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    5. RESULTADOS Y DISCUSION 5.1Evaluacién de parametros fisicoquimicos. En un estudio previo, se habian determinado algunos pardmetros fisicoquimicos al aceite de capulin. Ademas, en ese mismo estudio, al efectuar la cromatografia de gases al aceite, se encontré la presencia de un acido graso no comun (Castillo, 1997). Al realizar los estudios correspondientes, se encontré la presencia de ese acido graso y se comprobaron los datos anteriormente determinados. Ademas, se comparan los valores obtenidos con aquellos que presentan los aceites comerciales. En la tabla No. 6, se muestran los valores obtenidos en los indices fisicoquimicos para el aceite de capulin, Como se puede observar, el indice de refraccién y el indice de saponificacion son semejantes a aquellos que presentan los aceites comestibles. La densidad relativa y punto de fusién, nos hacen notar que se trata de un aceite muy fluido. Esto nos haria pensar que el aceite presenta varias insaturaciones y se confirma al obtener un indice de yodo elevado; sin embargo, menor al reportado con anterioridad. Para corroborar lo anterior, se !levé a cabo la caracterizacion del aceite mediante la cromatografia de gases; ademas, como se tenia conocimiento de la presencia de un Acido graso no comin (Castillo, 1997), el cual podia representar algun peligro de toxicidad en el estudio bioldgico, se llevé a cabo también la hidrogenacién del aceite a diferentes tiempos para observar el efecto que tenia sobre el mismo. Cabe sefialar que unicamente se efectuaron las determinaciones de los parametros fisicoquimicos al aceite crudo de la semilla de capulin, puesto que de las muestras de aceites hidrogenados sdlo se pretendia hacer un seguimiento de su indice de yodo, para comprobar que la hidrogenacién estaba llevando a cabo correctamente. Aunado a lo anterior, el perfil de los acidos grasos nos permitié corroborar que la hidrogenacién se estaba lievando a cabo preferentemente sobre el acido graso desconocido. 51 Tabla No. 6 Parametros Fisicoquimicos de los aceites crudo e hidrogenado de la almendra de capulin (Prunus serotina). Densidad Puntode —indicede —indicede ~—Indicede —indice de relative Fusién —Refraccin Yodo. © Saponiffica-_-—acidez_—, (25"c) °C) (25°C) (ghigaceite) ——cién (% acido (mg KOHig —oleico) aceite) Aceite crudo, jo eee Wits __2353_— Ba Aceite 39-45 103.36 hidrogenado Smin.* Aceite 48-56 3223 ~ hidrogenado 30 min, * Aceite 61-66 ————— 14.04 hidrogenado : 100% * Aceite 1310.0 BOIS hidrogenada 40 min. 1% catalizador Aceitede [09185 “18 TAIT 17. 187s Waximoo7 > maiz Manteca de [0.888- 0.664 —————> 46-70 195-202 MaxinioT cerdo** * Aceites hidrogenados con 5% de catalizador. “+ Swem (1979) 5.2Perfil de acidos grasos. Al obtener e! perfil de acidos grasos confirmamos la presencia de este acido graso no comin en un porcentaje promedio de! 30% (Tabla No. 7). De igual manera, se pudo observar cémo el tratamiento de hidrogenacién realizado lo eliminé de manera significativa desde los cinco minutos de hidrogenaci6n, por lo que se decidié emplear el mismo tratamiento bajo las mismas condiciones para el aceite que se ocuparia en el estudio biolégico. Se comprobé ademas, que la concentracién de catalizador empleada fue la adecuada, ya que el aceite al que se le dio el tratamiento con 1% de catalizador, aunque se le dejd mas tiempo hidrogenandose (10 minutos), el Acido graso desconocido no se elimind, como se puede observar en la tabla No.7 con respecto a los acidos grasos no identificados, Este resultado era el que