Stability Indicating Method Developmennt

A stability-indicating method is defined as an analytical method than accurately

quantitates the active ingredients without interference from degradation products, process
impurities, excipients, or other potential impurities. A method that accurately quantitates
significant degradants may also be considered stability indicating. A proactive approach to
developing a stability-indicating HPLC method involves forced degradation as the first step in
development. If forced degradation studies are performed early, method development and
identification of primary degradation products and unknown impurities can be run in parallel.
Using this process, a validated HPLC analytical assay, mechanism of degradation, and the
impurity/degradant information for filing can all be generated without delays in the project
timeline.

1. Mass Balance
Mass balance is defined in the ICH Impurity Guidelines as adding together the assay
value and levels of degradation products to see how closely these add up to 100 percent
of the margin of analytical error. Assessment of mass balance may be informative in
assuring that the chosen analytical strategy controls all significant degradants (Figure 2,
step 5). The guidelines recognize that it can be difficult to determine mass balance
because of unknown analytical precision and differences in response factor. Additional
guidance on helping the analyst obtain or approximate mass balance is given by
Nussbaum et al.
2. Key Predictive Sample Set
The key predictive sample set (KPPS) (Figure 2, Step 6) for a given compound is equal
to the significant degradants plus process impurities than can include intermediates,
starting materials, and by products. Process-related impurities and known degradation
products might be available as reference standards for use in method development.
Unknown degradation products can also be critical in the development of a stability
specific method. Forced degradation studies may generate complex mixtures of
degradants, but method development should consider only significant degradants.
Although project-specific factors may influence judgments of degradant significance, the
examples that follow describe guidelines that may generally be applied, considering the
stage of development. We propose that a degradant in a stress testing sample may be
 judged not significant, and hence discounted, if it fails to exceed either threshold
described.

Example 1. A degraded sample from an exploratory API forced degradation study

shows 25% main band loss. Analysis shows a major degradant (16%) a second
degradant (3%), and several further degradants at levels NMT 2%. The 16% peak is
the largest degradant,representing 60% of total degradation and is judged
significant. Although the 3% component comprises more than 10% of total
degradation, its level is less than 25% that of the largest degradant and is thus
judged not significant. The components at or below 2% are less than 10% of total
degradation, as well as being less than 25% the level of the largest degradant. All
are thus judged not significant.

Example 2. A forced photodegradation experiment results in 10% main band loss.

Many individual degradants are observed, of which the largest is 0,8%, Since no
individual impurity exceeds 10% total degradation, none are judged significant.

Figure 2 details the process involved in the key degradation-impurity sample

generation and selection. Work should then be performed to identify the unknown
significant degradants, as appropriate. The integrity of these analyte peaks can be
verified by liquid chromatography (LC)/mass spectrometry (MS) selective ion
monitoring. The purity of the peaks can also be verified by collecting the peak of
interest and chromatographing it by another method ( thin-layer-chromatography
(TLC), GC, or a second HPLC system), Ussually, key predictive samples can be
generated on a large-scale basis for preparative isolation, Small-scale synthesis is
also an option when a likely structure is identified and the chemistry can be
accomplished in a few short steps.

3. Stereochemical Stability

Chiral APIs should be assessed for their stereochemical stability during forced
degradation studies on a case-by-case basis. CAMEO analysis can be a useful tool to
evaluate concerns with racemization of chiral centers in the API. If the degradation
prediction suggest racemization to be likely by any condition, stereochemical
stability should be explored. APIs withone or two chiral centers should be analyzed
with a chiral method. Based on predictive data and chemical knowledge, choose
degradation conditions that are most likely to cause racemization. If the chosen
conditions do not invert or racemize the API, then chiral analysis does not need to
be part of further forced degradation protocols. APIs with three or more chiral
centers most likely convert to diastereoisomers and could be analyzed with an
achiral method. Stereoisomers should be treated like any other API-related impurity
with respect to quantitation, identification, and qualification thresholds. A
recommended procedure is to choose either the last timepoint or a timepoint where
5-20% degradation for each condition, and look for racemization of parent. If there
is no racemization of parent under any stress conditions, then that information is
used to justify why a chiral method does not need to be part of the control strategy.
 4. physicochemical stability

a polymorph appearing in the late stage of drug development may require reformulation,
redevelopment of analytical method, and change only of manufacturing procedures. In addition
to this, some physical form change only occurs in the solid state. For these reasons, the solid
form change should be monitored during forced degradation studies including stressing solvates
and hydrates in closed and open containers. If a solid form change is detected, degradation rates
could change for the new form; therefore, chemical stability should be evaluated in addition to
physical stability.

