UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAU

CAMPUS DE PARNABA
DEPARTAMENTO DE BIOMEDICINA

IMUNOLOGIA MDICA
BIOMEDICINA

Professor

Reginaldo Almeida da Trindade

Monitor

___________________________

Parnaba - Piau
1 Semestre
2012
 Apresentao
Curso de Imunologia Mdica para estudantes do curso Bacharelado em Biomedicina
da Universidade Federal do Piau.

Perodo: Primeiro semestre de 2012.

Horrio: 08h00m as 12h00m as teras-feiras

Local: Sala 701 do Bloco da Administrao

Neste curso as atividades estaro distribudas em: I-aulas expositivas conforme os

temas constantes no cronograma; II-estudos dirigidos em sala de aula, com superviso do
professor e monitores (Ex); e Seminrios (Se)
Nas teras-feiras sero apresentadas aulas expositivas, seguidas de perodos de
estudo por grupo de discusso (GD) e exerccios para fixao das matrias. Destes
exerccios 01 (um) ser selecionado no dia para entrega individual pelos alunos. Este
exerccio constar para avaliao de participao. Desta maneira, o esquema geral para as
teras-feiras ser:

08:10 s 09:00 aula expositiva

09:00 s 10:00 Leitura do livro texto em classe
10:00 s 10:15 - Intervalo
10:15 s 11:30 perodo de resoluo de exerccios
11:30 s 11:45 discusso e entrega do Exerccio do Dia

A nota final ser calculada como descrito abaixo:

Avaliao:

O critrio de avaliao ser feito de acordo com a Frmula, de modo geral as

avaliaes parciais e resoluo de GDs valero 90% e 10% da nota ou mdia final,
respectivamente.

MF = {[(P1 + P2 + P3)/3*0,90)] + GD*0,10}

Onde:
MF = mdia final
P1-P3 = provas 1 a 3 (Art. 8 da Res. n 043/95 CEPEX)
GD = mdia dos exerccios e GD resolvidos
2
 A mdia mnima para aprovao direta 7 (Sete), para exame final 4 (quatro)
6,9 (seis, nove). A reprovao ocorrer caso a mdia situe-se entre 0 (zero) e 3,9 (trs,
nove) ou se o aluno tiver presena em aula inferior a 75 % (Res. n 043/95 CEPEX).
A aplicao de Segunda chamada para os alunos que perderem alguma das
avaliaes parciais somente ocorrer mediante cumprimento do disposto no artigo 4 da
Res. n 043/95 CEPEX com a devida apresentao dos respectivos documentos
comprobatrios.
Na Prova de Exame Final constar toda a matria do semestre (de acordo com o
artigo 76 do Regimanto Geral da UFPI).
A entrega e divulgao das notas, vistas das avaliaes pelo aluno, e discusso da
prova se dar de acordo com o Art. 15 da Res. n 043/95 CEPEX, e a reviso de notas
ser realizada de acordo com o art. 17 da Res. n 043/95 CEPEX.

BIBLIOGRAFIA BSICA:
Imunoensaios: Fundamentos e aplicaes. Adelaide J.Vaz, Kioko Takei e Ednia
Casagranda Bueno. 2 edio. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2007.
Clinical immunology and serology: a laboratory perspective. Christine Dorresteyn Stevens.
3rd edition. Philadelphia: F.A. Davis Company, 2010.
Diagnstico Laboratorial das Principais Doenas Infecciosas e Auto-imunes. A. Walter
Ferreira & Sandra L. M. vila. 2 edio. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2001.
Infectioous Disease of the Fetus & Newborn Infant. Jack S. Remington & Jerome O, Klein.
W.B. Pensylvania: Saunders, 1995.
Blood Transfusion in Clinical Medicine. P.L. Mollison, C.P. Engelfriet, M. Contreras. 10
edio. London: Blackwell Science, 1998.
The Immunoassay Handbook. Editor: David Wild. 3rd edition. Oxford: Elsevier Ltd., 2007.
Imunobiologia - O sistema imunolgico na sade e na doena. Charles A. Janeway Jr. &
Paul Travels. 4 edio. Porto Alegre: Artes Mdicas, 2002.

BIBLIOGRAFIA COMPLEMENTAR:
Cellular and Molecular Immunology. Abul K. Abbas; Andrew H. Lichtman; J. S. Pober. 4
edition. Philadelphia: W.B.Saunders Co., 2003.
Fundamentos de Imunologia. Ivan M. Roitt Peter J. Delves. 10a edio. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 2004.
Imunologia. Vera Calich & Celidia Vaz. Rio de Janeiro: Livraria e Editora Revinter Ltda,
2001.

3
PROFESSOR:

Prof. Dr. Reginaldo Almeida da Trindade Setor 01 - Bloco 17, Sala 07

E-mail: rtrindade@ufpi.edu.br

MONITOR:

Nome: ___________________________________________________________________

E-mail: ___________________________________________________________________

4
 CRONOGRAMA
1 SEMESTRE - BIOMEDICINA 2012
IMUNOLOGIA MDICA
Aula Data Contedo
Maro
Diagnstico imunolgico no quadro geral da Patologia Clnica
01 13/03 Interao Ag-Ac in vitro. Tcnicas de Imunoprecipitao (IEF e IDR) e
Gamopatias.
Exerccio 1
Tcnicas de Imunoaglutinao.
02 20/03 Imunodiagnstico das infeces bacterianas (estreptococcias e sfilis)
Exerccio 2 Prtica VDRL (as 10 h T1 e as 11 h T2)
Testes de imunofixao do complemento
03 27/03 Testes de tipagem de HLA na compatibilidade doador versus receptor
Exerccio simulado Prtica: Interpretao dos resultados da RFC
Exerccio 3

