Professional Documents
Culture Documents
Astfel, rspunsul imun antigen specific este asigurat de: LB, LT i APC (antigen
presenting cells), iar rspunsul imun antigen nespecific de: MF, neutrofile, NK.
2013-2014 2
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
2013-2014 3
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Celulele fagocitare
A. NEUTROFILELE
Neutrofilele provin din mduva hematogen, din celula su comun pentru
monocite i granulocite GM-CFU. Din seria granulocitar se difereniaz neutrofilele (peste
90%), eozinofilele i bazofilele.
Neutrofilele triesc n snge sub 24h, chiar dac nu extravazeaz spre un focar
inflamator. Aproximativ jumtate din ele se deplaseaz lent, rostogolindu-se pe endoteliul
vascular.
Neutrofilele sunt celule polinucleare, cu un diametru de aproximativ 12 microni, cu
o form variabil (datorit permanentei emiteri de pseudopode). Nucleul este multilobat i
prezint granulaii citoplasmatice care conin lizozim, NADPH oxidaz, lactoferin.
Neutrofilele se mai numesc polimorfonucleare neutrofile (PMN) datorit nucleului
multilobat. Reprezint 60 - 70% din totalul leucocitelor din sngele periferic.
Neutrofilele sunt primele celule care ajung intr-un focar inflamator. Sunt celule cu
rol foarte important n imunitatea innscut (nespecific).
Neutrofilele strbat endoteliul capilar (diapedez) i se deplaseaz n esuturi
(chemotactism) pentru a ajunge la nivelul focarului imun.
2013-2014 4
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
B. MACROFAGELE
Macrofagele (MF) provin din monocite, care se gsesc n snge, n esuturi i n
cavitile naturale ale organismului. Monocitele au originea n mduva hematogen, dintr-
un precursor comun cu PMN, sub influena M-CSF i GM-CSF.
Monocitele ader de endoteliu datorit unor molecule de adeziune de pe suprafa.
Aderarea se face numai pe anumite zone ale endoteliului, situate n vecintatea unui focar
imun. Celulele APC din focarul imun, respectiv MF i celulele dendritice, elibereaz o serie
de citokine IL-1, TNF-alfa i IFN-gama care stimuleaz celulele endoteliale din
vecintate.
Sub aciunea unor citokine (IFN i IL-2) cu rol inductor produse de limfocite,
monocitele se difereniaz, transformndu-se morfologic i funcional n MF rezidente i
apoi n MF activate. MF activate sunt capabile s ndeplineasc funcia de APC. MF tisulare
au o durat de via de cteva luni, pn la civa ani.
MF sunt prezente difuz n organism, la nivelul esutului conjunctiv i n apropierea
membranei bazale a vaselor sangvine mici. Ele se afl n numr mare n zonele unde exist
un aflux important de antigene: plmni, ficat, splin i ganglionii limfatici.
Markerul membranar caracteristic pentru MF este CD14.
CELULELE NK
NK fac parte din grupul mai numeros al limfocitelor mari, numite i non-B non-T.
Limfocitele non-B non-T au morfologie de LGL (large granular lymphocytes). NK au mai
mult citoplasm dect limfocitele mici.
2013-2014 6
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
CELULELE KILLER
Celulele K sunt celule nedefinite morfologic, care au receptor de tip Fc pentru IgG
(de foarte mare afinitate) i recunosc intele mpachetate n anticorpi.
Activarea celulelor NK i K nu produce memorie imun. Nu exist diferene ntre
rspunsul imun primar i secundar. Celulele K interacioneaz cu celula int prin
intermediul receptorilor Fc. Celula tumoral tapetat cu IgG este astfel uor recunoscut
de celulele K. Ele se activeaz i lizeaz celula int.
2013-2014 7
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
D. CELULELE DENDRITICE
Celulele dendritice sunt specializate n prezentarea antigenelor. Se caracterizeaz
printr-o structur arborescent, cu un corp celular cu puin citoplasm perinuclear i
numeroase prelungiri ramificate care ptrund printre celulele din jur. Aceste pseudopode
au un aspect caracteristic care a fcut s fie comparate cu dendritele neuronilor. Datorit
lungimii lor, pseudopodele celulelor dendritice permit supravegherea unor spaii ntinse de
esut cu ajutorul unui numr relativ mic de celule.
