UNIVERSITATEA POLITEHNICA DIN BUCURETI

FACULTATEA INGINERIA SISTEMELOR BIOTEHNICE

PROGRAM DE MASTER IMSB

R E F E R AT

TERAPIA FOTODINAMIC

CURSANT:

0
 CUPRINS

1. INTRODUCERE ...................................................................................2

2. EFECTELE PDT ASUPRA VASCULARIZAIEI TUMORALE.........3

3. EFECTELE PDT ASUPRA SISTEMULUI IMUN.................................5

4. INDUCEREA APOPTOZEI DE CTRE PDT ......................................7

5. INDUCEREA AUTOFAGIEI DE CTRE PDT ................................... 9

6. GENERAREA DE SPECII REACTIVE DE OXIGEN (SRO) ............. 9

7. CONCLUZII ..........................................................................................10

8. BIBLIOGRAFIE ....................................................................................11

1
 EFECTE ALE TERAPIEI FOTODINAMICE N
SISTEMELE BIOLOGICE

INTRODUCERE

Terapia fotodinamic (PDT) este o achiziie recent n tratamentul leziunilor cutanate

premaligne i maligne, ce presupune administrarea sau inducerea sintezei unui
compus fotosensibilizator la nivelul esutului tumoral, urmat de iluminarea zonei-int
utiliznd o radiaie de lungime de und adecvat. n urma activrii fotosensibilizatorului se
declaneaz reaciile fotodinamice care conduc la distrugerea tumorii. Lucrarea de fa i
propune s treac n revist principalele mecanisme intime moleculare, celulare i
sistemice ale efectelor terapiei fotodinamice in vivo, cu accent pe inducerea apoptozei i a
autofagiei n celulele tumorale, alterarea vascularizaiei locale i modificarea rspunsului
imun.

Terapia fotodinamic (PDT) este o metod modern de tratament antineoplazic

utilizat n numeroase specialiti medicale (dermatologie, gastroenterologie,
urologie sau oftalmologie). Metoda const n administrarea sau inducerea sintezei unui
compus fotosensibilizator la nivelul esutului tumoral, urmat de iluminarea zonei-int
utiliznd o radiaie de lungime de und adecvat. Activarea fotosensibilizatorului pe aceast
cale declaneaz procese fotochimice complexe, n urma crora rezult specii reactive de
oxigen (SRO) ce produc distrucii tisulare extensive, la care se adaug modificri ale
vascularizaiei locale, inducerea apoptozei, a necrozei i autofagiei i declanarea
rspunsului imun, toate contribuind la distrugerea celulelor tumorale.

Pentru realizarea efectelor distructive ale PDT este necesar prezena

concomitent de cantiti suficiente de fotosensibilizator i oxigen molecular la nivelul
zonei-int, precum i utilizarea unei surse de lumin cu un spectru de emisie adecvat,
care s se suprapun peste spectrul de absorbie al fotosensibilizatorului i, n acelai timp
s permit o bun penetran tisular a luminii pn la nivelul acestuia, cu o absorbie
minim exercitat de ctre ceilali cormofori cutanai (melanina, oxi/hemoglobin i ap).

2
 Efectele PDT asupra vascularizaiei tumorale

Efectele antitumorale ale PDT in vivo au o amploare mai mare dect cea preconizat
innd cont de hipoxia prezent n majoritatea tumorilor, ceea ce sugereaz faptul c
celulele tumorale nu sunt distruse doar prin efecte fotodinamice directe
ci i prin alte mecanisme, cel mai probabil prin distrugerea vaselor de snge ce
asigur suport nutritiv tumorii.

Distrugerea vascularizaiei tumorale cauzeaz dispariia suportului nutritiv i

energetic necesar celulelor neoplazice, ducnd la necroza parial sau total a
tumorii. Scderea aportului sangvin prin distrucia vascular este nsoit ns i de reducerea
proporional a cantitii de oxigen furnizat tumorii; lipsa oxigenului va duce la scderea sau
anularea eficienei unor pulsuri ulterioare de lumin din cadrul PDT, ntru-ct efectele
terapiei fotodinamice sunt dependente n mare msur de producerea de specii reactive
de oxigen la nivelul zonei-int, n special a oxigenului singlet, prin procese fotochimice. La
rndul lor, reaciile fotochimice declanate de un puls de lumin consum oxigenul
tumoral, accentund hipoxia tumoral i limitnd efectul fotodinamic al unor
pulsuri luminoase ulterioare. Variaiile parametrilor de iluminare produc modulri
controlabile ale efectelor vasculare, fapt care ar putea fi
exploatat terapeutic prin variaia fluenei de iluminare utilizate.

