Informe 2 Microbiologa aplicada (2016)

Cultivos puros y Observaciones microscpicas (Tinciones)

Hernn Crdenas1., Camilo Seplveda2.

Carrera de Ingeniera Civil Ambiental, Universidad de La Frontera

1. Resumen

El suelo es el ambiente en donde existe la mayor cantidad y diversidad de

microorganismos. Los microorganismos le dan al suelo la caractersticas de ser vivo
(nace, crece, se reproduce y muere) (Toro, D., 2005). Inicialmente, se trat de obtener un
cultivo bacteriano puro, para ser aislado, estudiado y clasificado. Posteriormente se utiliz
el mtodo de Tincin de Gram con el objetivo de diferenciar Gram-positivas y Gram-
negativas de algunas bacterias y clulas (epiteliales). Para el cultivo bacteriano se utiliz
como medio de cultivo el Agar Plate Count (A.P.C.) mediante la tcnica de agotamiento por
estras mientras que para el examen microscpico de las bacterias se utiliz la tcnica de
preparaciones extendidas, fijadas y teidas donde se utilizaron compuesto qumicos
(colorantes) como violeta genciana, lugol, acetona, safranina, etctera. Como resultado del
cultivo bacteriano se obtuvo una placa con crecimiento de colonias idnticas mientras que
otra con colonias irregulares (resultado inesperado). En el estudio microscpico se pudo
observar bacterias Gram-negativas del tipo Estreptobacilos.

2. Resultados y discusin

a) Cultivos puros:
Para la obtencin de cultivos puros, a partir de una sola clula se utiliz el mtodo de
siembra por estras donde se utiliz como medio de cultivo Agar Plate Count utilizando el
asa de siembra, las cuales se depositaron en un Horno Pasteur por 48 horas para ser
incubadas. Lo que se esperaba era obtener colonias idnticas para su aislamiento, estudio e
identificacin como se muestra en la siguiente figura:
Figura 1: Cultivo puro
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Despus de las 48 horas de incubacin, el resultado fue dispar ya que de las 2 placas
incubadas, solamente 1 arroj resultados positivos, como se puede apreciar en las siguientes
figuras:

Figura 2: Cultivo bacteriano. Colonias Figura 3: Cultivo bacteriano. Colonias medianamente

ramificadas no uniformemente aisladas para su extraccin
Respecto a la figura 2, la siembra por estras no fue buena debido a que no se consigui
colonias perfectamente aisladas para su extraccin y cultivo. Esto posiblemente por:

1. Puede que la porcin de colonia tomada haya sido mucha cantidad y que al flamear
entre estras no haya sido el tiempo suficiente.
2. El crecimiento de la bacteria sobre la placa puede deberse a que diversas bacterias
de suelo son flageladas y esto produce que sean mviles, lo que viene asociado a un
crecimiento ramificado no uniforme.

Respecto a la figura 3, la siembra por estra fue regularmente buena, ya que se puede
apreciar colonias aisladas, las cuales pueden ser extradas para su posterior estudio y
clasificacin.

b) Observaciones microscpicas (Tinciones):

Por otra parte, para identificar los tipos de bacterias de la muestra de suelo puro se utiliz la
tcnica de Tincin de Gram, la cual permite de acuerdo con la estructura y grosor de la
pared bacteriana, agrupar las bacterias en Gram positivas y Gram negativas. Las Gram
positivas poseen una capa gruesa de peptidoglicano y carecen de membrana externas,
mientras que las Gram negativas tienen una capa ms delgada de peptidoglicano (E.
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Rodrguez et al., 2005). Las bacterias Gram positivas retienen el cristal violeta, y por lo
tanto, se ven de un color violeta intenso; las Gram negativas, que pierden el color violeta
con el agente decolorante, toman un color rojo al teirse con la safranina (V.Garca,2005).

A continuacin y como se aprecia en la figura 4, podemos observar bacterias del tipo

Estreptobacilos, las cuales son una variedad de bacilos en forma de cadenas de bastoncillos.
Son comnmente bacterias Gram-negativas ya que se visualizan de color rosa, rojo o
grosella. Tambin se pudo observar en las zonas perifricas bacterias Gram- positivas pero
de color violeta intenso. Esto pudo deberse a la antigedad de la muestra.

Figura 4: Bacterias Gram-Negativas del tipo Estreptobacilos.

3. Conclusin

En la etapa de cultivos puros podemos sealar que si bien en algunos casos el cultivo no
logr el xito deseado, ya que no se pudieron obtener cepas aisladas de la masa, se puede
concluir que si fueron xito, ya que se obtuvieron colonias de igual forma y tamao,
capaces de ser extradas para ser aisladas, estudiadas y clasificadas.
Mientras que en la etapa de tincin de Gram, si bien las bacterias observadas que
pertenecen a la variedad de Estreptobacilos que se caracterizan por ser Gram negativas, si
bien algunas presentan tonalidades violetas, estas se pueden explicar por la antigedad de la
muestra.

4. Referencias

Toro, D., (2005). Manual para la introduccin al laboratorio de microbiologa. (1th

ed.). Universidad de Caldas. (Colombia)
Rodrguez, E; Gamboa, M; Hernndez, F; Garca, J. 2005. Bacteriologa general:
Principios y Prcticas de Laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica. P.
Vera Garca Corts (2004).Introduccin a la Microbiologa (2 Ed.).Costa Rica.
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tems Nota:
Resumen (20%)
Resultados y discusin (50%)
Conclusin (25%)
Referencias (5%)
Nota Final: