UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID

FACULTAD DE MEDICINA

ACCIONES NEUROMUSCUTRES DE LOS

CALCIOANTAGONISTAS Y ANTIHISTAMINICOS 112 EN lA
RATA.

TESIS DOCTORAL

Mara Jess de la Iglesia Diez

Madrid, 1993
 Maa Jess de la Iglesia Diez

ACCIONES NEUROMUSCULARES DE LOS

CALCIOANTAGONISTAS Y ANTI-

HISTAMNICOS H2 EN LA RATA

Director: Prof. Jos Manzanero Yllana

Universidad Complutense de Madrid

Facultad de Medicina
 INFORME DEL DIRECTOR DE LA TESIS

JOSE MANZANERO YLLANA, PROFESOR ASOCIADO DE FARMACOLOGA DE LA

FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID

TIENE A BIEN INFORMAR:

Que el Proyecto de trabajo presentado por la Doctorando

Dha. M JESUS DE LA IGLESIA DIEZ, titulado: Acciones neuromuscu-
lares de los frmacos calcio-antagonistas y antihistamnicos
en la rata, reune las condiciones acadmicas y cientficas nece-
sanas para ser considerado como Tesis Doctoral.
Madrid, 6 de Mayo de 1993

VY BY
EL TUTOR (2) El Director de la Tesis

Fdo.:
J. Manzanero
____________________
Yllana

INFORME DEL CONSEJO DE DEPARTAMENTO

EL CONSEJO DEL DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGIA

INFORMA:

Favorablemente la presentacin, exposicin y defensa

del Proyecto de trabajo presentado por Dha. M~ JESUS DE LA IGLESIA
DIEZ y dirigida por D. Jose Manzanero Yllana, dado que reune las
condiciones acadmicas y cientficas requeridas para ser conside-
rado como Tesis Doctoral.

Madrid, 6 de Mayo de 1993

Fecha reunin
El Director del Departamento
Consejo Departamento

651993
WLL4
Pdo.: Prof. P. Lorenzo
(fecha y firma)
 AGRADECIMIENTOS

Este trabajo ha sido realizado en el Departamento de

Fannacolog-a de la Facultad de Medicina de la Unv. Complutense de
Madrid. A su Director, el Prof. P. Lorenzo Fernndez deseo manifestar
mi gratitud por brindarme su ayuda y los medios tcnicos para su
realizacin.

Al Dr. J. Manzanero flana, por su decidido apoyo,

orientacin y direccin de la presente tesis.

A los Jis. Tamargo, Anadn, Barrign y Leza por la

ayuda recibida en algunas facetas del presente trabajo.

A M~ Elena por su colaboracin en la redaccin de

algunos captulos.

A otros miembros del Departamento por los nimos

recibidos en su realizacin.
A Eva M~, Raquel y Sofa con cario.
 INDICE

Pg.

1. INTRODUCCION. 1

1.1. MUSCULO ESTRIADO Y TRANSMISION NEUROMUSCULAR.-.. 4

I.1.a. Acoplamiento excitacincontraccin 5

I.1.b. Relajacin. 9

I.1.c. Neurotransinisin en placa motora. 11

I.1.d. Liberacin espontnea de acetilcolina... 14

I.1.e. Liberacin de acetilcolina por impulsos

nerviosos. 15

I.1.f. Localizacin y bioquimica del receptor

nicotnico muscular. 16

I.1.g. Los receptores de acetilcolina. 18

1.2. CLASIPICACION DE LOS FARMACOS AGONISTAS

Y ANTAGONISTAS DE LA HISTAMINA. 21

1.3. RELACION ESTRUCTURA-ACTIVIDAD DE LOS

ANTIHISTAMNICOS H 22

1.4. EFECTOS COLINERGICOS DE LOS ANTI-

HISTAMNICOS H 27

1.5. ACCIONES FARMACOLOGICAS DE LA HISTAMINA.

ACCIONES NEUROMUSCULARES. 31

1.6. ACCIONES NEUROMUSCULARES DE LOS ANTI-

HISTAMNICOS H 35

1
 1.7. ACCIONES EN PLACA MOTORA DE LOS BLOQUEANTES

NEUROMUSCULARES COMPETITIVOS. 36

1.8. ACCIONES NEUROMUSCULARES DE LOS FRMACOS

ANTICOLINESTERASICOS . 38

1.9. EFECTOS NEUROMUSCULARES DE LOS CAMBIOS

INICOS EN PLACA MOTORA.- 40

1.10. ACCIONES NEUROMUSCULARES DE LOS INHIBIDORES

DEL ENZIMA CONVERTIDOR DE ANGIOTENSINA. 42

1.11. ACCIONES NEUROMtJSCULARES DE LOS FRMACOS

CALCIOANTAGONISTAS. 43

1.12. PLANTEAMIENTO Y OBJETIVOS.- 49

II. MATERIAL Y METODOS.- 52

A) MATERIALES. 53

1. Animales. 53

2. Aparatos. 53

a> Copa y circuito. 53

b) Electrodo y sistema de estimulacin. 53

c> Sistema de registro. 55

3. Liquido nutricio. 55

4. Oxigenacin. 55

E> METODO EXPERIMENTAL. 56

C) FARMACOS EMPLEADOS.- 58

D) ANALISIS ESTADSTICO..... 58

II
III. RESULTADOS . 59

1. EFECTO DE LOS CAMBIOS INICOS SOBRE LA ACCIN

CONTRACTIL DE RANITIDINA EN LA PREPARACIN

FRENICO-DIAFRAGMA DE RATA . - 60

1.1> Accin contrctil de ranitidina en solucin

Tyrode normal. 60

1.2) Efecto del K+ en la accin contractil

de ranitidi.na sola. 61

1.3) Efecto del Ca++ en las respuestas con-

trctiles de ranitidina. 63

1.4> Accin contrctil de ranitidina con variaciones

de Mg++ en el liquido nutricio. 64

2> EFECTO DE LOS CALCIOANTAGONISTAS EN LA ACCIN

CONTR2CTIL DE RANITIDINA EN HEMIDIAPRAGMAS DE

RATA INDIRECTAMENTE ESTIMULADOS. 66

2.1> Efecto de diltiazem sobre la accin contrctil

de ranitidina en liquido nutricio Tyrode

normal. 66

2.2> Efecto de verapamil sobre la accin contractil

de ranitidina en solucin Tyrode normal. 70

3. EFECTO DE CAPTOPRIL SOBRE LA ACCIN CONIYRACTIL

DE RANITIDINA EN EL MUSCULO DIAFRAGMA DE RATA

INDIRECTAMENTE ESTIMULADO. 75

3.1> Accin de ranitidina <20 MM 1 mM> en la

preparacin frnicodiafragma de rata con

III
 solucin Tyrode normal.. 75

3.2> Accin de ranitidina (20 lmM) despus de

captopril 1 pM. 7.7

3.3> Accin de ranitidina (20 MM - 1n~ despus de

captopril 10 MM. 79

3.4> Accin de ranitidina <20 pM - 1mw despus de

captopril 100 pM. 81

3.5) Efecto de captopril 10 pM en la accin

contrctil de ranitidina en medio nutricio

Tyrode con 5.4 mM de l<-~-. 83

3.6) Efecto de la disminucin de Ca++ en el lquido

nutricio sobre la accin contrctil de rani tidina

despus de captopril 10 MM. 85

4. INTERACCIN DE CAPTOPRIL CON EL ANTICOLINESTE

ii.sico NEOSTIGMINA EN HEMIDIAFRAGMAS DE RATA

INDIRECTAMENTE ESTIMULADOS. 88
4.1) Curva dosisrespuesta de neostigmina <0.1 MM 10

pH) en solucin Tyrode normal. 88

4.2> Efectos de neostigmina <0.1 pH, 1MM y 110 pH>

despus de captopril 10 pH en solucin Tyrode

normal. 90

4.3) Efectos de neostigmina (0.1 MM, 1pM y 110 MM)

despus de captopril 100 pM en solucin Tyrode

normal. 91

4.4> Efectos de neostigmina (0.1 MM, 1pM y 110 MM>

despus de captopril 10 pH en solucin Tyrode

bipoclcico [Ca++]o 0.90 mM. 93

IV
 ~5> Efectos de neostigmina (0.1 pH, 1pM y 110 pM>

despus de captopril 10 MM en solucin Tyrode

hiperpotsico [K+]o 5.4 mM. 94

5. ACCIN CONTRACTIL COMPARATIVA DE RANITIDINA Y

NEOSTIGMINA EN HEMIDIAFRAGMA DE RATA AISLADO. .. 97

5.1> Accin de ranitidina y neostigmina en hemidia

fragmas de rata en solucin Tyrode normal

directa e indirectamente estimulados. 97

A> Curvas dosisrespuesta de neostigmina

(0.1 pH 10 MM>. 97

B> Accin de ranitidina despus de neostigmina.... 98

C) Accin de neostigmina despus de ranitidina.... 99

D) Accin contrctil comparativa de ranitidina y

neostigmina. 100

5.2> Accin contrctil de ranitidina y neostigmina

en hernidiafragmas de rata aislados en solucin

Tyrode hiperpotsico <8.1 mM). 102

A) Accin de ranitidina despus de neostigmina... 102

B> Accin de neostigmina despus de ranitidina... 103

6. ACCIN ANTICURARE COMPARATIVA DE RANITIDINA

Y NEOSTIGMINA FRENTE A ATRACTJRIO.. 106

6.A> Hemidiafragmas de rata indirectamente

estimulados en solucin Tyrode normal. 106

6.A.1> Accin de atracurio solo. 106

6.A.2) Accin anticurare de ranitidina despus de

neostigraina. 108

V
 6.A.3) Accin anticurare de neostigmina despus de

ranitidina. 109
6.B) Hemidiafragmas de rata indirectamente

estimulados en solucin Tyrode hiperpots ico

<K+ 8.1 mM). 110

6.B.1> Accin de atracurio solo 110

6.B.2) Accin anticurare de ranitidina despus de

neostigmina .110
6.B.3> Accin anticurare de neostigmina despus de

ranitidina . 112

IV. DISCIJSION 114

V. CONCLUSIONES 139

VI. BIBLIOGRAFA 146

VI
1. INTRODUCCION
1. INTRODUCCION

El uso creciente de los antihistamnicos

aproximadamente en 1984, unos 30 millones con cimetidina y unos

2 millones con ranitidina, hace que poco a poco se vayan

conociendo ms efectos farmacolgicos y ms efectos adversos o

secundarios. Los segundos son descritos cada da ms

frecuentemente en revistas de prestigio y ello es debido por una

parte a que son molculas de reciente descubrimiento y por otra

parte que tienen un gran uso teraputico. Por los grandes

beneficios que generan las dos principales compaas ha originado

fuertes tensiones comerciales con el uso antiulceroso de

cimetidina versus ranitidina como seala Mc Carthy <1983) : Hasta

ahora, esta batalla ha generado ms agitacin en Wall Street y

entre las compaias en competencia que en las consultas mdicas

y si bien ello es cierto relativamente, ya que hay un creciente

inters de la clase mdica en tomar partido por una u otra,

debido al nmero creciente de publicaciones de efectos adversos

de la otra, con lo que contribuye incluso a una ms prudente

utilizacin teraputica y a unas preferencias cambiantes por el

advenimiento de nuevos antihistamnicos H2.

Aunque la histamina es un poderoso agente secretor de cido

clorhdrico y pepsina por el estmago, en sinergia, con

acetilcolina y gastrina, los agentes antisecretores del tipo de

los antihistamnicos ji2 no parecen actuar tan selectivamente

sobre los receptores H2 gstricos, como lo demuestran los

diversos efectos farmacolgicos, poco conocidos, por ser menos

1
usuales como los endocrinos y metablicos, incluso el simplista
concepto de antagonistas H2, a nivel gstrico puede no ser

directo, sino hipotticamente afectando al movimiento del calcio

intracelular y secundariamente la exocitosis o ambos mecanismos.

En este trabajo hemos visto la influencia de estos agentes en un

tejido no secretor, como es la preparacin frnicodiafragma de

rata con unos efectos especficos, tambin a rango de dosis muy

especfico y estrecho, aunque mayor que el preciso para el

antagonismo de los receptores ji2 y siendo este efecto

potencialmente beneficioso, como es la mejora de la contraccin

muscular, al igual que a nivel cardiaco favorecen in vitro la

inotropia, salvo algunos agentes nuevos. Cuando utilizamos

ranitidina como agente anticurare in vitro, previamente el grado

de curarizacin que realizamos con atracurio en esta tesis es

alrededor de un 20 a 50 por ciento de valor basal segn el

preparado y el tipo de estimulo, con lo que a diferencia de otros

autores que utilizan dosis supramximas, nos permite ver, una vez
alcanzada una disminucin contrctil estable, el efecto

subsiguiente del antihistamnico H2. A nuestro juicio, ensayar

dosis de curare muy altas presenta el inconveniente de que

producen una depresin supramxima de la contraccin

diafragmtica, la cual es muy persistente, pudiendo durar horas,

incluso tras lavados sucesivos de la preparacin. El ensayo

ulterior de un frmaco para ver si revierte o potencia esta

disminucin de la contractilidad es difcil, porque si la

potencia reversal es pequea no es posible apreciarlo y si

aumenta ms la depresin no se puede apreciar, una vez anulada

previamente sta.

2
 El inters de algunos antihistamnicos ji
2, estriba en que
presentan algunas acciones farmacolgicas nuevas, aunque

esperables y sorprendentes como la que estudiamos en este

trabajo. Ya era conocido el efecto contrctil de los

antihistamnicos H2 en miocardio de rata y cobayo, existiendo una

bibliografia abundante y revisiones <Manzanero, 1979),

estudindose incluso en miocardio humano in vitro, donde

cimetidina y ranitidina presentan efectos inotrpicos positivos

(Coruzzi and col., 1983), al igual que mifentidina <Pol and

col., 1985). En msculo liso son tambin innumerables las

publicaciones de efectos descritos con los antihistamnicos ji2.

En msculo estriado hay diferencias de especie y se describen

acciones de incremento y depresin contrctil. En la preparacin

frnicodiafragma de rata ranitidina tena una accin contrctil

ptima cimetidina solo tena ligeros efectos contrctiles,

mientras que en el cobayo no hay tal efecto, por lo que esta

especie la hemos excluido. . Tambin ha sido estudiada la accin

contrctil de ranitidina en esta preparacin sobre dosis

equimolares previas de histamina, para demostrar que el efecto

contrctil no se debe a interaccin sobre receptores H <Iglesia,

1982), as como despus de la depresin contrctil neuromuscular

de causa miognica, por inhibicin del calcio sarcoplasmtico

disponible para la contraccin, causada por dantroleno. Es decir,

el antihistaminico ji2 ranitidina antagonizaba los efectos de

dantroleno por interaccin con el calcio disponible para la

contraccin.

3
 1.1. MUSCIILO ESTRIADO Y TRANSMISION NEUROMUSCULAR.

A continuacin se resumen algunos aspectos de la

farmacologa y fisiologia de la placa motora, para una mejor

comprensin de esta tesis.

Dentro del citoplasma de las fibras musculares, llamado

sarcolema estn los miofilamentos dispuestos en cilindros de

dimetro aproximado de 1 pm y cada grupo constituye una

miofibrilla, que es el componente contrctil. En el sarcoplasma

hay miles de ncleos, mitocondrias y otras organelas

subcelulares. El retculo endoplsmico liso, se llama retculo

sarcoplsmico y esta constituido por una amplia red compleja de

tbulos, vesculas y sacos, ocupando un espacio intermiofibrilar.

En estos tbulos se almacenan iones de calcio. Hay otros tbulos

adems de estos longitudinales, que tienen una disposicin

transversal, los tbulos T, que son invaginaciones de la membrana

plasmtica en estrecha oposicin con las vesculas y sacos del

retculo sarcoplsmico. Cada tbulo en T con las porciones

vecinas del retculo sarcoplsmico forman la caracterstica diada

o triada en los mamferos. Los miofilamentos gruesos contienen

la protena contrctil miosina, mientras que los delgados

contienen actina, troponina y tropomiosina interrelacionados. La

contraccin muscular se produce cuando los filamentos de actina

se deslizan entre si y acortan los sarcmeeros. La molcula de

miosina tiene ATPasa en su extremo y contiene una porcin

delgada llamada meromiosina ligera y otra porcin ms gruesa

llamada meromiosina pesada. La movilidad de cabeza con cuello de

la meromiosina pesada permite e]. enlace reversible con la actina

 para formar la actomiosina. Los iones Ca++ por mediacin de la

troponina hacen permeables para las cabezas de miosina los puntos

de unin con la actina.

1.1 .a. ACOPLAMIENTO EXCITACION-CONTRACCION.

El desarrollo de la microscopia electrnica los estudios in

vitro de las proteinas contrctiles, etc., han conseguido grandes

avances, por lo que se resumen a continuacin. La membrana

plasmtica de una fibra muscular estriada est polarizada,

teniendo el interior negativo, de 50 a 90 mV en relacin al

exterior. En la mayor parte de las fibras musculares de los

mamferos el valor es de aproximadamente de 90 mV. El potencial

de membrana en reposo es esencialmente el potencial de equilibrio

del potasio. El estado contrctil de la fibra muscular guarda

relacin con el. potencial a travs de la membrana. Si la

diferencia de potencial disminuye hasta un nivel critico, es

decir se despolariza, se produce una contraccin de fibras

musculares. La cadena de acontecimientos que acoplan la

despolarizacin de la membrana plasmtica muscular con la

activacin de las proteinas contrctiles se denomina acoplamiento

excitacincontraccin o acoplamiento electromecnico.

Un mtodo experimental para despolarizar la membrana

plasmtica de clulas excitables se consigue mediante el

incremento extracelular de K+. En la mayor parte de las fibras

musculares de los mamferos el primer potencial a travs de la

membrana disminuye desde su valor en reposo, de aproximadamente

90 mV a un valor de aproximadamente 50 mv, es decir se

despolariza de 90 mV a 50 mV. El valor de 50 mV se denomina

umbral de activacin mecnica. Al aumentar la intensidad de la

despolarizacin se producen aumentos graduales de la contraccin,

hasta que el potencial de membrana se acerca a 20 mV. La

despolarizacin ms all de este valor no produce ningn aumento

de la contraccin, por lo que se dice que con este valor se ha

alcanzado la saturacin mecnica. La relacin entre

despolarizacin de 50 mV 20 mV y contraccin se expresa por una

curva sigmoidea. Se han obtenido resultados similares con la

tcnica del pinzamiento o fijacin del voltaje si se usa para

despolarizar la membrana hasta valores controlados durante

determinado tiempo. El empleo de esta tcnica demuestra que

durante perodos muy breves de despolarizacin los valores de

umbral y de saturacin de potencial de membranas varian segn la

duracin de la despolarizacin, que cuando ms breve es la

duracin de la despolarizacin, por debajo de un periodo crtico

mayor es la despolarizacin. En la mayor parte de los tipos de

fibras musculares estriadas, incluyendo casi todas las fibras de

los msculos de mamfero, el mecanismo fisiolgico que inicia la

contraccin es la despolarizacin producida por potenciales de

accin que se propagan en la membrana. Asimismo, la mayor parte

de las membranas de fibras musculares estriadas conducen

potenciales de accin a una velocidad de aproximadamente 5 mseg.

El potencial de membrana varia entre 90 mV en reposo hasta +30

mV o +40 mV en el mximo de la espiga. El mecanismo en el cual

se basa la generacin y propagacin del potencial de accin en

las fibras musculares estriadas es esencialmente igual que el de

las fibras nerviosas amielnicas. Como la saturacin mecnica

6
tiene lugar con un potencial de membrana de aproximadamente 20

mv, la despolarizacin ms all de este valor, incluyendo el

exceso del potencial de espiga, no produce mayor aumento de la

contraccin y esta parte del potencial de accin, es decir 50 mV,

de 20 mV a +30 mV o 40 mV constituye un factor de seguridad.

Este factor se confirma por experimentos en los cuales se

disminuye el contenido de Na+ de la solucin en la cual se baan

los msculos aislados. El contenido de Na+ tiene que reducirse

hasta el momento en que la amplitud del potencial de accin cae

en 50 mV aproximadamente antes de que disminuya la intensidad de

la contraccin asociada.