Abril
Testes de imunofluorescncia (para anticorpos e Imunofenotipagem)
04 03/04 Imunodiagnstico da toxoplasmose e doena de Chagas
Exerccio 4 Prtica Hemaglutinao Toxoplasmose
05 10/04 08/10 h: Avaliao Parcial 1
10/12 h: Metodologia para estudo da resposta celular
06 17/04 Avaliao Laboratorial de Imunodeficincias. Protenas de fase aguda
Exerccio 5 Prtica Aglutina Ltx (?)
Imunoensaios Enzimaimunoensaios para diagnstico imunolgico
07 24/04 Exerccio 6 (simulado prtica): demonstrao do Western-blot;
Prtica ELISA

Maio
08 01/05 Feriado
Imunodiagnstico da infeco por HIV/AIDS
09 08/05 Marcadores tumorais em laboratrio clnico
Exerccio 7
Automao em Imunoensaios
15/05 Avaliao de testes imunolgicos
10
Controle de qualidade em Imunoensaios
Exerccio 8
11 22/05 08/10 h: Avaliao Parcial 2
10/12 h: Imunodiagnstico das viroses: rubola, CMV, EBV
12 29/05 Exerccio 9
Imunodiagnstico das hepatites virais (Terica Extra)
Exerccios 10

Junho
Imunodiagnstico das doenas do tecido conjuntivo: LES
Imunodiagnstico de doenas auto-imunes rgo-especficas
13 05/06
Imunodiagnstico de Alergias
Exerccio 11 e Exerccio 12
14 12/06 08/10 h: Avaliao Parcial 3
15 19/06 Semana do TCC
16 26/06 Exame Final

5
 AULA 1

Imunoprecipitao - Gamopatias

EXERCCIOS 1

Paciente I.A., sexo feminino, 55 anos, apresenta sintomas de excesso de fatiga, ficando
cansada muito facilmente, sem outra queixa. O mdico solicita alguns exames
laboratoriais (de acordo com os resultados parciais, o mdico incluiu mais alguns), cujos
resultados foram:

- Contagem de hemcias 3,5 x 106/L (normal 4,2 a 5,0 x 106/L), contagem de leuccitos
3.600/L (normal 5.000 a 10.000/L).
- Taxa de sedimentao de hemcias (VHS) 32 mm/h (normal <20mm/hora)
- Eletroforese de protenas identificando hipergamaglobulinemia com pico monoclonal
- IgG srica 4.520 mg/dL (normal 600-1.500 mg/dL) IgM e IgA normais
- Imunoeletroforese para identificar pico monoclonal IgG1 cadeias kappa
- Exame de urina ligeira proteinria (identificao mostrou ser cadeias leves de Ig)
- Mielograma presena de plasmcitos
- Ressonncia magntica destruio da segunda vrtebra torcica com extruso de um
plasmocitoma

O acompanhamento seguiu-se ao longo dos anos com quimioterapia antineoplsica,

corticides, e transfuso de hemcias quando muito anmica. Em uma ocasio foi feita
plasmafrese (IgG estava em 8.200 mg/dL). Frequentemente ela apresentava infeces
piognicas comuns em imunodeficientes humorais.

Questes:

1. Conceitue mieloma mltiplo (aspectos patolgicos, clnicos e laboratoriais)

2. Como se explica a anemia (leve) e leucopenia?

3. Porque a taxa de sedimentao est aumentada?

4. Qual a utilidade de identificar a protena monoclonal?

5. Explique o fundamento da tcnica de imunoeletroforese de protenas.

6. Porque mostrava sinais de imunodeficincia enquanto mostrava

hipergamaglobulinemia?

7. Porque a plasmafrese foi necessria?

6
 AULA 2

Imunoaglutinao e Infeces Bacterianas

EXERCCIOS 2

Gestante de 26 semanas deu entrada no servio de atendimento de emergncia com

hemorragia vaginal e contrao uterina. No exame de ultrasson o feto mostrou
hepatoesplenomegalia, ascite moderada e hidrocele bilateral.
As investigaes posteriores mostraram infeco por Treponema pallidum na me e
no feto.
O tratamento foi feito com Penicilina G. O parto ocorreu a 31 semanas de gestao.
O RN apresentou ttulo de VDRL 4x inferior ao da me.
O RN foi tratado com Penicilina G e teve alta hospitalar aps 70 dias de nascimento,
quando se apresentava clinicamente normal e ainda positivo para o VDRL.

Pergunta-se:

1. O que levou o mdico que atendeu a gestante a suspeitar de uma sfilis? Em que se
baseou a hiptese diagnstica da infeco materna por Treponema pallidum?

2. Quais testes laboratoriais foram importantes para esse diagnstico?

3. Quais exames devem ser feitos na me/recm-nascido? Como se interpreta?

4. Porque o RN ainda apresentou ttulos de VDRL?

5. No caso de RN nascido de me sorologicamente positiva e no tratada, que conduta

deve ser tomada, em atendimento ao protocolo do MS?

