4.

Signalna transdukcija II
Doli smo do receptora spregnutih sa proteinom G koji predstavljaju veoma
heterogenu familiju receptora, ima ih oko 800 i zauzimaju kod oveka 4%
genoma i ono to je interesantno je da receptor koji je spregnut sa proteinom
G je ukljuen u transdukciju sa hemoreceptora i fotoreceptora (transducin).
Tu se ubrajaju i orphan receptori-receptori za koje jo uvek nije poznat
odgovarajui ligand. Ligandi za receptore spregnute sa G proteinom su
raznovrsni: hormoni, neurotransmiteri, odoranti, tastanti, feromoni,
vazoaktivni peptidi, amini, peptidi, AK, masne kiseline, nukleotidi...

Kako izgledaju ovi receptori? Imaju dugaak N-kraj u vanelijskom domenu,

petlje koje se nalaze u vanelijskom domenu, kao i u unutarelijskom
domenu, i C-kraj koji se nalazi u unutarelijskom domenu.

Kada govorimo o ligandima koji se vezuju za ove receptore, tu postoji vie

klasa:

Klasa A: kateholamini, holecistokinin....

Klasa B: glukagon, sekretin, CRH, VIP...

Klasa C: metabotropni (glutamat, tastanti, GABA...)

Klasa F: glatki (hedgehog signalni put)

1
Klasa A ovih liganda se vezuje za transmembranski deo receptora, ligandi
klase B se vezuju za petlje u vanelijskom domenu, a ligandi klase C se
vezuju za N-kraj.

Petlje u unutarelijskom domenu slue za vezivanje G proteina, najvanija je

prva petlja do C kraja.

Protein G je lan superfamilije GTP-vezujuih proteina, koja ukljuuje klasine

heterotrimere, ali i male proteine kao to je Ras. Za sve ove proteine je
karakteristino da kada imaju za sebe vezan GDP, oni su neaktivni, a kada
je vezan GTP oni su aktivni.

Kada je re o klasinim heterotrimernim proteinima oni imaju , i

subjedinicu. subjedinica je ta koja vezuje GTP, ona ga hidrolizuje, ali i
interaguje sa efektorima kao sto je npr. PLC ili AC. Znai u najveem broju
sluajeva subjedinica je ta koja je odgovorna za prenos signala sa receptora
zato to ona interaguje sa efektorom. Do skora se mislilo da i subjedinice
imaju ulogu samo u ukotvljavanju proteina G u membranu, meutim ove dve
subjedinice takoe imaju ulogu u transdukciji signala. Postoji veliki broj
izoformi ovih subjedinica. Sve te izoforme su razliito distribuirane, u razliite
tipove elija i interaguju sa razliitim proteinima.

s subjedinica pokree tzv. Put na A tj aktivira AC koja dovodi do stvaranja

cAMP-a koji aktivira PKA. Ovo je vrlo est put.

olf subjedinca (olf=olfaktorno) se aktivira vezivanjem odoranta za svoj

receptor na elijama mirisnog epitela i takoe ova subjedinica aktivira AC, tj
Put na A.

q subjedinica aktivira PLC tj Put na C.

t subjedinica aktivira fosfodiesterazu.

Za otkrie proteina G i signalne transdukcije preko proteina G, Gilman i

Rodbell su 1994. dobili Nobelovu nagradu za medicinu.

Proteini G obuhvataju i male GTP vezujue proteine, to je takoe velika

familija malih GTP vezujuih proteina u koje spadaju Ras, Rho, Rab,
Sar1/Arf i Ran, koji funkcioniu kao biotajmeri elije i reguliu spektar
funkcija (poetak, kraj, trajanje...)

Ras ekspresiju gena,

Rhoreorganizaciju citoskeleta,

2
Rab i Sar1/Arf transport vezikula,

Ran reorganizaciju mikrotubula.

Ovi proteini su takoe neaktivni kada je za njih vezan GDP, da bi se aktivirali,

GDP treba da se zameni GTP-om, a za to im treba pomo i tu pomo im daju
dva proteina- GEF (guanine nucleotide exchange factors) i SOS (son of
sevenless). Ovi mali GTP vezujui proteini kada veu GTP postaju aktivni, ali
oni sami po sebi imaju nisku GTP-aznu aktivniost tj ne mogu da hidrolizuju
GTP pa im i za to treba pomo, a tu pomo im pruaju dva proteina GAP
(engl.GTPase-activating protein) i neurofibromin (GAP je protein koji aktivira
GTP-aznu aktivnost).

