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Anlisis Microbiolgico del agua
- Anlisis microbiolgico del agua -
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Parmetros biolgicos del agua. 2
Determinacin de microorganismos aerobios mesfilos....... 4
Determinacin de Coliformes Totales y Fecales ....... 5
Determinacin de Estreptococos Fecales...12
Determinacin de Clostridios Sulfito Reductores...15
Conclusiones del anlisis...17
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Parmetros biolgicos del agua:
El agua es un recurso natural necesario para el desarrollo de un gran

nmero de actividades humanas. Su creciente degradacin por disminucin de
su calidad implica la reduccin del nmero de usos que se le da; es por ello, lo
que se hace necesario la realizacin de estudios que permitan determinar la
calidad de ese agua. Los anlisis que se pueden realizar al agua para controlar
su calidad son: fsicos, qumicos y microbiolgicos, en esta ocasin se har una
determinacin microbiolgica.
Todos los organismos que se encuentran en el agua son importantes en

el momento de establecer el control de la calidad de la misma sin considerar si
tienen su medio natural de vida en el agua o pertenecen a poblaciones
transitorias introducidas por el ser humano; si su crecimiento lo propician los
nutrientes presentes en el escurrimiento natural y en aguas residuales
municipales o lo frenan los venenos procedentes de la actividad agrcola o
industrial; y si tienen capacidad para intoxicar a las personas y a los animales
superiores.
Se debe conocer la forma de los patgenos hdricos y determinar su

presencia y origen, la magnitud y oscilacin de su nmero, el curso de su ciclo
vital y el ndice de su supervivencia. Los parmetros biolgicos en las aguas
potables son de mucho inters, los microorganismos que puede haber en el
agua son virus, bacterias, hongos, algas y protozoos. Aquellos que son inocuos
para el hombre no tienen significacin sanitaria, por lo que el control
microbiolgico del agua se va a centrar en las especies patgenas para el
hombre. Dado que buscar todo tipo de microorganismos patgenos, por su
diversidad, es costoso y complicado y como la relacin patgenos/no
patgenos es muy pequea, se realiza un control del agua a travs de
indicadores microbiolgicos de contaminacin.
Hay muchos seres vivos que se emplean como indicadores de la calidad

de un agua. As, segn predominen unos organismos u otros, podremos saber
el estado de un agua.
Para que un microorganismo sea considerado como indicador

microbiolgico ha de reunir unas condiciones que son:
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Debe ser incapaz de desarrollarse en el agua.
Debe tener una supervivencia en el agua superior a los

organismos patgenos.
Debe soportar mejor a los desinfectantes.
Deben ser fciles de aislar, identificar y contar.
Deben ser muy abundantes en heces y escasos en otros medios.
La normativa recoge una serie de anlisis microbiolgicos segn se

efecte sobre el agua un anlisis mnimo: Coliformes Totales y Fecales; uno
normal: los anteriores ms: bacterias aerobias a 37 C, Estreptococos Fecales
y Clostridios Sulfito-Reductores; o completo: los anteriores ms aerobias a 22
C, microoganismos parsitos y/o patgenos; el anlisis realizado ha sido el
normal.
El agua problema procede de un manantial, vamos a realizar un anlisis

microbiolgico normal y el objetivo va a ser determinar la contaminacin
microbiolgica que puede existir, buscar las causas de esa contaminacin y
proponer soluciones al problema.
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Determinacin de microorganismos aerobios mesfilos:
Se determinarn estos microorganismos que son los que se encuentran

a temperatura ambiente en el agua.
Procedimiento:
El mtodo consiste en filtrar a vaco una determinada cantidad de agua

que va a ser de 100 mL sobre una membrana filtrante estril depositada con la
cuadrcula hacia arriba.
Una vez filtrada el agua, se retira la membrana y se deposita con pinzas

estriles sobre una placa Petri con medio P.C.A., se incuba 37 C 24 -48
horas.
Tras la incubacin se realiza un recuento de las colonias aparecidas,

expresndose el resultado en u.f.c. en 100 mL.
Resultados obtenidos: recuento de colonias:
Al transcurrir el perodo de incubacin establecido se saca la placa de

Petri de la estufa y se recuentan las colonias crecidas.
El nmero de colonias aparecidas es 270 u.f.c. por cada 100 mL de agua

problema.
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Determinacin de Coliformes Totales y Fecales:
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales,

capaz de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los
totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en

heces estn formados por Escherichia Coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya
que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de
los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia
de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su
capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica
que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes
fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es
favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica,
pH, humedad Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador
ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin
de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica
que el agua se halla exenta de organismos productores de enfermedades.
Procedimiento:
Vamos a seguir el mismo mtodo para la determinacin de los dos tipos

de Coliformes, lo nico que variar ser la temperatura de incubacin de cada
determinacin, que para los Coliformes Totales ser de 37 C y para los fecales
ha de ser de 44 C.
Prueba presuntiva:
Para determinar estos Coliformes se va a utilizar el medio de cultivo

BGBB (dispuesto en tubo), que es un medio selectivo y de enriquecimiento ya
que inhibe el crecimiento de microorganismos distintos de los del grupo de los
Coliformes a la vez que permite que stos crezcan sin restriccin, se distribuye
el medio en nueve tubos (tres series de tres tubos) con diez mililitros cada uno
de medio de cultivo y echando 10 ml de el agua a la primera serie de tubos, 1
ml de agua a la segunda serie, y 0,1 ml a la tercera. Colocaremos en cada tubo
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una campana Durham para recoger el gas producido y al medio de cultivo se le

habr aadido un indicador cido-base.
Estos tubos se incuban a la temperatura correspondiente segn se trate

de Coliformes Totales Fecales durante 24 horas.
Los Coliformes son lactosa positiva, es decir, son capaces de fermentar

a la con produccin de cido y gas, estos signos sern los que buscaremos.
La reaccin ser positiva cuando se produce desprendimiento de gas en

la campana Durham por lo menos en un 10% de su capacidad, y el medio vira
a color amarillo debido a formacin de cido.
Una reaccin positiva por dbil que sea, indicar la presencia y

coliformes y habr que hacer las pruebas confirmativas de IMViC.
Se aplicar la tcnica del nmero ms probable (NMP).
Prueba confirmativa: siembra en EMB Levine:
En los tubos donde se introdujo 0,1 ml de agua problema, o resultados

positivos en la prueba presuntiva ,se introduce un asa de siembra estril y se
toma una porcin que va a sembrarse en estra en una placa Petri con medio
EMB Levine. El EMB Levine contiene eosina y azul de metileno que inhiben
parcialmente el crecimiento de los microorganismos Gram negativos, adems
la combinacin de azul de metileno y eosina permitirn diferenciar
microorganismos lactosa positiva de los negativos.
Se incuban los tubos 24 - 48 horas a la temperatura correspondiente

segn se trate de Coliformes Totales Fecales.
Los Coliformes apareceran como violetas oscuros y si hubiera

microorganismos lactosa negativos apareceran como colonias incoloras.
Pruebas IMViC:
Las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, pueden

identificarse a travs de una serie de pruebas bioqumicas, que permiten
determinar la presencia o ausencia de ciertas enzimas y a veces incluso
permiten determinar la existencia de una secuencia metablica. Con este fin se
han desarrollado diversos esquemas de clasificacin, uno de los ms
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conocidos y utilizados corresponde al IMViC que se desarroll para clasificar

especies de la familia antes mencionada y correspondientes al grupo de
bacterias coliformes (bacterias aerbicas o anaerbicas facultativas, Gram
negativos, bacilares, no esporgenas que producen cido y gas durante la
fermentacin de la lactosa). Consiste en las siguientes pruebas:
- Indol:
El triptfano, aminocido suministrado por una peptona adecuada, se

descompone en indol por accin de algunos microorganismos.
La prctica va a consistir en observar si el microorganismo es capaz de

producir indol cuando est en presencia de agua de peptona. El indol producido
es detectado por indol de kovacs que produce una coloracin al reaccionar con
l.
Se coge con un asa de siembra, colonias de la placas de EMB y se

siembra en un tubo con agua de peptona.
Se incuba horas a la temperatura correspondiente segn se trate de

