Métodos para Estudiar Las Células - Robert Vaca

ROBERT BORIS VACA REYES ESPOL_BIOLOGA_PARALELO_2
TABLA DE CONTENIDO
MTODOS PARA ESTUDIA LAS CLULAS ............................................................................................. 2

MTODOS UTILIZADOS POR LOS CIENTFICOS BILOGOS .................................................................. 2
EL MICROSCOPIO................................................................................................................................. 3
PARTE MECNICA DEL MICROSCOPIO ............................................................................................ 3
SISTEMA PTICO ............................................................................................................................. 4
SISTEMA DE ILUMINACIN ............................................................................................................. 5
TIPOS DE MICROSCOPIOS UTILIZADOS POR LOS BILOGOS............................................................... 6
MICROSCOPIO COMPUESTO DE LUZ (PTICO O FOTNICO) ......................................................... 6
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO ............................................................................................... 7
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES ....................................................................................... 8
MICROSCOPIO ELECTRNICO ......................................................................................................... 8
TIPOS DE MICROSCOPIO ELECTRNICOS: ................................................................................... 9
TINTES PARA UTILIZADOS EN BIOLOGA ........................................................................................... 10
Colorantes ..................................................................................................................................... 11
Colorantes histolgicos ms comunes .......................................................................................... 11
LUGOL ........................................................................................................................................ 11
AZUL DE METILENO ................................................................................................................... 12
ROJO DE CARMN ...................................................................................................................... 12
VERDE DE METILO ..................................................................................................................... 12
EOSINA ...................................................................................................................................... 13
ROSA DE BENGALA .................................................................................................................... 13
ORCENA ACTICA ..................................................................................................................... 13
MTODOS PARA ESTUDIA LAS CLULAS
Uno de los mtodos actualmente de mayor relevancia en el estudio de las clulas y dems
partculas de igual o mayor relevancia que constituyen el cuerpo humano y dems seres, adems
de los inertes, es la biologa molecular. sta es una disciplina cientfica cuyo objetivo es el estudio
de los procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular.
En su sentido moderno, la biologa molecular pretende explicar los fenmenos de la vida a partir
de sus propiedades macromoleculares. Dos macromolculas en particular son su objeto de
estudio:
i. Los cidos nucleicos entre los cuales el ms famoso es el cido Desoxirribonucleico (o

