INSTITUTO POLITCNICONACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE FISIOLOGA

PRCTICA 4

POTENCIAL DE DIFUSION Y POTENCIAL DE LESIN

INTRODUCCIN

La membrana plasmtica contiene canales proteicos que permiten a los principales iones
celulares (Na+, K+, Ca2+ y Cl-) cruzar la membrana a favor de su gradiente de concentracin a
distintas velocidades. Los gradientes de concentracin de iones y el movimiento de estos a
travs de la membrana crean una diferencia de potencial elctrico entre el interior y el exterior
de la membrana celular. A esta diferencia de potencial se la denomina Potencial de Membrana.
En la mayor parte de las clulas el valor de dicho potencial suele ser de unos -60 o -70 mV (el
signo negativo indica que el interior de la clula presenta carga negativa respecto al exterior) y
se debe nicamente a un ligero exceso de cationes, de tan solo ppm, en el exterior celular.

El potencial depende de:

La permeabilidad de la membrana para cada ion.

Donde la permeabilidad es la capacidad que tiene un material de permitirle a un flujo que lo

atraviese sin alterar su estructura interna. Se afirma que un material es permeable si deja pasar
a travs de l una cantidad apreciable de fluido en un tiempo dado, e impermeable si la cantidad
de fluido es despreciable.

Las concentraciones de los respectivos iones en LEC Y LIC

Potencial de difusin

Se denomina como la diferencia de potencial generada a travs de una membrana cuando

un soluto con carga elctrica se difunde y se opone al paso de nuevos iones hacia el lado
de menor concentracin. Slo puede generarse si la membrana es permeable a ese ion.

Cuando el flujo del ion, dado por la diferencia de concentraciones llega a ser compensado por el
flujo de repulsin, dado por la diferencia de potencial elctrico, se dice entonces que el ion esta
en equilibrio electroqumico a travs de la membrana (Alva et al., 2010). Este potencial est
definido por la ecuacin de Nerst:

Donde
E(ion)= potencial de equilibrio (volts)
R= constante de los gases

T= temperatura absoluta

F= constante de Faraday

z= valencia del ion

[ION]i = concentracin del ion en el interior de la clula

[ION]o = concentracin del ion en el exterior de la clula

Es decir, que el potencial de equilibrio de Nerst relaciona la diferencia de potencial a ambos

lados de una membrana biolgica en el equilibrio con las caractersticas relacionadas con los
iones del medio externo e interno y de la propia membrana semipermeable.

La ecuacin de Nerst se emplea para predecir la direccin del flujo inico en los siguientes casos:

1.- Cuando la diferencia de potencial medida a travs de la membrana es igual a la calculada

mediante la ecuacin de Nerst determinando para un ion determinado. En esta situacin el ion
se encuentra en equilibrio electroqumico y no habr flujo neto del mismo a travs de la
membrana.

2.- Cuando el potencial de elctrico medido es del mismo signo que el calculado por la ecuacin
de Nerst para un ion determinado, pero de mayor valor, la fuerza elctrica es superior causada
por el gradiente de concentracin, por lo que habr movimiento neto de dicho ion en la direccin
determinada por la fuerza elctrica.

3.- Cuando la diferencia de potencial elctrico medida es del mismo signo, pero de menor
cuantidad, que la calculada por la ecuacin de Nerst , la fuerza debida al gradiente de
concentracin es superior a la elctrica, y el movimiento neto de ion tiende a producirse en la
direccin determinada por la diferencia de concentracin.

4.- Cuando la diferencia de potencial elctrico medida es de signo opuesto al predicho por la
ecuacin de Nerst, tanto la fuerza elctrica como el gradiente de concentracin se encuentran
orientados en el mismo sentido y consiguiente el ion no se encuentra en equilibrio, por lo que
tendra a fluir en direccin determinada por ambas fuerzas.