Pesquise e responda posteriormente

6. O tratamento materno logo aps o diagnstico foi adequado? Por que o uso da
penecilina G?

7
 6/17/2010

TtulodoAnticorpo:________________Ttulodoantgeno:_________________ TtulodoAnticorpo:________________Ttulodoantgeno:_________________

Soro positivo 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 Soro Soro positivo 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 Soro
Antgeno g/ml negativo Antgeno g/ml negativo
1/10 1/10

1/5 + + + + + - + 1/5 + + + + + - +
1/10 + + + + - - - 1/10 + + + + - - +
1/20 + + + + - - - 1/20 + + + + - - +
1/40 + + + + - - - 1/40 + + + + - - +
1/80 + + + - - - - 1/80 + + + - - - -
1/160 + - - - - - - 1/160 + - - - - - -
Diluente - - - - - - - Diluente - - - - - - -

Observaogeral:___________________________________________________ Observaogeral:___________________________________________________

TtulodoAnticorpo:________________Ttulodoantgeno:_________________
TtulodoAnticorpo:________________Ttulodoantgeno:_________________

Soro positivo 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 Soro Soro positivo 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 Soro
Antgeno g/ml negativo Antgeno g/ml negativo
1/10 1/10

1/5 + + + + + - + 1/5 + + + + + - +
1/10 + + + + - - + 1/10 + + - - - - +
1/20 + + + + - - - 1/20 + + - - - - -
1/40 + + + - - - - 1/40 + + - - - - -
1/80 + + + - - - - 1/80 + + - - - - -
1/160 + - - - - - - 1/160 + - - - - - -
Diluente - - - - - - - Diluente - - - - - - -

Observaogeral:___________________________________________________ Observaogeral:___________________________________________________

TtulodoAnticorpo:________________Ttulodoantgeno:_________________
TtulodoAnticorpo:________________Ttulodoantgeno:_________________

Soro positivo 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 Soro Soro positivo 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 Soro
Antgeno g/ml negativo Antgeno g/ml negativo
1/10 1/10

1/5 + + + + + - + 1/5 + + + + + + -
1/10 + + + + + - - 1/10 + + + + + - -
1/20 + + + + - - - 1/20 + + + + + - -
1/40 + + + + - - - 1/40 + + + + - - -
1/80 + + + - - - - 1/80 + + + - - - -
1/160 + - - - - - - 1/160 + - - - - - -
Diluente - - - - - - - Diluente - - - - - - -

Observaogeral:___________________________________________________ Observaogeral:___________________________________________________

1
 AULA 3
Imunofixao de complemento e Tipagem HLA (Doador x Receptor)

EXERCCIOS PRTICO PARA INTERPRETAO DE RFC

8
 6/17/2010

IMUNOFIXAO DO COMPLEMENTO - RFC IMUNOFIXAO DO COMPLEMENTO - RFC

Interpretao de resultados da RFC feita para pesquisa de PROTOCOLO (cont.):
anticorpos anti-cardiolipina (Sfilis) em amostras de soro. 3) Adicionar 25 L do sistema indicador hemoltico (SH) em todas
as cavidades
PROTOCOLO:
(SH = hemcias de carneiro revestidas de anticorpos IgG anti-
1) Diluir as amostras em duas fileiras a partir de 1:2 (vol. 50 L)
hemcias de carneiro (produzidos por coelhos)
Na fileira T (Teste), adicionar 25uL de antgeno (Ag) diludo de
acordo com seu ttulo (concentrao ideal)
Incubar 30 minutos a 37oC
Na
N fil
fileira
i C ((controle
t l d da amostras
t d
de soro),
) adicionar
di i 25 LL de
d
diluente (no lugar de Ag) CONTROLES DO ENSAIO:
2) Adicionar 25 L de complemento (soro de cobaia diludo na Ag: antgeno + complemento + sistema indicador hemoltico (SH)
concentrao ideal) em todas os ensaios, exceto no controle C: complemento + sistema indicador hemoltico (SH)
do sistema hemoltico (SH). SH: s sistema indicador hemoltico (SH)
Incubar 30 minutos a 37oC

IMUNOFIXAO DO COMPLEMENTO - RFC IMUNOFIXAO DO COMPLEMENTO - RFC

GUIA PARA INTERPRETAO DOS RESULTADOS:
CRITRIOS DE LEITURA: 100% de hemlise
1) Analisar e explicar os resultados dos controles do ensaio
Significa que sobrou Complemento para lisar as a) controle do antgeno
b) do complemento e
hemcias do sistema indicador hemoltico, c) do sistema hemoltico

portanto esse complemento no foi usado na 2) Analisar e explicar os resultados das 3 amostras de soro,
a)) verifique
q os respectivos
p controles da amostra
primeira
i i etapa
t d
do tteste,
t ou seja,
j no
h
havia
i b) Qual o ttulo da amostra reagente (positiva)?
imunocomplexo formado entre a amostra de Ttulo: inverso da maior diluio do soro onde ainda h reatividade (ausncia de hemlise)

soro e o antgeno adicionado. 3) Discutir as causas e propor solues, supondo que:

a) o controle de Ag apresentou no hemlise (efeito anticomplementar)
b) o controle de C apresentou no hemlise (efeito anticomplementar)
Hemlise No Hemlise c) o controle de SH apresentou hemlise

Pesquisa de Ac anti-cardiolipina placa 1 Pesquisa de Ac anti-cardiolipina placa 1

Diluio 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256

1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256

Teste 1

T1
Controle 1

Teste 2 C1

Controle 2 T2

Teste 3 C2

Controle 3
T3

controle Ag C SH
C3

Con- Ag C SH
Controles Controles troles

Ag = Ag + C + SH Ag = Ag + C + SH
Hemlise Hemlise
C = C + SH C = C + SH
No Hemlise No Hemlise
SH = sist. Hemoltico SH = sist. Hemoltico