Celulele dendritice au rol de APC pentru c pot s capteze i s prezinte antigenele.
Ele au pe suprafa principalii receptori implicai n funcia de APC: CR (receptori pentru
fragmentul C3b al complementului), FcR i pot s sintetizeze moleculele MHC II. Celulele
dendritice ndeplinesc n cadrul rspunsului imun urmtoarele funcii:
capteaz antigenele de la porile de intrare
transport antigenele spre organele limfoide secundare - ganglioni limfatici i
splin
prezint n organele limfoide secundare antigenele spre LB i LT
Pe parcursul desfurrii funciei lor imunologice, clasele de celule dendritice se
transform una n alta. Se consider n prezent c o celul dendritic i schimb
morfologia n funcie de teritoriul unde se gsete. Exista 4 tipuri principale de celule
dendritice:
celulele Langerhans
celule dendritice interstiiale
celulele dendritice foliculare
celulele dendritice limfoide
Hematopoieza
Hematopoieza este procesul prin care iau natere celulele sangvine mature,
funcionale, iniiat n viaa intrauterin i cantonat n final la nivelul mduvei osoase.
Necesit celule de origine i micromediul hematopoietic.
Celule hematopoietice (de origine) se mpart n 3 grupe: celule stem pluripotente
(CSP), celule progenitoare hematopoietice i celule hematopoietice ale seriilor sangvine.
n luna a 5-a fetal, n dou sptmni, cavitile osoase sunt populate cu celule
stromale. Celulele hematopoietice migrate din ficat traverseaz pereii vaselor sinusoidale
i formeaz parenchimul hematopoietic.
Componentele micromediului hematopoietic sunt: celulele stromale mezenchimale,
reeaua matriceal extracelular i factorii de cretere produi de celulele stromale:
Factori de stimulare ai coloniilor granulo-monocitare (GM-CSF)
Factori de stimulare ai coloniilor de macrofage (M-CSF)
2013-2014 8
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Factori de stimulare ai coloniilor granulocitare (G-CSF)
Eritropoietina, trombopoietina
Citokine: interleukinele
Micromediul din timus. Timusul este un organ limfoepitelial care are n cortex
limfocite, celule epiteliale, macrofage. Nidarea limfocitelor T se face prin atragerea n afara
vaselor de ctre 2-microglobuline i dirijarea ctre zona cu celule epiteliale. Diferenierea
i maturarea se fac n zona epitelial. Migrarea celulelor mature se realizeaz ctre zona
medular.
Migrarea celulelor stem. n viaa intrauterin migreaz din sacul vitelin n ficat,
din ficat n mduva osoas, timus splin, ganglioni limfatici. La adult CSP se gsesc n
sngele circulant i mduva osoas.
Migrarea este explicat de:
intervenia CSP n sectoarele medulare intens solicitate
cutarea de noi teritorii hematopoietice
meninerea unei rezerve de CSP n snge atunci cnd mduva este lezat
La natere singurul organ hematoformator devine mduva osoas.
n jurul vrstei de 4 ani mduva roie din diafizele oaselor lungi dispare treptat
fiind nlocuit cu celule adipoase. La 18 ani esut hematopoietic se gsete n vertebre,
stern, coaste, oasele craniene, pelvine, partea proximal a epifizelor oaselor lungi.
esutul limfatic. esutul limfatic este strns legat de formarea mduvei osoase.
Apare n plexul limfatic n sptmna a 9-a i n glandele limfatice n sptmna a 11-a. La
nivelul splinei n perioada de declin a mielopoiezei apare limfopoieza. Timusul devine
organ limfopoietic n sptmna a 9-a. Aici vin celulele stem din ficat, splin i mduva
osoas. Dup natere, esutul limfatic rmne prezent n mduva osoas, dar devine mult
mai extins n ganglionii limfatici, plcile Peyer i timus.
2013-2014 9
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Pregatirea pacientului
1. Recoltarea probelor se face cu pacientul n condiii bazale, naintea oricrei proceduri
diagnostice sau terapeutice (ideal ntre orele 7 i 9 dimineaa, n condiii jeun pe
nemncate); pentru evaluarea metabolismului lipidic se recomand ca recoltarea s se
efectueze dup 12 ore de la ultima mas.