Coliformes Totales Fecales, 24-48 horas, pasado el tiempo de incubacin se
sacan los tubos de la estufa y se les aade 1 mL de reactivo indol de Kovacs y
se deja reposar.
Si aparece una coloracin roja indica que la prueba es positiva, el

microorganismo produce indol.
- Rojo de metilo:
Esta es una prueba cualitativa de la acidez producida por el crecimiento

de una bacteria en agua de peptona glucosa con tampn fosfato.
Debido a la acidez producida, el medio virar de amarillo a rojo

considerando la prueba positiva al aadir un reactivo.
El procedimiento es el mismo que el del indol, con la diferncia que, en

vez de aadir indol de kovacs, aadimos Rojo de Metilo.
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- Voges Proskauer:
Algunas bacterias producen acatilmetilcarbimol (producto intermedio en

la degradacin de la glucosa de los hidratos de carbono), que en presencia de
KOH y aire, se oxida para dar diacetilo, que reacciona con -naftol y un
producto de descomposicin de la arginina de la peptona, para producir un
color rojo.
En un tubo con agua de peptona y glucosa se siembran colonias

aparecidas en las placas EMB Levine.
Se incuba a 37 44 C 24-48 horas, luego se aade 1 mL de reactivo de

Voges Proskauer,que contiene -naftol y KOH, se aade seis gotas de reactivo
omehara y dos de reactivo de Barry, se agita, se deja reposar 10-15 minutos y
si aparece una coloracin roja la prueba es positiva.
- Citrato:
Esta prueba determina la capacidad que presenta el microorganismo

problema para utilizar el citrato como nica fuente de carbono.
En un tubo con agar inclinado con Citrato de Simmons, se siembra una

colonia de las aparecidas en EMB en picadura y estra. Si aparece crecimiento
en el slam y si el medio vira de verde a azul (debido a la produccin de
amonaco que lo alcaliniza), el microorganismo es citrato positivo.
Tincin de Gram:
La coloracin de Gram tiene fundamental importancia en la

diferenciacin morfolgica y taxonmica de las bacterias. Las bacterias se
clasifican en dos grandes grupos segn retengan o no el colorante de base
usado en la tincin, que es el violeta de genciana o el cristal violeta:
Las bacterias Gram positivas aparecen con el citoplasma teido

uniformemente de color azul o violeta.
Las bacterias Gram negativas se tien de rojo por el colorante

usado como contrastador, fuchina, safranina.
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La diferencia entre unas y otras radica en la composicin qumica de la

pared celular y su permeabilidad. La pared de las Gram negativas es ms
delgada y presenta un contenido en lpidos, grasas, diez veces superior que el
de las Gram positivas, lo cual dificulta la tincin y la retencin del colorante en
el citoplasma.
Tomamos una colonia de las aparecidas en EMB Levine y realizamos

una tincin diferencial, a continuacin observamos con el microscopio.
Resultado de la determinacin:
Se han obtenido idnticos resultados tanto en la determinacin de

coliformes totales como fecales y stos han sido:
Prueba presuntiva:
En los tubos ha aparecido un viraje del color del medio de cultivo de

violeta a amarillo debido a la produccin de cido y en la campana Durhan
puede apreciarse con bastante gas en su interior. Los resultados son positivos
en 2 de los 3 primeros tubos,2 de los 3 sundos y 1 de los 3 ltimos (viraje del
medio y gas); con estos datos vamos a las tablas del nmero ms probable
(NMP) y tenemos:
Ms de 20 u.f.c. por cada mL de agua problema.
Como sta prueba ha sido positiva, realizaremos las pruebas

