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Grupo 3 Turno P1
Introduo
Materiais e Mtodos
A realizao do trabalho experimental teve como base o protocolo laboratorial fornecido pelo
docente [8], com ligeiras modificaes: ao ser adicionado TRIzol, a agitao dos tubos foi acompanhada da
abertura dos eppendorfs de forma a libertar a presso exercida pela volatilizao do fenol, dada a sua
elevada volatilidade (passos 1 e 2); ambos os processos de centrifugao tiveram uma durao de 10
minutos cada (passos 4 e 7); o pellet contendo RNA foi dissolvido em 1 mL de gua previamente tratada com
DEPC (passo 9); ao preparar a soluo para a electroforese (gel de agarose 2%, 70V, 1h) foram utilizados 10
L de RNA e 3 L de tampo de carregamento/loading buffer; para a espectofotometria de UV procedeu-se
a uma diluio de 1/100 da soluo de RNA, com volume final de 750 L.
Tabela 1 Valores de
Resultados absorvncia da amostra
de RNA a determinados
comprimentos de onda
(diluio 1:100).
Abs
(nm) Abs
Corrigida
320 0.021 0
Grupo 3 Turno P1
Discusso e Concluso
Bibliografia:
[1] - Chomczynski, P. 1992. Solubilization in formamide protects RNA from degradation. Nucleic Acids Res. 20: 3791-
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[2] - Chomczynski, P., Sacchi, N. 1987. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-
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[3] - Chomczynski, P., Sacchi, N. 2006. The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-
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[4] - Hummon, A. B. et al. 2007. Isolation and solubilization of proteins after TRIzol extraction of RNA and DNA from
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[5] - Pinto, F.L. et al. 2009. Analysis of current and alternative phenol based RNA extraction methodologies for
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[7] - Vomelov, I. et al. 2009. Methods of RNA Purification. All Ways (Should) Lead to Rome. Folio Biol. 55: 243-251.
[8] Protocolo de Gentica Molecular A. 2011. Extraco de RNA (Mtodo do isotiocianato de guanidina). FCT UNL.