Becker i colaboratorii au demonstrat c, fluxul sangvin iniial descrete odat

cu aplicarea PDT, posibil ca urmare a scderii cantitii de oxid nitric (NO), ca urmare a
consumului oxigenului tisular n cadrul reaciilor fotochimice.
Ulterior ns, apare o cretere brusc a fluxului de snge la nivelul leziunii i apoi
o revenire lent la fluxul uzual.(3) PDT induce i tromboza vascular. Pornind de la
aceast ipotez, Yang i colaboratorii au artat n 2010 ntr-un studiu efectuat pe oareci
BALB/c injectai subcutan cu celule de carcinom mamar EMT6 c anticoagularea prealabil
cu eparin a determinat un rspuns antitumoral mai bun la PDT cu derivai de porfirine.

Hipoxia cauzat de PDT determin inducerea angiogenezei, prin creterea

nivelului HIF-1 (factorul inductibil al hipoxiei), subunitatea a unui factor de transcripie
dimeric (-) ce determin sinteza de VEGF (vascular endothelial growth factor),
acesta din urm stimulnd angiogeneza n urma legrii de receptorul pentru VEGF situat
la nivelul celulelor endoteliale. n condiii de oxigenare adecvat, HIF-1 este descompus de
ctre oxigenul tisular, dar n condiii de hipoxie HIF-1 persist i se leag de

3
subunitatea , stimulnd sinteza de VEGF i pe cale de consecin, angiogeneza.

Administrarea de factori antiangiogenici determin mbuntirea rspunsului

umoral la PDT. n anul 2006, Ferrario i Gomer au demonstrat pe un model murin de
arcom Kaposi c PDT determin creterea VEGF produs de ctre celulele tumorale i
ntr-o mai mic msur i a VEGF produs de ctre celelalte celule ale organismului, alturi
de o cretere ale nivelului HIF-1 i TNF- i c, utilizarea bevacizumabului (Avastin), un
inhibitor al VEGF, mbuntete eficiena terapiei fotodinamice.

Efectele PDT asupra sistemului imun

PDT atrage n zona-int macrofage i neutrofile, ducnd la un rspuns imun

antitumoral ndreptat mpotriva esutului neoplazic rezidual. Neutrofilele atrase n zona-
int dup PDT sunt activate i ulterior ajung n ganglionii limfatici, unde iniiaz celulele
dendritice, acestea la rndul lor activnd limfocitele CD8+ (BRACK).

Ali autori consider c, celulele dendritice se vor matura sub aciunea

citokinelor eliberate din focarul de PDT i vor ajunge n ganglionii limfatici regionali, unde
vor prezenta antigenele captate ctre limfocitele T CD8+, care devin limfocite T efectoare ce
vor fi atrase ulterior la nivelul focarului PDT prin chemokine i vor participa la
distrugerea esutului tumoral restant.

4
 PDT duce la creterea imunogenicitii tumorilor, prin mecanisme variate. Unul intre
acestea const n creterea expresiei moleculelor sistemului major de histocompatibilitate
MHC tip I la nivelul celulelor tumorale, ceea ce crete susceptibilitatea acestora la
aciunea ulterioar a celulelor imune NK (natural killer). PDT determin i
activarea complementului pe calea altern. Mai mult, prin distrugerea celulelor tumorale
n cadrul PDT, sunt revelate sistemului imun noi antigene iar, celulele tumorale, foarte
slab imunogene, capt o capacitate mai mare de elicitare a unui rspuns imun
din partea organsimului. Actualmente, aceste efecte ale PDT asupra imunitii sunt
cercetate n vederea obinerii de vaccinuri anti-tumorale.

Pe de alt parte, PDT poate determina i abolirea unor tipuri de reacii imune. Simkin i
olaboratorii au artat c, PDT cu derivai de benzoporfirin determin inhibiia sensibilizrii
utanate la 2,4-dinitrofluorbenzen (DNFB) la oarecii de laborator. Aceiai autori au
emonstrat c acest efect de inhibare a rspunsului imun de contact se datoreaz stimulrii
roduciei de IL-10 de ctre PDT. Ulterior, Gollnick i colaboratorii au artat c IL-10 nu este
implicat semnificativ n inhibarea hipersensibilizrii de contact. n ambele studii
ns, administrarea de IL-12 duce la reapariia hipersensibilizrii de contact, suprimnd
inhibiia imunitar cauzat de PDT.