confirmativas, de haber resultado negativas las primeras, daramos por
terminado el anlisis.
Prueba confirmativa: siembra en EMB Levine:
Tras la incubacin han aparecido

colonias de color violeta, tal y como se
esperaba. Se pasa a las pruebas de IMViC
para determinar el microorganismo existente.
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Pruebas IMViC:
- Indol: Aparece un anillo rojo bordeando al

tubo: Indol positivo:el microorganismo produce
indol.
En la figura aparecen de izquierda a

derecha: tubo sin inoculacin de bacterias,
resultado negativo y resultado positivo a la
derecha.
- Rojo de Metilo: Tras la incubacin de

cuatro das, se aade el reactivo y el tubo se
colorea de rojo: Rojo de metilo positivo; el
microorganismo produce acidez en su
crecimiento. En la figura aparecen de izquierda a
derecha: tubo sin inoculacin de bacterias,
resultado negativo y resultado positivo a la
derecha.
- Voges-Proskauer: El microorganismo no
produce acetilcarbimol al aadirle el reactivo que
se detecta con la aparicin del color rojo, en este
caso el resultado es negativo, (tubo del medio).
En la figura aparecen de izquierda a derecha:
tubo sin inoculacin de bacterias, resultado
negativo y resultado positivo a la derecha.
- Citrato: Tras la incubacin se observa que el microorganismo no ha

crecido en el slam del tubo (tubo del centro) y el medio no ha virado de color,
por lo que no es capaz de obtener su fuente de carbono del citrato.
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El viraje del color del medio se debera a

una produccin de amonaco que alcalinizara el
medio y se habra detectado este aumento de
pH con el viraje del color del indicador que
incorpora el medio de cultivo. En la figura
aparecen de izquierda a derecha: tubo sin
inoculacin de bacterias, resultado negativo y
resultado positivo a la derecha.
El resultado de las pruebas IMViC son:

++--; con esta combinacin vamos a una tabla y como resultado tenemos que
el microorganismo presente en nuestro agua es la Escherichia Coli.
I M VI C
Escherichia Coli + + - -
Tincin de Gram:
Con esta prueba, hemos observado bacterias bacilares Gram negativas

con lo que podemos confirmar la presencia de Escherichia Coli que responde a
estas caractersticas y es el mayor indicador de contaminacin fecal en el agua.
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Determinacin de Streptococcus Fecales:
Los Streptococcus Fecales son bacterias anaerbias o aerbias

facultativas, conocidas como bacterias del cido lctico, integrantes de la flora
normal de los animales homeotrmicos. Actualmente se considera que
pertenecen al gnero Enterococcus .
Todos los Enterococos presentan alta tolerancia a condiciones

ambientales adversas altas o bajas temperaturas, deshidratacin, salinidad, luz
solar), por lo que se suelen emplear para determinar la contaminacin fecal
en aguas de bao martimas, pues son las que mejor soportan esas
condiciones de salinidad.
Los Streptococcus son abundantes en heces de animales, por lo que

son muy utilizadas en zonas donde sea abundante la cra de ganado. Nuestra
muestra de agua problema est tomada en este ambiente por lo que es
importante realizar esta prueba.
Procedimiento:
Prueba presuntiva:
Para determinar los Streptococcus Fecales se va a utilizar el medio de

cultivo KAA caldo (Canamicina-Esculina-Azida), que es un caldo de
enriquecimiento para Streptococcus D de Lancefield.
En ese medio de cultivo el sulfato de Canamicina y la Azida sdica

inhiben el crecimiento de la flora acompaante, mientras que los Streptococcus
crecen sin restriccin.
A su vez los Streptococcus hidrolizan la Esculina produciendo glucosa y