1
 6/17/2010

Pesquisa de Ac anti-cardiolipina placa 2 Pesquisa de Ac anti-cardiolipina placa 3

1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256

T1 T1

C1 C1

T2 T2

C2 C2

T3 T3

C3 C3

Controles Com- Ag C SH Controles Com- Ag C SH

Ag = Ag + C + SH troles Ag = Ag + C + SH troles

C = C + SH Hemlise C = C + SH Hemlise
SH = sist. Hemoltico No Hemlise SH = sist. Hemoltico No Hemlise

Pesquisa de Ac anti-cardiolipina placa 4

1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256

T1

C1

T2

C2

T3

C3

Controles Com- Ag C SH

Ag = Ag + C + SH troles

C = C + SH Hemlise
SH = sist. Hemoltico No Hemlise

2
EXERCCIOS 3

Caso 1. Criana com 1 ano e seis meses, com leucemia mieloide aguda, necessita de
transplante de medula, pois no responde ao tratamento. A busca pelo possvel doador
feita na famlia.

1. Analise a tipagem HLA dos membros da famlia e faa inferncias sobre esse possvel
procedimento.

Caso 2. Em um servio de transplante de rgo dois pacientes imigrantes de outro pas

esto espera de um rgo imunologicamente compatvel. O servio possui um convnio
com o banco de sangue local, onde tambm feita a imunofenotipagem dos doadores de
sangue locais, aps a autorizao dos mesmos. O servio local deseja saber se h a
possibilidade de encontrar doadores compatveis entra a populao local, ou se seria
melhor encaminh-los para seus pases de origem. realizada ento uma PRA (Prova de
reatividade antileucocitria) com o soro do paciente receptor, cujos resultados so
expressos pelo score de colorao.

9
 Linf. tipados Score Score Linf. tipados Score Score
Paciente 1 Paciente 2 Paciente 1 Paciente 2
HLA-A 1 4 1 HLA-DR 1 2 2
HLA-A 2 1 1 HLA-DR 2 2 2
HLA-A 3 1 4 HLA-DR 3 2 2
HLA-A 7 1 4 HLA-DR 4 1 2
HLA-A 8 2 8 HLA-DR 5 1 2
HLA-A 9 2 8 HLA-DR 6 1 2
HLA-A 11 2 6 HLA-DR 7 2 2
HLA-A 19 1 6 HLA-DR 8 2 2
HLA-A 23 1 4 HLA-DR 9 1 2
HLA-A 24 1 4 HLA-DR 10 2 2

HLA-B 5 1 4 HLA-DQ 1 1 4
HLA-B 7 1 4 HLA-DQ 2 1 8
HLA-B 8 1 6 HLA-DQ 3 1 4
HLA-B 13 1 6 HLA-DQ 4 2 8
HLA-B 14 1 6 HLA-DQ 5 1 4
HLA-B 15 1 6 HLA-DQ 6 2 4
HLA-B 22 1 8 HLA-DQ 7 1 6
HLA-B 27 1 8 HLA-DQ 8 1 6
HLA-B 35 1 8 HLA-DQ 9 2 8
HLA-B - 44 1 8

Questes:
1. possvel que estes pacientes (1 e 2) encontrem um doador neste local? Justifique
sua resposta baseados nos resultados encontrados no PRP e nas limitaes que cada
paciente apresenta, caso haja.
2. Por que foram utilizados a tipagem para HLA-A, HLA-B, HLA-DR e HLA-DQ?

10
Abaixo consta um painel com resultados do teste de microlinfotoxicidade, ou seja, soros
contendo o anti-HLA de interesse, Linfcitos totais do paciente e doadores, complemento
e corante Tripan blue:
Anticorpos pata diferentes antgenos HLA-A
1 2 3 4 5 6 7 8
RECEPTOR
DOADOR 1
DOADOR 2
DOADOR 3
Anticorpos pata diferentes antgenos HLA-B
1 2 3 4 5 6 7 8
RECEPTOR
DOADOR 1
DOADOR 2
DOADOR 3
Anticorpos pata diferentes antgenos HLA-DR
1 2 3 4 5 6 7 8
RECEPTOR
DOADOR 1
DOADOR 2
DOADOR 3
Anticorpos pata diferentes antgenos HLA-DQ
1 2 3 4 5 6 7 8
RECEPTOR
DOADOR 1
DOADOR 2
DOADOR 3
Teste reativo (clulas coradas). Teste no reativo (clulas no coradas)

Questes:
1. Qual a tipagem HLA do receptor, e dos doades 1, 2 e 3.
2. Dentre os doadores testados, qual o mais provvel apresentar compatibilidade
com o referido receptor?
3. Na prova de microlinfocitotoxicidade qual o princpio imunolgico empregado
nesta prova laboratorial?

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 AULA 4
Testes de Imunofluorescncia Diagnstico de Toxoplasmose e Chagas

EXERCCIOS 4

CASO 1: S.B.R, neonato, cuja me teve toxoplasmose na gestao. Estes exames foram
solicitados pela Infectologia Peditrica, como parte da propedutica para investigao da
infeco congnita.

Resultados: IgG positivo 158 UI/ml (MEIA) e IgM positivo ndex da abs 0.934 (MEIA)
Valores de referncia: IgG positivo => 3 UI/ml e IgM positivo > 0.500
Mtodo Meia: Elisa em micropartcula

O index calculado a partir da absorbncia da amostra/absorbncia do calibrador.