2. Cnd probele de snge nu sunt recoltate n condiii bazale, trebuie inut seama de
efectele adiionale pe care le pot produce efortul fizic (chiar i efortul fizic moderat
poate determina o cretere a c% de glucoz, acid lactic, proteine serice, CK), precum i
a strii emoionale sau ritmului circadian care poate afecta anumii parametri.
3. Pacientul st ntr-o poziie comod (n poziie eznd sau n decubit dorsal).
4. Datele demografice ale pacientului trebuie s fie corect scrise pe formularul de
nregistrare de la punctul de recoltare a sngelui i recipientul de recoltare corect
etichetat.
2013-2014 11
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Aditivi utilizai
Pentru a mpiedica procesul de coagulare a sngelui integral, unele vacutainere
conin substane anticoagulante; anticoagularea se produce fie prin legarea Ca2+ (EDTA,
citrat de dextroz), fie prin inhibarea trombinei (heparinat de litiu sau sodiu, hirudin).
Pentru a nu exista nicio confuzie n identificarea tubului de recoltare, capacele
vacutainerelor sunt colorate diferit, n funcie de aditivul folosit. Codurile de culoare pentru
substanele anticoagulante sunt descrise n ISO/DIS 6710:
1. Capac mov/roz - folosete ca anticoagulant EDTA i are utilitate n hematologie,
biologie molecular, unele teste imunochimice (ex. ACTH).
2. Capac bleu/verde - conine Citrat 9+1 i se folosete pentru analiza coagulrii.
3. Capac negru/mov - conine Citrat 4+1 i se folosete pentru VSH.
4. Capac verde/portocaliu - conine Heparinat i se utilizeaz plasm pentru testele
de biochimie.
5. Capac rou/incolor - este un tub fr anticoagulant. Serul este folosit pentru
testele de chimie, imunologie i serologie.
2013-2014 13
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Kit-urile specifice permit tipizarea de rezoluie nalt a alelelor ntr-un singur test.
Metoda SSP (Sequence Specific Primers) se bazeaz pe tehnologia PCR care folosete
primeri specifici pentru tipizarea ADN din esuturi.
Fiecare kit de primeri specifici const ntr-un panel de primeri, fiecare coninnd o
pereche specific de primeri (specifici pentru o alel sau un grup de alele) ct i o pereche
de primeri de control specifici pentru secvenele non-alelice prezente n toate probele.
Acest control acioneaz ca un control PCR intern pentru a verifica eficiena
amplificrii PCR.
2013-2014 14
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
MHC este format din molecule solubile sau aflate pe diferite suprafee celulare, cu
roluri importante n funcionarea normal a sistemului imun.
Complexul major de histocompatibilitate este implicat n imunitatea adaptativ
(specific) avnd un rol esenial n discriminarea ntre self i nonself. De asemenea,
intervine i n imunitatea nespecific. Complexul major de histocompatibilitate mai este
cunoscut sub numele de sistemul HLA (human leukocyte antigen).
Toate celulele care prezint pe suprafa receptori MHC I pot prezenta antigene
endogene limfocitelor T citotoxice. Aceast prezentare determin activarea limfocitelor T
citotoxice, cu declanarea raspunsului imun celular, care are drept finalitate eliminarea
acestor celule neoplazice sau infectate cu germeni intracelulari. Astfel, celulele care prezint
antigene prin intermediul MHC I catre LT citotoxice sunt de fapt celule int pentru acestea
din urm.
Antigenele exogene pot fi procesate i prezentate limfocitelor T helper doar de ctre
celule specializate care au pe suprafa molecule MHC II (celule prezentatoare de antigen).
