INSTRUES DE

UTILIZAO MEIOS EM
PLACAS PRONTOS A
USAR
PA-254003.06 Rev.: Oct 2012

BD CLED Agar
UTILIZAO PRETENDIDA
O BD CLED Agar (Agar de cistina lactose deficiente em electrlitos) um meio de cultura para
diferenciao para utilizar no isolamento e enumerao de bactrias da urina. Este meio
suporta o crescimento de agentes patognicos e contaminantes urinrios, mas evita a
proliferao indevida de espcies de Proteus devido a ausncia de electrlitos.

PRINCIPIO E EXPLICAO DO PROCEDIMENTO

Mtodo microbiolgico
Em 1960, Sandys referiu o desenvolvimento de um novo mtodo para evitar a proliferao de
Proteus em meios slidos, limitando os electrlitos no meio de cultura que foi posteriormente
modificado para ser utilizado em culturas de urina.1-3 Este meio foi designado como meio de
cistina lactose deficiente em electrlitos (CLED) e demonstrou ser ideal para tcnicas de
imerso do inculo e para a bacteriologia urinria em geral.
Os nutrientes no BD CLED Agar so fornecidos pelas peptonas de casenas e gelatina e
extracto de carne de vaca. A lactose foi includa para fornecer uma fonte de energia para os
organismos com capacidade para utiliz-la atravs de um mecanismo fermentativo. utilizado o
azul de bromotimol como um indicador de pH para diferenciar os fermentadores da lactose dos
no fermentadores da lactose. Os organismos que fermentam a lactose iro reduzir o pH e
alterar a cor do meio de verde para amarelo. A cistina permite o crescimento de bactrias
coliformes "de colnias ans".3 As fontes de electrlitos so reduzidas para minimizar a
proliferao de espcies de Proteus. Deste modo, o meio permite a determinao quantitativa de
agentes patognicos urinrios incluindo o Proteus quando so utilizadas ansas calibradas para
inoculao.

REAGENTES
BD CLED Agar
Frmula* por Litro de gua Purificada
Hidrolisado pancretico de gelatina 4,0 g
Hidrolisado pancretico de casena 4,0
Extracto de carne de vaca 3,0
Lactose 10,0
L-Cistina 0,128
Azul de bromotimol 0,02
Agar 15,0
pH 7,3 0,2
*Ajustada e/ou suplementada conforme necessrio para cumprir os critrios do desempenho.

PRECAUES
. Apenas para uso profissional.
No utilizar as placas que apresentem sinais de contaminao microbiana, descolorao,
secura, fissuras ou outros sinais de deteriorao.
Consultar as INSTRUES GERAIS DE UTILIZAO para informao sobre os
procedimentos de manuseamento assptico, os riscos biolgicos e os procedimentos de
eliminao do produto usado.

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ARMAZENAMENTO E PRAZO DE VALIDADE
Aps recepo das placas, conservar no escuro a uma temperatura entre 2 e 8C, dentro do
invlucro original at ao momento da utilizao. Evitar congelar e aquecer excessivamente. As
placas podem ser inoculadas at ao prazo de validade (ver a etiqueta da embalagem) e
incubadas durante o tempo de incubao recomendado.
As placas so fornecidas em pilhas de 10 placas e, quando uma destas pilhas aberta, as
respectivas placas tero de ser utilizadas no prazo mximo de uma semana, se forem
conservadas em local limpo a uma temperatura entre 2 e 8C.

CONTROLO DE QUALIDADE PELO UTILIZADOR

Inocular amostras representativas com as seguintes estirpes (para mais detalhes, consultar as
INSTRUES GERAIS DE UTILIZAO). Incubar as placas a 35 2C numa atmosfera
aerbia.
Examinar as placas aps 18 a 24 horas para registar o grau de crescimento, a pigmentao, o
tamanho da colnia e a inibio da proliferao/propagao de Proteus.

Estirpes Resultados de Crescimento

Escherichia coli ATCC 25922 Crescimento; colnias amarelas, meio amarelo
Proteus vulgaris ATCC 8427 Crescimento; colnias incolores a azuis; proliferao
inibida; ligeira propagao aceitvel
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Crescimento; colnias incolores a amarelas; meio
amarelo
Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crescimento; colnias de pequena dimenso,
amarelas; meio amarelo
Staphylococcus saprophyticus Crescimento; colnias de pequena dimenso,
ATCC 15305 brancas a amareladas; meio amarelo
No inoculadas Verde a verde-azulado

PROCEDIMENTO
Materiais fornecidos
BD CLED Agar (placas Stacker de 90 mm). Microbiologicamente controlados.

Materiais no fornecidos
Meios de cultura auxiliares, reagentes e equipamento de laboratrio conforme necessrio.