De lo dicho se deduce que la contraccin muscular por si

misma no es un fenmeno del todo o nada, pues se producen

contracciones graduales por despolarizaciones tambin graduales

dentro de los limites de potenciales de membrana, desde

aproximadamente 50 mV a 20 mV. Sin embargo, la contraccin

muscular parece obedecer a la ley del todo o nada, porque en

circunstancias normales esta desencadenada por potenciales de

accin que se propagan y la conduccin nerviosa obedece a esta

ley. Los potenciales de accin que se propagan pueden producirse

en una membrana de clula muscular, aplicando los electrodos

estimulantes directamente al msculo o bien estimulando

indirectamente su nervio motor. El mecanismo en virtud del cual

un potencial de accin que se desplaza en un nervio motor

desencadena un potencial de accin en la membrana celular del

msculo correspondiente, incluye la acetilcolina como

neurotransmisor qumico, es similar a la transmisin en cualquier

otra parte.

.7
 Aunque la transmisin esta desencadenada por el potencial

de accin del msculo dura mucho ms que el cambio elctrico.

Ocurre as porque los acontecimientos iniciados por la

despolarizacin se producen en forma relativamente lenta, y

siguen despus que el proceso de recuperacin de la membrana ha

terminado el cambio elctrico. El cambio elctrico en la membrana

plasmtica de la clula muscular es conducido al interior de la

clula siguiendo las membranas de los tbulos T, que penetra en

ella en la regin de las membranas Z en el limite AI. En alguna

forma el cambio elctrico de la membrana de los tbulos T provoca

la liberacin de una pequea cantidad del llamado Ca++

desencadenante de las triadas de unin. Esto a su vez provoca

la liberacin de una cantidad mayor de Ca++ activador desde los

sacos laterales y las vesculas del retculo sarcoplsmico, donde

est almacenado, hacia el sarcoplasma en la unin de los

miofilamentos.

En reposo, la cantidad de Ca++ libre en el sarcoplasma es

baja y el complejo troponinatropomiosina, junto con Mg++ ATP

intacto, impide la formacin de puentes cruzados entre filamentos

gruesos y delgados de manera que persiste la relajacin. Cuando

se ha liberado Ca++ por el retculo sarcoplsmico y se ha unido

al complejo troponina tropomiosinaactina, desaparece la

represin que existe para la contraccin; la ATPasa de miosina

es activada, ATP es hidrolizado y tiene lugar la interdigitacin

de filamentos, con la formacin consiguiente de puentes cruzados

(Bowman and Rand, 1984).

8
 I.1.b. RELAJACION.

El restablecimiento del estado de relajacin requiere que

Ca++ desaparezca del complejo troponinatropomiosina que entonces

puede volver a ejercer su accin inhibidora. La superficie

exterior de los sacos laterales del retculo sarcoplsmico est

jalonada con intervalos de unos 10 nm, de pequeos elementos a

modo de nudos de 24 mm de dimetro. Se cree que intervienen en

el transporte activo de Ca++ a travs de la membrana del retculo
sarcoplsmico hacia sus lugares de almacenamiento internos. En

esta forma Ca++ a travs de la membrana del retculo

sarcoplsmico los atrapa en forma activa. Cuando los sacos

laterales y las vesculas del retculo sarcoplsmico estn

plenamente saturados, el 80 % aproximadamente, del Ca++ est

fijado electrostticamente a lugares en la superficie interna de

la membrana que contienen grupos de iniidazol, fosfatidilserina

y lecitina. El resto del Ca++ queda libre en solucin dentro de

los sacos. El transporte activo de Ca++ penetrando en el retculo

sarcoplsmico depende de la hidrlisis de ATP por una ATPasa

asociada con su membrana. El retculo sarcoplsmico tambin

contiene la enzima adenilciclasa, que cataliza la conversin de

ATP en AM? cclico. No sabemos hasta que punto esta enzima

intervenga en la captacin de Ca++, aunque se ha sealado que

esta captacin por retculo sarcoplsmico aislado es estimulada

por AM? ciclico.

Las mitocondrias del msculo tambin tienen gran capacidad

de almacenar Ca++, aunque su afinidad por l es menor que la del

retculo sarcoplsinico, y se acumulan ms lentamente. De todas

maneras, tambin intervienen las mitocondrias controlando la

concentracin intracelular de Ca+libre; su importancia relativa

en diversos tipos de msculos depende del nmero existente.

Si la membrana de una fibra muscular estriada se conserva

a nivel despolarizado (esto es, con exceso de K+ o pot fijacin
de voltaje>, la contraccin resultante disminuye en forma gradual

debido a un proceso de acomodacin, mal conocido del mecanismo

contrctil, que incluye secuestro de Ca++ por el retculo

sarcoplsmico, a pesar de persistir la despolarizacin. Por otra

parte, si el potencial de membrana se restablece rpidamente

hasta valor normal, como ocurre cuando la contraccin es iniciada

por un solo potencial de accin, entonces el mecanismo de

relajacin rpidamente sigue al proceso contrctil. La relajacin

se evita por una serie de potenciales de accin en rpida

sucesin. Esto se denomina ttanos.
Adems de su papel en la captacin activa de Ca++ por el

retculo sarcoplsmico, ATP desempea otros papeles en el proceso

de relajacin. Es necesario alterar la capacidad de fijacin de

los sacos laterales en favor de Ca++ sobre otros iones.

Posiblemente de ATP produce esta alteracin provocando un cambio
de conformacin en los lugares de fijacin. No sabemos si esta

accin particular de ATP depende de su hidrlisis. Incluso cuando

todo el Ca++ activador ha sido eliminado de los miofilamentos;

no se produce relajacin a menos que estn presentes Mg++ y ATP

intacto; estas substancias ejercen una accin directa sobre los

miofilamentos que, adems de la prdida de Ca++ por el complejo

troponinatropomiosina, es necesaria para lograr que se produzca

la relajacin. Esta, por lo tanto, tambin incluye la resntesis

de ATP.

O
 I.1.c. NEUROTRANSMISION EN PLACA MOTORA.

La breve latencia y la rpida contraccin de un msculo

estriado, en respuesta a un solo impulso nervioso, hizo que

muchos investigadores dudaran de que existiera un mecanismo

humoral a nivel de la unin neuromuscular. Sin embargo, Dale,

Feldberg y Vogt, en 1936, demostraron la liberacin de

acetilcolina al estimular un nervio motor somtico. Perfundieron

los vasos sanguneos de la lengua de un gato; cuando estimulaban

el nervio hipogloso, produciendo contraccin del msculo estriado

de la lengua, se identific acetilcolina en el lquido de

perfusin que sala de ellas. En otros experimentos se perfundi

el msculo gastrocnemio de la pata del perro o del gato y se

estimularon las races motoras del nervio citico dentro de la

columna cervical para evitar estimular ms fibras nerviosas que

las de motoneuronas. La substancia que apareca en el lquido de

perfusin tena cualitativa y cuantitativamente la misma accin

que una solucin estandar de acetilcolina ensayada con el msculo

dorsal de la sanguijuela y con la presin arterial del gato. La

presencia de la substancia slo se descubri cuando se aadi

fisostigmina al liquido de perfusin, para inhibir la

colinesterasa. Dale y colaboradores luego comprobaron que la

liberacin de acetilcolina no dependa de la contraccin del

msculo. En primer lugar el curare suprima la contraccin, pero

segua presentndose acetilcolina en el lquido de perfusin

despus de estimular el nervio. En segundo lugar, la estimulacin

elctrica directa del msculo denervado crnicamente

desencadenaba contracciones, pero no se descubra acetilcolina

11

en el lquido de perfusin. En el desarrollo de esta tesis se han

realizado experimentos estimulando el nervio frnico estimulo

indirecto o el msculo diafragma la contraccin que se produca

era sin liberacin de Ach.

Otros experimentos demostraron que la acetilcolina era
liberada cuando se estimulaban los nervios motores y trabajos

posteriores demostraron que remedaba el efecto de la estimulacin

nerviosa provocando la contraccin. Cuando se inyecta

directamente una pequea cantidad de acetilcolina en arterias que

riegan msculo esqueltico se produce una contraccin rpida y

breve, similar a la causada por la estimulacin nerviosa. Adems,

las contracciones producidas por la acetilcolina y las producidas

por estimulaciones nerviosas son afectadas por diversas frmacos

en forma similar. As, el curare bloquea y la fisostigmina

potencia la respuesta de las dos. Grandes dosis de acetilcolina

despus de la fisostigmina pueden deprimir las sacudidas

desencadenadas por la estimulacin nerviosa.

La acetilcolina, inyectada por va intravenosa produce

acciones intensas sobre estructuras inervadas por nervios

autnomos, pero poca accin sobre msculos estriados, incluso

despus de inhibida la colinesterasa. De manera similar, la

acetilcolina aadida al lquido del bao que contiene un tejido

aislado con inervacin autnoma, como un segmento de intestino,

produce rpidamente una respuesta del msculo liso que contiene;

sin embargo no ocurre as en el caso de msculos estriados

aislados, constituidos principal o totalmente por fibras de

inervacin focal. Tales msculos pueden conservarse en estado

funcional aislados del cuerpo y suspendidos en solucin salina

12
fisiolgica, siempre que sean suficientemente delgados para

poderse oxigenar adecuadamente. Ejemplos empleados frecuentemente

en experimentos farmacolgicos incluyen diafragma de rata,
msculo sartorio de rana y msculo dorsal ancho posterior del

pollo. Estos msculos responden con sacudidas o con ttanos a la

estimulacin nerviosa adecuada. Sin embargo, no se pueden

contraer aadiendo acetilcolina al lquido nutricio.

El fracaso de la acetilcolina para producir una contraccin

del msculo estriado cuando se da por va intravenosa, o cuando

se aade al lquido del bao donde hay un msculo aislado,

depende sobre todo de la rapidez con que es hidrolizada y la

extraordinaria brevedad de las contracciones, aunque se pueden

sumar para producir una respuesta visible cuando hay pequeas

cantidades de acetilcolina en el torrente vascular. Para que

tenga lugar la sumacin en un msculo estriado tienen que

responder sincrnicamente un nmero elevado de fibras musculares.

Esto slo se produce cuando la contraccin local de acetilcolina

en placa motora es elevada. Por ejemplo, despus de una rpida

inyeccin arterial prxima que riega el msculo.

Es sabido que la transmisin de la excitacin desde las

terminaciones nerviosas motoras a las fibras estriadas de los

msculos, no slo de mamferos sino tambin de pjaros y anfibios

es por la acetilcolina que es sintetizada dentro de las

terminaciones nerviosas motoras y almacenada en las vesculas

sinpticas. Cuando es liberada de las terminaciones nerviosas por

la llegada de impulsos nerviosos, la acetilcolina se difunde

atravesando el estrecho espacio de unin y despolariza la

membrana postunin, produciendo un potencial de placa terminal

13
 (e.p.p.) o sea una respuesta similar a la del potencial
postsinptico excitador <EPSP) . Esta accin de la acetilcolina
es remedada por la nicotina y por lo tanto, segn la

clasificacin de Dale se describe como accin nicotnica de la

acetilcolina <Bowman and Rand, 1984>

I.1.d. LIBERACION ESPONTANEA DE ACETILCOLINA.

En ausencia de impulsos nerviosos la acetilcolina es

liberada espontneamente y al azar en cuantos de volumen

aproximadamente uniformes; cada cuanto probablemente sera la

cantidad contenida en una sola vescula sinptica. El nmero

mximo de molculas de acetilcolina que pueden almacenarse en una

vescula de 40 nm de dimetro es de 45000, y las valoraciones ms

probables del nmero real en una vescula estn entre 12000 y
21000. La liberacin espontnea origina pequeas

despolarizaciones de la membrana postunin conocidas como

potenciales miniatura de placa terminal (m.e.p.ps>, que se

producen con frecuencias medias de 14 Hz en diferentes msculos.

Son demasiado pequeas para desencadenar el mecanismo contractil

en un msculo. En fibras musculares de inervacin focal los mepps

tienen volumen aproximadamente uniforme cuando se registran con

un microelectrodo en la placa terminal. En fibras de inervacin

mltiple aparecen en amplitud ms variable y en cronologa

diferente, porque la gran densidad de placas terminales significa

que se registran no slo de las placas terminales ms cercanas

al electrodo de registros sino tambin de otras ligeramente ms

alejadas, cuyas respuestas han sido atenuadas por la distancia.

14

 I.1.e. LIBERACION DE ACETILCOLINA POR IMPULSOS NERVIOSOS.

Cuando un impulso nervioso alcanza la terminacin nerviosa

provoca un aumento breve, pero enorme, de la descarga de

vesculas, de manera que se libera simultneamente el contenido

de varios centenares. Se ha calculado que un impulso nervioso a

nivel de una sola unin libera ms de 4 millones de molculas de

acetilcolina; o sea el contenido de 200 a 350 vesculas.

Experimentos en los que se han despolarizado terminaciones

nerviosas hasta grados fijos de impulsos despolarizantes de

corriente, demuestran que la relacin entre la magnitud de la

despolarizacin nerviosa terminal y la intensidad de liberacin

de transmisor se expresa por una curva muy empinada en forma de

S. De manera similar, la intensidad de liberacin depende mucho

de la duracin de la despolarizacin terminal. El potencial de

accin en la terminal nerviosa tiene un efecto muy neto sobre la

liberacin de transmisor.

La despolarizacin de membrana por el potencial de accin

solo es la primera de una serie de reacciones que terminan en la

liberacin de acetilcolina. El intervalo entre el comienzo de la

despolarizacin de la membrana terminal del nervio y el comienzo

de la respuesta postunin a nivel de uniones neuromusculares de

la rana a 2.5v C es prolongado, hasta de 3.57.0 mseg., y solo

0.15 mseg., de este retraso puede atribuirse al tiempo necesario

para que la acetilcolina difunda a travs del espacio de unin
e interactue con los receptores postunin. Asi pues, la mayor
parte de retraso depende de los acontecimientos del acoplamiento

15

de excitacinliberacin. El mejor conocido de estos

acontecimientos es la entrada de Ca++ extracelular en el

axoplasma terminal, que es acelerado por la despolarizacin de

la membrana terminal. La cantidad de acetilcolina liberada por
un impulso nervioso es funcin de la concentracin de Ca++ libre,
y parte de la liberacin de Ca++ en la liberacin de acetilcolina
es por tanto vital. Los compuestos que desacoplan la
fosforilizacin oxidativa hacen que las mitocondrias que hay

dentro de las terminaciones nerviosas liberen Ca++ hacia el

interior del axoplasma. Se ha comprobado que tales compuestos

aumentan la liberacin espontnea de acetilcolina a nivel de las

uniones neuromusculares in vitro en ausencia de Ca++ externo.
Los iones de magnesio tienen una accin opuesta sobre los

iones de calcio en cuanto a liberacin de transmisor. Una con-

centracin elevada (Mg++) inhibe la liberacin de acetilcolina

y se opone a la accin de Ca++. Por lo tanto, la liberacin de

acetilcolina, como la de otros transmisores, vara segn el grado

de despolarizacin de la terminal nerviosa y de la concentracin

de Ca++ y Mg++ en el lquido extracelular (Bowman and Rand,

1984>.

I.1.f. LOCALIZACION Y BIOOUIMICA DEL RECEPTOR NICOTNICO

MUSCULAR.

Para su identificacin y localizacin se han utilizado

ligandos como abungarotoxina, un polipptido que se une de

manera especfica e irreversible a estos receptores <Lee, 1972>.

16
Con radionclidos o peroxidasas marcadas, abungarotoxina <aBT)

se puede ver su localizacin por microscopio electrnico. El

receptor de acetilcolina (AchR> est localizado en las crestas

de los pliegues de la unin neuromuscular, justo debajo de las

zonas activas <Fertuck and Salpenter, 1974; Daniels and Vogel,

1975). El nmero de uniones a aBT se estima por algunos autores

alrededor de 30.000 nm 2 en estas reas (Fertuck and Salpenter,

1976>.
La bioqumica del receptor de acetilcolina segn Drayer
<1982) consiste en una glicoproteina que se extiende 5 nm al
exterior de la membrana y unos 1.5 nm en el espacio intracelular
<Ross and col., 1977>. El receptor tiene un peso molecular de
250.000 y est constituido por varias subunidades. El receptor
aislado es como una molcula de 14 x 8 nm y de 250.000 daltons.

Esta se compone de subunidades de 40 a 69 mil daltons, con dos

sitios de unin para la abungarotoxina y uno o dos de

agonistaantagonista por molcula receptora (Heidmann and

Changeux, 1978). La medicin del nmero de receptores por unidad

de superficie y la conductancia de membrana han demostrado que
la translocacin de iones es bastante rpida, unos 5 x 107 iones

por segundo, para requerir movimiento a travs de un canal

abierto y no por un portador rotativo de iones. Adems, los

cambios de permeabilidad de iones, mediados por agonistas, es

decir el movimiento de entrada de sodio y de salida de potasio,

puede producirse por un solo tipo de canal inico <Dionne and

ccl., 1978). El sitio de unin con el agonista parece estar

ntimamente acoplado con un canal inico y la unin del agonista

provoca un cambio rpido, que abre el canal. La densidad del

17
 receptor segn distintos autores oscila entre 10.000 nm2 a

30.000 nm2, tendiendo a localizarse en los puntos de los

pliegues postsinpticos y presentando una cavidad centrada en la

molcula receptora.

I.1.g. LOS RECEPTORES DE ACETILCOLINA

De lo dicho hasta aqu se desprende que los receptores de

acetilcolina que intervienen en el proceso de transmisin

neuroniuscular estn localizados en la membrana postunin a nivel

de la placa motora terminal. Adems, est comprobada la

existencia de receptores de acetilcolina antes de la unin; se

hallan localizados en las terminaciones nerviosas, probablemente

a nivel del primer nodo de Ranvier. La acetilcolina y otros

agonistas nicotnicos interactuan con los receptores preunin

produciendo despolarizacin de la membrana nerviosa terminal, y

este efecto, como el de la membrana postunin, es bloqueado por

la tubocurarina y frmacos similares. Es objeto de discusin si

los receptores de acetilcolina preunin desempean algn papel

en la transmisin fisiolgica normal o bien tienen funcin

neuromoduladora a este nivel. La mayor parte de los autores

admiten que si lo ejercen, es muy pequea con relacin con el

papel de los receptores postunin.

Se han hecho muchas deducciones acerca de la ndole del

receptor de la acetilcolina postunin basndose en relaciones de
estructuracin entre agonistas. Se ha comprobado que componentes

18

.
polipptidos de los venenos de algunas serpientes de las familias
Elapidae <cobras, Bungarus, corales, Dendraspis, tigres,

serpientes africanas> e Hydrophiidae (serpientes de mar) se fijan

fuertemente y en forma selectiva e irreversible a los teceptores

de acetilcolina. La mayor parte de los estudios se han efectuado

con una abungarotoxina del veneno de la serpiente de Taiwan

Bungarus niulticinctus; la fibungarotoxina del mismo veneno de

serpiente tiene accin diferente.

El empleo de toxinas radiomarcadas y la tcnica de auto

radiografa han permitido efectuar estimaciones del nmero de

receptores en una sola placa motora terminal. En msculos de

rata, ratn y pollo se ha calculado que hay aproximadamente 50

millones de receptores por placa terminal motora. Las fibras

musculares todava responden en forma mxima a la estimulacin

nerviosa cuando el 45 % de los receptores estn bloqueados por

la toxina, pero viene rpidamente la parlisis cuando estn

bloqueados ms del 45 %. Por lo tanto, cabe considerar que casi

la mitad de los receptores son redundantes.

