LABORATORIO

DE
BIORREACTORES
IEB-448

Mayo 2017
INTRODUCCIN

La eciencia de un bioproceso depende del adecuado

diseo del reactor y de su operacin
Diseo y evaluacin del comportamiento de un
Reactor EnzimNco

Modelo Cintico Balance Materia

V = f(E, X)

Modelo de Restricciones
inactivacin Difusionales
E = f(t, T) = f(So, )

Modelo de Comportamiento
k * E = f(Si,X)
F*K
 Diseo bsico de Reactores EnzimNcos

Reactores Ideales
1 Modelo de ujo:
Flujo Pistn
Mezcla Completa

2 Isotermos


3 Para Enzimas Inmovilizadas:
No hay restricciones difusionales
No hay efectos de parNcin.

4 No existe perdida de ac<vidad catal<ca
 Parmetros de operacin

Tiempo de residencia = t (RLTA)

Carga enzim<ca (E, en UI) (e, en UI/L3)

Grado de conversin x = (S0 S)/S0

Produc<vidad QP = S0x/

 Reactor por Lote tanque agitado (RLTA)

0
= ln(1 )

Ecuacin de diseo
Permite calcular el volumen de
reaccin (VR) a par<r de E, X y S0.
Ecuacin de operacin
Permite establecer para una
determinada carga enzim<ca,
la relacin X vs t a dis<ntos S0.
Comportamiento de un reactor por lotes tanque agitado
con una CinNca de MichaelisMenten
 OpNmizacin de reactores enzimNcos

La op<mizacin de reactores enzim<cos es

una tarea compleja ya que existen muchas
variables involucradas, frecuentemente en
situacin de compromiso.
 OpNmizacin de reactores enzimNcos

Situaciones de compromiso:

Una elevada temperatura aumenta la reac<vidad, PERO,

disminuye la estabilidad del catalizador.
Un elevado <empo de reaccin produce una mayor conversin,
PERO, disminuye la produc<vidad.

La produc<vidad es un parmetro de ingeniera de

gran signicacin, ya que representa la canNdad de
producto producido por unidad de Nempo y unidad de
volumen de reaccin.
 ACTIVIDADES A DESARROLLAR

1. Poner en marcha el reactor y operarlo en modalidad por
lotes.

2. Estudiar el comportamiento cinNco de la enzima

Biolactasa NT en el reactor, determinando el grado de
conversin de la lactosa en funcin del Nempo de
operacin del reactor.

3. Entregar los resultados obtenidos al nal de la experiencia.

Metodologa experimental

A) Puesta en marcha del reactor

1. Instalar el reactor de acuerdo al esquema de la Figura 1
2. Vericar las conexiones de las mangueras y el estado de los sellos.
3. Evaluar la potencia de agitacin.
4. Instalar y calibrar el electrodo de pH.
5. Poner en marcha el sistema de calefaccin, etc.

pH
T

Figura 1. Esquema de instalacin del reactor

 Metodologa experimental

B) Hidrolisis enzimtica de lactosa

Antes de comenzar la experiencia los alumnos debern calcular la cantidad de

enzima ha adicionar al reactor de tal forma que se alcance un grado de
conversin de 99% en dos horas de operacin.

Procedimiento

1. Adicionar al reactor 2 litros de lactosa (100 mM) preparada en tampn

citrato-fosfato 100 mM pH 6.0.
2. Tomar una muestra para determinar la concentracin de lactosa y glucosa
inicial (tiempo cero).
3. Poner en marcha el sistema de agitacin y calentamiento (35C o 45C
segn corresponda).
4. Esperar que el sistema de reaccin alcance la temperatura deseada y
adicionar la enzima.
5. Cada 10 minutos sacar muestras de 1 ml, inactivar y determinar el grado de
hidrlisis de la lactosa.
6. Detener la reaccin cuando se alcance un 99% de hidrlisis.
Consideraciones importantes:

Para los calculos considere Km: 20 g/L, kcat:1 y Actividad enzimtica

volumtrica: 2500 UI/mL.

El grado de conversin (moles de glucosa/moles de lactosa) se determina a

cada tiempo por lo que durante la experiencia debern ir graficando el
grado de conversin en funcin del tiempo obtenido experimentalmente,
para llevar un seguimiento del curso de la reaccin.
 Metodologa anal<ca

A) Determinacin del grado de hidrlisis de la lactosa

1. Las muestras de lactosa hidrolizada (1mL) se reciben en viales los cuales

son colocados por tres minutos en un bao con agua a 80C para detener la
reaccin.

2. Una vez fria la muestra, tomar 0.1 mL y adicionar sobre esta 1 mL del
reactivo enzimtico para determinar glucosa. OJO: Si es necesario, diluir la
muestra con agua destilada antes de realizar la determinacin de glucosa.

3. Incubar la mezcla por 10 minutos a 35C y determinar la absorbancia a

505nm.

4. Realizar un blanco utilizando agua destilada como muestra y una muestra

Standard con una solucin de glucosa de 0.1 g/L

5. La determinacin de la concentracin de glucosa en la muestra se hace a

travs de la relacin entre las absorbancias y la curva de calibrado.
B) Elaboracin curva calibrado de glucosa con el kit de Glucostat

El protocolo para la curva de calibrado es la siguiente:

1. Preparar una solucin patrn de glucosa 10 mM en tampn citrato-fosfato

100 mM pH 6,0 (B. circulans)

2. Realizar a partir de la solucin patron una serie de diluciones, para obtener

diversas concentraciones en el rango entre 0,1 y 1,6 mM

3. Tomar de cada una de las disolucines anteriores 0,1 mL, mezclar con 1 mL
del kit de Glucostat, agitar suavemente y dejar reaccionar por 10 minutos a
35C

4. Medir la absorbancia de la muestra a 505 nm

5. Determinar el coeficiente de extincin correlacionando la absorbancia con la

concentracin de glucosa mediante la ley de Lambert- Beer

6. Realizar un blanco empleando tampn citrato-fosfato 100 mM pH 6,0.