3
Sada da vidimo u kom signalnom putu uestvuju mali GTP vezujui proteini. U
pitanju je MAP kinazni signalni put. Kada se ligand (faktori rasta, insulin)
vee za svoj receptor (RTK-receptor sa tirozin kinaznom aktivnou), dolazi do
unakrsne fosforilacije tirozin kinaznih ostataka (dimerizacije RTK) i tako
aktiviran receptor moe da fosforilie nizvodno supstrate kao sto je IRS ili
moze sam da predstavlja mesto za pristajanje proteina koji imaju SH2 i SH3
domene. Takav jedan protein je GRB-growth factor receptor bound protein,
protein koji se vezuje za receptore faktora rasta. Sada kada se GRB preko
SH2 domena vezao za fosfotirozine moe da regrutuje SOS preko svog SH3

4
domena. SOS aktivira mali GTP vezujui protein tako to menja GDP za GTP i
SOS e aktivirati Ras koji moze da regrutuje Raf koji je u stvari kinaza
kinaze MAP kinaze. Raf se ubacuje u membranu, on je serin-treonin kinaza
i on e sad da fosforilie serinske ili treoninske ostatke kinaze MAP kinaze i da
je aktivira. Kinaza MAP kinaze se naziva MEK, fosforilisana MEK fosforilie
MAP kinazu ili MAP ili ERK. Sada je MAP kinaza aktivirana i ona sad moe
da fosforilie razliite proteine i da ostvaruje negenomske efekte, tj. da
ispoljava svoje dejstvo u citosolu ili na membrani, a isto tako moe da ue u
jedro i ispolji genomske efekte, tj. da fosforilie transkripcione faktore i da
omogui transkripciju ciljnih gena.

Ovo su bili mali GTP vezujui proteini, a sad se vraamo na klasine

heterotrimerne G proteine i sad emo da vidimo ta sve subjedinica moze
da radi i kakve sve signalne puteve pokree u eliji. subjedinica G proteina
moe da bude i inhibitorna i i stimulatorna s, tj. moe da inhibira ili
stimulie AC, zatim subjedinica moe da bude t i da aktivira
fosfodiesterazu, a q subjedinica e da aktivira PLC. Signalni glasnici su
razliiti: cAMP, cGMP, IP3 i DAG.

5
Sledei signalni put koji pominjemo je Hedgehog signalni put. Prvi put je
otkriven kod drozofile kod koje poremeaj ove signalizacije dovodi do
stvaranja embriona koji lie na jeie i otuda ovo ime. Kada govorimo o
sisarskim elijama one stvaraju Hedgehog ligand. Kako se aktivira HH
signalni put? Jedna elija e da sintetie HH ligand. Samo N-kraj HH liganda
predstavlja receptor za protein na drugoj eliji, dok C-kraj omoguava

6
autokatalizaciju tj isecanje N-kraja. N-kraj HH liganda e da difunduje i da se
vee za svoj receptor na drugoj eliji koja eksprimira 2 receptora, jedan je
PTC koji inhibira drugi receptor koji se naziva SMO (smooth-gladak), SMO
receptor je spregnut sa G proteinom. Kada se HH ligand veze za PTC otklanja
se inhibicija i poto je za PTC vezana i subjedinica ona e sad inhibirati AC.
Posto je ceo put na A inhibiran jer je aktivna i subjedinica, dolazi do
razgradnje HH signalnog kompleksa koji je vezan za mikrotubule
(transkripcioni faktor-CI-cubitus interruptus, je u komplesku sa proteinima
mikrotubula i kada nije aktivna AC ovaj kompleks se raspada). CI se
prebacuje u jedro i aktivira transkripciju.