ADN), el componente de genes.
ii. Las protenas que son los agentes activos de los organismos vivos.
Al estudiar el comportamiento biolgico de las molculas que componen las clulas vivas,
la Biologa molecular roza otras ciencias que abordan temas similares: as, por ejemplo,
juntamente con la Gentica se interesa por la estructura y funcionamiento de los genes y
por la regulacin (induccin y represin) de la sntesis intracelular de enzimas y de otras
protenas. Con la Citologa se ocupa de la estructura de los corpsculos subcelulares
(ncleo, nuclolo, mitocondrias, ribosomas, lisosomas, etc.) y sus funciones dentro de la
clula. Con la Bioqumica estudia la composicin y cintica de las enzimas, interesndose
por los tipos de catlisis enzimtica, activaciones, inhibiciones competitivas o alostricas,
etc. Tambin colabora con la Filogentica al estudiar la composicin detallada de
determinadas molculas en las distintas especies de seres vivos, aportando valiosos datos
para el conocimiento de la evolucin.
Sin embargo, difiere de todas estas ciencias enumeradas tanto en los objetivos concretos
como en los mtodos utilizados para lograrlos. As como la Bioqumica investiga
detalladamente los ciclos metablicos y la integracin y desintegracin de las molculas
que componen los seres vivos, la Biologa molecular pretende fijarse con preferencia en el
comportamiento biolgico de las macromolculas (ADN, ARN, enzimas, hormonas, etc.)
dentro de la clula y explicar las funciones biolgicas del ser vivo por estas propiedades a
nivel molecular.
MTODOS UTILIZADOS POR LOS CIENTFICOS BILOGOS
Los mtodos que emplea esta nueva ciencia son fundamentalmente los mismos que la Biofsica,
Bioqumica, y Biologa. Utiliza los anlisis qumicos, cualitativos y cuantitativos, los conocimientos
de la Qumica orgnica, la Biologa de microorganismos y de virus, etc., pero revisten especial
importancia los nuevos mtodos micro analtico tanto fsicos como qumicos. Merecen destacarse
la microscopa electrnica que permite resoluciones que alcanzan los 10 Armstrong; la difraccin
de rayos x, que determina la estructura y disposicin espacial de los tomos de las
macromolculas; la ultra centrifugacin diferencial, tanto analtica como preparativa, que permite
separaciones antes imposibles; la cromatografa de gases, y, en fase lquida, la espectrografa de
infrarrojos, la Qumica con istopos trazadores, la espectrometra de masas, etc.
EL MICROSCOPIO
Los microscopios son utensilios de relevante importancia en el estudio de las partculas que
superan diminutivamente el espectro visible. stos, son un mecanismo compuesto de mltiples
piezas, todas con una importancia absoluta para un correcto funcionamiento. Se utilizan
especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se
transparentan. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas:
PARTE MECNICA DEL MICROSCOPIO
La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo, el revlver, el asa, la platina, el
carro y el tornillo micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin;
adems, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.
El pie y soporte: contiene la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general
forma de Y o bien es rectangular.
La columna o brazo: llamada tambin asa, es una pieza en forma de C, unida a la base por su
parte inferior mediante una bisagra, permitiendo la inclinacin del tubo para mejorar la captacin
de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo
inferior se adapta al pie.
El tubo: tiene forma cilndrica . El tubo se encuentra en la parte superior de la columna, enfoca
el objeto mediante un sistema de cremalleras, las cuales permiten que el tubo se mueva mediante
los tornillos.
El tornillo macromtrico o macroscopico: girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del
microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a un mecanismo de cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.
El tornillo micromtrico o microscopico: mediante el ajuste fino con movimiento casi

imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y ntido de la
preparacin. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm, que se utiliza para
precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
La platina: es una pieza metlica plana en la que se coloca el objeto que se va a observar.
Presenta un orificio, en el eje ptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos a la
preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece inmvil; en otros casos puede ser
giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.
Las pinzas: son dos piezas metlicas que sirven para sujetar el objeto. Se encuentran en la
platina.
El revlver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al
girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posicin de trabajo, lo que
se nota por el ruido de un pin que lo fija.
SISTEMA PTICO
Es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo

componen. Est formado por el ocular y los objetivos. El objetivo proyecta una imagen de la
muestra que el ocular luego ampla.
El ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la cercana de
la pieza con el ojo del observador. Tiene como funcin aumentar la imagen formada por el
objetivo. Los oculares son intercambiables y sus poderes de aumento van desde 5X hasta 20X.
Existen oculares especiales de potencias mayores a 20X y otros que poseen una escala
micromtrica; estos ltimos tienen la finalidad de medir el tamao del objeto observado.
Los objetivos: se disponen en una pieza giratoria denominada revlver y producen el aumento
de las imgenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la preparacin que se
examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos: objetivos secos y objetivos de
inmersin.
Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la
preparacin. En la cara externa llevan una serie de ndices que indican el aumento que producen,
la abertura numrica y otros datos. As, por ejemplo, si un objetivo tiene estos datos: plan 40/0,65
y 160/0,17, significa que el objetivo es plan acromtico, su aumento 40 y su apertura numrica
0,65, calculada para una longitud de tubo de 160 mm. El nmero de objetivos vara con el tipo de
microscopio y el uso a que se destina. Los aumentos de los objetivos secos ms frecuentemente
utilizados son: 4X, 10X, 20X, 40X y 60X.
El objetivo de inmersin est compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar
a travs de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la
preparacin, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro.
Generalmente, estos objetivos son de 100X y se distingue por uno o dos crculos o anillos de color
negro que rodea su extremo inferior.
SISTEMA DE ILUMINACIN
Este sistema tiene como finalidad dirigir la luz natural o artificial de tal manera que ilumine la
preparacin u objeto que se va a observar en el microscopio de la manera adecuada. Comprende
los siguientes elementos:
Fuente de iluminacin: se trata clsicamente de una lmpara incandescente de tungsteno