5. Identify Degradants

Degradation product structure elucidation requires a multidimensional approach,

typically involving MS and NMR analysis (and if needed, other spectroscopic techniques such as
UV and IR and chromatographic techniques such 2D-LC). Such multidimensional approaches
can be greatly facilitated by collaborative efforts involving analytical, process, formulation, and
spectroscopic scientists in a team setting. (figure 2, Step 7)

Typically, the focus will be on collecting LC/MS data only through the phase 1 clinical
stage. At the phase 2 clinical stage and beyond, more time is invested in isolation, synthesis and
structural identity using NMR characterization of forced degradation products of concern.

G. Pharma D3 Degradation Database

A structure-searchable degradation profile database has been created to compile API/DP

degradation data and share degradation knowledge globally at Pfizer (figure 2, step 8). The
database is a web-based novel hybrid publishing/database paradigm where both chemical
structures and associated reports are stored in a structure and word-searchable database,
otherwise known as pharma D3. The use of pharma D3 enables a proactive approach to drug
stability by establishing trends with functional groups to allow enhanced prediction of
degradation results. It was developed to address certain key goals including: improve
communication, minimize duplication of effort, and establish a proactive approach to drug
stability, predict problems and identify trends in data. With the degradation profile database, an
analyst can search by structure and produce tabulated results of all the identified degradants
observed under each degradation condition. The database also contains a substructure search
function that allows the analyst to retrieve all records on compounds with similar structure. This
function is extremely powerful in that it enables better prediction of degradation reaction and
better use of our library of historical degradation studies. The following data is tracked in the
database: compound number, notebook reference, salt form, parent structure, degradant
structures, molecular weights/change in molecular weights of degradants, degradation
experimental conditions, HPLC procedure references, conditions for performing degradants
HPLC screening analysis, functional group involved in the degradation pathway, structure
elucidation data, report references, links to electronic report, and proposed mechanisms for
degradants (figure 6).

Stabilitas-Menunjukkan Pengembangan Metode

Sebuah metode stabilitas menunjukkan didefinisikan sebagai suatu metode
analisis dari akurat quantitates bahan aktif tanpa gangguan dari produk degradasi, kotoran
proses, bahan pengisi, atau kotoran potensial lainnya. Sebuah metode yang akurat
quantitates urai signifikan juga dapat dipertimbangkan stabilitas menunjukkan. Sebuah
pendekatan proaktif untuk mengembangkan metode HPLC stabilitas menunjukkan
melibatkan degradasi terpaksa sebagai langkah pertama dalam pengembangan. Jika studi
degradasi paksa dilakukan awal, pengembangan metode dan identifikasi produk
degradasi primer dan kotoran yang tidak diketahui dapat dijalankan secara paralel.
Menggunakan proses ini, alat tes divalidasi HPLC analitis, mekanisme degradasi, dan
pengotor / informasi urai untuk pengajuan semua dapat dihasilkan tanpa penundaan
dalam waktu proyek.

1. Neraca Massa

Neraca massa didefinisikan dalam Pedoman ICH Impurity sebagai "menambahkan

bersama nilai uji dan tingkat produk degradasi untuk melihat seberapa dekat ini menambahkan
hingga 100 persen dari margin kesalahan analitis." Penilaian keseimbangan massa mungkin
informatif dalam menjamin bahwa memilih strategi analitis mengontrol urai semua signifikan
(Gambar 2, langkah 5). Pedoman mengakui bahwa hal itu dapat sulit untuk menentukan neraca
massa karena ketepatan analitis tidak diketahui dan perbedaan dalam faktor respon. panduan
tambahan untuk membantu analis memperoleh atau keseimbangan massa perkiraan diberikan
oleh Nussbaum et al.