Kada nema liganda, tada PTC inhibira SMO sto znai da i subjedinica vie
nije aktivna i ona ne inhibira AC pa je samim tim AC aktivna. Doi e do
aktivacije PKA koja e dovesti do isecanja CI i taj manji iseeni deo ulazi u
jedro i vri represiju transkripcije ciljnih gena. Ciljni geni su geni koji utiu na
rast i morfogenezu, pa ako se na bilo kom nivou poremeti ova signalizacija
tada nastaju malformacije kao to su: fuzija plunih krila, hipoplazija i stenoza
jednjaka, CNS malformacije, ciklopija, rascepljeno nepce, sindaktilija,
polidaktilija, karcinomi koe i CNS-a.

7
Preko subjedinice i kolera toksin ispoljava svoje dejstvo. Ovaj toksin
stvara bakterija, sastoji se iz i subjedinica, subjedinice su neophodne da
bi toksin uao u organizam tj da bi uao u enterocitu. Ovaj toksin se vezuje za
svoj receptor i endocitozom biva uvuen u eliju, gde se raspada na i
subjedinice, a subjedinica toksina je ta koja utie na G protein i to tzv. ADP
ribozilacijom tj dodavanjem ADP riboze na s subjedinicu i na taj nain je
blokira sa vezanim GTP-om sto znai da je ona aktivna ali blokirana, sto znai
da e da aktivira velike koliine AC, koje e da stvaraju velike koliine cAMP-a
idt. Ovo je vano zato to velike koliine cAMP-a i AC dovode do otvaranja
CFTR-a, to je ABC protein koji je u stvari kanal za Cl- sto znai da velike
koliine hlora izlaze iz enterocita, a Cl- uvek prate Na+ i H2O i eto glavnog
simptoma- dijareje. Dijareja se lei enkefalinima, to su endogeni opioidi koji
se vezuju za svoje receptore koji imaju i subjedincu i ova subjedinica e da
inhibira AC sto znai da nema stvaranja cAMP-a i otvaranja CFTR-a. Na slian
nain pertussis toksin deluje.

8
2. RECEPTORI SPREGNUTI SA PROTEINOM G PREKO cAMP-a

Kada govorimo o s subjedinici i cAMP-u kao sekundarnom glasniku, da

pomenemo da se na taj nain ACTH vezuje za svoje elije u kori nadbubrega
i dovodi do luenja glukokortikoida. Preko ovog signalnog puta antidiuretiki
hormon se vezuje za svoje receptore u distalnim tubulocitima i omoguava
zadravanje H2O (tako to poveava ekspresiju akvaporina i ubacuje ih u
membranu). Sekretin se vezuje za svoje ciljne elije (epitelne elije
pankreasnih kanalia) i omoguava stvaranje bazne komponente
pankreasnog soka. Ovim putem noradrenalin ispoljava pozitivno inotropno
dejstvo.

AC stvara cAMP koji se vezuje za regulatorne subjedinice PKA i katalitika

subjedinica stie enzimsku aktivnost i fosforilie serinske i treoninske ostatke
supstrata.

Za otkrie cAMP-a kao sekundarnog glasnika Saderlend je dobio Nobelovu

nagradu.

9
Uloga cAMP u fosforilaciji proteina je prvi put pokazana u katabolizmu
glikogena u skeletnim miiima. Adrenalin se vezuje za adrenalinski
receptor spregnut sa proteinom G, pa s subjedinica dovodi do aktivacije AC
koja stvara cAMP, a on e da aktivira PKA, a ona e da fosforilie serinske i
treoninske ostatke kinaze glikogen fosforilaze i na taj nain se ona aktivira i
fosforilie glikogen fosforilazu koja vri glikogenolizu. Ona takoe inaktivira
glikogenezu tako sto fosforilie glikogen sintazu i tako elija ne moe da
pokrene ova dva procesa u isto vreme. Ovo je tipian primer puta na A,
prvootkriveni, i na taj nain adrenalin ili glukagon aktiviraju glikogenolizu.