Obinerea serului
- Se recolteaz 8-10mL snge venos ntr-o eprubet de centrifug
- Se introduce proba la 370C timp de 15 min, pn la completa coagulare
- Se decanteaz serul ntr-o alt eprubet de centrifug
- Serul rezultat se centrifugheaz 5 min la 3000 rpm
- Serul poate fi pstrat timp de 1-2 ani la -200C
2013-2014 16
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
2013-2014 17
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
patogeni ce au perioad mare de laten; astfel, pot fi identificai indivizii umani
pozitivi nainte de seroconversie
studii privind mecanismele genetice ce acompaniaz procesele maligne
(detectarea secvenei i esutului n care se exprim anumite oncogene n
diverse procese maligne)
studii de taxonomie, sistematic i filogenie molecular: obinerea rapid a unei
cantiti mari din secvene ADN cu valoare taxonomic i/sau filogenetic
biologia populaiilor, inclusiv la organisme mici: tehnologia PCR permite
secvenierea rapid a unor molecule de ADN de la foarte muli indivizi, fr a
necesita n prealabil clonarea acestora
studii de antropologie: tehnica PCR permite n prezent recupe-rarea i analiza
unor secvene ADN din fosile
medicin legal: cu ajutorul reaciilor PCR pot fi n prezent analizate la nivel
molecular o serie ntreag de probe biologice
Materiale necesare
Tuburi PCR de 0,2/0,5 mL
Vrfuri pentru pipete automate
Materialele trebuie s fie noi i sterile
Tehnica de lucru
Se realizeaz prin combinarea unei probe de ADN cu primeri oligonucleotidici,
deoxiribonucleotidtrifosfai (dNTP) i o ADN-polimeraz termosensibil (Taq-polimeraza),
ntr-un tampon corespunztor.
Prin nclzirea i rcirea repetat a amestecului (30-40 cicluri), se obine nivelul de
amplificare dorit.
Treptele de temperatur ale unei racii PCR standard
Denaturarea iniial
Pentru ca o reacie PCR s se desfoare eficient, este foarte important ca moleculele
ADN matri s fie denaturate iniial complet. Acest lucru poate fi realizat prin
nclzirea iniial a amestecului de reacie 2 min la 94-95oC.
Treapta de denaturare din cadrul fiecrui ciclu
De obicei, este suficient o denaturare de 20-30 sec la 94-95oC, dar aceasta trebuie
adaptat funcie de termocycler i de tuburile folosite (de ex., dac se lucreaz n tuburi
de 500 L sunt necesari timpi mai lungi dect dac se lucreaz n tuburi de 200 L).
Ataarea primerilor
n marea majoritate a experimentelor, temperatura de ataare a primerilor trebuie
determinat i optimizat empiric. Alegerea acestei temperaturi reprezint unul din
factorii critici pentru asigurarea unei nalte specificiti a reaciei PCR. Dac
2013-2014 18
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
temperatura de ataare este mult prea nalt, nu are loc ataarea primerilor, iar dac
temperatura este prea sczut, atunci crete probabilitatea atarilor nespecifice.
Polimerizarea propriu-zis
Taq-ADN polimerizeaz aproximativ 60 baze per secund la 72 oC. n fiecare ciclu, o
perioad de polimerizare de 45 sec este suficient pentru amplificarea unor fragmente
de pn la 1 kbp. Pentru amplificarea unor fragmente mai mari de 1 kbp, timpul se
calculeaz n multiplii de 45 sec, urmat de ajustri pentru diverse matrie. Pentru a
obine o cantitate ct mai mare de amplicon, se poate varia timpul de polimerizare,
astfel:
pentru primele 10 cicluri se folosete un timp constant de polimerizare (de ex.
45 sec pentru 1 kbp)
pentru urmtoarele 20 de cicluri se crete timpul de polimerizare cu 2-5 sec per
ciclu (de ex. 50 sec pentru ciclul 11, 55 sec pentru ciclul 12 etc.).
O asemenea mrire progresiv a timpului de polimerizare ofer enzimei mai mult
timp pentru polimerizare, pentru c pe msur ce reacia PCR avanseaz, n amestecul de
reacie se gsete din ce n ce mai mult matri i din ce n ce mai puin enzim activ
(randamentul enzimei scade datorit expunerii prelungite la temperaturi nalte).
Numrul de cicluri
ntr-o reacie PCR obinuit, mai puin de 10 molecule de matri pot fi amplificate
n mai puin de 40 cicluri, obinndu-se un produs (amplicon) detectabil n electroforez n
gel de agaroz. La o cretere mult prea mare a numrului de cicluri, se pot acumula produi
de reacie nespecifici.