El componente muscular que se combina con la abungarotoxina

radiomarcada puede separarse; se ha identificado como una

proteina unida a la membrana compuesta de unidades con peso

molecular de aproximadamente 80.000 agregados en tetrmeros. Esta

proteina contiene el receptor para acetilcolina que ahora se ha

aislado en forma pura del msculo denervado de mamfero <peso

molecular = 43.000>.
Los lugares receptores han de tener gran similitud

estructural con los lugares activos de la enzima

acetilcolinesterasa, ya que ambos poseen fuerte afinidad por la

9
acetilcolina. Frecuentemente se ha sugerido que son idnticos y

que la acetilcolina es hidrolizada cuando interactua con un lugar

receptor. Sin embargo, resulta difcil explicar el hecho de que

muchos frmacos que inhiben el enzima, tienen poca o ninguna

capacidad de bloquear la transmisin colinrgica y carecen de

efecto importante sobre la actividad colinesterasa. Los

principales datos en contra de la hiptesis segn la cual los

colinoreceptores son idnticos a la acetilcolinesterasa, son los

siguientes: 1) A nivel de la unin neuromuscular la micro

aplicacin iontofortica de acetilcolina demuestra que hay puntos

(receptores) sensibles a la acetilcolina fuera de la zona donde

existe la acetilcolinesterasa. 2> En msculos crnicamente

denervados <ver luego> se desarrollan receptores de acetilcolina

sobre la membrana y no guardan relacin con acetilcolinesterasa.

3> En clulas musculares esquelticas de embrin cultivadas se

desarrollan receptores de acetilcolina, mucho tiempo antes que

aparezca la acetilcolinesterasa (funcional) . 4) En todos los

tipos de msculo es posible bloquear los receptores de

acetilcolina con abungarotoxina y luego comprobar la presencia

de acetilcolinesterasa en otros lugares empleando tcnicas

histoquimicas <Bowman and Rand, 1984>.

20
 fl2. CLASIFICACION DE LOS FARMACOS AGONISTAS Y

ANTAGONISTAS DE LA HISTAMINA.

Son innumerables los frmacos que pueden tener uno u otro

efecto. As los frmacos capaces de liberar histamina como la

morfina, el curare, etc., pueden producir efectos histamnicos:

broncoconstriccin, etc. Esta clasificacin intenta basarse en

la accin estimulante o inhibitoria sobre los receptores H1, ji2

y otros no clasificados.

H1agonistas Hlantagonistas
2 metilhistamina 1) Etanolaminas: difenhidramina

2 (2piridil> etilamina 2) Etilendiaminas: antazolina

2 <2tiazolil) etilamina 3) Alquilaminas: clorfeniramina.

Aconistas indirectos <favorecen la liberacin de histamina)

Histamina Derivados de piperidina

Diamidinas Compuesto 48/80
Polimixina Derivados de piridinio
Axnodiaquina Alcaloides
Morfina

ji2agoni stas Antagonistas indirectos

5metilhi stamina Cromoglicato

Dimaprit Brocresina
Impromidi na Hidrazinohistidina
5metilNmetilhi stamina

H2antagonistas
1) De molcula compleja: 2> Derivados del imidazol:
Lamtidina Burimamida
Loxtidina Metiamida
BMY25368 Cimetidina
BMY 25405
Famotidina 3> Derivados del furano:
Etintidina Ranitidina
Mifentidina (DA ~5~7>
Tiotidina 4) Isocitosinas:
AH 18801 Oxmetidina
SKF 93479
5K? 91486

21

 1.3. RELACION ESTRUCTURAACTIVIDAD DE LOS

ANTIHISTAMINICOS H2

Los primeros compuestos con actividad antihistamnica H2

consistan en derivados de la histamina, sobre todo conservando

el anillo iniidazol al que se adicionan diversos radicales. De

unos doscientos compuestos iniciales, se vio que la burimamida

tena accin bloqueadora de receptores H2 (Black and col, 1972).

Esta primera serie de compuestos qumicos conservan el anillo

imidazol, la histamina, si bien con radicales ms largos. Otros

compuestos importantes fueron metiamida y cimetidina.

Qumicamente son molculas hidroflicas, polarizadas, de fcil

eliminacin en general, a diferencia de los antagonistas de

receptores H1, ms lipofilicas. El anillo imidazol permite la

unin y el reconocimiento del receptor ji y el radical nuevo

impide que de la unin frmacoreceptor se traduzca en un efecto

estimulante, sobre todo porque la histamina es menos efectiva y

adems tienen ms afinidad <Ganellin and col., 1976; Brinblecome

and col., 1978; Ganellin, 1978 a, 1978 b>. En la segunda serie

de antagonistas de receptores H2 destaca la ranitidina, la cual

tiene en vez de anillo imidazol de la histamina un anillo de

furano y el resto radicales similares a la cimetidina, aunque no

idnticos, que confieren a estas molculas complejas efectos
estimulantes o inhibitorios de otras funciones de receptores no

histamnicos. Cimetidina con radical derivado alquil ciano

22
guanidina y ranitidina con grupo cianoalquilico similar en

cadenas no cargadas no presentan ionizacin a pH fisiolgico

<Domschke and col., 1980). Cimetidina es ms soluble en los
lpidos que ranitidina <Bax and col., 1980).
Los antihistamnicos ji2 antagonizan la secrecin

cida gstrica, estimulada por los tres secretagogos endgenos:

histamina, acetilcolina y gastrina, si bien con diferencias

significativas as Brittain and Daly (1980), comunican sus

resultados en perros conscientes con sacos de Heindenhain

obteniendo los siguientes resultados comparativos frente a

histamina y betanecol (efecto colinrgico):

Tabla 1. Valores de DESO antisecretora y potencias

relativas <con lmite de confianza del 95%) para ranitidina y
cimetidina en el perro.

Secretagogo Antagonista DE 50 Potencia

antisecretoria rea
Va Compuesto en mg/Kg tiva a
Cimeti
dina.

Histamina i.v. Ranitidina 0.07 <0.050.09) 59* <4.48.2)

Cimetidina 0.43 <0.0340.054 1
oral Ranitidina 0.23 (0.170.29) 43* (3.25.8>
Cimetidina 0.96 (0.801.15) 1
Betanecol i.v. Ranitidina 0.14 <0.100.27) 9~5* <5.416.5)

Cimetidina 1.24 (0.852.14) 1

oral Ranitidina 0.11 (0.040.26> 9.2* <3.423.8)

Cimetidina 0.97 (0.172.85) 1

* = significativamente diferente de cimetidina a p < 0.05

De esta relacin se deduce que ranitidina tiene casi

23
doble potencia anticolinrgica que antihistamnica, comparada

con cimetidina. Ello nos indujo a investigar en profundidad no

slo la bibliografa, sino tambin la estructura molecular para

ver las similitudes y diferencias entre las molculas de los

agonistas y los antagonistas de la siguiente manera:

a) Similitudes de histamina con ranitidina y cimetidina.

Consisten en un comn anillo heterocclico pentaatmico,

imidazlico en histamina y cimetidina, mientras que en ranitidina

el anillo furano es similar en parte con histamina y cimetidina.

Ranitidina tiene un oxgeno que hace de puente entre dos

tomos de carbono como diferencia fundamental y ausencia en el

anillo de dos tomos de nitrgeno. La disposicin de los
radicales alifticos es similar en las molculas e idntico el

primer grupo metileno.

b> Similitudes de acetilcolina con cimetidina y

ranitidina

Hay que considerar lo poco disimilar que tienen algunos

componentes de las molculas de cimetidina y sobre todo

ranitidina, respecto de acetilcolina, que podran explicar

efectos experimentales y clnicos de ambas. Ahora bien,

ranitidina tiene destacados efectos de tipo colinrgico en unos

rganos y anticolinrgico en otros, que tendran relacin con su

parcial similitud estructural con acetilcolina y esta relacin

estructuraactividad es bsica para comprender mejor nuestros

resultados experimentales en la preparacin frnicodiafragma de

rata.
En los estudios sobre la qumica y el porqu de los efectos

del curare, Santeson en 1900 vio que la metilacin de las bases

24
terciarias, al convertirse en cuaternarias, reforzaban sus

efectos. Por otro lado las sales de onium de Ing (1936),

trmino genrico para los cationes amonium, fosfonium y

sulfonium, tienen acciones curricas (Velzquez, 1966) . Tambin

existe un componente furtretonium derivado de ranitidina, que

presenta propiedades colinrgicas, actualmente identificado como

un residuo, correspondiendo a ioduro de 5metil3

trimetilamoniometil dihidrofurano (Re and col. 1983).

Se admite que a pH fisiolgico el nitrgeno terciario de

ranitidina, se puede cuaternizar, con lo que contribuye a tener

mayor similitud con acetilcolina, si bien limita su difusin a

travs de la barrera hematoenceflica, puede mimetizar sus

efectos en otros rganos.

En la estructura de cimetidina tambin se ha sealado algn
grupo activo con efectos colinrgicos. Otro aspecto interesante

en las relaciones estructura actividad nicotnica en placa motora

de ranitidina es su parcial identidad de componentes moloeculares

del anillo furano con el grupo dimetilamino, y el compuesto

4dimetil aminopiridina y estos a su vez con similitud

estructural tambin parcial respecto de acetilcolina. En algunos

rganos in vitro, presentan acciones comunes, debido a esta

parecida estructura qumica y grupos reactivos idnticos.

Ranitidina tambin presenta otros componente en su molcula,

que aisladamente presentan tambin efectos nicotnicos en placa

motora. Es decir las acciones farmacolgicas de ranitidina en la

unin neuromuscular de rata pueden estar relacionadas con el

grupo dimetilamino unido por un grupo metilo al anillo

heterocclico furano y relacionado con frmacos de estructura

25
similar como 4dimetilaminopiridina y de efectos similares.
Tambin otros compuestos como el fenol y catecolaminas

presentan un aumento de acetilcolina en placa terminal motora.

El tetraetilamonio a dosis anticurare. Los frmacos aagonistas

tambin y lo mismo sucede con la guanetidina, los

anticolinestersicos y las aminofilinas, aunque por mecanismos

diferentes.
Las relaciones estructuraactividad de los nuevos

antihistamnicos son ms complejas, ya que otros efectos que

no son vehiculados por receptores H2 persisten, siendo a veces

opuestos, debido a una comn afinidad receptora), con o sin

actividad intrnseca dependiendo del rgano y la especie

estudiada.

En resumen, ha existido un gran desarrollo en la qumica

orgnica fsica as como en el desarrollo del anlisis dinmico

de la actividad estructural de los antagonistas de la histamina

a nivel de los receptores ji2 <Ganellin, 1981) . En un principio se

observ que las imidazolilalquilguanidinas, isotioureas y

carboxamidas eran agonistas parciales y por ello se intent

cambiar el componente agonista, alargando la cadena lateral y

sustituyendo el grupo fuertemente bsico en estas molculas, por

grupos no bsicos. Este enfogue convirti las tioureas y

cianoguanidinas en antagonistas competitivos, por ejemplo

burimamida y cimetidina. Despus se descubrieron otros grupos

qumicos no bsicos para las estructuras antagonisstas, tales

como las 1.1diamino2nitroetenes y 2aminopiridin4

<isocitosinas>. Estas mitades se incorporaron, respectivamente

a los antagonistas ji2 recientes, ranitidina y oxmetidina

26
(Ganellin, 1981>. Posteriormente se descubrieron una gran
cantidad de compuestos qumicos muy heterogneos, con actividad

antagonista de receptores H2, que precisan de una mayor

perspectiva farmacolgica para destacar su transcedencia y

posible utilidad clnica.

1.4. EFECTOS COLINERGICOS DE LOS ANTIHISTAMNICOS ~

Para entender muchos de los efectos que en esta tesis

doctoral se han experimentado con los antihistaminicos H2, es

preciso conocer los efectos colinrgicos que estos frmacos

presentan. El estudio de los efectos anticolinrgicos de los

antihistaminicos H2 tiene inters porque su principal efecto es

el antisecretor gstrico y este efecto est mediado por Ach y por

otro lado los efectos neuromusculares in vitro tienen que ver con

las acciones colinrgicas, en cuanto que ello supone unos niveles

de Ach en el lquido nutricio mayores, es decir, que al menos

experimentalmente si se estimula este sistema los niveles de Ach

que hay en el liquido nutricio tienen efecto aditivo con la Ach

que se libera con el impulso nervioso por estmulo elctrico y

es sabido que a mayor incremento de Ach en placa motora, mayor

contraccin muscular.

Hasta fecha relativamente reciente no se van conociendo las

bases farmacolgicas que expliquen la diversidad de efectos

indeseables de estos agentes antiulcerosos. A continuacin se

resumen los efectos experimentales de los antihistamnicos

as como los efectos adversos en clnica que afectan

27
particularmente al sistema colinrgico. En 1983 Hansen and Bert
desciben los efectos anticolinesterasa de cimetidina,

conocindose mucho antes la accin bradicardizante de cimetidina

(Lev and col., 1975) explicando simplsimamente el fenmeno como

debido al antagonismo de receptores histamnicos H2, si bien por

nuestros estudios en frnicodiafragma y antes otros autores en

diversas preparaciones, relacionaron efectos sobre canales de

calcio de los antihistamnicos H2, e incluso acciones vagales

evidenciadas con ranitidina en diversas preparaciones in vivo e

in vitro <Berteccini and Coruzzi, 1982)

Algunos estudios de tejido muscular humano en tiras

auriculares, tanto cimetidina como ranitidina no presentan

efectos inotrpicos positivos, incluso con dosis altas y por el

contrario oxmetidina y el nuevo compuesto SKF 93479 muestran un

efecto inotrpico negativo, que se observa con dosis mayores que

las requeridas para el antagonismo de los receptores H2,

relacionando este efecto con la movilizacin del in calcio y en

este sentido estos compuestos se podran considerar como

calcioantagonistas potenciales. <Coruzzi and col., 1983), si

bien en ciertas condiciones la liberacin de catecolaminas se ha

observado con ambas cimetidina y ranitidina <Itskovitz, 1983> por

lo cual incluso estos agentes se comportaran como ionforos de

calcio ocasionales a nivel presinptico terminal, ya que hay

diferencias de especie y rgano. As con ranitidina, menos

utilizado que cimetidina, estadsticamente presenta tambin menos

efectos adversos de bradicardia (Camarri and col., 1982; Shah,

1982> interpretando este efecto Bertaccini and Coruzzi <1982)

como dispar, ya que otros pacientes no muestran alteracin vagal,

28
a pesar del aumento de dosis. De todas formas los prospectos de
ranitidina inyectable en la RFA son obligados a sealar el riesgo

bradicrdico, cuando se utiliza en bolo i.v.

Otros antihistamnicos presentan acciones

anticolinrgicas como etintidina y tiotidina <Bertaccini, 1983).

Todos estos efectos no estn mediados por receptores H2.

La inhibicin de acetilcolinesterasa y pseudocolinesterasa

presenta grandes diferencias entre ranitidina (con dosis sobre

0.1 MM) y cimetidina que el efecto se consigue con dosis mil

veces mayor <Hansen and Bert, 1983> siendo estos efecto

colinrgicos, demostrando tambin otras preparaciones aisladas

(Re and col., 1983>. Jones and col, en 1983 han observado que la

aplicacin iontofortica de ranitidina (0.1 14) produce una

excitacin de las neuronas de la mdula de rata, sensible a

atropina, que es similar a la aplicacin de acetilcolina y esta

ltima es potenciada por ranitidina.

Otros efectos sobre el tracto gastrointestinal no estn

todava aclarados. La diarrea o constipacin observadas con

cimetidina o ranitidina pueden ser por afectacin colinrgica

ocasional en ciertos pacientes, sobre todo con ranitidina debido

a una directa o indirecta activacin del sistema colinrgico en

la diarrea, ya que la atropina es inhibidora en administracin

previa. Adems en humanos la administracin de ranitidina en bolo

i.v. causa aumento de tono del esfnter esofgico inferior

efecto colinrgico aumento de la secrecin salivar as como

retraso del vaciamiento gstrico Bertaccini and col. <1983> han

observado en pacientes con gastroparesia idioptica, la formacin

de ondas migratorias en el estmago, tras dar ranitidina, as

29
como un incremento plasmtico de motilina.

En la literatura se han descrito los siguientes efectos

adversos de ranitidina, que pueden ser debidos en parte a

interaccin con el sistema nervioso vegetativo: bradicardia,

hipertensin, cardiopata isqumica, palpitacionesarritmias,

sncope, depresin, vrtigo, somnolencia, fatigacansancio,

irritabilidadmal genio, colapso nervioso, tinitus, colitis,

constipacin, diarrea, dispepsia, epigastralgia, meteorismo,

vmito, sntomas de reflujo gstrico, aumento de creatinina,

rashprurito, alrgia, anafilaxia, astenia, coriza, sequedad de

mucosas, fiebre, cefalea, eritema facial, hipoestesia, aumento

de asma, aumento de presin intraocular, lagrimeo, dolor

muscular, parestesias y sialorrea, entre otras muchas. Hay que

sealar que de los efectos adversos sealados, se han descrito

a veces un solo caso y que de cimetidina hay descritos tambin

ms casos de efectos secundarios y adversos por llevar ms aos

de utilizacin clnica.
En resumen, ranitidina puede ejercer acciones colinrgicas

o anticolinrgicas ocasionalmente, como lo demuestran los efectos

colinrgicos en unas preparaciones como el esfinter esofgico

inferior <Eertaccini and Coruzzi, 1982>, y en otros como msculo

traqueal de cobayo <Re and col., 1983), aunque en el hombre

normalmente no hay aumento del tono del msculo trqueobronquial.

Por ello este efecto colinrgico no es ubicuo, dado que est

completamente ausente en algunos tejidos <Bertaccini and col.,

1981; Daly, 1982>. Tambin se observan efectos de sinergismo o

antagonismo colinrgico segn las condiciones naturales o

farmacolgicas (Re and col., 1983>.

30
 1.5. ACCIONES FARMACOLOGICAS DE LA HISTAMINA. EFECTOS

NEUROMUSCIJLARES .

Aunque considerada como autacoide hasta hace pocos aos, hoy

se le atribuyen funciones tambin como neurotransmisor exclusivo

en neuronas histaminrgicas, as como neuromodulador en la

neurotransmisin de otros sistemas, todava mal conocido por lo

sutil y escasa cuanta. A veces afecta los movimientos del Ca++.

Aunque los efectos neuromusculares de histamina son poco

conocidos, en algunas sinpsis incluidas las colinrgicas se

comporta como neuromodulador <Yamada and col., 1982>, mientras

que en placa motora de rana disminuye la sensibilidad de los

receptores a acetilcolina <Ach) <Scuka, 1973; Otha and col.,1984)

por mecanismo desconocido y puede actuar como antagonista de Ach

en el sitio de unin del complejo receptor nicotnicocanal

inico (Ariyoshi and col., 1985>. El estmulo de los receptores

histaminicos H2 presinpticos puede aumentar o disminuir la

liberacin de Ach de las uniones neuromusculares de rana <Scuka,

1973). Por otro lado, histamina bloquea no solo la unin

especfica al receptor de Ach sino que interacciona con el sitio

del canal de Ach, actuando como un antagonista que modula la

transmisin colinrgica (Ariyoshi and col.,1985). Tambin puede

aumentar o disminuir la liberacin de Ach de las uniones

neuromusculares de rana <Scuka, 1973) . Estos efectos, aunque

parecen ser contrapuestos, es posible que sean debidos a que

histamina puede actuar con funcin moduladora en sitios asociados

con el receptor nicotinico <Ariyhosi and col. 1985),

desconocindose su interaccin con la movilizacin del Ca++

31
citoslico o sarcoplsmico. En clulas miocrdicas histamina

incrementa el turnover de Ca++ <De Mello, 1976). Sobre el

sistema nervioso las vas histaminrgicas tienen efectos de
modulacin crticosubcortical, con acciones sobre hipotlamo

vegetativo.
En placa motora de rata <frnicodiafragma> histamina 100

MM deprima ms el estmulo directo que el indirecto y la

adiccin posterior del antihistaminico H2 ranitidina a dosis

equimolares antagonizaba ms el estimulo directo que el indirecto

(Iglesia, 1986), ello indica que el efecto de histamina no est

relacionado con la liberacin del neurotransmisor acetilcolina

en placa motora y si posiblemente con movimientos de calcio del

retculo endoplsmico. La inhibicin de receptores H1 podra

contribuir a aclarar el problema del mecanismo de accin de la

histamina en placa motora, pero los frmacos que ejercen tal

accin tienen otras propiedades como la accin anestsica local

o gangliopljica que en mayor o menor cuantia enmascaran un

efecto puro sobre receptores ji1. As pyrilamina, prometazina, y

difenhidramina inhiben la accin de Ach a nivel postsinptico

<Katayama and Tasaka, 1985). Tambin histamina deprime la

sensibilidad del los receptores de Ach por mecanismo desconocido
<Scuka, 1973) . Por otro lado, histamina bloquea la unin

irreversible de erabutoxina con el sitio receptor de Ach en placa

motora de rana <Ariyoshi and col., 1985) y para estos autores

histamina bloquea no solo las uniones especificas con Ach sino

tambin con el complejo canalreceptor. Es decir, histamina

compite con acetilcolina. Tambin los efectos musculares de los

antagonistas de receptores ji1 tales como fatiga y laxitud no

32
pueden ser considerados especificos ya que tienen acciones sobre
SNC. Los receptores H3 han sido localizados en neuronas

colinrgicas, no adrenrgicas y no colinrgicas del plexo

mientrico, teniendo un control negativo (inhibicin) de la

liberacin de neurotransmisores <Bertaccin and col., 1991> y

secrecin cida gstrica.