Julius Bernstein fue el primero, en 1902, en proponer una hiptesis satisfactoria para explicar el
origen del potencial de membrana en reposo en el nervio y en las fibras musculares. Mediante
anlisis qumico determino que el interior es rico en K + y contiene poco Na+ y Cl-. Adems
comprob que en el interior de la clula hay aniones a los que la membrana en reposo no es
permeable; basndose en esos datos, Bernstein postulo la siguiente hiptesis: El voltaje de
transmembrana es consecuencia de una desigual distribucin de iones K +, como puede
predecirse mediante la ecuacin de Nerst (Martin, 2006)

Bernstein cort fibras musculares de un msculo de rana e insert un electrodo en el rea

cortada, haciendo contacto eficaz con el lquido interno de las fibras musculares, pudiendo
adems modificar el liquido externo del musculo. Al registro que obtuvo se le llamo potencial de
lesin. El potencial de lesin es el potencial desarrollado entre las partes lesionada y no
lesionada de un nervio, debido a la exposicin de la superficie interna con carga negativa de la
membrana polarizada en el lugar de la lesin. En los tejidos excitables, la lesin produce
despolarizacin en la zona lesionada (potencial de lesin), lo que origina un flujo de corriente
elctrica entre ambas zonas (corriente de lesin). En la fibra muscular esqueltica, la
despolarizacin causada por una lesin es un proceso irreversible que se propaga gradualmente
y despolariza finalmente a toda la clula. Asimismo, el potencial de lesin se aproxima al
potencial transmembranal debido a que la superficie lesionada esta casi en el potencial del
interior de la clula (Rothstein et al., 2005).

Para la determinacin del potencial de lesin, se utiliza musculo gastrocnemio de rana, por su
funcin en la transmisin de impulsos nerviosos para la contraccin del mismo.

Los potenciales de electrodo se definen como potenciales de celda para una celda que consiste
en el electrodo en cuestin que acta como ctodo y el electrodo estndar de hidrogeno que lo
hace como nodo, el potencial de electrodo es de hecho el potencial de una celda electroqumica
que implica un electrodo de referencia cuidadosamente definido. (Wilches, 2007).
La ecuacin de Goldman-Hodkin-Katz predice el potencial de membrana para mltiples iones.
Esta se utiliza para calcular el potencial de membrana en reposo resultante de la contribucin de
todos los iones que pueden atravesar la membrana: Esta ecuacin incluye los valores de
permeabilidad de la membrana porque la permeabilidad de un ion influye en su contribucin al
potencial de membrana. Si la membrana en impermeable a un ion, ese ion no afectara el
potencial de membrana.

La contribucin de cada ion al potencial de membrana es proporcional a su capacidad para

atravesar la membrana. La ecuacin de Goldman-Hodking-Katz:

Em=Potencial de membrana en reposo.

R= Constante de los gases
T=Temperatura absoluta
F=Constante de Faraday
P= Permeabilidad relativa de la membrana al ion indicado con el subndice.
[ion in], [ion out] = Concentraciones del ion dentro y fuera de la clula.

Esta ecuacin se puede simplificar en estas palabras: el potencial de membrana en reposo est
determinado por las contribuciones combinadas del producto (gradiente de concentracin) x
(permeabilidad de la membrana) para cada ion. Si la membrana no es permeable aun ion el
trmino de permeabilidad de este ion ser cero y el ion abandonara la ecuacin.
La ecuacin de Goldman predice los potenciales de membrana sobre la base de concentraciones
inicas y permeabilidades de membrana dadas y explica porque la ligera permeabilidad de la
clula al Na+ hace que el potencial de membrana en reposo sea ms positivo que el E
determinado con la ecuacin de Nerst. La ecuacin de Goldman tambin se puede utilizar para
predecir lo que sucede con el potencial de membrana cuando cambian las concentraciones
inicas o las permeabilidades de las membranas. (Silverthorn, 2009)

Para obtener el potencial de difusin se utiliza la cascara de huevo que posee dos membranas:
externa e interna. La membrana interna es de menor grosor que la externa (22mm), ya que su
composicin es de fibras proteicas ms finas y de superficie homognea y lisa teniendo cierta
permeabilidad.
Se utilizo la membrana testcea interna de huevo ya que esta es altamente permeable al ion
potasio; en esta se llevo a cabo un potencial de difusin generado a travs de la membrana
cuando un ion se difunde debido al gradiente de concentracin.

OBJETIVOS
- Demostrar que la difusin de un electrolito a travs de una membrana artificial con
permeabilidad selectiva genera una diferencia de potencial (Potencial de difusin)
- Determinar el potencial de lesin de un musculo esqueltico de rana y establecer si existe
una relacin entre la diferencia de potencial obtenida con las diferentes concentraciones
de potasio y el predicho por la ecuacin de Nernst.