sobrevoltada; en versiones ms modernas con leds. Por delante de ella se sita un condensador
(una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el dimetro
de la parte de la preparacin que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de
observacin produciendo luces parsitas.
El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del microscopio y ya

alineada con el sistema ptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos
caras: una cncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cncava se
emplea de preferencia con iluminacin artificial, y la plana, para natural (luz solar). Los modelos
ms modernos no poseen espejos sino una lmpara que cumple la misma funcin que el espejo.
Condensador: est formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos
luminosos sobre el plano de la preparacin, formando un cono de luz con el mismo ngulo que el
del campo del objetivo. El condensador se sita debajo de la platina y su lente superior es
generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparacin
cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliacin); existen condensadores de
inmersin, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la preparacin.
La abertura numrica mxima del condensador debe ser al menos igual que la del objetivo
empleado, o no se lograr aprovechar todo su poder separador. El condensador puede deslizarse
verticalmente sobre un sistema de cremallera mediante un tornillo, bajndose para su uso con
objetivos de poca potencia.
Diafragma: el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para

ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo
que se hace cerrndolo ms de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolucin del sistema
ptico.
El ojo humano slo tiene un poder de resolucin de

aproximadamente 1/10 milmetros, o 100 micrmetros. El poder de
resolucin es una medida de la capacidad para distinguir un objeto
de otro; es la distancia mnima que debe haber entre dos objetos
para que sean percibidos como objetos separados. Esta limitacin
del ser humano ha llevado a los cientficos a desarrollar uno de
los inventos ms importantes de la historia: el microscopio
TIPOS DE MICROSCOPIOS UTILIZADOS POR LOS BILOGOS
MICROSCOPIO COMPUESTO DE LUZ (PTICO O FOTNICO)
La luz es un fenmeno complejo que clsico se explica con un modelo simple basado en rayos y
frentes de onda. La cartilla molecular de la microscopia de las expresiones explora muchos de los
aspectos de la luz visible comenzando con una introduccin a la radiacin electromagntica y la
continuacin a travs a la visin humana y a la opinin del color. . Un grupo de los cientficos, que
suscribieron a la teora de la onda, centr sus discusiones en los descubrimientos del remiendo
Christian Huygens.
El campo de oposicin cit experimentos del prisma de sir Isaac Newton como prueba que la luz
viaj como ducha de partculas, cada procedimiento en una lnea recta hasta que fue refractada,
absorbida, reflejada, difractada o disturbada de una cierta otra manera. Cerca de 200 aos ms
tarde, los mecnicos del quantum nacieron de la investigacin de Einstein, Planck, de Broglie, Niels
Bohr, Erwin Schrdinger, y otros que procuraron explicar cmo la radiacin electromagntica
puede exhibir lo que ahora se ha llamado dualidad , o ambos partcula como y comportamiento
ondulado. La luz se comporta ocasionalmente como partcula, y en otras veces como onda. Este, o
dblese, papel complementario del comportamiento de la luz se puede emplear para describir
todas las caractersticas sabidas que se han observado experimental, extendindose de la
refraccin, de la reflexin, de interferencia, y de la difraccin, a los resultados con la luz polarizada
y el efecto fotoelctrico.
Los microscopios son instrumentos diseados para producir imgenes visuales o fotogrficas
magnificadas de objetos pequeos. El microscopio debe lograr tres tareas: produzca una imagen
magnificada del espcimen, separe los detalles en la imagen, y haga los detalles visibles al ojo o a
la cmara fotogrfica humano. Este grupo de instrumentos incluye no solamente diseos de la
mltiple- lente con objetivos y condensadores, pero tambin los solos dispositivos muy simples de
la lente que son a menudo hand-held, por ejemplo una lupa.
Este tipo de microscopios utilizan la luz como fuente de energa y las propiedades de los lentes
pticos que permiten aumentar el tamao de los objetos observados. El microscopio ptico ms
simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un
objeto hasta quince veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos que disponen de
varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden
aumentar un objeto por encima de las 2000 veces. Dentro de los microscopios fotnicos existen
varios tipos, distinguidos por pequeas diferencias, aunque el principio bsico de funcionamiento
es el mismo microscopio de campo claro o compuesto, es el microscopio ms comnmente usado,
consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el ocular, montados en extremos opuestos de un
tubo cerrado. El objetivo est compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada
del objeto examinado. Las lentes de los microscopios estn dispuestas de forma que el objetivo se
encuentra en el punto focal del ocular. El aumento total del microscopio depende de las
longitudes focales de los dos sistemas de lentes. La muestra que se va a observar debe ser teida
con algn colorante que permita hacerla destacar sobre el fondo claro o brillante que proviene de
la fuente luminosa.
MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