Los receptores H1 se comportan como nociceptores y los

como antinociceptores, siendo activadores de la respuesta al

stress los H1 <se oponen los H2?> . La actividad locomotora est

en relacin con los H2 y sistemas 5HT. Los H1 inhiben conducta

agresiva, que estimulan los Hz. Los H1 disminuyen temperatura

corporal, va hipotlamo anterior, mientras que el estmulo de

los receptores ji2 aumentan la temperatura corporal, si bien la

hipotermia en el ratn causada por histamina, no se inhibe por

antihistamnicos ji, y ji2 <Costetin and col., 1973). Hay efectos

histaminrgicos en SNC sobre conducta, comportamiento, memoria,

aprendizaje, presin arterial, ADH, polarizacin de neuronas y

emesis.
Tambin histamina induce la despolarizacin del ganglio

cervical superior de rata que era antagonizada por mepiramina

<antagonista ji,> pero no por cimetidina (antagonista H2) por lo

que Field and Newberry (1991) concluyen que ello es debido a la

activacin de receptores ~ mientras que con alta concentracin

de histamina tambin causa una rpida despolarizacin pero parece

ser mediada por receptores fi,, fi2 o fi3.

Por otro lado histamina (100 nM 1 mM> deprima de forma

reversible la amplitud mxima de la corriente de entrada inducida

por Ach de forma dosisdependiente; histamina prevena la unin

33
especfica de Ach con el complejo canal receptor, sugiriendo que
histamina puede actuar como un antagonista que modula la

transmisin colinrgica nicotnica en placa motora de rana

(Ariyoshi and col., 1985.).

Tambin histamina se comporta como un potente secretor de

pentapptidos (met y leuencefalina) en clulas cromafines

suprarenales in vitro, efecto dependiente del Ca++ extracelular

y reducido por bloqueantes de canales de calcio tales como

cobalto, D600 y nifedipina, siendo antgonizado por el H1

antagonista clemastina, mientas que los antagonistas H2

ranitidina y cimetidina eran un 20 % menos efectivos (Bommer and

col., 1987).

A nivel vascular produce dilatacin arterial, con

hipotensin y disminucin de la presin arterial sistlica y

diastlica. Tambin causa dilatacin capilar y aumento de la

permeabilidad capilar con edema.

El corazn aumenta de fuerza y frecuencia de contraccin por

histamina, siendo posible la disminucin dromotrpica en nodo

AV, al igual que en determinadas circunstancias estimula la

liberacin de noradrenalina, quizs por aumento presinptico del

mf lux de Ca++.

En SNC la histamina aumenta la presin arterial y la

frecuencia cardaca, va hipotlamo anterior.

En aparato digestivo, aumenta secreciones salivar, gstrica,

pancretica e intestinal. El aumento de secrecin gstrica es

interdependiente con gastrina, acetilcolina, prastaglandinas y

somatostatina.

El aparato respiratorio puede presentar broncoconstriccin

34
y aumento de secreciones por histamina. El efecto

broncoconstrictor est mediado por receptores fi1 y el aumento de

permeabilildad por receptores ji2 <Braude and col., 1984).

Otros efectos de la histamina son menos concidos o

importantes. As relaja tero de rata, que es contrado por

ranitidina por efecto de tipo colinrgico. Tambin presenta

acciones sobre linfocitos T y B, acciones inmunitarias, etc.

1.6. ACCIONES NEUROMtJSCULARES DE LOS ANTIHISTAMINICOS fi,.

El antihistaminico Hz ranitidina ejerce efectos no

relacionados con el antagonismo de receptores E2 ya que posee

acciones sobre receptores colinrgicos <Daly, 1982; Re and col.

1983), bien de estmulo colinrgico (Bertaccini and Coruzzi,

1.981 y 1.983), bien de inhibicin colinrgica (Bradshaw and

col., 1.979, Bertaccini and Coruzzi,1981, Re and col 1.983>. Por

eso no es de estraar que haya acciones descritas aparentemente

contrapuestas de este frmaco en placa motora, dependiendo del

protocolo experimental. En msculo estriado tiene acciones tanto

de bloquo neuromuscular ((Galatulas and col. 1980; Gwee and

Cheah, 1986> como de estmulo contrctil <Re and col., 1.983;

Re and Rossini, 1.984). Las acciones contrctiles en msculo

estriado seran por inhibicin de colinesterasa e incremento en

35
placa motora de los niveles de acetilcolina.
Por otro lado, aunque ranitidina tambin potenciaba la
respuesta a Ach en el tero de rata <Poli and col., 1984),

msculo abdominal aislado de sapo <Cheah aud col., 1985) e leo

de cobayo <Kouneis and col., 1986>, estas acciones pueden no ser

colinrgicas y ser mediadas por movimiento de Ca++ libre, etc.

1.7. ACCIONES EN PLACA MOTORA DE LOS BLOOLJEANTES

NEUROMUSCULARES COMPETITIVOS .

La ocupacin reversible de receptores de Ach en placa motora

es la accin farmacolgica fundamental de los agentes que

producen selectivamente parlisis muscular duradera. La anulacin

del ttanos <50 Hz durante 5 s. por ejemplo> y la disminucin a

bajas dosis y anulacin a dosis mayores del tren de a cuatro

<TOP) derivan de lo anterior.

Los bloqueantes neuromusculares competitivos no modifican

la corriente que fluye a travs de cada canal ni altera el tiempo

de apertura media de un canal, si bien reducen la frecuencia de

apertura en placa motora, y por ello acetilco3.ina es capaz de

combinarse con los mismos receptores competitivamente, ya que

estos compuestos actan de forma reversible y si la densidad de

acetilcolina se incrementa localmente por inhibicin de

colinesterasa, los receptores no bloqueados se activan y se

36
desplaza al bloqueante neuromuscular de los receptores comunes.
Slo abungarotoxina es de unin irreversible con receptores
nicotnicos en placa motora. La duracin de accin es un indice

de la reversibilidad del bloqueo de receptores, aunque tambin

intervienen otros factores. El incremento de potasio extracelular

disminuye la sensibilidad al bloqueo competitivo. Paralelamente,

a mayor concentracin de calcio menor despolarizacin por

acetilcolina (Waud and Waud, 1980) y menor afinidad de d

tubocurarina por el receptor nicotnico <Jenkinson, 1960)

El estandar de referencia del bloqueo neuromuscular se hace

in vitro mediante la valoracin de la contracin realizada con

estmulos de 0.2 Hz de duracin y de intensidad supramaximal. As

por ej. el 50 % del bloqueo neuromuscular se refiere al 50 % de

reduccin el la altura de la contraccin a un estmulo simple.

Este no deber estar condicionado por otros factores tales como

el que est precedido por un ttanos o trenes de estmulos, ya

que su altura real se modificara. Los trenes de estmulos de 50

Hz durante 5 s. tienen tambin un efecto depresor de la

contraccin cuando se dan relajantes musculares competitivos y

son una forma ms de valorar el grado de curarizacin. Por

ltimo, el anlisis del tren de a cuatro <train of four, TOP),

de cuatro estmulos durante 2 s y 2 Hz de frecuencia constituye

una valiosa ayuda para conocer el grado de relajacin muscular

y reversibilidad del bloqueo. El anlisis de la ratios

<cocientes> entre los cuatro impulsos nos da informacin de la

altura del mismo y la evolucin con cada dosis de frmaco. En
trminos generales, los frmacos bloqueantes y depresores

neuromusculares causan un gradiente del TOP decreciente, mientras

31
que los frmacos ionforos de calcio producen gradiente del TOF
creciente y causan incremento contrctil muscular. Los

anticolinestersicos causan incremento contrctil y siempre

causan gradiente del TOF decreciente aunque aumentado de altura.

Atracurio como nuevo bloqueante neuromuscular competitivo

supone un gran avance hacia el relajante muscular ideal por su

escasa acumulacin, as como la latencia, la corta duracin de

accin y la rapidez, que le hacen equiparable a pancuronio y

vecuronio <Gramstad and col. 1983), teniendo un amplio margen

entre la dosis relajante y la que causa otros efectos <Hughes and

Chapple, 1981>. Presenta eliminacin Hofmann, dependiente de la

temperatura corporal y el pH as como hidrlisis estrica (Neil

et al., 1983>, lo que dificulta su posible acumulacin.

1.8. ACCIONES NEUROMUSCULARES DEL LOS FARNACOS

ANTICOLINESTERASICOS .

Los frmacos anticolinestersicos incrementan la fuerza

contrctil del msculo estriado al inhibir colinesterasa

verdadera y aumento subsiguiente de los niveles de acetilcolina

en placa motora (Bowman, 1980). Neostigmina es un frmaco

anticurare en base a su accin anticolinesterasa <para revisin

ver Cronnelly and Morris, 1982> y su accin contrctil de

neostigmina est en relacin con la concentracin plasmtica y

la inhibicin de colinesterasa (Cronnelly and Morris, 1982)

Neostigmina tiene tambin efectos directos en placa motora no

relacionados con la actividad anticolinesterasa (Fickers,

1985)

38
 Ranitidina tiene tambin actividad anticolinesterasa <Hansen
and Bert, 1983; Gall and col. 1984>, por lo que el incremento

de acetilcolina puede explicar sus efectos sobre msculo estriado

<Galatulas and col. 1980; Re and col. 1983).

Los agentes anticolinestersicos aumentan la respuesta al

estmulo simple, causando por el contrario una rpida anulacin

del ttanos <inhibicin Wedensky), por estmulos a altas

frecuencias <Morrison, 1977; Hedfron & Hobbinger, 1979, Clark &

Hobbinger, 1983, Clark and col. 1983; 1984).

La elevacin continuada o crnica de los niveles de

acetilcolina en placa motora puede disminuir la sensibilidad de

los receptores a la misma (Gwilt & Wray, 1986>, as como una

disminucin de receptores a abungarotoxina <Chang and col.,

1973). Es decir, en un exceso crnico de acetilcolina puede

causar una adaptativa reduccin en la carga pasada por un nico

canal junto con una reduccin en el nmero de AChRs en placa

motora; estando la frecuencia de apertura de canales reducida

<Gwilt & Wray, 1986>. Por el contrario, en la denervacin hay un

dficit crnico de acetilcolina, incrementndose los receptores

(Axelson & Theslef, 1959; Miledi, 1960> as como el tiempo de

apertura de los canales <Wray, 1980>, que origina un aumento del

flujo de iones a travs de tales canales, produciendo un

incremento de la despolarizacin producida por la apertura de un

canal simple (Katz & Miledi, 1972>. Todos estos cambios son
modulativos, ya que tienden a amortiguar y adaptarse al

incremento o disminucin de acetilcolina. Neostigmina tambin

tiene efecto aditivo con Ach por accin estimulante nicotnica

directa (Ricker and Wescoe, 1946).

39
 El gradiente del tren de a cuatro train of four (TOP) es

un ndice tanto del grado de curarizacin <Waud and Waud, 1972)

como de la recuperacin del bloqueo neuromuscular (Ah and col.,

1981), as como de la sensibilidad postsinptica <Lee, 1975). La

depresin del tren de a cuatro, train of four <TOP> fadet y

del ttanos, tetanic fade tambin son ndices tanto del grado

de curarizacin <Waud & Waud, 1972) como de la recuperacin del

bloqueo neuromuscular <Ah & col., 1981>. La disminucin del

latido twitch y del ttanos se produce en el bloqueo

postsinptico de los colinoceptores <Bowtnan, 1980>. La

potenciacin posttetnica (PTP) es un incremento transitorio de

la respuesta al estmulo simple que sigue a la estimulacin

repetitiva del nervio (Hughes, 1958)

El tren de a cuatro <TOP> permitir conocer el grado de

ocupacin de receptores en placa motora y en unin del ttanos

dara ms informacin que las respuestas al estmulo simple

(Bowman, 1980) . La facilitacin postetnica varia con los

frmacos empleados.

1.9. EFECTOS NEUROMUSCULARES DE LOS CAMBIOS IONICOS EN

PLACA MOTORA.

Todos los frmacos que actan sobre membranas excitables,

se puede modificar su accin por cambios en la concentracin

inica. As, a nivel de placa motora los cambios inicos producen

modificaciones electrofisiolgicas. El exceso de potasio en el

medio nutricio disminuye el potencial de membrana (Katz, 1966;

Asai and col., 1982> tambin incrementa a nivel presinptico

40

tanto la frecuencia de potenciales miniatura de placa (Ginsburg

and Jenkinson, 1976) como la cantidad de transmisor liberado <Van

der 1<100<, 1978). El incremento en el medio de potasio tiene un

efecto despolarizante en nervio y msculo. No obstante, un exceso

de potasio extracelular inactiva la liberacin de calcio del

retculo sarcoplsmico del msculo estriado por despolarizacin

de la membrana <Bowman, 198Va> En nuestros resultados tambin

se observ un aumento de la fuerza contrctil muscular

incrementando la concentracin de potasio en e]. liquido nutricio.

La liberacin de Ach en placa motora es tambin dependiente

de la concentracin de Ca++ y Mg++ extracelular (Bowman, 1980a>

de la siguiente forma: a> el aumento de la concentracin de

calcio aumenta la liberacin de Ach; b> la disminucin de la

concentracin de magnesio aumenta la liberacin de Ach <Hubbard

and col., 1968) y c> viceversa, disminuyendo (Ca+-i-]o o aumentando

[Mg++]o disminuye la cantidad de aceticolina liberada (Bowman,

198Va>, ya que la liberacin espontr~ea del neurotransmisor en

la unin neuromuscular es parcialmente dependiente del calcio

extracelular <Elmqvist and Felman, 1965) . El calcio a nivel

postsinptico disminuye el grado de despolarizacin producido por

acetilcolina (Ginsburg ana JenJcinson, 1916), altera la afinidad

del receptor por tubocurarina (Jenkinson, 1960), mientras que a

nivel presinptico puede incrementar la liberacin de Ach si se

incrementa la concentracin de calcio <Katz and Miledi, 1965)

A nivel postsinptico los iones de calcio aumentan el umbral

de excitabilidad de la membrana <Eowman and Rand, 1980), se

disminuye la permeabilidad al sodio y desencadena la

despolarizacin postsinptica.

41
 En la contraccin muscular tambin el calcio juega un papel
importante ya que inactiva la proteina inhibidora troponina y

activa la ATPasa, que produce la energa para las uniones entre

actina y miosina (Braunwald, 1982). Con la liberacin de calcio

del retculo sarcoplsmico se incrementa el calcio activo para

causar la contraccin, mientras que el calcio externo que penetra

en la clula no causa contraccin muscular aunque aumenta la

cantidad de calcio activo en el retculo sarcoplsmico <Nicola

Sin and col., 1980).

1.10. ACCIONES NEUROMUSCULARES DE LOS INHIBIDORES DEL

ENZIMA CONVERTIDOR DE ANGIOTENSINA.

La literatura sobre los efectos en placa motora de los

inhibidores del enzima convertidor de angiotensina es muy escasa.

Los inhibidores del enzima convertidor de angiotensina (ECA) como

captopril disminuyen la presin arterial por bloqueo perifrico

de la formacin de angiotensina II <Sweet and col., 1983).

Asimismo, la literatura sobre los efectos de captopril en msculo

estriado es limitada, principalmente porque carece de efecto

manifiesto sobre la contraccin in vitro, aunque potencia el

sistema prostaglandina kinina kalikreina, (Matsumo and col.

1986) . Por otro lado, ECA es idntico con kininasa II y la

reduccin de su actividad por un inhibidor de ECA puede no

slo disminuir la concentracin de angiotensina II sino tambin

elevar los niveles de kininas <Dietze, 1987>. Angiotensina II

42

 incrementa la liberacin de acetilcolina (Ach> y tiene accin

contrctil en msculo esqueltico (Wali, 1986>.

Tanto captopril como enalapril no causan efectos

contrctiles manifiestos en msculo de rata (Matsumo, 1986), no

obstante captopril interfiere con la transmisin adrenrgica

(Antoniaccio and Rervin, 1981) y angiotensina II en bajas dosis

incrementa el flujo de noradrenalina (Ziminerman and Gisslen,

1968) . Puesto que las aminas simpaticomimticas mejoran la

contraccin muscular <Bowman 1980), por este doble mecanismo

es posible que la contraccin muscular sea afectada. Tambin hay

que tener en cuenta que angiotensina puede facilitar la

neurotransmisin colinrgica <Brown and col., 1980; Wali, 1983>.

Angiotensina II aumenta la transmisin neuromuscular y la

contraccin por mecanismo pre y postsinptico (Walt 1985).

1.11. ACCIONES NIEUROMUSCULARES DE LOS PARMACOS CALCIO

ANTAGONISTAS.

Los bloqueantes de canales lentos de calcio tienen acciones

sobre musculatura lisa, estriada, cardaca, neuronas y SNC. En

la dcada actual (1990) existe tal cantidad de frmacos activos

sobre los canales de calcio que se precisa hacer un breve resumen

de estos canales inicos as como de los diferentes tipos de

calcioantagonistas. Recientemente se han clasificado (Sppeding

and Paoletti, 1992> y ello ha permitido el anlisis de los

43

diferentes tipos de canales inicos especficos de calcio como

sigue:
1. Canales voltajedependientes Ca++selectivos:
Tipo L (subtipos Li, 2, 3 y 4; subunidades a1,
a2, B, z y 8).
Tipo T
Tipo N
Tipo P
2. Otros canales calcioselectivos:
Canales de liberacin de Ca++ en retculo sarcoplsmico.
Canales de Ca++ receptoroperativos.
Tambin existen a nivel de placa motora otros canales
inicos especficos de Na+, K+, etc.

Sobre este tipo de canales actan de forma selectiva o ms

preferentemente los diferentes tipos de calcioantagonistas,

segn se resumen a continuacin:

1. Compuestos con unin selectiva a sitios de canales de

tipo L:
a. Sitio de dihidropiridinas (DHP): nifedipina <protipo>,
nicardipina, etc. Es grupo muy numeroso y de alto uso clnico.
b. Sitio de benzotiazepinas: diltiazem.
c. Sitio de fenilalquilaminas: verapamil, gallopavil, etc.
2. Agentes que actan sobre otros canales de calcio voltaje
dependientes:
Canales T: flunarizina
Canales N: conotoxina
Canales P: agatoxina
3. Moduladores de canales de calcio no selectivos:
fendilina, cinarizina, flunarizina, etc.
4. Otros frmacos activos en canales calcioselectivos:
1> Canales de liberacin de Ca++ en RS: ryanodina.
II) Canales receptoroperativos:
a. Canales de a.a. excitatorios.
b. Canales de angiotensina.
c. Canales de aadrenoreceptores.
d. Canales de nucletidos/nuclesidos.

Los frmacos de los grupos 1 y 2 son voltajedependientes.

Los canales tipo L (de long, lasting> son abundantes en msculo

estriado y dentro de estos cabe destacar la subunidad a1 que es

homloga en un 55 % con la estructura del canal de Na+ y esto

explicara la doble afinidad por ambos de algunos frmacos (Grima

and col., 1986). Los canales tipo T (de trasient) de actividad

44
marcapasos en algunos tejidos, se han localizado tambin en
neuronas. Por otro lado, los canales tipo N <de neuronal, ni L
ni T) estn asociados a liberacin de neurotransmisor. Todos

ellos son los que ms interesan a nivel neuromuscular, si bien

son solo un anticipo que se alargar en el futuro. Estaran

excluidos de la zona neuromuscular los canales tipo P (de
Purkinje) ubicados en el cerebelo.
En las membranas ttubulares del msculo esqueltico se ha

observado que son una fuente rica en sitios de unin de

dihidropiridinas <Foset and col., 1983; Schwartz and Triggle,

1984) y se han llegado a purificar macromolculas asociadas con

el canal de Ca++ usando nitrendipina <Glossman and col., 1983).