esculetina la cul reacciona con el NH4+ que lleva el medio y Fe+3 para dar un
complejo verde negruzco.
Vamos a sembrar en dos tubos con nueve mL de KAA 1 mL de muestra

problema y lo incubamos 24 horas a 37 C. Si aparece ennegrecimiento, la
prueba presuntiva es positiva y se pasar a las confirmativas.
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Prueba confirmativa: Siembra en KAA Agar:
De los tubos positivos de las pruebas presuntivas se hace una siembra

en estra mltiple en placas KAA Agar, las que se incuban a 37 C 24-48 horas.
Si pasado el periodo de incubacin aparecen colonias rodeadas de halos

negros debido a la hidrlisis de la esculina confirmaremos la presencia de
Streptococcus Fecales.
Otras pruebas confirmativas:
- Tincin de Gram:
En el caso de la presencia de Streptococcus Fecales se observarn

cocos Gram positivos.
- Crecimiento de colonias crecidas en KAA agar en caldo de cultivo BHI:
Se trata del caldo Cerebro-corazn que tiene la caracterstica que

contiene una concentracin en NaCl de 6,5%. Los Streptococcus crecen en
medios con elevada concentracin en sales minerales, es por lo que son ndice
de contaminacin fecal en agua marina, como ya se ha comentado
anteriormente.
- Prueba de la catalasa:
Consiste en observar si un microorganismo es capaz de descomponer el

agua oxigenada (H2O2) produciendo agua (H2O) y oxgeno (O2). Los
Streptococcus Fecales son catalasa negativos luego no metabolizan el H2O2 y
no se produce burbujeo debido al desprendimiento de oxgeno lo que nos
indicara que se ha reaccin se ha producido.
Para realizar esta prueba se efectuar un frots con las colonias

aparecidas en el caldo BHI con Streptococcus, en un portaobjetos y nunca con
colonias de medios que contengan Azida sdica.
Una vez fijada la extensin se aade H2O2, si aparece un burbujeo, la

prueba de la catalasa ser positiva.
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Prueba presuntiva:
Aparece un ennegrecimiento en el tubo, la prueba es positiva.
Los Streptococcus han hidrolizado la esculina produciendo glucosa y

esculetina, la cul reaccionan con el NH4+ que lleva y Fe+3 para dar un
complejo verde negruzco.
Prueba confirmativa: Siembra en KAA Agar:
La prueba resulta positiva: Aparecen colonias rodeadas de halos negros

debido a la hidrlisis de la esculina por ello confirmaremos la presencia de
Streptococcus Fecales.
Otras pruebas confirmativas:
- Tincin de Gram:
Se observan cocos Gram positivos que aparecen con el citoplasma

teido uniformemente de color azul o violeta.
- Crecimiento de colonias crecidas en KAA agar en caldo de cultivo BHI:
La prueba es positiva, aparece en el medio de cultivo, los Streptococcus

han crecido en este medio rico en NaCl.
- Prueba de la catalasa:
La prueba ha resultado negativa, es decir, los Streptococcus no tienen la

enzima catalasa que consigue metabolizar el H2O2 a H2O y O2.
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Determinacin de Clostridios Sulfito Reductores:
Los Clostridios son un gnero de bacterias que se caracterizan por

producir esporas terminales que deforman los bacilos. Son anaerobias y Gram
positivos. Estos microorganismos son importantes por los daos que pueden
provocar en las personas y por los beneficios econmicos que reportan.
Los gneros pertenecientes al gnero Clostridium tienen la caracterstica

comn de poder reducir el sulfito a sulfuro, los Clostridios sulfito reductores se
usan en ocasiones como ndice de contaminacin fecal, sobretodo para
apreciar la calidad higinico-sanitaria del agua y productos animales de
origen animal.
Este tipo de microorganismos pueden esporas, lo que les confiere una

gran resistencia.
La deteccin se basa en el crecimiento de este tipo de bacterias en