Permite el estudio de las partes internas de la muestra, para lo cual sta debe de ser dispuesta en
una fina capa que pueda ser atravesada por la luz. El campo microscpico est intensamente
iluminado y los objetos estudiados se ven ms oscuros en l. Provisto de un condensador
paraboloide, que hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo, sino que
iluminan oblicuamente la preparacin. Los objetos aparecen como puntos luminosos sobre un
fondo oscuro.
MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES
Se basa en las modificaciones de la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes
notables en la preparacin. Consta de un dispositivo, situado dentro o debajo del condensador,
que produce una diferencia de un cuarto de longitud de onda en unos rayos luminosos con
respecto a otros. Esto origina unas variaciones de luminosidad en los elementos estudiados, que
permite diferenciarlos del resto de la muestra y observar con mayor detalle su estructura interna.
MICROSCOPIO ELECTRNICO
El microscopio electrnico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta fundamentalmente

de un tubo de rayos catdicos, en el cual debe mantenerse el vaco. El ctodo est constituido por
un filamento de tungsteno, que al calentarse elctricamente emite los electrones, los cuales son
atrados hacia el nodo por una diferencia de potencial de 50.000 a 100.000 voltios. La lente del
condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el objeto que se observa, cuya preparacin exige
tcnicas especiales. Los electrones chocan contra la preparacin, sobre la cual se desvan de
manera desigual.
Se acostumbra a utilizar el trmino microscpicos para las fotografas tomadas a travs del
microscopio ptico y micrografa o electro micrografa para las que se toman en el microscopio
electrnico.
Los aumentos mximos conseguidos en el microscopio electrnico son del orden de 2.000.000X
mediante el acoplamiento al microscopio electrnico de un amplificador de imagen y una cmara
de televisin. En resumen, el microscopio electrnico consta esencialmente de:
Un filamento de tungsteno (ctodo) que emite electrones.