n studii pe animale, s-a observat c PDT determin scderea reversibil a numrului

e celule Langerhans la locul iradierii, cu nadir la 5 zile post-PDT; acest efect apare ca urmare
migrrii celulelor Langerhans din tegument la nivelul ganglionilor limfatici - putnd
xplica, cel puin n parte, suprimarea reaciei de contact. Aciunea PDT determin o
nhibare a rspunsului imun de contact att local, ct i sistemic, amploarea reaciei depinznd
doar de doz utilizat. Efectul este ntr-o mare msur asemntor cu cel determinat de
UVB n cadrul fototerapiei. Efectul imunosupresiv al PDT a fost verificat i pe
tegumentul uman; acest efect ar putea fi speculat n afeciunile cutanate inflamatorii, n
timp ce, n afeciunile tumorale ar putea contribui la scderea eficacitii PDT.

5
 Inducerea apoptozei de ctre PDT

Apoptoza este un proces activ, desfurat cu consum energetic, nalt conservat

filogenetic, prin care celula rspunde la prezena (sau absena) unor stimuli exteriori sau
a unor modificri structurale interne distrugndu-se, urmnd etapele unui program bine
stabilit i similar n toate esuturile organismului. Celulele tumorale dezvolt
mecanisme adaptative care suprim apoptoza; inducerea apoptozei n celulele
neoplazice este un efect dezirabil al PDT, ce contribuie semnificativ la distrugerea
tumorii. Terapia fotodinamic poate produce moartea celular pe mai multe ci, urmarea
uneia sau a alteia dintre acestea fiind dictat de diveri factori. Astfel, n funcie de
intensitatea injuriei celulare, terapia fotodinamic poate induce necroza - n cazul
stresului oxidativ de mare intensitate sau apoptoza, moartea celular programat - n cazul
unui stres oxidativ de intensitate moderat.

6
 Localizarea intracelular a fotosensibilizatorului determin de asemenea,
modalitatea de rspuns la PDT; fotosensibilizatorii localizai la nivelul
mitocondriilor declaneaz apoptoza prin lezarea membranei mitocondriale i
eliberarea citocromului c n citosol, ducnd la clivarea procaspazei 9 i n cele din
urm la activarea caspazei 3, efector principal al apoptozei implicat n degradarea
lamininelor din membrana nuclear i, prin degradarea poli-ADP-ribonucleaz-
polimerazei, n activarea endonucleazelor care vor cliva
AND.

n afara acestui mecanism, apoptoza poate fi indus i prin alterarea proteinelor

antiapoptotice Bcl-2, creterea expresiei membranare a CD95/FAS, activarea cii
FAS/FAS-ligand i a cii moleculelor FLICE cu clivarea procaspazei 8 i
activarea cii de semnalizare a ceramidelor.

Caspaza 8 activat poate, al rndul ei, s cliveze proteina Bid care va migra din citosol
spre mitocondrie unde va determina eliberarea suplimentar a citocromului c. n cazul
fotosensibilizatorilor localizai la nivelul reticulului endoplasmic, lezarea membranei
acestuia determin creterea calciului intracelular, mecanism care declaneaz de
asemenea apoptoza.

Apoptoza poate fi iniiat i pe calea protein-kinazelor activate de mitogeni

(MAPK). Pe de alt parte, PDT poate determina i activarea factorului de transcripie
nuclear NFkB, cu rol antiapoptotic. Acionnd n special la nivelul fazei terminale a
apoptozei, de regul prin lezarea mitocondriei, PDT este eficient i n
distrugerea celulelor neoplazice altfel rezistente la radioterapie
i la majoritatea chimioterapicelor.

7
 Inducerea autofagiei de ctre PDT

Inducerea autofagiei apare ca mecanism de protecie a celulei mpotriva efectelor PDT.

Autofagia este un proces nalt conservat la eucariote, prin care regiuni ale citoplasmei
-inclusiv organite aberante sau n exces- sunt nconjurate de o dubl membran formnd
autofagozomi ce va fuziona cu lizozomii, contribuind la reciclarea unor compui de
ctre celul. Autofagia este alterat n cazul utilizrii unor fotosensibilizatori care
se localizeaz preferenial la nivelul lizozomilor; suprimarea expresiei sau inactivarea
proteinelor pro-autofagice ar putea contribui, n viitor, la creterea eficienei
PDT.