medios que contienen Na2SO3 y en su capacidad para reducicirlo a sulfuro,
dando lugar, en presencia de hierro, sulfuro de hierro que es de negro, con lo
que la aparicin de este color nos indica que existen Clostridios Sulfito
reductores.
La deteccin y recuento de Clostridios Sulfito reductores se puede hacer

de dos formas:
- Investigando la presencia de formas de vida vegetativas y

esporuladas conjuntamente.
- Investigando la presencia de formas esporuladas.
Se va a determinar la presencia de formas de vida vegetativas y

esporuladas conjuntamente.
Procedimiento:
Determinacin de formas esporuladas y viables:
Se va a utilizar como medio de culltivo el Agar Sulfito-Polimixina-

Sulfadiazina (SPS).
Lo primero ser preparar una serie de diluciones decimales.
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Se preparan dos tubos con medio, donde se sembrar con pipeta estril
en un tubo, un mL de la dilucin 10-2 y en otro tubo un mL de la dilucin 10-3.
La siembra se efectuar introduciendo la pipeta hasta el fondo del tubo y

depositando el inculo lentamente hasta antes de llegar a la superficie. Una vez
solidificado el medio de cultivo se aaden 2 mL de ese mismo medio para crear
anaerobiosis.
Se incuba a 37 C 48 horas, y pasado el periodo de incubacin se

cuentan las colonias negras aparecidas, ese nmero multiplicado por el factor
de dilucin ser el nmero total de formas vegetativas y esporuladas por
gramos mL de muestra.
En el tubo sembrado a partir de la dilucin 10-1 se observa 1 colonia

negruzca.
En el tubo sembrado a partir de la dilucin 10-2 no se observa ninguna

colonia.
El nmero total de formas vegetativas y esporuladas ser:
1 colonia * 10 (Inverso del factor de dilucin) =
10 formas vegetativas y esporuladas por cada mL de agua problema.
El color negro de estas colonias es debido a que los Clostridios han

reducido el sulfito a sulfuro, que reacciona con el Fe+2 del medio formando FeS
que es negro, por eso las colonias aparecidas son negras.
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Conclusiones del anlisis:
El agua constituye un elemento esencial, ya que es indispensable para

la vida, por lo que es necesario llevar un seguimiento de la calidad. Con este
anlisis se ha querido determinar la calidad de un agua tomado de un
manantial.
El reglamento que regula la calidad de las aguas (R.D. 140/2003 del 7

de Febrero (B.O.E. n 45 de 21/2/2003)) establece unos lmites de
contaminacin que no pueden ser superados y como puede observarse con los
resultados obtenidos, el lmite se supera ampliamente.
BACTERIAS A. M. : 200 u.f.c. / mL
COLIFORMES: 0 u.f.c. / 100 mL.
E. COLI: 0 u.f.c. / 100 mL.
ESTREPTOCOCOS FECALES : 0 u.f.c. / 100 mL.
CLOSTRIDIOS SULFITO REDUCTORES: 0 u.f.c. / 100 mL.
Como resultado hemos obtenido una gran contaminacin microbiolgica

del agua, donde no debera aparecer ningn tipo de contaminacin puesto que
se trata de un agua que en tiempos pasados se ha utilizado para consumo
humano, aunque actualmente se conoca la no potabilidad de la misma.
Durante aos se ha hecho un seguimiento de la calidad del agua

analizado y comparando resultados vemos que los parmetros biolgicos se
alejan notablemente de los permitidos a partir de un determinado momento.
La causa presumible es la ubicacin de unas grandes instalaciones

ganaderas, a pocos metros de distancia, de donde se encuentra el manantial
del agua analizado que originaran la contaminacin.
Es normal que aparezca una contaminacin fecal en el agua y la

presencia de Escherichia Coli, que es el mejor indicador de este tipo de
contaminacin, as lo confirma.
Pgina 17
El problema de la no potabilidad del agua sera solucionado con una

buena gestin de los residuos de las instalaciones ganaderas y someter al
manantial a un tratamiento de potabilizacin.
Pgina 18