Condensador o lente electromagntica, que concentra el haz de electrones.
Objetivo o lente electromagntica, que ampla el cono de proyeccin del haz de luz.
Ocular o lente electromagntica, que aumenta la imagen.
Proyector o lente proyectora, que ampla la imagen.
Pantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano.
TIPOS DE MICROSCOPIO ELECTRNICOS:
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN DE LUZ
Utiliza un haz de electrones acelerados por un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una
seccin muy fina de la muestra, sean tejidos, clulas u otro material.
Microscopio electrnico de transmisin, se utiliza para ver secciones o cortes de tejidos, dirige un
haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar; una parte de los electrones rebotan o
son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la
muestra.
Para utilizar este microscopio debe cortarse la muestra en capas finas con un grosor entre 50 a
200 nanmetros. Dicha muestra se coloca en una redecilla que se introduce en el tubo con una
pieza alargada que se introduce por un lateral Para el funcionamiento de este microscopio se
utiliza un haz de electrones, obtenido desde una lmpara especial de tungsteno. El tubo tiene
vaco en su interior, para impedir que nada dificulte el paso de los electrones. Un fallo en este
vaco ocasiona la aparicin de cuerpos extraos en el visor. Luego de ser enfocados por las lentes
electromagnticas, los electrones inciden sobre la muestra, formando la imagen que se obtiene en
blanco y negro, la cual puede proyectarse sobre una pantalla especial o pelcula fotogrfica. ste
examina partes grandes de la muestra. ste microscopio obtiene imgenes en dos dimensiones,
que luego pueden ser plasmadas en fotografas si interesa. ste es el tipo de microscopio
electrnico ms utilizado en investigacin, ya que obtiene muy buenos resultados y tiene gran
potencia.
MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO
Se utiliza para el estudio de la morfologa y la topografa de los elementos. Estos instrumentos

utilizan voltajes cercanos a los 20.000 voltios. Las lentes magnticas utilizan un haz muy fino de
electrones para penetrar repetidamente la muestra, y se produce una imagen ampliada de la
superficie observada en la pantalla de un monitor. El microscopio electrnico mixto tiene
propiedades comunes con el de transmisin y con el de barrido y resulta muy til para ciertas
investigaciones. Hay otros microscopios analticos que detectan seales caractersticas de los
elementos que constituyen la muestra.
Microscopio electrnico de barrido, este permite la observacin de superficies sin la necesidad de
realizar cortes microscpicos, explorando la superficie de la imagen punto por punto. Su
funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de
forma parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla de una televisin.
DE BARRIDO VS DE TRANSMISIN
Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la aparicin de electrones
secundarios, ambos son recogidos y contados por un dispositivo electrnico situado a los lados de
la muestra. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel en un monitor de televisin.
Cuanto mayor sea el nmero de electrones contados por el dispositivo, mayor ser el brillo del
pxel en la pantalla. Como consecuencia del barrido electrnico se genera una imagen con
apariencia tridimensional, que permite estimar parmetros celulares como tamao y forma,
dndole ventajas en este sentido sobre el microscopio electrnico de transmisin. Las desventajas
del microscopio electrnico de barrido es su menor capacidad de aumento ya que slo puede a
unas 100000 veces y tambin tiene una resolucin 1000 veces menor que el microscopio
electrnico de transmisin. Eso y que slo permite ver el exterior de la muestra.
TINTES PARA UTILIZADOS EN BIOLOGA