Polimerizarea (extensia) final
n multe reacii, dup ultimul ciclu de amplificare, tuburile de reacie se in 5-15 min
la 72oC pentru a realiza polimerizarea complet a produilor pariali, precum i
renaturarea moleculelor monocatenare.
Prelucrarea rezultatelor
Probele obinute se analizeaz prin electroforez n gel de agaroz 1%
Dup migrare, gelul se examineaz la UV
ARN-ul, n mod normal, migreaz n faa ADN-ului
2013-2014 20
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Cele mai multe antigene cu care organismul vine n contact au o structur complex.
n general, pentru un anumit antigen, sistemul imun va genera mai multe tipuri de
anticorpi, care vor recunoate diferii epitopi. Fiecare anticorp recunoate specific un
anumit epitop, de care se leag cu o poriune care are structur complementar cu a
epitopului. Aceast poriune se numete paratop, situs de legare sau situs combinativ.
Funciile anticorpilor
2013-2014 21
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Structura anticorpilor
2013-2014 22
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Situsul combinativ
Primii 100 de aminoacizi ai capetelor N-terminale ale lanurilor H i L prezint o
variabilitate marcat ntre anticorpi cu specificitate diferit. Aceste segmente sunt
denumite regiunile V: VL pentru lanurile uoare i VH pentru lanurile grele.
Specificitatea diferit a anticorpilor este datorat acestei regiuni variabile.
Asocierea dintre VH i VL creaz o zon hipervariabil, care este locul de legare a
antigenelor. Aceasta a fost denumit situs combinativ sau situs de legare a antigenului. n
interiorul regiunii variabile, exist anumite poziii care sunt relativ constante de la
molecul la molecul i zone care foarte rar sunt ocupate de acelai aminoacid. Aceste
poziii numite hipervariabile constituie locul de legare cu antigenul i au fost denumite
regiuni determinante ale complementaritii (CDR - Complementary Determining Regions).
Sistemul imun este capabil s produc anticorpi mpotriva unei repertoriu vast de antigene
prin generarea de imunoglobuline care prezint CDR specifice pentru fiecare antigen.
2013-2014 23
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Situsul combinativ pentru antigen este o cavitate mic format prin plicaturarea
domeniilor VH i VL. Antigenul intr n aceast cavitate i angajeaz legturi cu domeniile V
prin complementaritate, pe principiul cheie-broasc.
Secvenele de aminoacizi care nu stabilesc legturi cu antigenul formeaz regiunea
suport FR (framework region).
Clasele de imunoglobuline
Imunoglobulinele G
Imunoglobulinele G (IgG) sunt distribuite egal n sectorul intravascular i
interstiial. Moleculele de IgG sunt formate din dou lanuri grele i dou lanuri uoare
sau . Exist 4 subclase de IgG, pe baza diferenelor existente la nivelul lanurilor : IgG1,
IgG2, IgG3 i IgG4.
Au concentraia plasmatic cea mai mare
Realizeaz imunizarea pasiv umoral a nou-nscuilor n primele luni de via
Fixeaz complementul (IgG4)
Reprezint peste 75% din totalul Ig circulante
Apar n RIU secundar
Sinteza lor este indus de IL-4
Imunoglobulinele M
Imunoglobulinele M (IgM) reprezint ntre 5 i 10% din totalul imunoglobulinelor
serice. Forma monomeric de IgM se afl pe suprafaa limfocitelor B i intr n structura
BCR.
Plasmocitele secret IgM circulant ca pentameri. Monomerii sunt aranjai astfel
nct fragmentele Fc se afl n centru iar cele 10 situsuri de legare al antigenului se afl la
periferia moleculei. Fiecare pentamer este format prin legarea monomerilor prin legturi
disulfurice, legturi care se constituie ntre anumite zone ale lanurilor grele, situate nspre
captul C-terminal. n plus, molecula de IgM conine un lan suplimentar polipeptidic numit
lanul J (joining), care este necesar pentru polimerizarea monomerilor.
2013-2014 24
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Imunoglobulinele A (IgA)
IgA este clasa de imunoglobuline predominant n secreii: lapte matern, saliv,
lacrimi, mucusul tracturilor digestiv, bronic i genitourinar. n ser, IgA reprezint 10-15%
din totalul Ig.
n snge, IgA circul n principal sub forma de monomeri. n secreiile mucoase, IgA
exista aproape exclusiv sub form de dimeri (IgAs).
