por i i i i i i
activador (A)
A La unin de S al E
Forma T

8
 b) Modelo secuencial simple = Modelo de encaje inducido
Se contemplan estados hbridos para la conformacin enzimtica

+S

T T R R
R r

I A Modulador positivo
Induce la
fijacin del S
I
Modulador negativo
Induce una
< afinidad por el S