2. Kunci prediktif sampel Kumpulan

Kunci sampel set prediktif (KPPS) (Gambar 2, Langkah 6) untuk senyawa yang diberikan
sama dengan urai signifikan ditambah kotoran proses daripada yang bisa mencakup intermediet,
bahan awal, dan oleh produk. kotoran-terkait proses dan produk degradasi disebut mungkin
tersedia sebagai standar acuan untuk digunakan dalam pengembangan metode. produk degradasi
diketahui juga dapat menjadi penting dalam pengembangan metode tertentu stabilitas. Studi
degradasi paksa dapat menghasilkan campuran kompleks dari urai, tetapi pengembangan metode
harus mempertimbangkan urai hanya signifikan. Meskipun faktor spesifik proyek mungkin
mempengaruhi penilaian penting urai, contoh yang mengikuti menggambarkan pedoman yang
secara umum dapat diterapkan, mengingat tahap perkembangan. Kami mengusulkan bahwa urai
dalam sampel pengujian stres dapat dinilai tidak signifikan, dan karenanya diskon, jika gagal
melebihi baik threshold dijelaskan.

Contoh 1. Sebuah terdegradasi sampel dari API memaksa studi degradasi eksplorasi
menunjukkan 25% penurunan pita utama. Analisis menunjukkan urai besar (16%) a urai kedua
(3%), dan beberapa urai lebih lanjut di tingkat NMT 2%. 16% puncak adalah urai terbesar, yang
mewakili 60% dari total degradasi dan dinilai signifikan. Meskipun komponen 3% terdiri lebih
dari 10% dari total degradasi, level kurang dari 25% yang dari urai terbesar dan dengan demikian
dinilai tidak signifikan. Komponen pada atau di bawah 2% kurang dari 10% dari total degradasi,
serta menjadi kurang dari 25% tingkat urai terbesar. Semua demikian dinilai tidak signifikan.

Contoh 2. Sebuah memaksa hasil percobaan fotodegradasi di 10% loss pita utama.
Banyak urai individu yang diamati, yang terbesar adalah 0,8%, Karena tidak ada pengotor
individu melebihi 10% dari total degradasi, tidak ada yang dinilai signifikan.

Gambar 2 Rincian proses yang terlibat dalam kunci kerusakan-pengotor generasi sampel
dan seleksi. Pekerjaan kemudian harus dilakukan untuk mengidentifikasi urai signifikan
diketahui, yang sesuai. Integritas puncak analit ini dapat diverifikasi oleh kromatografi cair
(LC) / spektrometri (MS) pemantauan ion selektif massa. Kemurnian puncak juga dapat
diverifikasi dengan mengumpulkan puncak bunga dan chromatographing dengan metode lain
(lapis tipis-kromatografi (TLC), GC, atau sistem HPLC kedua), Ussually, sampel prediksi kunci
dapat dihasilkan pada skala besar dasar untuk isolasi preparatif, sintesis skala kecil juga
merupakan pilihan ketika struktur kemungkinan diidentifikasi dan kimia yang dapat dicapai
dalam beberapa langkah singkat.

3. Stabilitas stereokimia

API kiral harus dinilai untuk stabilitas stereokimia mereka selama studi degradasi paksa atas
dasar kasus per kasus. Analisis CAMEO dapat menjadi alat yang berguna untuk mengevaluasi
masalah dengan racemization dari pusat kiral dalam API. Jika prediksi degradasi menyarankan
racemization menjadi mungkin dengan kondisi apapun, stabilitas stereokimia harus dieksplorasi.
API withone atau dua pusat kiral harus dianalisis dengan metode kiral. Berdasarkan data prediksi
dan pengetahuan kimia, memilih kondisi degradasi yang paling mungkin menyebabkan
racemization. Jika kondisi yang dipilih tidak membalikkan atau racemize API, maka analisis
kiral tidak perlu menjadi bagian dari protokol degradasi lebih lanjut paksa. API dengan tiga atau
lebih pusat kiral kemungkinan mengkonversi ke diastereoisomer dan bisa dianalisis dengan
metode akiral. Stereoisomer harus diperlakukan seperti yang lain pengotor terkait API
sehubungan dengan batas kuantisasi, identifikasi, dan kualifikasi. Sebuah prosedur yang
direkomendasikan adalah memilih baik timepoint terakhir atau timepoint mana 5-20% degradasi
untuk setiap kondisi, dan mencari racemization dari orang tua. Jika tidak ada racemization induk
di bawah kondisi stres, maka informasi yang digunakan untuk membenarkan mengapa metode
kiral tidak perlu menjadi bagian dari strategi pengendalian.