se esperaba, ya que desde el momento en que se estaba realizando la hidrogenacién, ésta muestra no consumia la cantidad de hidrégeno que las otras muestras consumieron desde que arrancé la hidrogenacién. €n el aceite crudo se observé la presencia de una gran cantidad de acidos grasos libres de los que se sospechaba su presencia con el valor de indice de acidez relativamente alto; para poder eliminarlos, seria necesario un proceso de refinamiento. En los apéndices 7.4 al 7.6 se presentan los cromatogramas obtenidos de las muestras del aceite de capulin. 3B sopeayijuapl tase —_ —_ — se oN oon ae _ — ~— — = oompinbery 9D) L — 8 4 ioe wwe os'y eve caugioun | Hg & 6 co 8s Wo oe es arg ex1z — emeioun ez, Be & % oxy barbs, 992, eur gue a0 | cr 8 ’ z are oven ees vee ese ogueaisa Baty 9 ca a “ sos 995 ors ev ves ee Baty ’ 1 —_— — —_ _— c= ons | org (mw) sopeziieyeo ws Cr) ‘soynujul (mb (%) (%) ) tw) ore 0010 = somnup gg — soy g (%) ewied peusfospiy peuoBopry opeuaBoply opeuebospiy uyndes os) opiegeap = ep_—s edo ep zeWap —utindeo jndes ——uyindeo undes op opnia—opisy eooeN «aay HOY oaDY ap AIEOY OP oY IP BIQWION aSEID OPIOY NY Bpaesy —-@payady -(eunoues snunig) windeo ep espuewye e] ap opeueBoupiy @ opnia soyj99e So] ap SOSeIB SOpIDE Op 19d Lon eige, 5.3Estudio de Toxicidad Aguda. Tabla No. 8 Caracteristicas ctinicas observadas en ef estudio de Toxicidad Aguda. Coractersica ceive do Acelto énido celta Acaite ‘Acelte Acelte Acolte ebrervads Male Jmandra refinadode hidrogenade hidrogenade hidragenade_hidragenado (control) " decapulln slmencrade 10'con 1% © SiconS% 30" con Si 100% con ‘coputin —catallzedareatelizador eatallzador = S%. ceatallzador Hipotermia * Los lugares ocupados par un asterisco, indican la presencia de esa caracteristica en ese lote. ss 5.4Estudio de Toxicidad Subaguda. Al realizarse el estudio de toxicidad aguda, se vio la presencia de algunas caracteristicas que indican la posibilidad de toxicidad en el aceite refinado (Tabla No.8), por lo que era necesario tlevar a cabo un estudio mas detallado al respecto, debido a que ninguno de los ratones en ningin lote murid, por lo que se efectud el estudio de toxicidad subaguda. En este estudio se trabajé con 25 ratones con un peso promedio de 15 gramos. Estos fueron distribuidos en 5 lotes con 5 ratones cada uno. Dichas lotes quedaron de la siguiente manera: Tote de acene Tote Ge acehe Loto de aceite de Lote de acela Tote do scone hidragenado crud de almendra ——refinado de. maiz hidrogenado. de capulin ‘almendra de capulin (ogka pc HS 0Ko pc] [309/Ko pc.) BB0g/Kop.c.) (5 9Kg 9.04 56 Como se habia mencionado anteriormente, para este estudio se incorporaron los diferentes tipos de aceites a la harina de pellet, y de acuerdo a las dosis manejadas, seria la cantidad de aceite incorporado a la harina. Cabe mencionar que los datos fueron calculados de acuerdo a un estudio biolégico realizado anteriormente. De acuerdo al peso promedio inicial que presentaban los ratones y a la informacin que se tenia acerca del consumo de alimento aproximado por dia, se hizo la relacién con la dosis que manejariamos en cada lote, para de esta manera determinar la cantidad de aceite que le agregariamos en cada caso y asegurar que los ratones consumieran la dosis requerida diariamente. Quedando asi que para los lotes que manejaron la dosis de 30 g aceite/ Kg p.c., se le adicioné por cada gramo de pellet, 147.09 mg de aceite, y para la dosis de 15 g aceite / Kg p.c., por cada gramo de pellet, 73.54 mg de aceite, En las tablas 9 - 13 se muestran los valores de! consumo de pellets para cada lote. Cada tabla muestra los valores de ingesta de cada ratén por semana, asi como el promedio del alimento ingerido a lo largo del estudio. 