FUNDAMENTOS
Se utilizo la membrana testcea interna de huevo ya que es permeable al ion potasio. Donde se
lleva a cabo un potencial de difusin generado a travs de la membrana cuando un soluto con
carga (ion) difunde debido al gradiente de concentracin, es decir se debe a la difusin de los
iones y slo puede generarse por que la membrana testcea de huevo es permeable a ese ion.

Se utilizo el nervio citico de rana debido a que se hacen estudios en clulas musculares o
nerviosas, y estas clulas muestran una notable especializacin para este tipo de actividades.
Tambin, la rana suele utilizarse por la facilidad de disponer de estos animales, asi como por
presentar muchos aspectos de su anatoma interna claramente visibles.

Se utilizo KCl y KSO ya que tanto el ion Cl- como el SO-- son impermeables a las membranas
del huevo y del musculo gastrocnemio respectivamente.

DESARROLLO

Metodologa

Resultados

Concentra Concentra Potencial Potencial

Relacin Log de
cin de cin de del ion K+ del ion K+
C ext/C int
K+ K+ terico experimen C ext/C int
intracelula extracelul (mV) tal (mV)
r (mM) ar (mM)

400 1 -153.41 -174.4

400 2.5 -129.95 -159.7

Probar que sucede con la lectura del Repetir elsolucin
paso anterior con KSO
multimetro si se levanta el cascaron Sustituir por solucin
solucinyde
0.025M KSO
leer en ordende
la diferencia
de la solucin. creciente de concentraciones.
potencial.
400 5 -111.22 -128.1

400 10 -94.45 -119.7

400 20 -76.70 -113.7

400 50 -53.24 -88.7

400 100 -35.49 -76.2

400 400 0
1 0

Tabla 1.-Efecto de las concentraciones milimolares (mM) del cloruro de

potasio (KCl) sobre la diferencia de potencial generada (potencial de
difusin) en un huevo de gallina, se observan valores tericos y
experimentales de la diferencia de potencial (E) en milivolts (mV).

POTENCIAL DE DIFUSION
0
1 2.5 5 10 20 50 100 400
-50
POTENCIAL DE DIFUSION

Ek (mV) -100 Potencial de difusion

experimental

-150

-200
[K+]

Figura 1. Efecto de las concentraciones milimolares (mM) del cloruro de potasio (KCl) sobre la
diferencia de potencial generada (potencial de difusin) en un huevo de gallina. En el eje X se
tiene la concentracin de K+ extracelular (mM), en el eje Y la diferencia de potenciales en
milivolts de color azul datos tericos y en color rojo datos experimentales.

Concentra Concentra Poten Potencial

Relacin Log de
cin de cin de cial del ion
C ext/C int
K+ K+ del ion K+ C ext/C int
intracelul extracelul K+ experime
ar (mM) ar (mM) teric ntal (mV)
o (mV)
123 10 -64.26 -83.5

123 20 -46.51 -74.5

123 50 -23.04 -41.8

123 100 -5.30 -41.7

123 200 12.44 -31.4

123 Ringer188

Tabla 2. - Efecto de las concentraciones milimolares (mM) de sulfato de potasio (KSO) sobre la
diferencia de potencial generada (potencial de lesin) en musculo gastrocnemio de rana.

Potencial de lesin
20

0
10 20 50 100 200
-20 POTENCIAL DE LESION
TEORICO
Ek+ (mV) -40 POTENCIAL DE LESION
EXPERIMENTAL
-60

-80

-100
[K] LEC

Figura 2. Efecto de las concentraciones milimolares (mM) del sulfato de potasio (K2SO4) sobre la
diferencia de potencial generada (potencial de lesin) en musculo gastrocnemio de rana. (E)
representa la diferencia de potencial de membrana en milivolts.

DISCUSIN
El potencial de difusin, debido a la composicin de la membrana del huevo, al ser sumamente
permeable al ion K+, genera una difusin a favor de su gradiente de concentracin, esto se
debe a que el ion K+ esta presente en gran concentracin dentro de la clula y tiende a
difundirse al exterior generando un equilibrio qumico, esto se puede observar terico y
experimentalmente ya que la concentracin extracelular se vuelve menos negativa por el ligero
exceso de K+ y la intracelular se vuelve ms negativa por la ligera deficiencia del K+.