Responda:

1. Qual o possvel diagnstico para o RN?

2. Por que necessrio pesquisar IgG e IgM?
3. Na ausncia de sinais clnicos no RN, qual a melhor conduta diagnstico, em razo
dos valores de IgM, apesar de positivos, serem baixos?

CASO 2: R. F. G. B, 1 ms, em propedutica para toxoplasmose congnita. No foi

informada a sorologia materna ou dados clnicos.

Resultados:
IgG: positivo 88 UI/ml (MEIA) e IgM: negativo (MEIA)
Imunofluorescncia IgG positivo 1 / 2048 ( 1/16 = exposio ao parasita)

Responda:

1. Qual o possvel diagnstico para o RN?

2. Por que neste caso a tcnica de IFI se torna mais importante para o diagnstico?
3. Por quais razes se supe o IgM negativo no RN?

CASO 3: K.F.C, 23 anos, portadora de HIV, em tratamento. Sorologia para acompanamento

de rotina.

Resultados:
IgG positivo 1000,6UI/ml (MEIA)
IGM negativo (MEIA)

Responda:

1. Apesar do IgM negativo, qual a implicncia dos valores encontrados para IgG?

12
CASO 4: A.N., 26 anos, gestao 14 semanas, em prodedutica de pr-natal.

Resultados:
Toxoplasmose: IgG negativo (MEIA) e IgM positivo index 0.800 - (MEIA)
Sorologia 15 dias aps, realizada com pareamento de amostras:
IgG: positivo 45 UI/ML (MEIA) e IgM positivo index 1.200 (MEIA)
* Valores obtidos na 1 amostra: IgG negativo, IGM positivo index 0.892

Responda:

1. Qual o diagnstico da mulher e em qual fase da doena se encontra?

2. Qual a importncia de se realizar uma nova coleta e determinaes aps 15 dias?
3. Qual a importncia de ser realizar o pareamento de amostras clnicas em novas
coletas?

Caso 5: R.P, 32 anos, gestao 16 semanas, em propedutica de pr-natal.

Resultados:
IgG: positivo 380 UI/ML (MEIA) e IgM positivo index 0.600 (MEIA)
IFI IgG: positivo 1/1024 e IFI IgM: negativo

Responda:

1. Qual o diagnstico da mulher e em qual fase da doena se encontra?

2. Por que a tcnica de IFI foi importante nesta condio?
3. H risco de transmisso para o feto?

Interpretao
Avidez de IgG:> 60% (<30% = infeco aguda, desde que o exame seja realizado at no
mximo a 20 semana)

Caso 6: T.C.J. 37 anos, gestao 28 semanas, em propedutica de pr-natal.

Resultados:
IgG positivo 200 UI/ml (MEIA) e IgM positivo index 0.750 (MEIA)
IFI IgG: positivo 1/8192 e IFI IgM: negativo
Avidez de IgG: > 60% ( < 30% = infeco aguda)
Responda:

1. Por que nesta condio clnica foi importante a determinao do ndice de avidez
do IgG?
2. Qual o diagnstico da gestante? H risco de transmisso para o feto?

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CASO 7: RN de L.B.C, 35 anos, pr-natal com 5 consultas. Criana de sexo masculino
nasceu no dia 18/04/207 por parto Cesrio (indicao: ventrculomegalia moderada) com
idade gestacional de 35 semanas e 4 dias pela, Lquido Amnitico espesso, apresentao
ceflica. Chorou ao nascer. Peso de nascimento: 1.790 g, estatura: 41 cm. Pequeno para
idade gestacional. Solicitado TORCH e Toxo da me e exame da placenta.
Resultados dos exames pr-natal 60 dias antes do nascimento (21/02/2007):
Toxo: IgG>250 UI/ML, IgM= reagente
Rubola: IgG= 29,25 UI/ML; IgM= negativo
CMV: IgG= 4,71 UI/ML; IgM= Negativo
VDRL: NR
HIV, Chagas, Hepatites B e C, HTLV negativos.
Ultra-sonografia (US) do dia 12/04/07:
Hidrocefalia (ventriculomegalia moderada com dilatao dos ventrculos laterais).
Sorologias do RN do dia 18/04/07:
VDRL: NR
Chagas: NR
CMV: IgG= 22 UI/ML, IgM= Negativo
Toxo: HAI= 1/32, IgG= > 300 UI/ML, IgM= Negativo
Antomo-patolgico da placenta: No foram encontrados parasitas na pea.

Responda:

1. Nos exames pr-natal qual a(s) principal(ais) justificativa(s) que conduziria(m) a um

provvel diagnstico de toxoplasmose congnita?
2. Qual o diagnstico da gestante? H risco de transmisso para o feto?
3. Qual seria a explicao para um IgM negativo no RN, como de fato foi encontrado?

14
 AULA 5
Diagnstico das Imunodeficincias Protenas de fase aguda

EXERCCIOS 5

AX foi saudvel at 8 meses de idade, quando comeou a manifestar vrios episdios de

otites, pneumonias e erisipela (infeco da pele por Streptococcus). Com uso de
antibiticos, o menino ficava curado por algumas semanas. A me dele teve dois irmos
que morreram ainda bebs, cerca de 30 anos antes (quando a antibioticoterapia ainda era
pouco disponvel).
Com 2 anos, os resultados de dosagem de Ig do menino mostraram:

IgG = 80mg/dL (normal 600-1200 mg/dL), e

IgA (normal 50-125mg/dL) e IgM (normal 70-150mg/dL) indetectveis (<20 mg/dL).
A contagem de leuccitos circulantes, de linfcitos e de neutrfilos estava normal.