7 Tabla No. 9 Alimento ingerido en el lote de aceite de maiz (control). Alimento consumido. Ratén (9) “semana 2" semana 3*semana__ 4" semana Total _| 4 16.2 18.5 19.7 30.1 84.5 z 178 173 153 Bi 735 3 167 765 178 387 O17 a 1S 164 172 256 767 3 167 3 206 23.6 839 Promedio 16.58 188 18.14 28.42 81.94 7 0.84 245 2.09 688 694 Tabla No. 10 Alimento ingerido en el lote de aceite crudo de la almendra de capulin. Alimento consumido Ratén (g) “T®semana__2°semana__3*semana_4* semana ‘Total | 7 149 174 216 28.3 822 z 172 19.2 19.4 20.4 B52 3 173 16.6 24.4 25.3 856 a 15.4 227 208 24.6 B35 5 18.1 22.6 24 26.4 908 Promedio 16.58 20.1 22.04 26.74 85.46 3 1.36 241 242 203 3.28 Tabla No. 11 Alimento ingerido en el lote de aceite refinado de la almendra de capulin. Alimento consumido Ratén 7) T semana 2 semana S* semana 4*semana__ Total 7 EK] 23 7A = a37 2 45 78 103 78 607 3 T37 22.6 147 194 704 4 13.4 15.1 10.2 oo 38.7 5 19 16.3 13.200 0 a 48.5 Promedio 16.18. 18.66 11.41 18.65 52.4 3 225 32 2.98 7.06 72.55 Tabla No. 12 Alimento ingerido en el lote de aceite hidrogenado. (Dosis: 15 g/Kg p.c.) Alimento consumido Ratén (a) “semana semana 3*semana_4*semana__‘Tolal__| 1 14.2 17.1 16.6 29.4 77.3 2 164 7A 20.3 OT B15 3 137 2 222 356 855 a 3 204 20.5 307 88.1 5 76 27 22 324 92.9 Promedio 15.6 20.08 20.24 31.16 87.06 o 161 2.99 2.14 3.02 7.62 59 Tabla No. 13 Alimento ingerido en el lote de aceite hidrogenado. (dosis: 30g/Kg p.c.) Alimento consumido Raton {g) “semana 2*semana__3* semana 4*semana Total __| 7 66 B2 118 133 399 2 164 197 184 28.8 e338 3 133 178 795 30.3 B05 4 15 167 174 28 7A 5 157 205 19.4 314 867 Promedio 13.4 16.58 17.3 26.5 73.58 o 3.97 4.92 3.19 7.36 19.15, Para poder tener una observacion mejor de! comportamiento de los animales en cuanto al consumo de alimento, se realizo la grafica de consumo de alimento acumulativo (Figura 2) en donde se observa que todos los lotes, excepto el de aceite fefinado, mostraron un incremento en el consumo de alimento a lo largo del experimento; Unicamente durante la tercera semana se vio afectado el consumo de alimento en el control, aunque no fue grande la diferencia de consumo con respecto a la segunda semana del experimento. Para el caso del lote del aceite refinado, se pudo constatar que el hecho que disminuyera el consumo de alimento se debia a ta dieta, ya que fue a finales de esta semana, cuando tres de los ratones de ese grupo murieron (sefialados en la tabla No. 11 mediante lineas punteadas), seguidos de los Ultimos dos a principics de la ultima semana, que como ocurrié en el transcurso del fin de semana, no fue posible realizarles una necroscopia para observar caracteristicas diferentes en sus organos; sin embargo, si fue percibido un comportamiento extrafio en este lote, en su manera de caminar y se les notaron caracteristicas como piloereccién y lordosis a estos animales. 6 Alimento consumido (g se miz -a-oub refined x hideg 15gig pe hho Dgic ac 1 2 ergo 3 4 Figura 2. Consuro ce dirrerto anu cto paralos Sctes, ilar en todos los En cuanto a la ingesta de agua, el comportamienta fue muy sit lotes, no ingerian ni muy poca agua, ni demasiada, con excepcidn nuevamente del lote de aceite refinado, en ef cual el consumo fue muy bajo, fo que nos daria también la pauta para detectar la existencia de alguna anomalia en este lote. De igual manera que en [a tabla No. 11, fa tinea punteada indica que en esa semana los ratones mutieron por lo