CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)

David Esteban Quintero Jimenez

Prof. Dr. Andr Luiz Meleiro Porto
Objetivos do experimento
Separar, identificar, purificar e dosar misturas moleculares.

Conceitos introdutrios

A cromatografia pode ser definida como um processo de separao. utilizada essencialmente

para a separao e identificao de misturas moleculares, bem como para purificao e dosagem das
mesmas. O processo se baseia na redistribuio das molculas da mistura entre duas ou mais fases. A
distribuio se passa entre uma fase estacionria (suporte) e um fluido mvel (eluente).
Cromatografia em papel: Na cromatografia em papel o suporte o prprio papel, constitudo
majoritariamente de celulose. A tcnica simplificada da cromatografia de partio em papel consiste em
aplicar (com o auxlio de um capilar) uma soluo, contendo a mistura a ser analisada/separada, prximo
extremidade de uma tira de papel de filtro com 8,0 cm de comprimento e 3,0 cm de largura (Figura 1a).
Deposita-se ento, a tira com a amostra adsorvida, dentro da cuba cromatogrfica (previamente saturada
com o vapor do eluente) (Figura 1b). O eluente passa, por ao de capilaridade, sobre a mancha (amostra
adsorvida no papel) (Figura 1a) arrastando os componentes com velocidades diferentes. Os componentes
a separar sofrem uma partio entre a fase aquosa suportada em uma matriz inerte de celulose e o
solvente orgnico usado na fase mvel (Figura 1c).

Figura 1. Cromatoplacas. (a) Preparada para separao; (b) no instante inicial aps ser introduzida na cuba cromatogrfica; (c) aps
o eluente percorrer a placa por capilaridade e (d) fora da cuba cromatogrfica para aferir as distncias percorridas pelas amostras e
pelo eluente (Rf).

O valor de Rf fator de reteno mede a velocidade de deslocamento da zona relacionada com a

distncia percorrida pelo eluente em relao distncia percorrida pela zona da substncia frente ao seu
ponto de aplicao. Os valores de Rf devem ser menores do que a unidade. Quando este for igual a zero,
conclui-se que a substncia no se deslocou, quando for igual frente do solvente, conclui-se que a
mesma se moveu junto com o solvente. Para ambos os casos, a escolha do eluente no foi apropriada,
devendo-se procurar ento um eluente ou uma mistura eluente adequado. Muitas das substncias
separadas por este processo no so coloridas (Figura 1d). A cor pode ser desenvolvida
momentaneamente (para determinados compostos) por exposio luz ultravioleta. Pode-se tambm
converter tais substncias incolores em derivados coloridos quando o sistema pulverizado com um
reagente apropriado (sulfato crico, ninidrina, cloreto frrico, cido fosfomolibdco, anisaldedo, dentre
outros ) ou expondo a cromatoplaca em atmosfera saturada com vapores de iodo (I2).
Cromatografia em cromatoplacas de slica: Neste caso o adsorvente ( a slica) espalhado
sobre um revestimento de placa de vidro, plstico ou de alumnio. O desenvolvimento das manchas
referentes substncia semelhante cromatografia em papel. A cromatografia em camada fina em
slica apresenta algumas vantagens em relao cromatografia em papel, tais como, maior nitidez, alta
sensibilidade, e ainda, a possibilidade do emprego de solventes e reveladores normalmente agressivos ao
papel (cidos concentrados e compostos fortemente oxidantes).

Materiais e reagentes utilizados

3 Frascos Bker de 100 mL vedados com folhas de papel alumnio;

3 Tubos capilares (para medidas do ponto de fuso);
Papel para cromatografia (3 cm x 5cm) e (5) placas de alumnio CCD (3 cm x 5 cm);
 1 Tesoura; 1 Rgua; 1 Lpis; 1 Pina;
Eluentes (Hexano, 100%; Hexano/Acetato de Etila, 9:1, Acetato de Etila, 100%)
Revelador (Luz Ultravioleta, 254 e 355 nm) e vapor de iodo (capela).

A Tabela 1 apresenta os compostos a serem analisados por CCD (slica e em papel).

Tabela 1. Flavonoides a serem utilizados na separao cromatogrfica

Flavonoides Estruturas Qumicas

Chalcona (1)

Flavonona (2)

Flavonol (3)

Procedimento experimental

1) Com um tubo capilar, aplicar a 1 cm de altura em relao extremidade inferior da placa

cromatogrfica (ou papel) uma ou duas gotas dos compostos 1, 2 e 3. assim como da mistura dos
compostos 1 e 2 e 1 e 3 em questo.
Cuidado para que a mancha formada no ultrapasse o dimetro de 3 mm, deixando secar a primeira gota antes de
colocar a segunda.

2) Levar as placas (ou papel) para a eluio dentro da cuba cromatogrfica, contendo o eluente adequado.
O nvel de eluente deve estar abaixo do nvel das manchas aplicadas na placa (ou papel).
A cuba cromatogrfica sempre dever estar vedada/fechada e com o volume de solvente adequado para que a mesma
permanea saturada com os vapores do eluente.

3) Deixar o eluente subir at a demarcao superior da placa ou papel.

Se necessrio adicione mais eluente na cuba cromatogrfica.

4) Retirar a placa com uma pina depositando-a sobre a bancada e deixar o solvente evaporar.
Observar e marcar levemente as manchas, caso sejam visveis a olho nu. Circular com um lpis as
manchas observadas.
Nunca utilizar caneta para circular as manchas na placa ou no papel.

5) Em seguida revelar as manchas, primeiro em luz UV (245 e 355 nm).

Circular com um lpis as manchas observadas na luz UV na placa e no papel.

6) Levar a placa para a cuba cromatogrfica contendo vapores de iodo.

Vapores de iodo so txicos, manipular sempre na capela.

7) Calcule os Rfs de cada uma das manchas.

8) Com um tubo capilar, aplicar a 1 cm de altura em relao extremidade inferior da placa

cromatogrfica (ou papel) uma ou duas gotas de uma mistura de 1 com 2 e de 1 com 3 e realizar a analise
por cromatogrfica. Neste caso s ser usado o eluente hexano:acetato de etila 9:1 e ser revelado tanto
com UV, vapores de iodo como tambm revelador anisaldeido.
 Questes para discusso
Sabe-se que a ordem de eluio das manchas na placa ou no papel dependente da fase mvel e da fase
estacionria. Comente.
O que ocorre se aplicar amostra concentrada, bem como, mergulhar o ponto de aplicao junto ao
eluente?