O mdico indicou administrao intramuscular mensal de gamaglobulina.

Aos 9 anos um episdio de atelectasia (colapso parcial de um pulmo, por excesso e

cronicidade de enzimas proteolticas no local, p.ex. elastase) e foi anotado no pronturio
que AX no apresentava tonsilas (amdalas).

O menino seguiu em tratamento recebendo gamaglobulina humana, restrita condio de

higiene e acompanhamento clnico laboratorial bimestral.

Questes
1. Qual abordagem laboratorial inicial para investigar causa/compartimento de
imunodeficincias?
2. Explique o fundamento do mtodo de dosagem de Ig srica.
3. Como se classifica a imunodeficincia do menino?
4. Como distinguir o caso de hipogamaglobulinemia transitria da infncia?
5. De que local devem ser selecionados os doadores de sangue para o pool de plasma
para obter a gamaglobulina a ser usada no menino? Explique

15
 AULA 6
Imunoensaios ELISA e WesternBlot

EXERCCIOS 6

Exerccio prtico: Interpretao dos testes EIA e suas variantes:

Considere que na placa abaixo, as respectivas linhas contm os seguintes testes:

A. Um EIA direto competitivo com antgeno marcado;

B. Um EIA de captura de Ig com anticorpo marcado;
C. UM EIA indireto para dosagem de anticorpo;
D. Um EIA direto competitivo com anticorpo marcado;
E. Um EIA de captura de Ig com antgeno marcado;

Utilize os poinhos abaixo para esquematizar a sequncia da sua reao:

A B

C D

Considere cada fileira a partir da 3 uma amostra diferente, e as fileiras 1 e 2 como controles.
Quais so positivas para cada teste (considerando os controles do teste):

A. ____________________________________________________________
B. ____________________________________________________________
C. ____________________________________________________________
D. ____________________________________________________________
E. ____________________________________________________________

16
 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

A
B

C
D

E
F

G
H

Questes

1. Qual a importncia da soluo de bloqueio utilizada na preparao da microplaca?

2. Por que so necessrias lavagens entre as diversas etapas?
3. De acordo com seus conhecimentos sobre enzimas, por que a padronizao do tempo de
reao, aps a adio do substrato, fundamental para o resultado correto da tcnica?
4. Por que a reao parada com uma soluo cida? Poderia ser usada uma soluo
alcalina? Qual o princpio bioqumico desta etapa?

17
Exerccio prtico: Determinao de anticorpos anti-HIV atravs da reao de Western-
blot (Demonstrao).

A tcnica de Western blot tem sido utilizada na caracterizao do perfil

antignico do HIV e na descrio da resposta imune para este vrus em pessoas expostas ou
infectadas. Devido a seu alto custo, mas com grande sensibilidade comumente utilizada
apenas como teste confirmatrio, sendo o ensaio imunoenzimtico (ELISA) utilizado
rotineiramente como teste de triagem.

O princpio da reao o mesmo do ensaio imunoenzimtico, mas na reao

Western-blot as protenas virais so separadas pela sua massa (kDa) em tiras de
nitrocelulose. O preparo destas fitas, contendo as protenas virais, feito pelas indstrias
produtoras de kits de diagnstico. No laboratrio clnico a reao feita a partir da adio
do soro do paciente.

1. O HIV cultivado da linhagem celular H9 de linfcitos T. O vrus parcialmente

purificado inativado por tratamento com psoralen e luz utravioleta e rompido
pela ao de detergente.
2. Os extratos proticos so aplicados num gel de SDS-poliacrilamida.
3. As protenas virais so separadas de acordo com o peso molecular, atravs de
eletroforese.
4. As protenas so transferidas do gel para uma membrana de nitrocelulose ou nylon,
em cuba de transferncia, por aplicao de uma corrente eltrica.
5. A membrana ento lavada, bloqueada (com protenas, ex: leite, para minimizar a
ligao inespecfica de imunoglobulinas), cortada em fitas e acondicionada.

No momento do teste:

6. Para cada amostra de soro utilizada uma fita em separado. As fitas de

nitrocelulose so incubadas na presena do soro ou plasma dos pacientes, assim
como, com os soros controles, por 2 hs a 37oC.
7. A seguir, as fitas so lavadas, por 3 vezes, com tampo fosfato (PBS-Tween 20).
8. Para detectar a presena dos anticorpos, adicionado soro detector: soro de cabra
anti IgG humana, conjugado peroxidase e as fitas so incubadas por 30 min. a
37oC, e lavadas.
9. A reao revelada com soluo de substrato: tampo citrato contendo H2O2 e 4-
cloro-1-naftol (cromgeno), por 10 a 15 minutos temperatura ambiente, e lavadas
com gua.
10. Para leitura da reao feita analise das bandas proteicas reveladas, e a presena
ou ausncia de anticorpos para HIV determinada pela comparao de cada fita de
nitrocelulose teste com os padres de bandas dos controles positivos Cada banda
visualizada na fita teste deve ser relacionada com um peso molecular das protenas
virais, baseando-se em sua posio e por comparao com a fita contendo o
controle positivo altamente reativo (forte).

18
 Resultados do Western-blot:

Exemplos: Fortemente positivos Fracamente positivos Negativo

gp160
gp120
p65
p55
p51
gp41
p39

p24

p18

Controle de soro
Banda especfica de HIV-2

Padro observado Resultado

Nenhuma banda presente Negativo.
Uma banda presente em gp41 ou gp120/160, e a banda p24 Positivo para HIV-1.
presente. Normalmente gp 120/160 e gp 41 apresentam-se
difusas.
Bandas presentes com padro diferente do esperado. Indeterminado.