Antes de tratar los diferentes tipos de tintes, es de vital importancia saber el uso que les vamos a
dar a stos. Para ello necesitamos definir nuestro trabajo en curso, es decir la tincin.
Una tincin in vivo (tincin supra vital) es el proceso de teir tejidos vivos. Al provocar que
determinadas clulas o estructuras adquieran los colores de contraste, se puede estudiar su
ubicacin y morfologa mientras estn desempeando su funcin. El propsito ms comn es
revelar detalles de la cito estructura que de otra manera no resultaran evidentes, sin embargo, la
tincin supra vital puede revelar adems donde aparece un determinado producto qumico o
donde se lleva a cabo una determinada reaccin qumica dentro de las clulas o tejidos.
A menudo estas tinciones son llamadas tinciones vitales o supra vitales. Se introducen en el
organismo mientras las clulas an se encuentran vivas. Para conseguir el efecto deseado, el
colorante usualmente se utiliza en soluciones muy diluidas que van entre 1:5.000 a 1:50.000. A
pesar de esto las tinciones son eventualmente txicas para los organismos, algunas ms que otras.
Una tincin in vitro involucra el coloreo de clulas o estructuras que han sido removidas de su
contexto biolgico. Se utiliza a menudo una combinacin de varios colorantes para revelar ms
detalles y caractersticas de las que se obtendran con la utilizacin de uno solo. Combinados con
protocolos especficos de fijacin y de preparacin de muestras, los cientficos y profesionales de
la salud pueden utilizar estas tcnicas estandarizadas como una herramienta diagnstica repetible
y consistente. Una contra tincin es una tincin que consigue que las clulas o estructuras sean
ms visibles, cuando no se consigue que sean totalmente visibles con la tincin principal.
Por ejemplo, el cristal violeta tie nicamente a las bacterias Gram positivas en la tincin de Gram.
Se utiliza una contra tincin de safranina (que colorea todas las clulas), para permitir tambin la
identificacin de bacterias Gram negativas. Es de notar que muchas tinciones pueden ser utilizadas
tanto en clulas vivas como en clulas fijadas.
Colorantes
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por
los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas
positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes
catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas
cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados
positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y
el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo
se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la
localizacin de las gotculas o depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro
Sudn. Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas para la microscopa, son
suficientes los procedimientos simples de tincin. El azul de metileno es un buen colorante simple
que acta sobre todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color tan intenso
que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias
en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tie.
Colorantes histolgicos ms comunes
Los diferentes colorantes reaccionan o se concentran en diferentes partes de las clulas o tejidos,
y estas propiedades son utilizadas como una ventaja para revelar partes o reas especficas.
Algunos de los colorantes biolgicos ms comunes se listan ms abajo. A menos que se indique lo
contrario la mayora de estos colorantes se utilizan con clulas y tejidos fijados. Las tinciones
vitales (que pueden ser utilizadas con organismos vivos) se encuentran destacadas.
LUGOL
El yodo se utiliza en qumica analtica como indicador para el almidn. Cuando se mezcla almidn
con una solucin de yodo, se desarrolla un color intensamente azul, representando la formacin
del complejo de inclusin yodo/almidn. El almidn es una sustancia muy comn en la mayor
parte de las clulas vegetales, de modo que una solucin diluida de yodo puede colorear el
almidn presente en las clulas. El yodo tambin es componente de la coloracin de Gram
utilizada en microbiologa. La solucin de Lugol o Lugol yoduro (IKI) es una solucin de color
marrn que se torna negra en presencia de almidones y puede ser utilizada para colorear clulas,
haciendo ms visible el ncleo. En la coloracin de gram el yoduro se utiliza como mordiente,
aumentando la capacidad del colorante para entrar en las clulas a travs de los poros presentes
en la membrana o pared celular.
AZUL DE METILENO
El azul de metileno se usa como tintura para teir ciertas partes del cuerpo antes o durante la
ciruga. Su uso es principalmente como antisptico y cicatrizante interno. Tambin se utiliza como
colorante en las tinciones para la observacin en el microscopio, y para teir resultados en los
laboratorios. Se utiliza para teir clulas animales, para hacer ms visibles sus ncleos. Es tambin
utilizado para teir los extendidos de sangre para ser utilizados en citologa y como colorante vital
en el recuento de reticulocitos.
La empresa farmacutica TauRx Therapeutics ha comprobado que el uso del azul de metileno
(Rember) retrasa el deterioro de las funciones cognitivas de los enfermos de Alzheimer. De
todas maneras, la formulacin empleada en los ensayos clnicos no es la utilizada para teir las
clulas y, por tanto, no debe utilizarse.
ROJO DE CARMN
Es un colorante de un intenso color rojo que puede ser utilizado como sal de litio para teir
glicgeno, mientras que las sales de alumbre-carmn son colorantes que se adhieren al ncleo. Las
tinciones con carmn requieren del uso de un mordiente, que usualmente es aluminio o alumbre.
VERDE DE METILO
Se utiliza frecuentemente en microscopia de campo claro, para teir la cromatina de las clulas y
facilitar as su visualizacin.
EOSINA
Se utiliza ms frecuentemente como contra coloracin de la hematoxilina, impartiendo un color