La corriente ICa++ se ha estudiado en msculo de rana <Almers and

Palade, 1981), as como en msculo de rata <Danaldson and Beam,

1983) . Aunque abundan los receptores de canales de calcio en

msculo estriado <membranas, tbulos T y retculo sarcoplsmico

principalmente>, algunas DHPs como nitrendipina carecen de efecto

a este nivel (Whalsh and col., 1986>. Por otro lado, la fijacin

en el receptor de DHP no supone su inactivacin aparentemente.

El receptor de Ca++ ha sido estudiado y al mismo habra una unin

alostrica y estereoespecfica para verapamil, diltiazem y DHP.

Los tres tipos tiene una zona comn y por otra son

complementarios (Glasman and col., 1985). El hecho de que algunas

DHP no sean activas en msculo estriado se ha explicado que ello

sera debido al actuar sobre receptores silentes en determinadas

condiciones experimentales e incluso subtipo de canales de calcio

DHPinsensibles (Wlahs and col., 1986). Lo cierto es que todos

los frmacos calcioantagonistas son muy liposolubles y se fijan

45
en membranas, tbulos T, etc. Las DHPs causan en general

vasodilatacin en el msculo, por lo que por un lado antagonizan,

por otro es posible sea contrarestado con un mayor aporte de

calcio. Verapamil y diltiazem son dos representantes tipicos con

efectos neuromusculares y con mayor literatura en este campo.

Mientras que qumicamente nifedipina es una 1,4

dihidropiridina, verapamil es un anlogo de papaverina y

diltiazem una benzotiazepina, difieren bastante, comparten

similares acciones farmacolgicas y mecanismo de accin.

Desde 1969 se pudo interferir selectivamente sobre las

corrientes transmembrana de Ca++ y de Na+ y con ello un mejor

estudio de los inhibidores de las corrientes de entrada de

calcio. Obviamente los primeros estudios fueron a nivel cardaco

y fibra lisa vascular. Los calcioantagonistas en placa motora

bloquean la entrada de calcio a travs de los canales lentos del

msculo esqueltico y causan relajacin muscular. A nivel

muscular existen acciones de los calcioantagonistas a nivel

presinptico y postsinptico. A nivel presinptico se libera

acetilcolina en pequeas proporciones que no activan el proceso

contrctil, pero dejan cierto estado de despolarizacin y

producen unas deflexiones pequeas, de bajo voltaje los llamados

m.e.p.ps. La frecuencia de estos minipotenciales depende de la

concentracin de Ca++ axoplxmica y puede modificarse con

variacin de la temperatura y frmacos. En reposo la mayora de

los canales de Ca++ estn cerrados y en actividad o por estmulo

elctrico pasan a estar abiertos. El potencial de accin

postsinptico se produce por liberacin de acetilcolina en mayor

concentracin en la terminacin nerviosa. El calcio juega un

46
papel muy importante en este evento. As, la amplitud de los
potenciales de accin se modifica por la concentracin externa
de calcio y no se afecta por tetrodotoxina, inhibidor selectivo

de la entrada de sodio, en cambio el manganeso y magnesio lo

antagonizan de forma competitiva. Es decir, los antagonistas de

calcio es posible que ejerzan acciones a nivel pre y

postsinptico ya que hay potenciales de accin mediados por

calcio a nivel postsinptico (Snchez and Stefani, 1978: y a

nivel presinptico (Katz and Miled, 1969; Balcer and col., 1971).
En reposo muscular no est aclarado si verapamil reduce el

influx pasivo de calcio entre el gradiente de concentracin

intracelular 01 mol/litro y el extracelular de 2.54 mmol/litro.

El verapamil a concentracin alta, mayor de 1W M tambin causa

aumento de la frecuencia de los potenciales miniatura (Publicover

and Duncan, 1979).

Verapamil disminuye de forma dosis dependiente la amplitud

de los potenciales de accin en msculo sartorio de rana en medio

nutricio con potasio alto y sin cloro y sodio, revirtiendo en

parte en medio con incremento de calcio (Kerr and Sperelakis,

1982>. Los autores encuentran efectos dispares de verapamil. En

trminos generales a dosis bajas causa disminucin de la

contraccin (Lawson and col., 1983; Kraynack and col., 1983> y

a dosis altas incremento contrctil (Sato and Ono, 1981>, quizs

por incremento de salida de calcio del retculo sarcoplsmico

<Bondi, 1978>

Verapamil y diltiazen bloquean la transmisin neuromuscular

en el ratn solo a concentracin alta, mayor o igual a 100 micro

14, desapareciendo el potencial de placa <e.p.p.> con estmulos

4.7
a 0.1 Hz, mientras que a 100 Hz el bloqueo de msculo y nervio
era a concentraciones menores de 10 micro M; si la transmisin
neuromuscular se reduce por Dtobocurarina o incrementando el

Mg++ y disminuyendo el Ca++ del medio nutricio, se produce una

disminucin de la contraccin por verapamil o diltiazem por un
mecanismo de inhibicin de la liberacin del neurotransmisor

(Chang and col., 1988). Por otro lado, la cantidad de calcio

liberado del retculo sarcoplsmico (RS> por 4aminopiridina <4

AP), un inhibidor de los canales de KRS, no era afectado por

verapamil a dosis 20 pH <Fink and Stefenson, 1987>.

Nifedipina y diltiazen potencian el bloqueo neuromuscular

de los relajantes musculares, sin que el incremento de calcio en

el medio nutricio tenga efecto reversal y postulando su efecto

debido a bloqueo del mf lux de calcio y a la liberacin de

acetilcolina <Wali, 1986>.

En diafragma de rata verapamil causa incremento contrctil

seguido de depresin, que no es revertido por incremento de

calcio (Varagic and Kentera, 1978; Bilkhazi and col., 1985). En

msculo de gato puede o aumentar la contraccin (Skirboll and

col., 1979>, o disminuirla (Krainck and col., 1983>, dependiendo

del protocolo experimental. Por otra parte se ha sugerido que

verapamil y nifedipina incrementan la actividad bloqueante

neuromuscular de frmacos bloqueantes neuromusculares no

despolarizantes (Bikhazi and col., 1982; Kraynack and col.,

1982>

48
 1.12. PLANTEAMIENTO Y OBJETIVOS.

El propsito fundamental de esta tesis era hacer un amplio

estudio de las acciones nicotnicas en placa motora de algunos

antihistaminicos H2, de los cuales haba una literatura escasa.

Previamente se ensay con cimetidina, ranitidina y famotidina.

La preparacin frnicodiafragma de rata result tambin muy

til, ya que era muy sensible a ranitidina. Esta misma

preparacin era poco sensible a ranitidina en el cobayo. De los

parmetros de estudio, el estmulo indirecto era el principal ya

que remeda el estmulo fisiolgico; el estmulo directo al

msculo tambin permita conocer los efectos musculares,

excluyendo tericamente la neurotransmisin. Los trenes de

impulsos estandarizados son tambin unos valiosos parmetros de

valoracin indirecta de la contraccin muscular, por la diferente

y a veces especfica modificacin farmacolgica. El tren de a

cuatro cuatro impulsos acoplados de frecuencia 2 Hz. y duracin

2 5. (TOF) y el ttanos de 50 Hz durante 5 s. eran utilizables

con este fin, si bien el ttanos era suprimido en algunos

protocolos cuando o bien no era modificado por diferentes

concentraciones de frmaco o bien la repeticin excesiva y

reiterada causaba per se efectos negativos sobre la contraccin.

Cuando se realiz el ttanos se valor la potenciacin

postetnica que era otro medida muy til en el anlisis del

frmaco. Naturalmente estudios que
electrofisiolgicos,
5 radiactivo, etc. hubiera
histoquimicos, cintica de Ca
permitido ampliar ms los conocimientos de estos frmacos, pero
ello excedera en el tiempo y en medios materiales.

49

 Conocida la accin contractil de ranitidina se plante si

tendra un origen colinrgico de tipo nicotnico o bien mediado

por Ca++. Con este motivo, se modificaron por un lado las

concentraciones de Ca++, Mg++ y X+ del lquido nutricio,

modificando la despolarizacin del nervio y/o msculo, asi como

la liberacin del neurotransmisor acetilcolina y por otro lado

se utilizaron dos tipos de calcioantagonistas: verapamil y
diltiazem.

Pensando en la posibilidad de que captopril, inhibidor del

enzima convertidor de angiotensina, presentara efectos de tipo

calcioantagonista inespecificos en placa motora, tambin se

emple para conocer el modo en que afectaba la accin de

ranitidina.

Por otra parte, los efectos colinrgicos de algunos

antihistamnicos como ranitidina descritos en diferentes

preparaciones se fundamentan en la inhibicin de colinesterasa.

El enzima colinesterasa y el receptor de Ach es conocido que

tienen similitud estructural como cabria esperar por tener un

sustrato comn fisiolgicamente. El inhibidor prototipo es

neostigmina. Por esta razn un anlisis comparativo de ranitidina

y neostigmina permitira conocer si este antihistamnico tena

~~<2

acciones de este tipo y cuantificables en esta preparacin. Estos

dos frmacos se ensayaron con curvas dosisrespuesta y con dosis

ptimas solos y en asociacin. Tambin si ranitidina tena

acciones de inhibicin de colinesterasa, tendra acciones

anticurare, por lo que con este fin fue tambin comparado su

efecto con neostigmina.

En Medicina son mltiples los campos de aplicacin de los

50
antihistamnicos ji
2, adems del principal gastroenterolgico. En

Anestesiologa, Cuidados intensivos, Medicina interna, etc., se

utilizan asiduamente y los efectos clnicos adversos observados

no siempre han tenido una explicacin satisfactoria. Es ms, los

efectos contrapuestos que se observan dependen de la dosis

inhiben o activan enzimas y del animal y rgano estudiado. Sirva

esta tesis como pequea aportacin para aclarar algunas acciones

y abra nuevas perspectivas para el futuro

51
II. MATERIAL Y METODOS
 II. MATERIAL Y METODOS.

A> MATERIALES.

1. ANIMALES.

En nuestros experimentos hemos utilizado ratas de ambos

sexos SPRAGUE DAWLEY de un peso comprendido entre 220 a 310 grs.

2. APARATOS.

a> CoDa y circuito

Para bao de rganos se utilizaron copas de Alhin de 145

ml de capacidad, de vidrio con una doble pared, por cuyo interior

circulaba agua caliente que se mantena a una temperatura

constante de 36~ C en todo su recorrido, por medio de un Ultra

Thermostat 1<5 Cobra que actuaba como bomba y termostato a la

vez. La copa tena tambin un orificio lateral inferior por

donde entraba la solucin nutricia y otro en la parte lateral

superior por donde rebosaba dicho liquido nutricio y permita el

lavado de las preparaciones. Este liquido de perfusin antes de

llegar a la copa pasaba por un serpentn por el que circulaba el

agua caliente del circuito termosttico y de este modo las

preparaciones no se afectaban por las diferencias de temperatura.

Por la parte inferior tenan un tapn con membrana porosa para

53

.
 la oxigenacin de la preparacin mediante la mezcla carbgena.

b> Electrodos y sistema de estimulacin

fin electrodo especial en forma de L, serva de soporte de

la preparacin, as como aplicar estmulos elctricos

indistintamente al nervio frnico o al msculo diafragma. En este

ltimo caso, con un electrodo adicional en forma de gancho se

insertaba en el msculo diafragma. Mediante un dispositivo de

acero inoxidable en forma de pinza, por su parte inferior se

sujetaba el msculo diafragma en su porcin osteocartilaginosa,

mientras que la porcin fibrosa era sustentada con un hilo a un

transducer fuerza desplazamiento. Por la parte superior de este

electrodo eran conectados los correspondientes electrodos,
procedentes del estimulador Grass 509.

o) Sistema de registro

El registro de la fuerza contrctil y de la frecuencia de

estimulacin se realizaba mediante un polgrafo UGOBASILE de

un canal conectado a un tansducer UGOBASILE. El polgrafo

permita un registro de la contraccin y del tiempo segn la

velocidad del papel.

54

.
 G

12

A c

Fig. Al.- Copa de Alhin y electrodo especial

(T> para la preparacin frnicodiafragma. El liquido
nutricio entra por la parte inferior (E) regulado por
una llave de paso, pernitiendo tambin el lavado del
rgano y saliendo por rebosamiento (B) . Por la copa
de doble pared recircula agua a temperatura prefijada
(C y D). La oxigenacin se hace a travs de una
membrana microporosa (F> . La preparacin se ata a un
hilo (G) para el registro contrctil isotnico. De un
estimulador salen impulsos bien al nervio (1 y 2),
bien al msculo (3 y 4).
 3. LIQUIDO NUTRICIO.

Como lquido nutricio se utiliz solucin Tyrode, con la

siguiente composicin expresada en gramos y milimoles por litro

respectivamente:
CNa 8 g/l. 136.0 mM

Cl2Mg. 6 ~~2o <im al 10%) 0.1 g/l. 1.05 mM

ClIC 0.2 gIl. 2.7 mM

Cl2Ca <20 ml al 10%> 2 gIl. 1.8 mM

PO4H2Na 0.05 gIl. 0.42 mM

CO3HNa 1 g/l 11.9 mM

Glucosa 2 g/l. 11.0 mM.

Se aada agua desionizada y bidestilada hasta completar

1.000 ml.

4. OXIGENACION.

Era mediante una mezcla carbgena cuya composicin

porcentual es la siguiente:

Oxigeno 94.9 U
Anhdrido carbnico 5.1 %.

La oxigenacin se hacia mediante burbujeo continuo de la

mezcla carbgena sobre el lquido nutricio, a travs de una

membrana microporosa, situada en la parte inferior de la copa de

ALLHIN.

55
 B> METODO EXPERIMENTAL.

Se utilizaron ratas de raza SpragueDawley, de ambos sexos,

de peso entre 220 y 310 gr., a las que tras decapitacin y

sangrado previo, se procedi a la diseccin de una porcin

triangular del msculo diafragma y el nervio frnico

correspondiente, segn el mtodo de Bulbring <1.946). La

preparacin se mont en un bao de rganos de 140 ml conteniendo

solucin Tyrode. Las variaciones de [K+]o, [Mg++]o y [Ca++]o se

hicieron sin modificar la (Na+]o.

La oxigenacin se baca con 95% 02 y 5% C02 manteniendo

el lquido nutricio a 36~ C y pH 7.4. El ajuste de la tensin

basal era a 2 gr. y se realizaba por medio de un hilo que se

ataba por un lado al vrtice del msculo y por otro al transducer

UgoBasile. Las contracciones isomtricas se registraron por

medio de un polgrafo UgoBasile. Mediante electrodos bipolares

de platino se aplicaban estmulos elctricos rectangulares tanto

al nervio frnico como al msculo diafragma. El voltaje en los

estmulos indirectos era supramaximal, mientras que en los

estmulos directos al diafragma se incrementaba hasta alcanzar

la mxima altura de los estmulos indirectos. En ambos casos la

frecuencia era 0.16 Hz y duracin 0.2 ms. Cada experimento se

dejaba estabilizar unos 30 mm., antes del comienzo de la

adiccin al bao de uno o ms frmacos, cuyo efecto mximo servia

para obtener las curvas concentracin acumulativasrespuestas,

en las que cada punto representaba la media e.s.m. de al menos

6 experimentos.

La valoracin de la accin de cada frmaco era cuando

56
alcanzaba el efecto mximo aadido al lquido nutricio, excepto

en el bloqueo neuromuscular competitivo ya que la transmisin

neuromuscular era parcialmente bloqueada por la adicin al

lquido nutricio de 8 MM de atracurio y la depresin contrctil

cuando alcanzaba los 15 mm. se proceda a poner los frmacos

anticurricos.

La latencia de un frmaco era el tiempo desde su adiccin

al bao y el comienzo de su accin contrctil. En esta

preparacin no fue posible hacer una curva con dosis acumulativas

de neostigmina hasta obtener un efecto mximo, ya que cuando

haba respuesta con dosis mnimas esta era mxima. Las

contracciones inducidas por los frmacos eran expresadas como

porcentaje de la respuesta basal o control, sin frmacos en la

misma preparacin. En la curvadosis respuesta, la concentracin

que produca un efecto del 50 % del efecto mximo (Emax> era la

CE5O, mientras que la concentracin que causaba el 50 % del

decremento mximo era la CISO. Todos los resultados de esta tesis

estn expuestos como la media e.s.m. Cada preparacin era

expuesta una sola vez al test de los frmacos. Las

concentraciones de los frmacos eran expresadas como

concentracin molar final en bao.

Los estmulos del tren de a cuatro train of four (TOP>

eran conducidos a una frecuencia de 2 Hz, duracin del tren 2

sec. (0.5 sec. entre cada estimulo) y repetidos cada 10 sec. En

el ttanos la frecuencia de estimulacin era de 50 Hz durante 5

sec. La potenciacin posttanica <PTT) era tambin estudiada en

algunos protocolos. El valor del % de potenciacin postetnica

<% FTP> se haca con la frmula: % PTP = (PTT X 100)IT 100

57
donde T era el valor de la contraccin por estimulo indirecto.

C> FARMACOS EMPLEADOS.

Los frmacos empleados fueron:

Ranitidina <Glaxo>,

Atracurium besilate (Wellcome),

Neostigmine metilsulfonate <prostigmine, Roche>.

Captopril <Squibb>.
Verapamil (Knoll>

Diltiazem <ParkeDavis)

Las soluciones de estos frmacos eran preparadas

inmediatamente antes de su uso en agua desionizada y las

diluciones en solucin Tyrode.

D> ANALISIS ESTADSTICO.

Se us el test de la t de Student para probar el significado

estadistico entre la altura contrctil en el control estable y

los efectos mximos resultantes tras cada frmaco. Las

diferencias entre medias eran consideradas significativas para

valores de P menores de 0.05 y datos no apareados.

58
III. RESULTADOS
III. RESULTADOS

1> EFECTO DE LOS CAMBIOS INICOS SOBRE LA ACCIN CONTRACTIL

DE IIANITIDINA EN LA PREPARACIN FRENICO-DIAFRAGMA DE

RATA.-

1.1> Accin contrctil de ranitidina en solucin Tvrode

La accin de ranitidina en un rango de concentracin entre

20 MM 1 mM sobre la contraccin diafragmtica en solucin

Tyrode normal se muestran en hg. C1. El comienzo de la accin

contrctil era con dosis 20 pH, alcanzando una altura contrctil

mxima con dosis 1 mM, de 270.012.6 % con estimulo indirecto

y de 257.511.6 % con estimulo directo. Cada dosis tena un

efecto instantneo y altura mxima en unos 10 mm. La

concentracin de ranitidina que causaba el 50 por ciento del

efecto mximo en cada CDR era la CE50 (tabla CI>. Tambin en

esta tabla se representa la concentracin que causaba el efecto

mximo (Emax.>. En la tabla CII se nuestra el % de la altura

contrctil basal sin frmacos en solucin Tyrode con

variaciones jnicas, comparativamente con la altura contrctil

basal (valor 100.0) en solucin Tyrode normal.

60
 T a b 1 a CI

Anlisis comparativo de la CE50 y Emax en la curva dosis

respuesta de ranitidina variando los iones del medio nutricio,
en preparaciones frnicodiafragma de rata directa <SD) e
indirectamente <SI) estimuladas.

SI SD

Emax
Solucin Tyrode Emax CE 5M) (H)
(X1ORM) (M) (x10
Normal 2.40.3 o3 3.2+0.4
K+ 5.4 mM 4.80.2 o3 5.00.3
K+ 8.1 mM 1.20.1 4x105 1.60.1 4x105
Mg++ O mM 3.20.4 3.00.3 arn3
Mg++ 6 mM 5.50.3 4.50.2
Mg++ 12 mM 5.90.3 5.80.2
Ca++0.45 mM 3.50.5 8x105 3.40.3 8x10.s
Ca++0.90 mM 5.10.4 10~ 5.10.3 10~
Ca++3.6 mM 4.00.1 4.00.2 rn3
Ca++0. 6m14Mg++6mM 75.00. lo-3 63.00.1* o3
* concentracin inhibitoria 50 (CI>
0) . Todos los valores eran
la media e.s.m. de 6 experimentos. Notese el paralelismo de la
altura contrctil en la curva dosisrespuesta de ranitidina a los
estmulos indirecto y directo.