19
20
 WESTERN-BLOT

Algumas amostras foram submetidas confirmao pelo Western-blot:

A seguir seguem os resultados do teste:

A B C D

QUESTES PARA ESTUDOS

1. Considerando os resultados do ELISA do exerccio anterior quais as amostras que

devero ser submetidas a testes confirmatrios (Western-blot)?

2. Que material aplicado na eletroforese do Western blot?

3. Em que etapa do Western blot se aplica o soro do paciente a ser testado?

4. Por que em alguns casos no so identificadas as protenas gp120 ou gp160?

5. Quais os diagnsticos finais das amostras analisadas pelo western blot?

6. Compare o uso da tcnica ELISA e Western Blot- Por que Western Blot considerado
menos sujeito a obteno de um falso positivo?

21
 AULA 7
Imunodiagnstico da infeco pelo HIV e Marcadores Tumorais

EXERCCIOS 7

Paciente, masc., 38a, alega uso droga EV e faz peridicos testes para anticorpos anti-HIV,
sempre negativos (ltimo teste h dois meses e 20 dias depois de um episdio de risco).
Hoje repete o teste que se mostra reagente (fraco) na triagem e negativo no Imuno Blot
(westernblot).
Na reconvocao informa a histria pregressa e diz que o ltimo contato de risco foi h 15
dias. O mdico solicita exames adicionais para confirmar a infeco por HIV e aproveita
para fazer avaliao da imunocompetncia do paciente.

Questes
1. Porque houve incoerncia entre os dois resultados?
2. Explique o fundamento dos dois mtodos (ELISA e imunoblot) para pesquisa de
anticorpos.
3. necessrio repetir o exame para verificar a ocorrncia de infeco h 15 dias?
Explique.
4. Que outro(s) exame(s) pode(m) ter sido solicitado(s) para confirmar a infeco pelo
HIV?
5. Se confirmada a infeco, quais exames sero feitos periodicamente para acompanhar
o paciente? Explique para que.

22
 AULA 8
Automao em Imunoensaios e Controle de Qualidade

EXERCCIOS 8

No Brasil, o Ministrio da Sade obriga a realizao de testes para a pesquisa de anticorpos em

amostras de doadores de sangue. A pesquisa de anticorpos, embora no seja a mais aconselhvel,
pois, antgenos esto presentes anteriormente produo de anticorpos, ocorrem na maioria dos
diagnsticos sorolgicos, sendo, portanto, necessria a utilizao de testes muito sensveis para
que seja diminuda a chance de infeco transfusional.

Questes

A) Um teste para pesquisa de anticorpos anti-X foi aplicado a 200 amostras, sendo 30
pacientes com a infeco/doena pelo agente X e 170 de indivduos supostamente sadios sem
contato com o agente X. Os resultados mostraram positividade do teste em 28 pacientes e em
3 indivduos sadios. Defina e calcule os ndices de sensibilidade, especificidade, falso-
positividade e falso-negatividade obtidos para esse teste.

B) Um teste para pesquisa de anticorpos anti-X foi aplicado a 1000 amostras, sendo 100
pacientes com a infeco/doena pelo agente X e 900 de indivduos supostamente sadios sem
contato com o agente X. Os resultados mostraram positividade do teste em 99 pacientes e em
50 indivduos sadios. Defina e calcule os ndices de sensibilidade, especificidade, falso-
positividade e falso-negatividade obtidos para esse teste.

Doena Teste Doena Total

Teste Total
Presente Ausente Presente Ausente
Reagente Reagente
No No
Reagente Reagente
Total Total

C) Compare os ndices dos dois grupos e verifique como os valores de falso-positivos e falso-
negativos so afetados pela sensibilidade e especificidade do teste.

D) Preencha as lacunas abaixo e verifique como a prevalncia de doentes no grupo analisado e

a sensibilidade do teste influencia o valor preditivo de positivo?

Populao 1: Nmero de pessoas:10.000, Prevalncia de 5 %, S: 99%, E: 98 %.

Populao 2: Nmero de pessoas:10.000, Prevalncia de 1 %, S: 99%, E: 98 %

Doena Teste Doena Total

Teste Total
Presente Ausente Presente Ausente
Reagente Reagente
No No
Reagente Reagente
Total Total

23
E) Veja a figura abaixo e responda:

a. Qual cut-off (A, B, C) escolher para ensaios de triagem? Explique sua resposta.

b. Qual cut-off (A, B, C) escolher para ensaios confirmatrios? Explique sua resposta.

24
 AULA 10
Imunodiagnstico das infeces virais: Rubola CMV - EBV

Exerccios 9

Gestante, 16 anos na 18a semana de gestao, apresentou aborto espontneo. A paciente

saudvel, mas no tinha feito nenhum exame prenatal e no possua carto de vacinao
e tinha tido poucos recursos de assistncia sade na infncia. Autpsia do feto mostra
incluses virais em clulas de quase todos os tecidos, e evidncias de desorganizao
celular que deixariam defeitos congnitos (neurolgicos) se o feto tivesse sobrevivido.

Questes
1. Como poderia ter sido detectada essa infeco (aguda) na gestante (laboratorial)?
2. Como se pode confirmar a infeco ativa no feto (intra-uterino)?
3. Como se explica a virulncia e efeitos citopticos desse vrus no feto, se a me no
mostrava sintomas de infeco viral?
4. Como pode ser prevenida essa infeco congnita? H risco em futuras gestaes dessa
mulher?