10
Rekli smo da signalizacija moe da ima genomske ili negenomske efekte,
pomenuli smo MAP kinazu koja moe da ue u jedro, isto tako katalitika
subjedinica PKA moe da ue u jedro i da ostvari genomske efekte (ADH
povecava ekspresiju akvaporina na taj nain). Katalitika subjedinica PKA e u
jedru fosforilisati CREB ( protein koji se vezuje za CRE sekvence u okviru
promotora, a CRE sekvence su cAMP response elements). Kada se CREB
fosforilie da bi se pokrenula transkripcija mora da se regrutuje jo jedan
protein koji se naziva CBP ( CREB vezujuci protein) i tek sad se pokree

11
transkripciona mainerija. Tako se pokree transkripcija ciljnih gena za
akvaporine u distalnim tubulocitima nefrona i to je primer kako PKA ostvaruje
i genomske efekte.

Receptorska desenzitizacija

Kad se adrenalin vee za svoje adrenalinske receptore preko puta na A i

PKA, fosforilisae ciljne proteine, a PKA moe da fosforilie i unutarelijski
regulatorni molekul koji e da kontrolie da se ovaj adrenalinski receptor ne
stimulie predugo. Taj se protein naziva BARK (BARkinaza). Znai, adrenalin
preko PKA dovodi do fosforilacije BARK-a. Taj BARK e sada da se ubaci u

12
 membranu, da se priblizi adrenalinskom receptoru da ga fosforilie i na taj
nain sprei njegovu prekomernu aktivaciju. To je proces koji se naziva
receptorska desenzitizacija, znai smanjuje se osetljivost receptora na
adrenalin. Tako elija sama kontrolie aktivaciju svog receptora. Drugi nain
na koji moe receptor da se inaktivira je kad se za njega vee arestin. On se
vee za sekvence za koje se vezuje protein G i omoguava internalizaciju
receptora tj receptor se ubacuje u eliju.

adrenalinski receptor (BAR)

adrenalin

Arestin 2 se vezuje za
BAR na mestu
vezivanja proteina G i s AC

Arestin 2

Arestin 2 se vezuje za

cAM

BARK se translocira

BARK

PKA

13
Odoranti se vezuju za svoje receptore spregnute sa proteinom G i olf
subjedinica e da aktvira put na A i nastali cAMP e da aktivira CNG kanale
koji nemaju voltazni senzor ( HCN kanali ga imaju). Kad se otvore ovi
kanali pomou cAMP-a, to su neselektivni Ca2+ kanali, ulazi Na+ i dolazi do
depolarizacije.

depolarizacij
a

RECEPTORI SPREGNUTI SA PROTEINOM G PREKO cGMP-a

Opsin je spregnut sa transducinom, t subjedinica transducina aktivira

fosfodiesterazu koja e da smanji koliinu cGMP-a to znai da e ovi CNG
kanali da se zatvore i dolazi do hiperpolarizacije.

14
RECEPTORI SPREGNUTI SA PROTEINOM G PREKO IP3 I DAG

Drugi nain prenosa signalizacije je preko puta na C tj preko IP3 i DAG-a. U

pitanju je receptor spregnut sa proteinom G, meutim ovaj protein ima q
subjedinicu koja aktivira PLC koja e da razlae PIP2 na IP3 i DAG. DAG
ostaje u membrani. IP3 aktivira IP3 zavisni kanal za Ca2+ koji se nalazi na
endoplazminom retikulumu kroz koji unutarelijski Ca2+ izlazi u citosol i
uestvuje u egzocitozi ili kontrakciji. Ca2+ ispoljava ova dejstva tako to se
vezuje za kalmodulin (4 Ca2+ + kalmodulin = Ca2+-kalmodulin ). Ca2+-
kalmodulin e sad da aktivira npr. kinazu lakog lanca miozina (MLCK) i to
je kalmodulin zavisna protein kinaza lakog lanca miozina. Aktivirana MLCK
omoguava kontrakciju. Ca2+ nikako ne sme u eiiji da bude povien, znai
im ispolji svoju funkciju mora da se vrati u ravnoteu, SERCA ga vraa u ER,
a PMCA ga izbacuje iz elije.

15
16
 SERCA pumpa

DAG je ostao u membrani. Ca2+ koga je oslobodio IP3 osim to se vezuje za

kalmodulin omoguava translokaciju PKC u membranu. Na nju sad moe da
deluje DAG i da je aktivira. PKC je serin/treonin kinaza zavisna od Ca+ koja
moe da pokrene MAP kinazni put, da otvori jonske kanale, da ima genomske
efekte... Svi vazokonstriktori deluju preko ovog puta.