que va del rosado al rojo al material citoplasmtico, membrana celular, y algunas estructuras
extracelulares. Adems imparte un fuerte color rojo a los eritrocitos. La eosina puede ser utilizada
tambin en algunas variantes de la coloracin de Gram, y en muchos otros protocolos de tincin.
De hecho existen dos compuestos muy estrechamente relacionados (aunque no iguales) conocidos
como eosina. El ms frecuentemente utilizado es la eosina Y (tambin conocida como eosina
amarillenta) ya que posee una tonalidad amarillenta muy suave. El otro compuesto conocido
como eosina es la eosina B, tambin conocida como eosina azulada o rojo imperial, la cual posee
una suave tonalidad azul. Los dos colorantes son intercambiables, y en la utilizacin de uno u otro
es ms una cuestin de preferencia y tradicin.
ROSA DE BENGALA
Rosa de bengala es una mancha. Su sal de sodio se utiliza comnmente en gotas para los ojos para
teir las clulas conjuntivales y corneales daadas y de ese modo identificar el dao al ojo. La
mancha tambin se utiliza en la preparacin de Foraminfera para el anlisis microscpico, que
permite la distincin entre las formas que estaban vivos o muertos en el momento de la recogida.
Una forma de Rosa de Bengala tambin est en estudio para el tratamiento de ciertos tipos de
cncer y enfermedades de la piel. La formulacin del cncer del frmaco, conocido como PV-10, se
encuentra actualmente en ensayos clnicos para el melanoma y el cncer de mama. La compaa
tambin ha formulado una medicina basada en el Rosa de Bengala para el tratamiento de eczema
y la psoriasis, este medicamento, PH-10, se encuentra actualmente en ensayos clnicos tambin.
ORCENA ACTICA
La orcena (trmino usual que no aparece en el Diccionario de la Real Academia, donde s aparecen
los trminos orcina y urchilla)2 3 es un colorante de color rojo violceo (prpura) que se extrae de
forma natural de diversos lquenes (orchella). Se emplea en la industria alimentaria con el cdigo
E182. Es una sustancia que se utiliza para teir y ver las distintas fases de los cromosomas en
divisin celular. Con esta tcnica de tincin se pueden ver los cromosomas impregnados por la
orcena actica en color morado y de esta manera poder observar las diferentes etapas de la
mitosis; esto facilita la visualizacin de las etapas del ciclo celular. Su composicin no est muy
clara actualmente.

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ROBERT BORIS VACA REYES ESPOL_BIOLOGA_PARALELO_2

MTODOS PARA ESTUDIA LAS CLULAS ............................................................................................. 2

i. Los cidos nucleicos entre los cuales el ms famoso es el cido Desoxirribonucleico (o

MTODOS UTILIZADOS POR LOS CIENTFICOS BILOGOS

PARTE MECNICA DEL MICROSCOPIO

El tornillo micromtrico o microscopico: mediante el ajuste fino con movimiento casi

Es el encargado de reproducir y aumentar las imgenes mediante el conjunto de lentes que lo

Fuente de iluminacin: se trata clsicamente de una lmpara incandescente de tungsteno

El espejo: necesario si la fuente de iluminacin no est construida dentro del microscopio y ya

Diafragma: el condensador est provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para

El ojo humano slo tiene un poder de resolucin de

TIPOS DE MICROSCOPIOS UTILIZADOS POR LOS BILOGOS

MICROSCOPIO COMPUESTO DE LUZ (PTICO O FOTNICO)

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES

El microscopio electrnico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta fundamentalmente

Un filamento de tungsteno (ctodo) que emite electrones.

TIPOS DE MICROSCOPIO ELECTRNICOS:

MICROSCOPIO ELECTRNICO DE TRANSMISIN DE LUZ

MICROSCOPIO ELECTRNICO DE BARRIDO

Se utiliza para el estudio de la morfologa y la topografa de los elementos. Estos instrumentos

TINTES PARA UTILIZADOS EN BIOLOGA

Colorantes histolgicos ms comunes

Se utiliza ms frecuentemente como contra coloracin de la hematoxilina, impartiendo un color

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