Moleculele de IgAs conin un lan polipeptidic J i o component secretorie, de
asemenea de natur peptidic. Lanul polipeptidic J este identic cu cel care se gsete n
pentamerii de imunoglobulin M. Componenta secretorie este sintetizat de celulele
epiteliale.
Mecanismele de protecie ale IgAs la nivelul mucoasei:
mpiedicarea colonizrii bacterene
neutralizarea particulelor virale
neutralizarea enzimelor i toxinelor
aciune sinergic cu factori ai sistemului de aprare nnscut: lactoferina,
peroxidaz, lizozim
IgAs au un rol important n meninerea relaiei simbiotice cu bacteriile comensale
din cavitatea oral. Exist un repertoriu larg de IgAs care conine anticorpi pentru
antigenele exprimate de bacteriile comensale i care mpiedic trecerea acestora prin
mucoas.
Imunoglobulinele E (IgE)
IgE este o clas de imunoglobuline cu efecte biologice importante, cu toate c se
gsete n cantiti reduse n plasm 0,3 micrograme/mL.
Lanul greu epsilon este format din cinci domenii, unul variabil i patru constante.
Molecula de IgE nu are o zon balama i din aceast cauz este foarte rigid.
Au rol n aprarea antiparazitar i intervin n reacia de hipersensibilitate de tip 1,
care este responsabil pentru o varietate de afeciuni alergice, de la rinit alergic,
urticarie, astm bronic, pn la oc anafilactic.
2013-2014 25
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
IgE sunt anticorpi citofili, adic dup ce sunt sintetizai nu rmn n lichidul
extracelular, ci se ataeaz prin receptori specifici pe suprafaa mastocitelor i bazofilelor.
Mastocitele i bazofilele posed un bogat echipament enzimatic i de mediatori ai
inflamaiei, care se afl n granulaiile citoplasmatice. Legarea antigenului de
imunoglobulinele E care se afl pe suprafaa acestor celule declaneaz degranularea i
eliberarea mediatorilor inflamaiei n esuturi, cu apariia manifestrilor alergice.
Genele imunoglobulinelor
Localizarea cromozomial a genelor pentru Ig:
Sinteza lanurilor grele este codificat de gene plasate pe cromozomul autozom
14, braul lung q, regiunea 32
Sinteza lanurilor uoare este codificat de gene plasate pe cromozomul autozom
2, braul scurt p, regiunile 11-12
Antigenele
Sistemul complement
Sistemul complement este un sistem multienzimatic care particip la rspunsul
imun i la reacia inflamatorie. n acest fel el face legtura ntre aprarea specific i
nespecific. Factorii sistemului sunt sintetizai n principal n ficat. Ca i sistemul coagulrii,
complementul funcioneaz pe principiul cascadei.
Factorii complementului se gsesc permanent n plasm. Ei extravazeaz n focarul
inflamator datorit permeabilitii capilare crescute. n circulaie factorii sistemului
2013-2014 28
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
complement se gsesc sub form de profactor (enzim inactiv sau zimogen). Profactorii se
activeaz succesiv prin procese de proteoliz limitat. Factorii C 2, C3, C4 i C5 sunt clivai n
cte dou fragmente notate cu a i b. Fragmentele a sunt mai mici. Ele rmn solubile
n lichidul interstiial i au efecte de tip proinflamator. Fragmentele b sunt mai mari. Ele
intervin n distrugerea antigenelor corpusculate i n epurarea antigenelor solubile.
2013-2014 29
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
2013-2014 30
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
2013-2014 31
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
2013-2014 32
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Principiul metodei:
Reactivul folosit: suspensie de particule latex de polistiren ncrcate cu streptolizina
O stabilizat.
Reactivul a fost astfel preparat nct, n prezena unui titru ASLO normal de 200
U.I/mL sau mai crescut, s dea o aglutinare vizibil a particulelor latex, fr diluarea
serului.