25
 AULA 11

Imunodiagnstico das Hepatites virais

Exerccios 10

Hepatite C

Um jovem do sexo masculino, 18 anos, foi atendido no ambulatrio de Gastroenterologia

de um hospital. Queixava-se de astenia, anorexia e emagrecimento com 3 semanas de
evoluo. Referia tambm ser usurio de drogas intravenosas, consumo moderado de
lcool. No histria de transfuses sanguneas. Os exames laboratoriais revelaram:

Exames Valores obtidos

AST 650 UI/L (VR: 37 UI/mL)
ALT 1020 UI/L (VR: 37 UI/mL)
Anti-HVA total +
Anti-HVA IgM -
HBsAg, anti-HBc -
Anti-HCV ELISA +
Anti-HCV Imunoblot +
RNA do HCV 925.000UI/mL
Gentipo do HCV 1
Sorologias para infeco aguda por CVM, EBV, rubola, Sem alterao (SA)
toxoplasmose
Anti-HIV -
Hemograma AS

Questes
1. Qual o diagnstico laboratorial desse paciente? Explique.
2. Explique a interpretao clnica provvel dos resultados dos testes para anti-HAV.
3. Qual a importncia da quantificao do RNA do HCV?
4. Qual a importncia da genotipagem do HCV?
5. Explique por que o mdico solicitou testes sorolgicos para outros agentes
infecciosos como CV, EBV, rubola, toxoplasmose e HIV?

26
INTERPRETAR OS PERFIS SOROLGICOS DA HEPATITE B ABAIXO:

MARCADORES SOROLGICOS DA HEPATITE B

Perfil HBsAg Anti-HBc Anti-HBc HBeAg Anti-HBe Anti-HBs
total IgM
A + + + + - -
B + - - - - -
C -/ + - - + -
D - + - - - +
E - - - - - +
F + + - + - -
G + + - - + -
H - + + + - -
I - + + - - -
J + - - + - -
K - + - - - -
L - - - - - -

PERFIL POSSVEL INTERPRETAO

Possvel imunodeficincia
Imune aps inf. Natural
Incubao
Crnico sem replicao viral
Imune (vacinado)
Infectado no passado, RN - me+, baixa viremia, mutante do
eptopo a, resultado falso+
Soroconverso anti-HBe
Janela sorolgica do core
Hepatite B aguda
Crnico com replicao viral
Susceptvel

27
 AULA 12
Imunodiagnstico das doenas autoimunes e alergias

Exerccios 11

Doenas reumticas autoimunes

Uma jovem universitria de 20 anos procurou um Servio de Reumatologia de um hospital

e relatou que apresentava dores nas juntas e seu corpo estava inchado. Notou tambm
manchas no seu corpo, principalmente no rosto. J havia passado anteriormente por um
mdico clnico geral que havia solicitado exame laboratorial. Os resultados revelaram
proteinria no exame de urina tipo 1 e anemia e plaquetopenia no hemograma. O
reumatologista solicitou mais exames e os resultados alterados no sangue dessa paciente
foram observados em: frao globulina aumentada na eletroforese de protenas,
protenas de fase aguda positivas e nveis baixos de complemento e suas fraes. No se
observou alteraes nos testes de coagulao. Os exames sorolgicos demonstraram: IFI
com clulas HEp2: positivo (1:640), padro nuclear homogneo com barra metafsica
positiva; IFI com Crithidia lucilliae positivo (1:160); ENA para anti-Ro e anti-RNP positivos
(ambos1:1.600). Os anticorpos anticardiolipina foram negativos. O diagnstico feito pelo
reumatologia foi LES em atividade.

Questes
1. Porque o mdico clnico geral encaminhou a paciente para um reumatologista?
2. Baseado em que o reumatologista fez o diagnstico acima?
3. Como se interpreta os resultados do IFI com clulas HEp2?
4. Quais os principais sinais e sintomas clnicos no LES?
5. Qual o significado clnico das alteraes de protenas de fase aguda nesse caso?
6. Como o reumatologista chegou ao diagnstico de doena em atividade?
7. Qual a possvel interpretao para um resultado negativo para anticorpos
anticardiolipina?

28
Exerccios 12

Alergias

Criana com 11 anos apresenta sintomas respiratrios agudos do tipo alrgico desde os 6
anos de idade. Vrios exames foram feitos e confirmaram o diagnstico de alergia a
caros, poeira e mofos. Os exames foram feitos em laboratrio de anlises clnicas e no
prprio consultrio do dermatologista. Na fase sintomtica (asmtica), so administrados
medicamentos para aliviar os sintomas e para bloquear o mediador que liberado pelas
clulas e s vezes at antiinflamatrios corticides. A resposta Th2 (humoral)
predominante nessa afeco mostra produo de IL-4 e IL-13 (induz switch para IgE) e IL-5
(maturao de eosinfilos).

Questes
1. Que tipo de hipersensibilidade (alergia) essa criana apresenta? Como esse
mecanismo imunolgico que desencadeia esse sintoma?
2. Que exames foram feitos no laboratrio? Que anticorpo pesquisado e que antgeno(s)
(so) usado(s)?
3. Explique o teste que foi feito no dermatologista. Como o resultado positivo?
4. Algum dos medicamentos pode interferir com os resultados dos exames laboratoriais e
testes cutneos? Qual, porque?
5. Pacientes alrgicos (tipo I) melhoram quando recebem gama-interferon por outra
indicao mdica. Explique.

29