4. stabilitas fisikokimia

a polimorf muncul dalam tahap akhir dari pengembangan obat mungkin memerlukan
reformulasi, pembangunan kembali metode analisis, dan mengubah hanya prosedur manufaktur.
Selain ini, beberapa perubahan bentuk fisik hanya terjadi dalam keadaan padat. Untuk alasan ini,
perubahan bentuk padat harus dipantau selama studi degradasi paksa termasuk menekankan
solvates dan hidrat dalam wadah tertutup dan terbuka. Jika perubahan bentuk padat terdeteksi,
tingkat degradasi bisa berubah bentuk baru; Oleh karena itu, stabilitas kimia harus dievaluasi
selain stabilitas fisik.

5. Identifikasi urai

struktur produk degradasi penjelasan memerlukan pendekatan multidimensional, biasanya

melibatkan MS dan analisis NMR (dan jika diperlukan, teknik spektroskopi lain seperti UV dan
IR dan teknik kromatografi seperti 2D-LC). Pendekatan multidimensional tersebut dapat sangat
difasilitasi oleh upaya kolaboratif yang melibatkan analisis, proses, formulasi, dan ilmuwan
spektroskopi dalam pengaturan tim. (Gambar 2, Langkah 7)

Biasanya, fokus akan pada mengumpulkan data LC / MS hanya melalui tahap klinis fase 1. Pada
tahap klinis fase 2 dan seterusnya, lebih banyak waktu diinvestasikan dalam isolasi, sintesis dan
identitas struktural menggunakan NMR karakterisasi produk degradasi paksa perhatian.

G. Pharma D3 Degradasi database

Sebuah struktur database dicari profil degradasi telah dibuat untuk mengkompilasi API / DP
Data degradasi dan berbagi pengetahuan degradasi secara global di Pfizer (gambar 2, langkah
8). database adalah sebuah novel "hybrid" paradigma penerbitan / database yang berbasis
web di mana kedua struktur kimia dan laporan yang terkait disimpan dalam struktur dan kata
database dicari, "atau dikenal sebagai" farmasi D3. "Penggunaan pharma D3 memungkinkan
pendekatan proaktif stabilitas obat dengan membentuk tren dengan kelompok fungsional
untuk memungkinkan prediksi ditingkatkan dari hasil degradasi. Ini dikembangkan untuk
mengatasi tujuan kunci tertentu termasuk: meningkatkan komunikasi, meminimalkan
duplikasi usaha, dan membangun pendekatan proaktif untuk stabilitas obat, memprediksi
masalah dan mengidentifikasi tren dalam data. Dengan degradasi basis data profil, seorang
analis dapat mencari berdasarkan struktur dan menghasilkan hasil tabulasi dari semua urai
diidentifikasi diamati di bawah setiap kondisi degradasi. database juga berisi substruktur
fungsi pencarian yang memungkinkan analis untuk mengambil semua catatan pada senyawa
dengan struktur serupa. Fungsi ini sangat kuat dalam hal itu memungkinkan prediksi yang
lebih baik dari reaksi degradasi dan lebih baik menggunakan perpustakaan kami studi
degradasi sejarah. Data berikut ini dilacak dalam database: nomor compound, referensi
notebook, bentuk garam, struktur induk, struktur urai, berat molekul / perubahan berat
molekul urai, kondisi eksperimental degradasi, referensi prosedur HPLC, kondisi untuk
melakukan analisis urai screening HPLC, kelompok fungsional yang terlibat dalam jalur
degradasi, struktur data penjelasan, referensi laporan, link ke laporan elektronik, dan
mekanisme yang diusulkan untuk urai (gambar 6).