La difusin de los iones K+ fuera de la membrana del huevo origina una diferencia de potencial
elctrico, positiva afuera y negativa dentro. Mientras ms K+ se difunda a favor de su gradiente
de concentracin mayor ser la diferencia de potencial, a concentraciones milimolares pequeas
de KCl extraceluar se genera mayor diferencia de potencial ya que se alcanzara ms rpido el
equilibrio disminuyendo la diferencia de potencial.

Sin embargo llegara un punto cuando la diferencia de potencial ser 0 la fuerza elctrica que
arrastra al K+ al interior de la clula es igual a la fuerza qumica que arrastra los iones de K+
fuera de la clula y este potencial recibe el nombre de potencial de equilibrio y este equilibrio se
calcula mediante la ecuacin de Nerst. En la figura 2 se observa el efecto de las concentraciones
extracelular e intracelular sobre la diferencia de potencial, al comparar los resultados tericos
con los prcticos se observa que difieren mayormente en el dato 5, y al observar la ecuacin de
la recta difieren mucho, esto lo podemos a atribuir que al hacer el experimento no se contaba
con la misma temperatura ya que nos encontrbamos aproximadamente a 24 C este factor
afectara directamente a la pendiente de la recta, tambin otro factor influye a la pendiente es
que la permeabilidad del huevo no es infinita. En la ordenada tambin se observa una gran
diferencia los factores que pueden influir en esta son que el huevo a pesar de enjuagarlo muy
bien quedan protenas cargadas en la membrana, estas cargas afectan directamente la
diferencia de potencial, otro factor influyente es el potencial de electrodo.

En el potencial de lesin al musculo gastrocnemio de rana, contiene iones K+, Na+ y Cl- en su
interior por la solucin de LIC estos contribuirn al potencial de membrana pero en cuanto mayor
es la concentracin de una clase de ion en particular y mayor la permeabilidad de la membrana
a este ion tanto mayor es su importancia en la determinacin del potencial en este caso es al ion
K+.

Utilizamos soluciones extracelulares de K 2SO4 y el ion SO42- es un anin prcticamente

impermeable, solo se considera la concentracin del K+ extracelular, sin embargo, al utilizar la
solucin de Ringer extracelular la cual contiene iones K+, Na+ y Cl-el potencial no puede
considerarse solo al ion K+ y esto se obtiene por la ecuacin de Goldman. Sin embargo, al tener
solo concentraciones del ion K+ extracelulares, y la membrana es ms permeable a este que a
los otros iones podra decirse que bajo estas condiciones se espera obtener el potencial de
membrana en reposo.

En la grafica podemos observar que los valores experimentales y los valores tericos difieren
esto se puede atribuir a la temperatura ya que no se trabajo a la temperatura absoluta, que el
musculo gastrocnemio contiene clulas de tejido conectivo, vasos sanguneos y nervios, si al
manipular el musculo lo rompemos puede quedar expuesto el LIC y el LEC combinndose ambos
estos factores afectaran directamente el potencial de lesin y con esto la pendiente de nuestra
grafica.

Conclusiones

- Determinamos el efecto del cambio de gradiente de concentracin del ion [K+] sobre el
potencial de difusin de la membrana testcea de huevo de gallina.
- Comprobamos que la membrana testcea tiene una permeabilidad selectiva al ion K+.
- Observamos que entre mayor sea la concentracin extracelular del ion K+ de la
membrana testcea, la diferencia de potencial se har menos negativa hasta que el ion
K+ llegue a su potencial de equilibrio.
- Determinamos el efecto del cambio del gradiente de concentracin el ion [K+] sobre el
potencial de lesin del musculo gastrocnemio de rana.
- Comprobamos que la membrana del musculo gastrocnemio de rana permeabilidad al los
iones K+.
 - La diferencia de potencial de la membrana interna y externa del musculo gastrocnemio de
rana por su potencial de lesin predice el potencial de membrana para mltiples iones que
atraviesan la membrana.

Bibliografa

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Fisiologa humana 4 edicion editoria medica panamericana Espaa 2009 Silverthorn Dee
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Tratado de nutricin composicin y calidad de los alimenos angel gil 2010 2 edicion
editorial panamericana espaa