que ya no se determiné el volumen de agua ingerida. rr Tabla No. 14 Ingesta de agua en el lote de aceite de maiz (control) ‘Agua ingerida Ratén (ma) “W®semana 2° semana 3*semana 4*semana Total 7 22 32 32 30 116 z 20 24 30 24 98 3 2 30 34 36 12 a 22 22 28 2 oF \—s 20 2 26 22 % Promedio 27.2 364 30 268 1044 6 709 433 3.16 09 13.66 Tabla No. 15 Ingesta de agua en el lote de aceite crudo de la almendra de capulin. ‘Agua ingerida Ratén (mi) semana 4° semana Total ‘semana 2* semana 1 22 30 30 24 106 2 24 30 28 28 110 3 34 52 30 32 148 4 26 28 28 30 112 5 2 26 32 26 108 Promedio 26 33.2, 29.6 28 116.8 o 4.69 10.63 167 3.16 1758 8 Tabla No. 16 Ingesta de agua en el lote de aceite refinado de la almendra de capulin. ‘Agua ingerida Ratén (mi) “Fsemana_2 semana "semana 4*semana Total | 7 22 2 2 es 70 z 36 16 30 28 700 3 28 14 26 16 84 a 36 18 26 — 70 5 22 2 26 = 72 Promedio 24.8 182 264 2 79.2 @ 2.68 76 2.19 o48 73.00 Tabla No. 17 Ingesta de agua en el lote de aceite hidrogenado (Dosis: 15 g/kg p.c.) ‘Agua ingerida (ml) 7®semana 2? semana Total 1 20 30, 30 24 104, 2 24 36 50 34 144 3 22 30 38 36 126 4 26 18 28 28 100) 5 20 28 30 30 108 Promedio 22.4 28.4 35.2 30.4 116.4 o 26 6.54 9.12 4.77 18.35 Tabla No. 18 Ingesta de agua en el lote de aceite hidrogenado (Dosis: 30 g/Kg. p.c.) Agua ingerida Raton {ml) 7? semana 2*semana_3* semana 4° semana Total 1 16 22 268 24 90 2 26 cry a 12 126 3 26 14 26 By 30 4 22 26 30 30 708 5 2 26 34 32 16 Promedio 22.4 268 324 244 706 7c 4.09 77.00 712 775 1558 140 420 "00 —e—maiz a0 —=—crudo refinado volumen (mi) 2 8 * & 8 ° tiempo (semanas) —e-hidrog. 15 gikg. p.c. x hidrog. 30 gikg. p.c. Figura 3. Ingesta de agua acumulativa en los 5 lotes. 68 A continuacién, se muestra en la tabla No. 19 el incremento total de peso en todos los lotes. Si observamos también a tabla No. 20 podemos ver el promedio por dias en el incremento de peso para cada lote. Ahi se observa como el lote del aceite hidrogenado incrementé el peso por debajo del lote control durante los primeros 15 dias det experimento, inviriéndose el efecto para los Lillimos dias. En el caso del aceite crudo, la tendencia fue diferente: este lote incrementé poco de peso en los primeros dias de una manera constante; pero el comportamiento en este aspecto fue muy extrafio porque en algunos dias incrementaban mucho el peso y en otros muy poco, aunque siempre hubo incremento a diferencia del lote del aceite refinado donde nuevamente se presentaron anomalias, ya que los animales en este lote desde un Principio perdieron peso, hasta lievarios a su muerte. Se observa la pérdida de peso Por los nlimeros negativos. En la Figura 4 se esquematiza este punto, donde se observa que los otros lotes juvieron el comportamiento esperado, quedando incluso el control por debajo de los lotes de aceite hidrogenado a partir de la tercera semana de estudio (dia 16). Et que tuvo un mayor incremento fue el lote de aceite hidrogenado con una dosis de 15 g/kg p.c., que coincide con el comportamiento presente en el consumo de alimento e ingesta de agua que también terminé por encima de los demas. Tabla No. 19 Incremento total de peso en los diferentes totes Theremento total de peso (a) maiz —_aceite ac. ac. Hidrog. ac. Hidrog. crudg__refinado_(15 g/kg pc) (30 g/kg pc) raton1___ 58 46 -0.9 6 04 raton2 54 18 2.6 55 74 ratén3____0.9 2 “37 56 87 ratén4 2.3 72 47 42 46 raton5 3.9 14 “3.6 43 3 Media___3.66 22 “3.1 B12 416 © 2.06 1.37 143 0.8% 2.58 ro) Ze ze ie ery 190 2S 30% oot 8, 220 6h ib POE 80 Lor FO ver v6 eee sz ero 260 z6¥ ez vy 90 92'S on om ee SEO seh 962 om eoy