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Anlisis Microbiolgico del agua

- Anlisis microbiolgico del agua -

Parmetros biolgicos del agua. 2

Determinacin de microorganismos aerobios mesfilos....... 4

Determinacin de Coliformes Totales y Fecales ....... 5

Determinacin de Estreptococos Fecales...12

Determinacin de Clostridios Sulfito Reductores...15

Conclusiones del anlisis...17

Parmetros biolgicos del agua:

El agua es un recurso natural necesario para el desarrollo de un gran

Todos los organismos que se encuentran en el agua son importantes en

Se debe conocer la forma de los patgenos hdricos y determinar su

Hay muchos seres vivos que se emplean como indicadores de la calidad

Para que un microorganismo sea considerado como indicador

Debe ser incapaz de desarrollarse en el agua.

Debe tener una supervivencia en el agua superior a los

Debe soportar mejor a los desinfectantes.

Deben ser fciles de aislar, identificar y contar.

Deben ser muy abundantes en heces y escasos en otros medios.

La normativa recoge una serie de anlisis microbiolgicos segn se

El agua problema procede de un manantial, vamos a realizar un anlisis

Determinacin de microorganismos aerobios mesfilos:

Se determinarn estos microorganismos que son los que se encuentran

El mtodo consiste en filtrar a vaco una determinada cantidad de agua

Una vez filtrada el agua, se retira la membrana y se deposita con pinzas

Tras la incubacin se realiza un recuento de las colonias aparecidas,

Resultados obtenidos: recuento de colonias:

Al transcurrir el perodo de incubacin establecido se saca la placa de

El nmero de colonias aparecidas es 270 u.f.c. por cada 100 mL de agua

Determinacin de Coliformes Totales y Fecales:

Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales,

Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en

Vamos a seguir el mismo mtodo para la determinacin de los dos tipos

Para determinar estos Coliformes se va a utilizar el medio de cultivo

una campana Durham para recoger el gas producido y al medio de cultivo se le

Estos tubos se incuban a la temperatura correspondiente segn se trate

Los Coliformes son lactosa positiva, es decir, son capaces de fermentar

La reaccin ser positiva cuando se produce desprendimiento de gas en

Una reaccin positiva por dbil que sea, indicar la presencia y

Se aplicar la tcnica del nmero ms probable (NMP).

Prueba confirmativa: siembra en EMB Levine:

En los tubos donde se introdujo 0,1 ml de agua problema, o resultados

Se incuban los tubos 24 - 48 horas a la temperatura correspondiente

Los Coliformes apareceran como violetas oscuros y si hubiera

Las bacterias pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, pueden

conocidos y utilizados corresponde al IMViC que se desarroll para clasificar

El triptfano, aminocido suministrado por una peptona adecuada, se

La prctica va a consistir en observar si el microorganismo es capaz de

Se coge con un asa de siembra, colonias de la placas de EMB y se

Se incuba horas a la temperatura correspondiente segn se trate de

Si aparece una coloracin roja indica que la prueba es positiva, el

Esta es una prueba cualitativa de la acidez producida por el crecimiento

Debido a la acidez producida, el medio virar de amarillo a rojo

El procedimiento es el mismo que el del indol, con la diferncia que, en

Algunas bacterias producen acatilmetilcarbimol (producto intermedio en

En un tubo con agua de peptona y glucosa se siembran colonias

Se incuba a 37 44 C 24-48 horas, luego se aade 1 mL de reactivo de

Esta prueba determina la capacidad que presenta el microorganismo

En un tubo con agar inclinado con Citrato de Simmons, se siembra una

La coloracin de Gram tiene fundamental importancia en la

Las bacterias Gram positivas aparecen con el citoplasma teido

Las bacterias Gram negativas se tien de rojo por el colorante

La diferencia entre unas y otras radica en la composicin qumica de la