Tipos de amostra e colheita de amostras

Este meio destina-se exclusivamente enumerao e diferenciao de bactrias na urina.
possvel utilizar urina de jacto mdio ou urina de cateterizao ou urina colhida atravs de uma
puno supra-pbica na bexiga (consultar tambm CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO E
LIMITAES DO PROCEDIMENTO). Cumprir as tcnicas asspticas para a colheita de
amostras de urina. A urina deve ser directamente espalhada no meio num perodo de tempo
no superior a 2 horas aps a colheita ou deve ser mantida no frigorfico (por um perodo
inferior a 24 horas) para evitar o crescimento excessivo de agentes infecciosos ou
contaminantes antes da inoculao deste meio.2-5

Procedimento do teste
Colher uma amostra de urina no diluda e bem misturada utilizando uma ansa calibrada (0,01
ou 0,001 mL). Certificar-se de que feita a aplicao adequada da amostra na ansa. Proceder
inoculao da amostra no meio da placa numa nica faixa a partir da qual ocorre a
propagao adicional do inculo. 4 ,5 Incubar as placas em ar ambiente, a uma temperatura de
35 2 C, durante 24 a 48 horas.

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Resultados
A morfologia tpica das colnias no BD CLED Agar a seguinte:
Organismos Resultados de Crescimento
Escherichia coli Colnias amarelas, opacas; meio amarelo
Klebsiella, Enterobacter Colnias amarelas a azuis esbranquiadas, muitas vezes
mucides; meio amarelado
Proteus Colnias azuis translcidas; meio verde azulado a azul
Pseudomonas aeruginosa Colnias verdes com superfcie tpica mate e periferia irregular;
meio azul
Enterococos Colnias de pequena dimenso, amarelas com cerca de 0,5 mm
de dimetro; meio amarelo
Staphylococcus aureus Colnias amarelas escuras, de cor uniforme; meio amarelo
Estafilococos negativos para Colnias amarelas plidas, mais opacas que o Enterococcus
a coagulase faecalis

Clculo e interpretao dos resultados

Contar o nmero de colnias (CFU) na placa. Caso tenha sido utilizada uma ansa de 0,01 mL,
cada colnia resultante representa 100 CFU/mL; caso tenha sido utilizada uma ansa de 0,001
mL, cada colnia corresponde a 1000 CFU/mL de urina.5
Urina de jacto mdio e cateterizao: As linhas de orientao actuais indicam que para um nico
isolado uma densidade de 105 CFU/mL indica infeco, <105 CFU/mL indica contaminao
uretral ou vaginal e entre 104 a 105 CFU/mL necessita de ser novamente avaliada com base na
informao clnica.6
As bactrias contaminantes aparecem normalmente em nmero reduzido consoante a
morfologia das colnias.
Urina colhida atravs puno supra-pbica na bexiga: Uma vez que a bexiga estril em
indivduos no infectados, quaisquer CFU detectadas indicam uma infeco.
Os agentes patognicos urinrios iro normalmente dar origem a contagens elevadas
apresentando uma morfologia de colnias uniforme e dever ser efectuada uma repicagem
directamente no meio de rotina para a identificao e realizao de testes de sensibilidade.5,6

CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO E LIMITAES DO PROCEDIMENTO

O agar BD CLED Agar apropriado para o isolamento e contagem de muitos microorganismos
de crescimento aerbio, como as Enterobacteriaceae, Pseudomonas e outros bastonetes
gram-negativos no fermentadores, os enterococos, estafilococos, tipos de Candida e muitos
outros relativamente a amostras de urina.

Os estreptococos e outros organismos que necessitam de sangue ou soro para crescer podero
ser apenas recuperados de forma insuficiente ou podero necessitar de uma incubao mais
prolongada. Por essa razo, a amostra dever tambm ser submetida a cultivo numa placa de
agar de sangue se se prever o aparecimento destes organismos.
Neste meio, no se verifica o crescimento de agentes patognicos do aparelho geniturinrio
como, por exemplo, o Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia, Ureaplasma,
ou outros organismos exigentes. Consultar a bibliografia apropriada para mais informaes
sobre as tcnicas de deteco apropriadas relativamente a estes organismos.4-6
Embora possa ser efectuada uma diferenciao de acordo com a fermentao da lactose e
alguns testes de diagnstico directamente neste meio, necessria a realizao de testes
bioqumicos para uma completa identificao e, se indicado, a realizao de testes
serolgicos usando culturas puras.

BIBLIOGRAFIA
1. Sandys, G.H. 1960. A new method of preventing swarming of Proteus sp. with a description
of a new medium suitable for use in routine laboratory practice. J. Med. Lab. Technol. 17:224-
233.

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2. Mackey, J.P., and G.H. Sandys. 1965. Laboratory diagnosis of infection of the urinary tract in
general practice by means of a dip-inoculum transport medium. Br. Med. J. 2:1286-1288.
3. Mackey, J.P., and G.H. Sandys. 1966. Diagnosis of urinary infections. Br. Med. J. 1:1173.
4. Barry, A.L., P.B. Smith, and M. Turck. 1975. Cumitech 2, Laboratory diagnosis of urinary tract
infections. Coordinating ed., T.L. Gavan. American Society for Microbiology, Washington,
D.C.
5. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
6. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of
urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.

EMBALAGEM / APRESENTAO
BD CLED Agar
Cat. No. 254003 Meios em placas prontos a usar, 20 placas
Cat. No. 254070 Meios em placas prontos a usar, 120 placas

INFORMAES ADICIONAIS
Para obter informaes adicionais, contacte o representante local da BD.

Becton Dickinson GmbH

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