Generarea de specii reactive de oxigen (SRO)

Speciile reactive de oxigen produse n cadrul PDT atac lipidele determinnd

eroxidarea lor, proces ciclic declanat de ctre radicalul hidroxil (HO), apa oxigenat
sau oxigenul singlet (1O2), n cadrul cruia apar radicali peroxil sau hidroperoxil din acizii

8
grai nesaturai care la rndul lor reacioneaz cu alte molecule de acid gras pn la
formarea de produi de terminare a ciclului ca malondialdehid sau acrolein, care
la rndul lor pot reaciona cu acizii nucleici producnd alterri structurale ale acestora
sau cu proteinele, formnd proteine carbonilate. Glucidele atacate de SRO duc la formarea
de cetoaldehide, cetoamine i deoxiozone, care pot contribui i ele la formarea de proteine
carbonilate. De asemenea, SRO produc alterri structurale ale proteinelor, acionnd
preferenial prin oxidare la nivelul reziduurilor aminoacidice laterale, cu formarea de
legturi ncruciate ntre proteine sau prin fragmentarea lanului proteic, fie pe calea -
amidrii, fie pe cea a formrii de diamide. Aminoacizii cei mai susceptibili la oxidare sunt
cisteina, fenilalanina, tirozina, histidina, lizina i prolina. Proteinele pot fi i carbonilate
prin glicare, glicoxidare sau reacie cu produii peroxidarii lipidelor.

SRO atac i acizii nucleici, provocnd alterri structurale semnificative ce se

traduc prin mutaii sau rupturi ale catenei. Acizii nucleici sunt atacai de radicalii hidroxil
HO , cea mai comun reacie fiind oxidarea guaninei n 8-oxo guanin, care n
urmtorul ciclu replicativ se va cupla cu adenina n loc de citozin ducnd la apariia
mutaiilor. Mutaiile care nu pot fi reparate de ctre aparatul enzimatic celular determin
declanarea apoptozei.

9
 Concluzii:

Efectele PDT in vivo sunt deosebit de complexe i se exercit pe niveluri diferite,

efectele moleculare determinate de alterarea structural i funcional produs prin
generarea de specii reactive de oxigen intricndu-se cu cele celulare,
reprezentate de inducerea apoptozei i a autofagiei i cu cele tisulare i sistemice,
reprezentate de efectele asupra vascularizaiei i rspunsului imun. Cercetarea
acestor efecte poate sta la baza dezvoltrii, n viitor, a unor metode de optimizare a
protocoalelor de PDT deja existente sau a elaborrii unor vaccinuri antitumorale.

10
 BIBLIOGRAFIE

REFERINE
1. Henderson BW, Fingar VH. Relationship of tumor hypoxia
and response to photodynamic treatment in an experimental
mouse tumor. Cancer Res. 1987;47(12):3110-3114.
2. Wang KK, Cottrell WJ, Mitra S, Oseroff AR, Foster TH.
Simulations of measured photobleaching kinetics in human
basal cell carcinomas suggest blood flow reductions during
ALA-PDT. Lasers Surg Med. 2009;41(9):686-696.
3. Becker TL, Paquette AD, Keymel KR, Henderson BW,
Sunar U. Monitoring blood flow responses during topical
ALA-PDT. Biomed Opt Express. 2010;2(1):123-130.
4. Yang L, Wei Y, Xing D, Chen Q. Increasing the efficiency
of photodynamic therapy by improved light delivery and
oxygen supply using an anticoagulant in a solid tumor
model. Lasers Surg Med. 2010;42(7):671-679.
5. Richard DE. Berra E, Pouyssegur J. Angiogenesis: how a
tumor adapts to hypoxia. Biochem Biophys Res Common.
1999;266(3):718-722.
6. Ferrario A, Gomer CJ. Avastin enhances photodynamic
therapy treatment of Kaposi's sarcoma in a mouse tumor
model. J Environ Pathol Toxicol Oncol. 2006;25(1-2):251-
259.
7. Brackett CM, Gollnick SO. Photodynamic therapy
enhancement of anti-tumor immunity. Photochem
Photobiol Sci. 2011;10(5):649-652.
8. Castano AP, Mroz P, Hamblin M.R. Photodynamic therapy
and anti-tumour immunity. Nat Rev Cancer.
2006;6(7):535-545.
9. Belicha-Villanueva A, Riddell J, Bangia N, Gollnick SO.
The effect of photodynamic therapy on tumor cell
expression of major histocompatibility complex (MHC)
class I and MHC class I-related molecules. Lasers Surg
Med. 2012;44(1):60-68.
10. Korbelik M, Stott B, Sun J. Photodynamic therapy-
generated vaccines: relevance of tumour cell death
expression. Br J Cancer. 2007;97(10):1381-1387.

11