1.2) Efecto del K+ sobre la accin contrctil de ranitidina

En lquido nutricio Tyrode con doble concentracin de K+

<5,4 mM> la curva dosis respuesta a ranitidina <20 gM 1 mM) se

desplazaba hacia abajo y a la derecha, obteniendo una altura

contrctil mxima de 204.514.3por ciento del control <p<0.05>

con estmulo indirecto y de 199.715.1 por ciento del control

(p<0.05> con estimulo directo (fig. C1). El efecto mximo de

cada dosis era en unos 4.1 mm. Con Tyrode triple concentracin
la
de K+ (8.1 mM), la CDR de ranitidina <20 pH 1 mM) perda

un
accin de incremento contrctil y se aplanaba. Solo habla
La
ligero incremento contrctil con 20 pM y 40 MM de ranitidina.
3 M de ranitidina, de
menor altura contrctil era con dosis o-
61
 300-

250-

L..
4-,
e *
o
~200 -

*
*

150-

*** ***

loo-
U

o 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 1

Concentracin mM de ranitidina

Fig. C1.Accin contrctil de ranitidina en preparaciones

frnicodiafragma de rata indirectamente estimulados con Tyrode
normal <.) e hiperpotsico, K+ 5.4 mM (O) y 1 8.1 mM (A).
Cada punto era la media de 6 experimentos e.s.m. Diferencias
significativas del control *p<0.05 **p.cO.01 ***p<0.001.
106.57.4% del control (p<0.001) estimulando el nervio frnico

(fig. C1) y de 108.19.1% del control (p<0.001> estimulando el

msculo diafragma. La altura mxima con cada dosis se obtena en

2.5 mm. aprox. ~ y Emax disminuan con el incremento de la

concentracin de K+ de 5.4 mM a 8.1 mM (tabla CI), sin embargo

la altura contrctil control en medio hiperpotsico comparado con

las variaciones de calcio y magnesio, era mayor tanto al estimulo

indirecto como directo (tabla CII) . En la fig. C2 se muestra

la altura contrctil de ranitidina con las variaciones del

potasio extracelular.

Tabla CII

% de altura contrctil control y despus del efecto mximo

de ranitidina (20 uM 1 mM) segn la variacin jnica del medio,

en hemidiafragmas de rata y estimulando el nervio frnico <SI)

o el diafragma (SD)

SI SD
Solucin nutricia % Altura Emax % Altura Emax
Tyrode control control
Normal 100.0 100.0 100.0 100.0
K+ 5.4 mM 152.7 75.7 143.8 77.5
K+ 8.1 mM 145.5 39.4 152.4 41.9
Mg++ O mM 116.0 83.7 114.8 84.3
Mg++ 6 mM 115.6 74.4 116.9 75.5
Mg++ 12 mM 103.7 62.1 107.8 61.1
Ca++ 0.45 mM 127.8 56.1 130.9 57.5
Ca++ 0.90 mM 104.2 77.0 107.0 77.3
Ca+4- 3.6 mM 105.4 92.0 105.7 93.0
Ca++0.6mMMg++6mM 87.3 60.4 93.8 59.6

62
 u,
o

Fig. 02. Altura contrctil de ranitidina en la preparacin

frnicodiafragma de rata directa (SD) e indirectamente
estimulada en solucin Tyrode hiperpotsico: 5.4 mM <A) y 8.1 mM
(B) -
 1.3> Efecto del Ca++ en las resnuestas contrctiles de

ranitidina

En solucin Tyrode con 3.6 mM de Ca++ ranitidina en el rango

20 uM 1 mM, tenia un incremento contrctil mximo con dosis 1

mM, que era de 248.615.1 % y 239.612.4 % del control con

estmulos indirecto y directo respectivamente y el efecto mximo

de cada dosis era despus de 5 mm. aproximadamente. Cuando la

concentracin de Ca++ se reduca a 0.9 mM haba un desplazamiento

a la derecha y abajo de la CDR de ranitidina (fig. C3) y la

accin contrctil se produca despus de 5 mm. con cada dosis

y era mxima con 100 pH de ranitidina de 207.911.9% del control

con estimulo indirecto y de 199.212.3% del control con estimulo

directo, ya que con dosis 1 mM de ranitidina disminua la altura

contrctil. Con Ca++ 0.45 mM se produca un mayor desplazamiento

de la CDR de ranitidina a la derecha y abajo con una altura

contrctil mxima de cada dosis de ranitidina que se alcanzaba

en unos 3.2 mm. La mayor contraccin era de 151.511.8 % del

control (p<O.OS) y 148.29.7 % del control (p<O.01)

respectivamente con estmulos indirecto y directo con dosis 80

pM, ya que dosis superiores de ranitidina causaban una accin

depresora contrctil (fig. C4) . La CE50 se deprima

proporcionalmente en el rango de variacin del [Ca++]o de 3.6 mM

a 0.45 mM e igual curso segua la Emax. (Tabla CI). En la fig.

C3 tambin se muestra la accin depresora contrctil adicional

con la disminucin del Ca++ y la elevacin del Mg++ en el medio

63

.
 300-

250-

200 *

o
1..
4-
e
o
0150
4>
0

100 -
*** ***

50-

0-

0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1

ConcentracOn mM de ranitidina

Fig. C3. Accin contrctil de ranitidina en Tyrode normal

() y con variaciones inicas: Ca++ 3.6 mM (Q), Ca++ 0.9 mM
<U), Ca++ 0.45 mM <A) y Ca++ 0.6 mM.ig++ 6 mM <Q> en
hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados. Cada punto era
la media e.s.m. de 6 experimentos. Diferencias significativas
del control *p<0 05 **p<0Ol ***p<0 001
c

SD
1
4x10
-5
N SD
1
6xtO
.~
~ SO ExIO
.5
N

Fig. C-4. Ejemplo de curva dosis-respuesta de ranitidina

en la preparacin frnicodiafragma de rata directa (SD) e
indirectamente estimulada en solucin Tyrode normal <A), Ca++ 0.9
UJM <B), Ca++ 0.45 mM <C) y Ca++ 3.6 mM (D).
 (0.6 mM de Ca++ y 6 mM de Mg++).. En estas circunstancias
ranitidina en el rango 20 pH 80 pH careca de accin

contrctil, y con dosis mayores disminua la contraccin, que era

mxima con 103 M, de 36.75.7 % del control (p<0.00l) con

estmulo indirecto y 46.26.3 % del. control (p<0.0O1) con

estimulo directo a los 10 mm. de su adiccin al liquido

nutricio. La CISO era de 75.00.1x105 M con estmulo indirecto

y de 63.O0.1x105SI con estimulo directo (tabla CI). La altura

contrctil basal tambin disminua tanto al estmulo directo como

indirecto <tabla CII) por el dficit de calcio necesario para

la contraccin.

1.4) Accin contrctil de ranitidina con variaciones de Ma++

en el lquido nutricio

La accin contrctil de ranitidina disminua con el

incremento de la concentracin extracelular de Mg++. La curva

dosisrespuesta de ranitidina (20 pH 1 mM> en solucin Tyrode

O mM de Mg++ causaba un ligero desplazamiento a la derecha y

abajo, con un efecto mximo con dosis 1 mM de 226.210.9% al

estmulo indirecto y de 217.212.3% al. estmulo directo. Similar

y mayor desplazamiento de la CDR de ranitidina se produca con

Tyrode 6 mM de Mg++ con un incremento contractil mximo con

dosis 1 mM de 201.114.5 % del control (p<0.05) con estimulo

indirecto y de 194.511.9 % del control con estimulo directo.

Un ulterior desplazamiento de la CDR a la derecha y abajo se

produca con 12 mM de Mg++ <fig. C5), alcanzando una altura

64

.
 300-

250

o
1~
4-
c
o
~2OO
0

**

*
150
**

loo-

o 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 1

Concentracin mM de ranitdina

Fig. C5. Accin contrctil de ra natidina en Tyrode normal

(>, Mg++ O mM (O), Mg++ 6 <U) y Mg++ 12 mM (Q) en la
preparacin frnicodiafragma de rata indirectamente estimulada.
Cada punto era la media e.s.m. de 6 experimentos. Diferencias
significativas del control *pcO. 05 **p<O.01 ***p<O.Ool.
contrctil mxima tambien con 1 mM de ranitidina, que era de

167.811.4% del control (p<O.Ol) al estimulo del nervio frnico

y de 157.411.7% del control <p<O.Ol) al estmulo del diafragma.

El efecto mximo de cada dosis era obtenido despus de 6.6 mm.,

5.8 mm.., y 5 mm. respectivamente con Mg++ O mM, 6 mM y 12 mM.

La CE50 y Emax eran de este orden O mM Mg < 6 mM Hg < 12 mM Mg

con ambos tipos de estmulo <tabla CI) e igual evolucin tena

la altura contrctil control (tabla CII>.

65
 2> EFECTO DE LOS FARMACOS CALCIOANTAGONISTAS SOBRE LA

ACCIN CONTRACTIL DE RANITIDINA EN HEMIDIAFRAGMAS DE

RATA INDIRECTAMENTE ESTIMULADOS.

2.1) Efecto de diltiazem sobre la accin contrctil de

ranitidina en lquido nutricio Tvrode normal.

En la preparacin frnicodiafragma de rata indirectamente

estimulada con solucin Tyrode, la curva dosis respuesta de

ranitidina 20 pM 1 mM era desplazada hacia abajo y a la derecha

por diltiazem de forma dosisdependiente, cuando se aada

previamente al medio nutricio. La altura contrctil mxima de

cada dosis de ranitidina era alcanzada en unos 3.3 mm. Con 10-6
M de diltiazem haba un menor incremento contrctil dosis

dependiente de ranitidina hasta alcanzar una altura contrctil

mxima de 211.317.0 % del control

dosis de(p<0.05) con
ranitidina 1 mM; Mayores dosis de diltiazem como lcr5 Yi tambin
producan un menor incremento contrctil dosis dependiente de
ranitidina y la altura mxima era de 167.3 11.8 % del control

(P<0.01> con dosis de 80 MM de ranitidina, mientras que dosis

superiores disminuan algo la contraccin. Cuando se aada

previamente diltiazem 1O~ M al lquido nutricio la CDR de

ranitidina se desplazaba a la izquierda con dosis 20 gM de

ranitidina y despus un gran desplazamiento hacia la derecha y

abajo. El incremento contrctil mximo era con dosis 60 pH de

ranitidina, de 142.511.2% del control <p<0.00l> . Con ranitidina

20 pH babia un rpido, precoz y mximo incremento contrctil de

134.4 9.1 % del control. Dosis superiores de ranitidina eran

66

 270

2 5 0

rl
o
3..
a 200fl
o
ti

rl
CI

.4
1 50

10 0
pr,
~1~ 1
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 1

Concentracin mM de ranitidina

Fig. D1. Accin contrctil de ranitidina sola () en

Tyrode normal y despus de diltiazem 1 pH <Q>. 10 uM <A> y 100
pH (u ) en hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados.
Cada punto era la media de 6 experimentos e.s.m. Diferencias
significativas del control: *p<0.05 **pCO.01 ***p<O.001.
depresoras de la contraccin. El incremento contractil mximo de

cada dosis de ranitidina era a los 6.3 mm., 5.4 mm. y 4 mm.
respectivamente con diltiazem 10 SI, 05 M y 10 M. En la figura
01 se resumen los efectos de la adiccin de diltiazem previo

a la COR de ranitidina.
En las relaciones del TOP de la COR de ranitidina (20 UM

1 mM) tambin se producan modificaciones cuando se adicionaba

al bao nutricio precedido de diltiazem. En la tabla 01 se

muestran los ndices del TOP de ranitidina sola y en la tabla 1=

II los mismos indices modificados por la adiccin previa al

lquido nutricio de diltiazem 10.6 SI. Con esta dosis haba una

disminucin proporcional de la altura de los cuatro estmulos

Tabla 01

Indices del tren de a cuatro <TOP) de ranitidina <20 MM

1 mM) en solucin Tyrode en hemidiafragmas de rata. T1T2T3T4
son valores del TOF sin frmacos y T1T2T3T4 con frmacos.

Ranitidina

Relaci6n 20 pM 40 pH 60 pH 80 pSI 100 pM 1 mM

Control
T4/T1=1 .00

Vi/Ti 1.08 1.17 1.52 1.65 1.65 1.79

T2/T1 1.08 1.10 1.34 1.42 1.52 1.52
VS/Ti 1.08 1.08 1.27 1.36 1.42 1.41
T4/T1 1.08 1.08 1.25 1.33 1.44 1.39

T2/T1 1.00 0.94 0.88 0.86 0.92 0,84

T3/T2 1.00 0.97 0.94 0.95 0.96 0.93
T4/T1 1.00 0.91 0.82 0.80 0.87 0.77
T4/T3 1.00 0.99 0.98 0.98 0.98 0.98

acoplados, las relaciones T/T estaban incrementadas

comparativamente con ranitidina sola, excepto con dosis 20 pH y

67
1 mM que estaban disminuidas, mientras que las relaciones T/T
eran de igual valor o disminuan ligeramente.

Tabla DII
Indices del tren de a cuatro <TOP> de ranitidina <20 pSI
1 mM> despus de diltiazem 1 pH con solucin Tyrode normal en
hemidiafragmas de rata.
Diltiazem Ranitidina

Relacin 1 pH 20 pH 40 pH 60 pSI 80 MM 100 pH 1mM

control
T4/T1=1 .00

Vi/Ti 0.96 1.03 1.83 2.20 1.86 1.96 1.80

T2/T1 0.96 0.98 1.80 2.00 1.73 1.80 1.43
T3/T1 0.96 0.98 1.70 1.80 1.63 1.63 1.33
T4/T1 0.96 0.96 1.70 1.53 1.58 1.58 1.30

T2/T1 1.00 0.95 0.98 0.90 0.92 0.91 0.79

T.3/T2 1.00 1.00 0.94 0.90 0.94 0.90 0.93
T4/T1 1.00 0.93 0.92 0.69 0.84 0.77 0.72
T4/T3 1.00 0.98 1.00 0.85 0.96 0.93 0.97

Smbolos como en tabla DI.

Los trenes de cuatro impulsos acoplados durante 2 s y 2 Hz

al msculo diafragma tambien se acompaaba de cambios con

diltiazem o~ SI previo a la CDR de ranitidina, segn se muestra

en la tabla DIII. La altura contrctil del. TOP era inferior con

relacin a 10.6 de diltiazemCDR de ranitidina. Las relaciones

T/T estaban todas incrementadas, en cambio, las relaciones

T/T tenan una pequea disminucin con dosis 20 pH, 100 pSI y

1. mM y por el contrario, aumento con 40 pSI, 60 pH y 80 pH de

ranitidina, comparadas con ranitidina sola.

68
 Tabla DIII

Indices del tren de a cuatro <TOE) de ranitidina (20 pSI

1 mM> despus de diltiazem 10 pH con solucin Tyrode normal en
hemidiafragmas de rata.

Diltiazem Ranitidina

Relacin 10 pSI 20 pSI 40 pM 60 pM 80 pSI 100 pSI 1 mM

control
T4/T1=1.00

U 1/Ti 1.03 1.18 1.70 2.01 2.06 1.99 2.07

U 2/Ti 1.03 1.17 1.59 1.80 1<74 1.69 1.80
VS/Ti 1.03 1.15 1.50 1.71 1.67 1.64 1.68
T4/T1 1.03 1.09 1.45 1.66 1.64 1.58 1.61

T 2/T 1 1.00 0.98 0.93 0.89 0.84 0.85 0.86

U 3/U 2 1.00 0.98 0.88 0.95 0.96 0.96 0.93
U 4/U 1 1.00 0.92 0.85 0.82 0.79 0.79 0.77
U 4/U 3 1.00 0.95 0.96 0.97 0.98 0.96 0.95

Smbolos como en tabla DI.

Con diltiazem 10 SI previo a la CDR de ranitidina causaba

sobre el TOP en primer lugar un decremento de altura contrctil

y en segundo lugar un menor gradiente contractil entre los cuatro

estmulos acoplados (tabla DIV), que se traduca comparados con

ranitidina sola en: a) incremento del valor de las relaciones

T/T con dosis bajas de ranitidina (20 pSI, 40 pSI y 60 MM)

mientras que haba decremento con dosis mayores (80 pSI, 100 pH

y 1 mM> y b) incremento y aproximacin al valor de la unidad

entre las relaciones T/T.

69
 Tabla D-IV
Indices del tren de a cuatro (TOP> de ranitidia (20 pH
1 mM> despus de diltiazem 100 pH con solucin Tyrode normal en
hemidiafragmas de rata.

Diltiazem Ranitidina
Relacin 100 pSI 20 pM 40 pSI 60 pSI 80 pSI 100 pSI 1 mM

control
T4/T1=1 .00

Vi/Ti 1.15 1.34 1.35 1.37 1.40 1.39 1.34

T2/T1 1.15 1.34 1.35 1.37 1.35 1.34 1.31
T3/T1 1.14 1.34 1.35 1.37 1.36 1.29 1.30
T4/T1 1.14 1.34 1.35 1.37 1.34 1.30 1.31

T2/Tl 1.00 1.00 1.00 1.00 0.96 0.96 0.98

T3/T2 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0.96 0.99
T4/T1 0.99 0.99 1.00 1.00 0.96 0.93 0.97
T4/T3 0.99 0.99 1.00 1.00 0.99 1.00 1.00

Smbolos como en tabla DI.

2.2> Efecto de veranamil sobre la accin contrctil de

ranitidina en solucin Tvrode normal.

Cuando se aada verapamil lpSI, 10 pSI 6 100 pSI en el liquido

nutricio Tyrode normal antes de la CDR de ranitidina, haba un

desplazamiento de esta hacia la derecha y hacia abajo dosis

dependiente de verapamil segn se muestra en la fig. D-2. El

efecto mximo de cada dosis de ranitidina era alcanzado en unos

45 mm. Con dosis de 10.6 M de verapamil haba un incremento

contrctil dosisdependiente de la CDR de ranitidina alcanzando

70

 270

250-

200

rl
o
1~
1

O
(.3 150-
rl
CI

.4

100

50

30

1 It-,

0 0.02 004 006 0.08 0.1 1

Concentracin mM de ranitidina

Fig. D2. Accin contrctil de ranitidina sola <e

> en
Tyrode normal y despus de verapamil 1 pSI <0>, 10 pH (A) y 100
pSI < > en hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados.
Cada punto era la media de 6 experimentos e.s.m. Diferencias
significativas del control: p<O.05 p<0.O1 p<O.001.
una altura mxima de 217.5 17.1 % del control (p<0.05> con
ranitidina 1 mM. Con cada dosis se obtena el efecto mximo en

unos 5.2 mm. Mayores dosis de verapamil como io~ M causaban

mayor disminucin de la respuesta contractil por ranitidina y el

incremento contrctil mximo era con dosis 100 pSI de ranitidina

era de 158.4 18.2 % del control (pc0.01), ya que con dosis 1

mM de ranitidina haba una pequea disminucin de la altura

contrctil. El efecto de cada dosis se obtena a los 4 mm aprox.

Cuando se utilizaban dosis altas de verapamil como 10~ SI la

respuesta contrctil del msculo diafragma a ranitidina <20 pSI

1 mM) era diferente; en primer lugar haba un rpido y elevado

incremento contrctil que era de 164.0 12.9 % del control con

dosis 20 pSI de ranitidina y en segundo lugar, dosis mayores

causaban decremento contrctil que era mximo con 1 mM de

ranitidina, de 30.4 11.9 % (P<0.001> del control a los 12 mm.

La contraccin desapareca a los 30 mm. aprox. despus de la

adiccin al liquido nutricio de 10~ M de verapamil.