Reactivi:
1 flacon cu reactiv latex de 5mL
1 flacon control pozitiv de 1mL
1 flacon control negative de 1mL
1 plcu pe care se efectueaz reacia
Interpretarea testului:
Reacia ASLO negativ: obinerea unei suspensii lptoase, fr aglutinare, ca cea
observat la controlul negativ
Reacia ASLO pozitiv: obinerea unei aglutinri observat n cercul probei
asemntoare cu cea observat la controlul pozitiv
Valori crescute:
> 200 U.I.: la pacienii care au avut n ultimele trei luni o angin streptococic sau
alte infecii streptococice
> 300 U.I.: n glomerulonefrita acut streptococic, scarlatin, purpura reumatoid
600-2500 U.I.: n RAA
Principiul metodei:
Reactivul CRP este o suspensie de particule latex de polistiren, marcate cu o
fraciune de gamaglobulin a serului anti-uman CRP specific. Cnd CRP este
prezent n prob, se observ o aglutinare ce indic un coninut de 6 mg/L.
2013-2014 33
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Reactivi:
1 flacon cu reactiv latex de 5 mL
1 flacon cu control pozitiv de 1 mL
1 flacon cu control negativ de 1 mL
1 plcu pe care se efectueaz reacia
Interpretarea rezultatelor:
CRP nu este prezent n sensul pacienilor aparent sntoi
Valori crescute:
infecii bacteriene: pneumonii
infarct miocardic, afeciuni maligne, LES, stri post-operatorii
febr reumatic, afeciuni reumatice diverse, colagenoze, TBC activ
Modul de lucru :
Se aduc reactivii i probele la temperatura camerei, nainte de folosire
Se agit uor reactivul pentru dispersarea particulelor
Se pune cte o pictur din controlul pozitiv i negativ n cte un cercule al plcuei
Se pune cte o pictur (50 l) de ser nediluat din fiecare prob n cte unul din
cercurile plcuei
Se adaug o pictur de reactiv RPR Carbon, ori se pipeteaz 20 l de reactiv n
fiecare cercule folosit
Se amestec ambele picturi, fr s se disperseze pe toat suprafaa cercului
Se rotete plcua manual ori cu un rotor mecanic de 80-100 rpm, 8 min
Se citete prezena aglutinrii vizibile cu ochiul liber. O aglutinare nespecific poate
apare dac testul este citit mai trziu de 8 min
Interpretarea rezultatului:
Rezultat pozitiv: prezena unor nori cenuii pe albul plcuei
Rezultat negativ: lipsa unei reacii de floculare uniforme i a unei culori cenuii
2013-2014 34
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Principiul metodei:
25 de plcue imunocromatografice
Reactivul 1 = enzima conjugat
Reactivul 2 = soluia de splare
Reactivul 3 = soluia revelatoare
2013-2014 35
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Interpretarea rezultatelor:
Negativ: sunt vizibile doar cele 3 spoturi mici
Intens pozitiv: toate cele 3 spoturi mici i spotul mare sunt vizibile, iar spotul mare
este intens colorat
Slab pozitiv: apar cele 3 spoturi mici i spotul central, dar spotul mare nu foarte
intens colorat
Neconcludent: cnd spotul central este vizibil, dar cele mici nu sau cnd nu apare
niciun spot; se repet testul
5. Testul COOMBS
Test de diagnostic pentru anemiile hemolitice autoimune
Const n reacia de hemaglutinare
Testul DIRECT: detecteaz Ac anti-eritrocitari (AAc) fixai deja pe Ag de pe
eritrocitele bolnavului
Eritocitele se pun n contact cu ser anti-Ig, care determin aglutinare n urma
cuplrii anti-Ig-AAc
Testul INDIRECT: detecteaz Ac anti-eritrocitari (AAc) circulani
Serul cu AAc provenit de la bolnav este pus n contact cu eritrocite normale care au
pe suprafa Ag eritrocitare
Are loc cuplarea AAc de Ag
Adugarea de ser anti-Ig determin aglutinarea eritrocitelor
2013-2014 36
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
2013-2014 37
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
IMUNIZAREA ORGANISMULUI
Imunizarea organismului presupune ansamblul de msuri prin care se ofer
protecie specific mpotriva patogenilor frecveni i agresivi.