17
RECEPTORI SPREGNUTI SA PROTEINOM G PREKO EIKOZANOIDA

Zavrili smo cAMP, cGMP, IP3 i DAG. Sekundarni glasnici takoe mogu da
budu i eikozanoidi. Arahidonska kiselina vodi poreko od fosfolipida. Kada
se neki ligand npr.serotonin vee za svoj receptor spregnut sa proteinom G,
aktivira se PLA2 koja dovodi do isecanja membranskih fosfolipida i sad
nastaje arahidonska kiselina, koju tri vrste enzima prevode u eikozanoide, to
su signalni molekuli koji sadrze 20 C-atoma. To su tromboksani,
prostaciklini i prostaglandini, ako su ciklooksigenaze te koje prevode
arahidonsku kiselinu. Ukoliko su lipooksigenaze te koje prevode arahidonsku
kiselinu, onda su to leukotrieni. Ukoliko su epoksigenaze onda su to HETE
molekuli. To su vazoaktivni molekuli koji imaju ulogu u irenju krvnih sudova,
agregaciji trombocita, alergijskim reakcijama.

18
Kada se serotonin vee za svoje receptore i preko PLA2 dovede do isecanja
arahidonske kiseline, to je direktan put nastanka ove kiseline, a arahidonska
kiselina moe da nastane indirektno kada serotonin preko drugog receptora
aktivira put na C, pa PLC razgrauje PIP2 na IP3 i DAG, zatim na DAG e da
deluje DAG lipaza koja e da dovede do nastanka monoacil glicerola i
arahidonske kiseline i to je indirektan put nastanka ove kiseline.

Prostaglandin E i aspirin. Aspirin inaktivira ciklooksigenazu i inhibira

nastanak prostaglandina E, koji podiu badarenu taku u hipotalamusu i
aktiviraju nae miie da drhte i stvaraju toplotu, tako se podie temperatura.
Takoe ne nastaju tromboksani koji omoguavaju stvaranje trombocita i
njihovu agregaciju. Aspirin se daje za sniavanje temperature i spreavanje
infarkta.

19
 SIGNALIZACIJA

subjedinica ima irok spektar dejstava u eliji. Jedan od procesa u kojima

uestvuje subjedinica je endocitiza posredovana kalveolinom. Na taj
nain npr. moe albumin da se prenosi sa jedne strane elije na drugu. Da bi
albumin uao u eliju procesom endocitoze on se vezuje za svoj receptor
GPCR (G proteinom spregnut receptor) i sad subj aktivira cSRC koji e da
fosforilie protein dinamin i aktivira ga. Dinamin je GTP-aza koja omoguava
da se vrat prekine i da cela ova vezikula bude ubaena u proces endocitoze.
Fosforilacija dinamina dovodi do toga da se on pribliava kalveolinu,
omoguava fisiju vrata i albumin se sad ubacuje u eliju endocitozom.

Prva uloga subjedinice je endocitoza a druga je aktivacija MAP

kinaznog puta. subjedinica preko adapternog SHC proteina aktivira
MAP kinazni put.

subjedinica uestvuje i u metabolizmu fosfoinozitida i moe da pokrene

put na C. subjedinica aktivira BTK (Brutanovu kinazu) koja fosforilie PLC,
koja prevodi PIP2 u IP3 i DAG. subjedinica moe direktno da aktivira PLC
koja prevodi PIP2 u IP3 i DAG.

20
Ako subjedinica aktivira PI3K, PI3K e prevesti PIP2 u PIP3 (mTor put), PIP3
omoguava da se poveu PKB i Akt koji se aktivira i fosforilie mTor i dolazi do
proliferacije.

subjedinica moe da aktivira ACII i pokrene put na A.

moe da otvori Girk (kanal za K+ za inverznom retifikacijom, otvara ga

ACH kad se vee za svoje muskarinske receptore koji su spregnuti sa
proteinom G, kad se otvori ovaj kanal K+ izlazi).

Jonotropni receptori ili ligand zavisni jonski kanali.

21
To su receptori za neurotransmitere kao sto su Ach, serotonin, GABA, glicin.
Tu spada i receptor za IP3 tj IP3 kanal za Ca.

22