Los TOF de ranitidina sola eran modificados con la presencia

previa de verapamil 1 pSI en el liquido nutricio. Habla

disminucin de las relaciones T/T con dosis de ranitidina 20 pSI

y aumentaba con dosis acumulativas superiores, por otra parte,

descendan o no variaban las relaciones T/T del TOP de

verapamil irn seguido de la CDR de ranitidina, segn se muestra

en la tabla Oy.

71
 Tabla fl-V
Indices del tren de a cuatro <TOP) de ranitidina (20 pM
1 mM) despus de verapamil 1 pM con solucin Tyrode normal en
hemidiafragmas de rata.

Verapamil Ranitidina
Relacin 1 pH 20 pSI 40 pH 60 pM 80 pSI 100 pSI 1 mM

control
T4/T1=1 .00

Tl/T1 1.02 1.02 1.29 1.75 2.04 2.04 2.04

T2/T1 1.02 1.02 1.15 1.50 1.84 1.85 1.69
T3/T1 1.02 1.02 1.12 1.34 1.74 1.73 1.51
T4/T1 1.02 1.02 1.02 1.30 1.71 1.72 1.45

T2/TX 1.00 1.00 0.89 0.85 0.90 0.90 0.83

T3/T2 1.00 1.00 0.99 0.89 0.93 0.93 0.89
T4/T1 1.00 1.00 0.79 0.74 0.84 0.84 0.71
T4/T3 1.00 1.00 0.91 0.96 0.99 0.99 0.96

Smbolos como en tabla DI.

El efecto de la administracin al bao nutricio de verapamil

i05 M previo a la CDR de ranitidina tambin causaba disminucin

de altura contractil de los valores del TOF de forma dosis

dependiente. El decremento era mayor que con 10.6 de verapamil.

Disminuan los valores de las relaciones T/T (tabla DVI> y las

relaciones T/T del TOF de ranitidina 20 pH 1 mM despus de

verapamil o5 SI tenan descenso o no variaban en relacin con

ranitidina sola.

72
 Tabla D-VI
Indices del tren de a cuatro (TOF> de ranitidina (20 pSI
1 mM> despus de verapamil 10 pSI con solucin Tyrode normal en
hemidiafragmas de rata.

Verapamil Ranitidina

Relacin 10 pH 20 pH 40 pH 60 pH SO pH 100 pH 1 mM

control
T4/T1=1 .00
Vi/Ti 0.99 0.99 1.08 1.38 1.57 1.56 1.52
T2/T1 0.99 0.99 1.02 1.09 1.30 1.36 1.36
T3/T1 0.99 0.99 1.02 1.06 1.16 1.24 1.25
T4/Tl 0.99 0.99 1.02 1.05 1.12 1.18 1.19

T2/T1 1.00 1.00 0.94 0.79 0.83 0.87 0.89

T3/T2 1.00 1.00 1.00 0.96 0.89 0.91 0.91
T4/T1 1.00 1.00 0.93 0.76 0.71 0.76 0.78
T4/T3 1.00 1.00 0.99 0.99 0.96 0.95 0.95

Smbolos como en tabla DI.

En las respuestas a los cuatro estmulos del tren de a

cuatro de 2 Hz durante 2 s. producidos cuando se utilizaba

verapamil 1W previo a ranitidina 20 pSI 1 mM en relacin con

ranitidina sola haba disminucin de la altura contrctil y menor

gradiente, por ello las relaciones T/T eran prximas a la

unidad (tabla DVII> y babia un descenso muy significativo en

las relaciones T/T con dosis de ranitidina 80 pSI, 100 pH y 1

mM, teniendo un comportamiento similar a diltiazem con igual

dosis.

73
 Tabla D-VII
Indices del tren de a cuatro (TQF) de ranitidina (20 pSI
1 mM> despus de verapamil 100 pSI con solucin Tyrode normal en
hemidiafragmas de rata.

Verapamil Ranitidina

Relacin 100 pSI 20 pH 40 pM 60 pSI 80 pSI 100 uSI 1 mM

control
T4/T1=1 .00

T1/T1 1.55 1.57 1.53 1.42 1.38 1.32 0.16

T2/T1 1.58 1.60 1.53 1.39 1.30 1.13 0.00
U3/T1 1.61 1.63 1.48 1.36 1.22 0.86 0.00
T4/Tl 1.63 1.62 1.52 1.37 1.26 0.82 0.00

T2/T1 1.02 1.02 1.00 0.98 0.94 0.85 0.00

T3/T2 1.01 1.01 0.96 0.97 0.93 0.75 0.00
T4/T1 1.05 1.03 0.99 0.96 0.91 0.62 0.00
T4/T3 1.01 0.99 1.02 1.00 1.03 0.95 0.00

Smbolos como en tabla DI.

.74
 3> EFECTO DE CAPTOPRIL SOBRE LA ACCIN CONTRACTIL DE

RANITIDINA EN EL MSCULO DIAFRAGMA DE RATA

INDIRECTAMENTE ESTIMULADO.

3.1> Accin de ranitidina (20 SI 1 mSI~ en la preparacin

frnicodiafracma de rata con solucin Tvrode normal

Cuando se estudiaba la accin de ranitidina en el rango 20

pSI 1 mM en preparaciones frnicodiafragma de rata aplicando

estmulos indirectos para obtener contraccin simple, TOP y

ttanos haba un incremento contrctil dosisdependiente, segn

se muestra en la fig. E1. La mxima altura contrctil era con

dosis 1 mM de 179.815.4 % del control (p<0.01). La contraccin

mxima de cada dosis se alcanzaba en alrededor de 3.3 mm. Con

40 de ranitidina haba dificultad de relajacin despus de

cada contraccin durante 10 mm. en 3 exptos. <n=6> y la

fasciculacin comenzaba con 40 pSI, era mxima entre 40 pSI y 60

pH y se anulaba con 1 mM. En la tabla EI se resumen los valores

de la contraccin, ttanos, altura contrctil postetnica en

relaci6n al valor control y sin frmacos expresado

porcentualmente. Es de resaltar que en el protocolo de estudio

de la curva dosisrespuesta de ranitidina que no inclua el

ttanos el incremento contrctil mximo de cada dosis era mayor.

Aunque el ttanos presentaba una pequea disminucin dosis

dependiente, era muy significativa ya que el ttanos tena pocas

variaciones con cada dosis, alcanzando una altura contrctil de

77.26.1% del control <PcO.001> con ranitidina 1 mM.

75

.
 210

200 -

rl
O
ib
a
O
u

150-
rl
a

t4

100-

a o~
~~1
o 0.02 0.04 0.06 0,08 0.1 1

Concentracin mM de ranitidina

Fig. E1. Accin contrctil de ranitidina sola <> en

Tyrode normal y despus de captopril 10.6 SI <Q), io-5 M <A> y
1W SI <Q> en hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados.
Cada punto era la media de 6 experimentos e.s.m. Diferencias
significativas del control: *p<O05
 La potenciacin postetnica (PTT> tena una pequea

disminucin dosisdependientes (tabla EI). La PTT mxima sin

frmaco era de 165.2 9.5 % del control, que disminua con

ranitidina 20 pM a 128.19.3 % de]. control <P<O.001) ye]. mximo

de depresin era de 112.43.9 % del control (P<0.001> con 1 mM

de ranitidina. El porcentaje de potenciacin postetnica tenia

tambin un decremento dosis dependiente cuyo minimo era del 59.9

6.3 % del control (P<0.001> con dosis de ranitidina de 1 mM.

Tabla EI

Accin de ranitidina <20 pSI 1 mM) sobre la contraccin

indirecta <0.16 Hz y 0.2 ms), ttanos <50 Hz durante 5 s.>,

contraccin posttetnica (PTT) y porcentaje de potenciacin de
la contraccin posttetnica (% PTP) en la preparacin frnico
diafragma de rata con solucin Tyrode normal

Contraccin Ttanos PTT PTP (%>

control 100.0 100.0 165.29.5 65.26.8

flan 20 pSI 108.3 5.5 95.74.3 128.19.3 18.24.5***
flan 40 pSI 121.810.3* 90.32.7** 124.44.6*** 2.31.4***
flan 60 pH 152.6 8.7*** 87.82.4*** 119.27.7*** ~28.03.9***
flan 80 pSI 165.412.1*** 86.93.1*** 115.96.50***~42.74.6***
flan 100 pSI 165.311.9*** 85.64.4*** 113.57.40***~45.75.9***
flan 1 mM 179.815.4*** 77.26.1*** 112.43.9*** ~59.96.3***

Los datos muestran la media e.s.m. de n=6 experimentos.

Significacin estadstica en relacin al control: *P<0.05;
**P.CO.0j. y ***p<Q.OQ1.

La mayor altura de los valores de]. TOP era con 100 pH de

ranitidina y el mayor gradiente contrctil era con la relacin

T4/T1 con ranitidina 1 mM <tabla EII). El gradiente del TOF

creca algo de forma dosisdependiente.

76
 Tabla EII
Indices del tren de a cuatro <TOE) de ranitidina (20 pH
1 mM> en solucin Tyrode en hemidiafragmas de rata. T1T2T3T4
son valores del TOP sin frmaco y T1T2T3T4 con frmaco.

Ranitidina

Relacin 20 pSI 40 pM 60 pM 80 pH 100 pH 1 mM

Control
T4/Tl=1 .00
Vi/Ti 1.08 1.17 1.52 1.65 1.65 1.79
T2/T1 1.08 1.10 1.34 1.42 1.52 1.52
V3/TI. 1.08 1.08 1.27 1.36 1.42 1.41
T4/Tl 1.08 1.08 1.25 1.33 1.44 1.39

T2/T1 1.00 0.94 0.88 0.86 0.92 0.84

1V3/T2 1.00 0.97 0.94 0.95 0.96 0.93
T4/T1 1.00 0.91 0.82 0.80 0.87 0.77
T4/T3 1.00 0.99 0.98 0.98 0.98 0.98

3.2> Accin de ranitidina <20 uM1 mMN desnus de cantonril

Captopril a dosis 1 pH causaba sobre la curva dosis

respuesta de ranitidina un incremento contrctil dosis

dependiente <fig. E1> cuyo mximo era con dosis de ranitidina

1 mM de 190.015.1 % del control <tabla EIII), mayor que con

ranitidina sola. Es decir, en esta preparacin captopril 1 pSI

potenciaba la accin contrctil de ranitidina.
El ttanos tena un decremento contrctil dosis dependiente

que alcanzaba una altura de 82.78.6% del control con ranitidina

1 mM <tabla EIII), mientras que con ranitidina sola era de

77.26.1% del control. La potenciacin posttanica tena tambin

77
un decremento dosisdependiente, pero el incremento ms

significativo en relacin con ranitidina sola era 148.69.7% del

control, (PcO.01> con dosis 20 PSI de ranitidina. El porcentaje

de potenciacin posttanica (% FTP) tena un decremento similar

a ranitidina sola, pero con un incremento significativo con dosis

de ranitidina 20 pM (tabla EItt).

Tabla Ehl

Accin de ranitidina despus de captopril 1 pH sobre la

contraccin indirecta (0.16 Hz y 0.2 ms.), ttanos (50 Hz durante
5 s.), contraccin posttetnica <PTT> y potenciacin
postetnica (FTP> en preparaciones de hemidiafragma de rata
indirectamente estimuladas con liquido nutricio Tyrode normal.

Contraccin Ttanos PTT PTP <%)

control 100.0 100.0 171.112.4 71.17.9

Cap 1 pH 95.710.2 97.42.8 152.011.7 58.87.1
Ran 20 pSI 100.07.4 96.23.5 148.69.79** 48.66.4***
flan 40 pSI 124.26.8 94.03.8 140.514.3* 13.14.2**
flan 60 pSI 166.27.4 91.73.9 127.78.9 30.16.1
Ran 80 pSI 178.511.2 88.94.7 119.15.7 49.85.7
Ran 100 pSI 178.612.3 81.22.7 117.17.5 52.47.9
Ran 1 mM 190.015.1 82.78.6 107.84.9 ~76.29.3**

Los datos muestran la media e.s.m. de n=6 experimentos.

Valores estadisticamente significativos comparados con ranitidina
sin captopril (tabla EI): *P<0.05, **P<0.01 y ***P<~j1J~J1~

La altura contrctil T/T de los TOE con ranitidina despus

de captopril 1 pSI estaban incrementados comparativamente con

ranitidina sola (tabla Etv>, mientras que los valores T/T del

TOP con ranitidina despus de captopril 1 pSI eran similares a los

de ranitidina sola.

78
 Tabla EIV
Indices del tren de a cuatro (TOP> de ranitidina <20 pH
1 mM> despus de captopril 1 pSI con solucin Tyrode normal en
hemidiafragmas de rata.

Captopril Ranitidina
Relacin 1 pSI 20 pH 40 pSI 60 pM 80 pH 100 pH 1 mM

control
T4/T1=1.00

Vi/Ti 1.00 0.99 1.22 1.68 1.84 1.78 1.85

T2/T1 1.00 0.99 1.15 1.46 1.70 1.61 1.57
T3/T1 1.00 0.99 1.13 1.41 1.60 1.55 1.46
T4/T1 1.00 0.99 1.11 1.38 1.56 1.51 1.43

T2/T1 1.00 1.00 0.94 0.87 0.92 0.90 0.84

T3/T2 1.00 1.00 0.98 0.96 0.93 0.96 0.92
T4/T1 1.00 1.00 0.88 0.82 0.85 0.85 0.77
T4/T3 1.00 1.00 0.98 0.97 0.98 0.97 0.98

Smbolos como en tabla EII.

3.3> Accin de ranitidina (20 SI 1 mSIl desnus de

cantonril 10 SI.

La curva dosis respuesta de ranitidina <20 pH 1 mM> se

desplazaba hacia la derecha y abajo cuando captopril 10 pH era

aadido al liquido nutricio previamente (fig E1>. La amplitud

contrctil mxima era con ranitidina 1 mM de 156.4 12.5 % del

control (Tabla Ey>.

El ttanos de ranitidina despus de captopril 10 pSI tena

una escasa disminucin dosisdependiente similar a la de

ranitidina sola <tabla EV>. El efecto de aadir previamente

captopril 10 pSI al lquido nutricio tambin causaba un pequeo

incremento en la PTT de la COR de ranitidina, que era mas

siginificativo con 20 pSI de ranitidina <163.4 7.2 % del

79

control, P<0.001) en relacin con ranitidina sola.

El % de la FTP aumentaba de forma muy significativa con

ranitidina despus de captopril 10 pSI en relacin con ranitidina

sola (tabla Ey)

TABLA E-y

Accin de ranitidina (Ran) (20 pH 1 mM> despus de

captopril <Cap) 10 pM en la preparacin hemidiafragma de rata.

Contraccin Ttanos PTT FTP (%)

control 100.0 100.0 164.05.1 64.05.9

Cap 10 pH 95.59.2 97.64.9 156.55.5 63.85.3
flan 20 pSI 92.18.4 98.09.0 163.47.2*** 77.48.7***
Ran 40 pH 106.79.3 95.311.8 138.98.1** 30.14.7***
flan 60 pH 138.511.5 93.312.4 128.54.9* ~7.72.3***
flan 80 pSI 146.311.6 93.012.9 126.66.4 ~15.53.8***
Ran 100 pH 149.712.1 91.86.6 122.25.7 ~22.54.6***
flan 1 mM 156.412.5 78.09.2 111.24.3 ~40.65.2***

Significacin estadstica y smbolos como en tabla Ehl.

TABLA E-VI

Indices del tren de a cuatro (TOE) de ranitidina <20 pH

1 mM> despus de captopril 10 pSI en solucin Tyrode en
hemidiafragmas de rata.

Captopril Ranitidina
Relacin 10 pH 20 pH 40 pSI 60 pSI 80 pH 100 pH 1 mM

Control
T4/T1=1 .00
Vi/Ti 0.93 0.88 1.05 1.38 1.43 1.45 1.52
T2/T1 0.93 0.88 0.95 1.25 1.32 1.32 1.31
T3/T1 0.93 0.88 0.94 1.21 1.27 1.26 1.25
T4/T1 0.93 0.88 0.93 1.19 1.25 1.24 1.22
T2/T1 1.00 1.00 0.90 0.90 0.92 0.90 0.89
T3/T2 1.00 1.00 0.98 0.96 0.96 0.95 0.95
T4/T1 1.00 1.00 0.88 0.86 0.87 0.85 0.80
T4/T3 1.00 1.00 0.99 0.98 0.98 0.98 0.97

Smbolos como en tabla EII.

80
 Los valores de las relaciones T/T del TOP tenan un

decremento con dosis altas de ranitidina despus de captopril 10

pSI en relacin con ranitidina sola (tabla EVI) . Las variaciones

del TOF con frmacos (T/T) tenan una altura muy similar y por

tanto variaciones prximas a la unidad.

3.4) Accin de ranitidina (20 uM 1 mSII desnus de

cantonril 100 uM en solucin Tvrode normal

En preparaciones pretratadas con 100 pH de captopril

ranitidina tambin tena un incremento contrctil dosis

dependiente pero disminua en relacin con ranitidina sola, con

un desplazamiento de la CDR de ranitidina hacia abajo y hacia la

derecha <fig. E1), alcanzando una altura contrctil de

142.811.3 % del control (P<0.05) con dsis 1 mM de ranitidina

(tabla EVII)

El ttanos de 50 Hz durante 5 s. tena un escaso decremento

dosis dependiente, aunque menor en relacin con ranitidina sola,

excepto con 1 mSI de ranitidina que disminua a 66.1 6.7 % del

control con ranitidina 1 mM despus de captopril 100 pSI <tabla

EVII). La accin de captopril 100 pSI previo a la CDR de

ranitidina sobre la PTT era disminucin de forma dosis

dependiente, pero se produca un incremento que era mas

significativo con ranitidina a dosis bajas (20 pH 80 pH) en

comparacin con ranitidina sola <tabla EVII> . El % de la PTP

tena tambin un incremento significativo comparativamente con

81

.
ranitidina sola <tabla EVII> y haba disminucin dosis

dependiente.

Tabla EVII
Accin de ranitidina despus de captopril 100 pH con
solucin Tyrode en la preparacin henidiafragma de rata.

Contraccin Ttanos PTT PTP (%>

control 100.0 100.0 184.05.3 84.09.1
Cap 100 pH 97.4 8.9 101.64.6 168.54.8 72.96.8
flan 20 pH 97.8 7.3 96.65.8 168.16.9*** 71.87.5***
Ran 40 pSI 121.0 8.2 94.23.9 147.85.4** 22.14.6***
flan 60 pSI 132.7 7.5 93.37.6 130.77.3** ~1.53.7***
flan 80 pSI 147.8 8.4 90.97.5 128.05.8** ~15.45.2***
flan 100 pSI 147.010.9 90.03.8 103.96.1* 41.48.3
Ran 1 mM 142.811.3* 66.16.7* 106.45.9 ~34.24.2**t
Significacin estadstica y smbolos como en tabla EItt.

Captopril 100 pH causaba un decremento del valor de los

cocientes T/T del TOP de ranitidina y habia incremento de los

valores del TOP T2/T1. La mayor relacin del TOP era con dosis

100 pM de ranitidina y la menor relacin era con 1 mM de

ranitidina ambas despus de 100 pSI de captopril 100 pSI <tabla E

VIII) . En conjunto captopril 100 pM tena escasa accin sobre las

variaciones del TOP con ranitidina, es decir haba escasa

diferencia entre los relaciones del TOP de ranitidina con y sin

captopril 100 pSI.

82
 Tabla EVIII
Indices de]. tren de a cuatro <TOP) de ranitidina <20 pM
1 mM> despus de captopril 100 pM en solucin Tyrode en hemidia
fragmas de rata.

Captopril Ranitidina

Relacin 100 pSI 20 pSI 40 pSI 60 pSI 80 pM 100 pH 1 mM

Control
T4/T1=l .00

T1/T1 0.95 0.95 1.15 1.35 1.40 1.42 1.35

T2/T1 0.93 0.93 1.08 1.27 1.32 1.30 1.21
T3/T1 0.93 0.93 1.06 1.23 1.26 1.25 1.17
T4/T1 0.93 0.93 1.04 1.22 1.26 1.24 1.16

T2/T1 0.98 0.98 0.94 0.94 0.94 0.91 0.89

T3/T2 0.99 0.99 0.97 0.90 0.95 0.96 0.96
T4/T1 0.97 0.97 0.90 0.90 0.89 0.87 0.85
T4/T3 1.00 1.00 0.98 0.99 0.99 0.99 0.98
Smbolos como en tabla EII.