Edward Jenner a descoperit vaccinul mpotriva variolei (vrsatului de vnt) n anul
1700.
Imunizarea natural activ const n apariia unui rspuns imun specific i
protector dup o boal infecioas, n urma contactului natural cu agentul patogen. Ea se
realizeaz prin mecanismul memoriei imunologice i reprezint o achiziie a sistemului
imun. Boala infecioas poate mbrca forme severe, uneori mortale, motiv pentru care
imunizarea natural nu este ntotdeauna o variant benefic de imunizare. De aceea
cercettorii au cutat nc de acum 200 de ani metode artificiale de imunizare.
Imunizarea natural pasiv const n motenirea de ctre nou nscut a unui titru
de anticorpi protectori de la mam, fa de bolile infecioase pentru care mama este
imunizat. Aceti anticorpi sunt de tip IgG i traverseaz placenta n timpul vieii
intrauterine. Dup natere ei continu s ajung la copil prin intermediul laptelui matern.
Astfel copilul este protejat n primele luni de via de o serie de boli infecioase. ns titrul
acestor anticorpi scade progresiv, astfel nct dup vrsta de 5-6 luni copilul nu mai este
protejat.
2013-2014 38
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Vaccinul este un preparat care conine fraciuni antigenice din structura unui
agent infecios. El este capabil s induc la individul vaccinat un rspuns imun protector
mpotriva respectivului agent infecios. Acesta se instaleaz dup un interval de timp
necesar sintezei de anticorpi n urma vaccinrii.
Apariia unui rspuns imun n cursul vaccinrii nu este suficient pentru
protecie. Acesta trebuie s aib o anumit intensitate i este necesar apariia memoriei
imunologice, asigurat de limfocitele T i B de memorie.
Tipuri de vaccinuri:
Germeni vii atenuai (vaccinuri vii bacteriene sau virale)
Germeni mori
Fraciuni de germeni
Toxoizi (toxine secretate i detoxifiate)
Recombinani de determinani antigenici
Vaccinurile vii sunt utilizate pentru imunizarea mpotriva unor infecii virale:
rujeol (pojar), rubeol, oreion, varicella, poliomielit, hepatit A.
Pentru c pot determina simptome de boal majore, vaccinurile vii sunt atenuate
prin cultivarea agentului patogen pentru perioade ndelungate n condiii anormale de
cultur. Se vor selecta mutani care sunt adaptai supravieuirii n cultura anormal, dar
au patogenitate mai redus n organism. Un exemplu este vaccinul mpotriva
Mycobaterium (BCG bacilul Calmette Guerin). Acesta a fost obinut prin creterea
Mycobaterium bovis pe un mediu cu o concentraie crescut de bil.
Vaccinurile inactivate conin virusuri sau bacterii lipsite total de putere patogen.
Induc, dup administrri repetate, o imunizare activ. Pot fi utilizate la gravide i
imunodeprimai. Vaccinurile inactivate determin inducerea unui rspuns predominant
umoral.
2013-2014 40
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Serurile heterologe
Sunt recoltate de la animale (cai) n prealabil imunizate activ, care posed deci
titruri mari de anticorpi specifici.
Din cauza riscului de accidente anafilactice ele sunt din ce n ce mai puin utilizate,
fiind nlocuite cu Ig umane specifice.
Se administreaz n scop profilactic, imediat dup un presupus contact cu agentul
infecios (plag tetanigen, plag rabigen).
Serurile homologe (umane): provin de la convalesceni. Ele au fost abandonate din cauza
riscului transmiterii unor virusuri, ca HIV i virusurile hepatitice.
Imunoprofilaxia secundar
DTP diftero-tetanic-pertussis luna a 2-a de via i 3 rapeluri la 4, 6, 12 luni
HVB administrat la natere, lunile 2 i 6
VPI (antipolio) luna a 2-a de via, cu rapel
BCG (antituberculos) n primul an de via
2013-2014 41
UMF Carol Davila Bucureti Disciplina de Fiziopatologie i Imunologie
Facultatea de Medicin Dentar Anul de studii: III
Acest material este proprietatea intelectual a Disciplinei de Fiziopatologie i Imunologie Medicin Dentar. Reproducerea
parial sau integral a textului este interzis.
2013-2014 42