zo zy 90% zee Wz. ze web zoe eB 20¥ evo 20% $6 ave ah 19 2x0 ove 9974 Que z60 80% oy ose ET ot zh ez a see es'0 ge z0'4 2LE im wt 190 eve eh s9% zv0 vOe Ob 90°C bh aut 1e0 264 zat Seb $0 98% 26°0 99% 6 Ot v0 98% 6z4 er go ove 60 962 Z get 90 ose sZt Svz zo Bez z6°0 ze ¥ es sv'0 or £0 eet 160 zu 60) bz z o 0 0 0 0 oO 0 0 0 0 pig'nseg ee PIS ASeQ_— AW IS “ASO eIPAW PIS “ASAIN PIS “‘AS@G_— eA SEI opeuaBoupiy 1109 opeucBospiy aay z opnss one2e (jonuos) zew ap ayooy “s910] Soyuoseytp So] ua osad Ua ojuaWesoUl 02 °ON FIGeL fc. etua0 -e-Retieado a Hidrog. 1591KgPC Tea Hiarog. 2oaKGPC Tampa se) Figura 4, Incremento en peso en los diferentes lotes. cy En la Tabla No. 21 se muestran los valores de la relacion porcentual del peso de los érganos con respecto al peso corporal del animal y se observan valores muy cercanos al control para el caso de los rifiones, bazo y estomago; difiriendo el caso del higado, donde se nota un incremento considerable en los lotes que contenian el aceite de capulin, lo que nos indica un trabajo mayor de! higado para poder metabolizar el aceite, dando como resultado un higado anatémicamente més grande en estos ratones con respecto a su peso corporal. Esto se ve claramente en la Figura 5 donde se nota agrandamiento del higado en los lotes alimentados con aceite de capulin con relacion al control, mientras los otros érganos se encuentran relativamente al mismo nivel que el control. Ademés, fisicamente, el higado de estos ratones se notaba palido y jaspeado, a diferencia del higado de los ratones del lote control, que se puede decir, tenian el color café-rojizo caracteristico. Finalmente, al ver los resultados del estudio estadistico que se les aplicé (Analisis de varianza y t de student), se comprueba que existié un trabajo excesivo del higado en los ratones alimentados con el aceite de capulin, al presentarse diferencia significativa en los higados de estos animates con respecto al control. Este trabajo excesivo del higado se puede confirmar al efectuar el estudio en el plasma sanguineo, donde veriamos el nivel de colesterol. Si este se presentaba en bajas concentraciones nos indicaria una moviizacién del mismo por medio de la bilis, producida en el higado, por medio de un trabajo arduo del higado para producir bilis y poderlo asi metabolizar. 69 Tabla No. 21 Peso porcentual de tos érganos al final de! estudio Rann pase Srganaipeso corporal TO Cd ‘watz (eonvaly ‘eats endo. Fipado —Finanes azo Esiomage—Figado__Risones Bas Esrorago atGRT Te 10 Oaz 080 Baz 185 Car Tat WaT 735 vaT O38 J ee 175 Os To] Tato 30 ie oss THT aE 1s oz OT Talent TE Tar Oa THE EJ 5 Oz 18 raion 5 Te Tat O37 Oe 510 T85 os ToT wedi 730 i Os O56 70 Ter os 195 = ‘oar ey Tae Ts 008 O05 309 Ralacion pose organorpere corporal "100 ‘acate TEGIKG PC Haropenedo EE Tidragnado SOKO P. Figedo—— Ritores azo EsiGmnage —Wigado__—Pifones Bao Eaomago Taton 7 % TEE 0B KE Tae & TAT raion az —«*TRS OaF Oe S10 ce) oat O76 Taian 3 15 3a5 Tad ome 098 Tata Sa 1a oa oa oH Taz OF Tae" waton 5 5 10 035 oar Ed 753 os az Weds 3a CO oat oat 58 1a v. 70 @ 0580 OOF Oat ad ad oz 025 7 Prasentaron diferencia signifealiva con respecto al conwol, 70 ooL ~ 1esodios osedsouebio osad ugioejay ofewo}sy ozeg souoUly | opeBiH Figura 5 . Estudio taxicolégico subagudo. Relacion porcentual peso Grgana/peso corporal Tabla No. 22 Indices biolégicos nutricionales. Energia digerible aparente (%) ee ___ Recite Matz Aceite crudo Acelte Hidrog. Aceite hidrog. (control) (15 g/Kg pc) (30 g/kg. p.c.) \Ratont 0703 S6~ a BSC*<“

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