3.5) Efecto de cantonril 10 uH en la accin contrctil de

ranitidina en medio nutricio Tvrode con 5.4 mM de K+

Aunque captopnil 1W SI solo no causaba disminucin de la

altura contrctil control, en cambio, causaba un gran desplaza-

miento de la CDR de ranitidina hacia abajo <fig. E2>, alcanzando

una altura contrctil con ranitidina 1 mM de]. 63.6 9.3 % del

control <p<O.001> (tabla EIX).

El ttanos tena menor decremento en re].acin con ranitidina

sola en solucin Tyrode normal (tabla EIX>. Con captopril 10 pSI

en medio nutricio con doble de potasio tambien haba una

disminucin dosisdependiente de la altura contrctil de la PTT

de ranitidina, si bien haba un incremento significativo excepto

con ranitidina 1 mM <tabla EIX) comparativamente con ranitidina

83

.
 200

rl
O
ib.
a
O
ti

rl
0

100-
.4

50

0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 1

Concentracin mM de ranitidina

ng. E2. Accin contrctil de ranitidina en Tyrode normal

<> y despues de captopril 1W SI <a), captopril con K+ 5.4 mM
5> y con 0.90 mM de Ca++ < Q> en hemidiafragmas de rata
indirectamente estimulados. Cada punto era la media de 6
experimentos e.s.m. Diferencias significativas del control:
*p<0.05 **p<O0l ***p<0 001
sola en solucin Tyrode normal.

El % de PTP tena un incremento dosis dependiente y tambin

era significativo el incremento en relacin con ranitidina sola

en Tyrode normal, es decir haba menor disminucin dl % de la

PTP con ranitidina despus de captopril 10 pM en medio hiperpot

sico.

Tabla EIX
Accin de ranitidina despus de captopril 10 pH con solucin
Tyrode 5.4 mM de K+ en la preparacin frnicodiafragma de rata.

Contraccin Ttanos PTT PTP (%)

control 100.0 100.0 185.316.6 85.37.9

Cap 10 pSI 100.06.8 95.15.5 160.812.6 60.85.6
flan 20 pSI 93.97.3 97.27.2 154.07.4*** 64.07.1***
Ran 40 pSI 87.29.4* 92.57.7 136.28.4* 56.14.9***
flan 60 pSI 76.36.5*** 90.87.9 132.56.8** 73.66.1***
flan 80 pSI 67.87.8*** 88.18.0 131.06.6** 93.26.8***
flan 100 pSI 65.411.2*** 97.43.9 127.74.0** 95.28.2***
flan 1 mM 63.69.3*** 84.86.0 115.83.2 82.08.7***

Significacin estadstica y smbolos como en tabla EIII.

Las alturas del TOP de ranitidina despus de captopril 10

pH en medio con potasio 5.4 mM eran menores que los del TOP

control y por ello los cocientes TOE con frmacos/TOP control

(UIT) eran inferiores a la unidad (tabla EX). Las relaciones

del TOP con frmacos (T/T) tenan un valor prximo a la unidad,

sobre todo las relaciones del T2/T1, T3/T2 y T4/T3 por el

efecto despolarizante del exceso de potasio en el medio nutricio.

En relacin con ranitidina sola en solucin Tyrode normal los

84
 cocientes U/U aumentaban y los V/T disminuan.

Tabla E-X

Indices del tren de a cuatro (TOF> de ranitidina (20 pSI 1

mM> despus de captopril 10 pH en solucin Tyrode 5.4 mM de K+
en hemidiafragmas de rata.

Captopril Ranitidina
Relacin 10 pSI 20 pSI 40 pSI 60 pSI 80 pH 100 pSI 1 mM

control
T4/T1=1.00

T1/T1 0.94 0.90 0.85 0.70 0.57 0.61 0.61

T2/T1 0.97 0.92 0.84 0.66 0.54 0.57 0.59
T3/T1 0.97 0.92 0.83 0.64 0.53 0.56 0.56
T4/T1 0.97 0.92 0.83 0.64 0.53 0.56 0.56

T2/T1 1.02 1.02 0.97 0.93 0.95 0.93 0.95

T3/T2 1.00 1.00 0.99 0.97 0.97 0.98 1.00
T4/T1 1.03 1.02 0.97 0.90 0.92 0.91 0.95
T4/T3 1.00 1.00 0.99 1.00 1.00 0.99 0.99

Smbolos como en tabla EII.

3.6) Efecto de la disminucin de calcio en el medio nutricio

sobre la accin contractil de ranitidina desnus de

cautonril 10 aH.

Cuando se disminua en el medio nutricio la concentracin

de calcio a la mitad (0.90 mM de Ca++) y aadiendo previamente

captopril 10 pSI a la CDR de ranitidina, la mxima altura

contrctil era alcanzada con 60 pSI de ranitidina, que era de

134.9 10.7 % del control <tabla EXI) . El efecto mximo de cada

dosis se alcanzaba en unos 5.4 mm. Tambin haba una significa-

tiva disminucin contrctil de ranitidina con dosis >60 pH y la

CDR tena un ascenso hasta 60 pSI y despus descenso hasta 1 mM

alcanzando con esta ltima dosis una altura contractil de 89.9

85

 10.4 % del control <2<0.001> en relacin con ranitidina en

solucin Tyrode normal.

SIientras que el ttanos tena una altura contrctil muy

similar con cada dosis, comparado con ranitidina sola el

incremento era solo significativo con dosis de ranitidina 1 mM

(95.8 8.7 % del control, 2<0.01). Tanto la PTT como el % de la

PTP estaban incrementadas significativamente (tabla EXI> tanto

en comparacin con captopril 10 pSI CDR de ranitidina como con

la CDR de ranitidina sola, ambas en solucin Tyrode normal.

Tabla EXI
Acciones de ranitidina despus de captopril 10 pH con
solucin Tyrode 0.90 mM de Ca++ en la preparacin hemidiafragma
de rata.

Contraccin Ttanos PTT PTP <%)

control 100.0 100.0 193.210.6 93.210.3
Cap 10 pH 96.87.9 103.513.3 204.312.9 111.012.7
flan 20 pSI 92.78.6 101.610.6 195.69.6*** 111.010.6***
flan 40 pSI 111.47.9 100.412.1 163.76.9*** 46.96.7***
Ran 60 pSI 134.910.7 98.510.8 163.78.0*** 21.95.3***
flan 80 pSI 127.311.5** 95.88.1 161.98.6*** 27.15.1***
flan 100 pSI 112.87.8*** 96.48.7 151.46.4*** 34.24.9***
Ran 1 mM 89.91O.4*** 95.88.7** 152.61.2*** 69 7+7 3***

Significacin estadstica y smbolos como en tabla EIlE

En medio hipoclcico (0.9 mM) las acciones de captopril 10

pSI previo a la CDR de ranitidina sobre las relaciones T/T del

TOP era de disminucin. Con 20 pSI de ranitidina despus de

captopril 10 pSI estas relaciones eran inferiores a la unidad

<tabla EXII). Dosis superiores de ranitidina causaban aumento

de los valores del TOF, aunque descendidos en relacin a

86
captopril 10 pM CDR de ranitidina en solucin Tyrode normal y

an mayor disminucin con relacin a ranitidina sola en solucin

Tyrode normal. Los valores T/T del TOF de ranitidina despus

de captopril 10 pSI tenan valor prximo a la unidad por tener

poca variacin en su altura contrctil.

Tabla EXII

Indices del tren de a cuatro (TOP> de ranitidina <20 pSI

1 mM> despus de captopril 10 pSI con solucin Tyrode 0.90 mM de
Ca++ en hemidiafragmas de rata.

Captopril Ranitidina

Relacin 10 pSI 20 pM 40 pSI 60 pSI 80 pSI 100 pSI 1 mM

control
T4/T1=1 .00
Vi/TI. 0.95 0.94 1.12 1.34 1.25 1.14 0.92
T2/T1 0.97 0.95 1.10 1.31 1.21 1.11 0.85
T3/T1 0.97 0.95 1.05 1.27 1.18 1.08 0.79
T4/T1 0.97 0.95 1.04 1.26 1.16 1.06 0.78

T2/T1 1.02 1.01 0.96 0.97 0.97 0.97 0.92

T3/T2 1.00 1.00 0.97 0.97 0.97 0.96 0.93
T4/T1 1.01 1.01 0.92 0.94 0.93 0.93 0.85
T4/T3 0.99 1.00 0.99 0.99 0.98 0.98 0.98

Smbolos como en tabla EII.

87
 4. INTERACCIN DE CAPTOPRIL CON EL AFTICOLINESTERASICO

NEOSTIGMINA EN HEHIDIAPRAGMAS DE RATA INDIRECTAMENTE

ESTIMULADOS .

4.1) Curva dosisrespuesta de neostiamina <0.1 uM 10 SI

en solucin tvrode normal

Bajas dosis de neostigmina como 0.01 pSI no tenan efecto en

la contraccin y el TOF, en cambio dosis mayores y prximas a

0.1 pH tenan un incremento contrctil mximo; con esta dosis

el comienzo del efecto era despus de una latencia de

aproximadamente de 3.3 mm, alcanzando el mximo de la amplitud

contrctil de 276.023.6 del control (p<0.001> en 9 mm. Mayor

dosis de neostigmina, 1 pSI tena una accin dual, primero un

breve incremento contrctil adiccional de 8.2 % del control en

un minuto, seguido de un decremento similar que despus era

menor y gradual, ms prolongado que se haca estable a los 8

mm.., alcanzando una altura de 232.619.1% del control (p<0.Ol>.

Mayor concentracin adiccional de neostigmina, 10 pH no solo no

incrementaba la amplitud contrctil, sino que incluso descenda

con rapidez los primeros io mm aprox. y despus se hacia

lentamente, a].canzando una altura contrctil a ].os 30 mm. de

146.311.2 % del control <fig. F1>. Se producan contracciones

espontneas de poca amplitud pero cuya frecuencia era paralelo

al incremento contrctil causado por neostigmina; estas

comenzaban 7 mm despus de neostigmina 0.1 pH, era menores con

1 pM y desaparecan con 10 pSI.

Aunque las relaciones del TOP tenan un decremento

88

.
)
 300

250-i

-~200 i
L.
4-,
e
o
o
*
-D
~ 150

100
**
**

50-

o 0.1 1 10
Concentracibn M de neastigmina

Fig. F1.Accin contrctil de neostigmina sola (> y

despus de captopril 10 pH <A> y 100 pSI <u> sobre preparaciones
hemidiafragma de rata indirectamente estimuladas en solucin
Tyrode. En barras verticales se muestran la media s.e.m. de n=6
preparaciones. Significacin: *p<O.05, **p<0.01 y ***p<0.001.
proporcional al incremento de la dosis, con neostigmina 0.1 pM

el mximo incremento era con la relacin T1/T1 de 2.65 y la

menor relacin T4/TA de 0.87, que disminuian respectivamente

a 2.03 y 0.48 con dosis de neostigmina de 1 pSI. Con 10 pSI de

neostigmina haba tendencia a disminuir e igualarse

progresivamente la altura de los cuatro latidos del TOP de forma

tiempodependiente <tabla PI) alcanzando tambin respectivamente

los valores de 0.93 y 0.71, por el incremento despolarizante que

tiene en placa motora el exceso de neostigmina (Bowman, 1980a>.

TABLA FI
Indices del TOP por neostigmina en hemidiafragmas de rata

indirectamente estimulados con solucin Tyrode normal.

neostigmina
Cociente 0.lpM 1pM 10pM

Control
T4/T1=1.00

U 1/Ti 2.65 2.03 0.93

T2/T1 2.37 1.17 0.78
T3/Ti 2.33 1.02 0.71
T4/T1 2.31 0.99 0.67

T2/T 1 0.89 0.57 0.83

T3/T2 0.98 0.87 0.90
T4/T1 0.87 0.48 0.71
T4/t3 0.99 0.96 0.83

T1T2T3T4 eran alturas del TOP sin frmacos y

T1T2T3T4 con frmacos. Los datos eran la media de n=6
experimentos.

89
 4.2> Accin de neostiamina (0.1 SI. 1 SI y 10 SI~ desnus
de cantonril 10 SI en solucin Tvrode normal

Captopril 10 pSI solo tena un pequeo efecto de disminucin

de la contraccin, alcanzando una altura contrctil de 95.012.3

% del control. La adiccin posterior de neostigmina 0.1 pM,

despus de 3.3 mm de latencia causaba un incremento contrctil

mximo a los 10 mm. de 240.422.3 % del control (fig. F1). El

mximo contrctil permaneca estable unos minutos y despus tenia

una lenta disminucin de la contraccin si no se adicionaban al

bao ms dosis de neostigmina. En cambio, 1 pM de neostigmina

despus de captopril 10 pH causaba una disminucin de la

contraccin a 190.020.4 % del control y en unos 8.2 mm. se

estabilizaba, mientras que 10 pSI de neostigmina despus de
captopril 10 pSI disminua la amplitud contrctil con rapidez los

primeros 8 mm., alcanzando una amplitud contrctil a los 30 mm.

de 92.710.4% del control <pC0.01) que despus se haca tambin

estable o con muy lenta disminucin <fig. P1>.

El efecto de la adiccin previa de captopril 10 pSI sobre las

relaciones del TOP de neostigmina 1 pSI y 10 pSI era de incremento,

mientras que con 0.1 pSI haba un pequeo incremento o no variaban

en relacin con neostigmina sola <tabla EII).

90

.
 TABLA PII

Indices del TOP por neostigmina 0.1 pSI, 1 pSI y 10 pSI despus
de captopril 10 pH en hemidiafragmas de rata indirectamente
estimulados en solucin Tyrode normal.

captopril neostigmina
Cociente 10 pH 0.1 pH 1. pH 10 pH

Control
T4/T1=1 .00

Vi/Ti 0.93 2.71 2.28 1.23

T2/T1 0.93 2.42 1.74 1.12
T3/T1 0.93 2.30 1.60 1.05
U4/TI. 0.93 2.25 1.53 1.02

T2/T1 1.00 0.89 0.76 0.90

T3/T2 1.00 0.95 0.91 0.94
T4/TI. 1.00 0.83 0.67 0.82
T4/T3 1.00 0.97 0.95 0.96

Los datos eran la media de n=6 experimentos. Smbolos como

en tabla FI.

4.3) Accin de neosticsmina (0.1 M1 SI y 10 PU despus de

cantonril 100 aH

Aunque la contraccin era afectada ligeramente por captopril

100 pH, con una disminuci6n que alcanzaba al 92.111.0 % del

control, en cambio, causaba una disminucin de la accin

contrctil de neostigmina sola <fig. F-1). As, neostigmina 0.1

pM despus de captopril tena un comienzo de accin transcurridos

3.7 mm. de latencia, alcanzaba a los 18 mm. el mximo

incremento contrctil disminua a 224.414.8 % del control

(p<O.O5, fig. F1>; 1 pH de neostigmina causaba un pequeo y

breve incremento de la amplitud contrctil durante 1 mm.,

seguido de disminucin, que era a los 11.3 mm. de 172.012.8%

91

.
A

Fig. F2. Acci6n sobre el TOF de neostigmina (N)

sola <A) 0.1 pH, 1 pH y 10 pH y neostigmina despus de

captopril (CP) 100 pH <B> en hemidiafragmas de rata
indirectamente estimulados con soluci6n Tyrode normal.
del control <p<0.05> y despus se estabilizaba. La dosis

adicional de 10 pSI de neostigmina tena inicialmente una rpida

disminucin de la contraccin que despus era ms lenta y a los

30 mm. alcanzaba una altura contrctil de 81.69.6 % <pC0.01)

de la amplitud control.

Comparativamente con neostigmina sola, el efecto de la

adiccin previa de captopril 100 pSI causaba una mayor disminucin

en los cocientes U/T del TOP por neostigmina 0.1 pSI en relacin

con el TOE sin frmacos y en cambio mayor aumento con

neostigmina 1 pSI, excepto la relacin T1/T1 que disminua. Las

alturas contrctiles del TOP por neostigmina despus de captopril

100 pM tenan escaso gradiente y por ello los valores se

aproximaban a la unidad <fig. F2). La mayor relacin del TOP era

Vi/Ti de 1.94 con neostigmina 0.1 pSI y la menor ratio T4/T1 de

0.69 con 10 pM de neostigmina (tabla FIhI>

TABLA Ehl
Indices del TOP de neostigmina 0.1 pM, 1. pSI y 10 pH despus
de captopril 100 pSI en bemidiafragmas de rata en medio nutricio
Tyrode.

captopril neostigmina

Cociente 100 pSI 0.1 pSI 1 pSI 10 pSI

Control
T4/T1=1.0
Vi/Ti 0.88 1.94 1.69 0.78
T2/T1 0.88 1.77 1.54 0.73
1V3/T1 0.88 1.74 1.43 0.71
T4/T1 0.88 1.70 1.37 0.69
T2/T1 1.00 0.90 0.90 0.94
T3/T2 1.00 0.98 0.93 0.96
T4/T1 1.00 0.87 0.80 0.88
T4/T3 1.00 0.97 0.95 0.97
Los datos eran la media de n=6 experimentos. Smbolos como
en tabla EII.

92
 4.4> Accin de neostiamina (0.1 uM. 1 aH y 10nH~ desnus de
cantonril 10 uM en solucin Tvrode hinoclcico fCa++1

9.~ILnM.

La altura contractil. era escasamente afectada por captopril

10 pM en medio con calcio disminuido a 0.90 mM, ya que era de

97.114.2 % del control. Por otro lado, neostigmina 0.1 pH

despus de captopril 10 pSI tena una latencia de 3 mm.,

aumentaba la amplitud contrctil hasta alcanzar un mximo a los

18 mm. de 215.014.8 % del control (p<0.Ol>; 1 pSI de

neostigmina tena un incremento contrctil adicional de 16.1 %

del control en 2.7 mm., seguido de disminucin contrctil ms

rpida durante 17 mm., y despus de 8.6 mm siguientes era

estable, alcanzando una altura de 136.212.7 % de la amplitud

control (p<0.001>. Con 10 pSI de neostigmina rpidamente disminua

la contraccin en los primeros 9 mm., alcanzando una altura

contrctil de 36.28.6 % del control (p<0.001) despus de 30

mm. de aadido al bao <fig. F3), que era seguida de lenta

disminucin y en un experimento la contraccin desapareca en 45

mm.

Todas las relaciones T/T se acercaban a la unidad (tabla

EtV) con dosis 0.1 pSI y 1 pSI de neostigmina y eran de valor

unidad con 10 pSI de neostigmina, ya que el gradiente y la

amplitud de los cuatro estmulos del TOP por neostigmina 0.1 pSI

93
 300-

250

200
o
a-
4-
c
o
0150
*
a>
-c

100

50

0-J

o 0.1 1 10
Concentracin aM de neostgmina
Fig. E3. Accin contrctil de neostigmina en solucin
Tyrode normal (> y despus de captopril 10 pSI en solucin
Tyrode hipoclcico, 0.9 mSI (y) e hiperpotsico, 5.4 mM (a> sobre
preparaciones hemidiafragma de rata indirectamente estimulados.
En barras verticales se muestran la medias.e.m. de n=6
preparaciones. Significacin: *pcO.O5, **pc0.01 y ***p<0.001.
 y 1. pH estaban poco modificados (fig. P4>. Asimismo, con
relacin a neostigmina sola en Tyrode normal la mayor

disminucin era los cocientes T/T con neostigmina 0.1 pSI y sobre

todo 10 pM.

TABLA P-IV

Indices del TOE de neostigmina 0.1 pSI, 1 pSI y 10 pSI

despus de captopril 10 pSI en hemidiafragmas de rata con solucin
Tyrode hipoclcica (0.9 mM de Ca++>.

captopri 1 neostigmina

Cociente 10 pSI 0.1 pH 1 pSI 10 pSI

Control
T4/T11 .00

U 1/Ti 0.92 1.91 1.57 0.31

U 2/Ti 0.92 1.85 1.51 0.31
T 3/Ti 0.92 1.82 1.46 0.31
U 4/Ti 0.92 1.80 1.43 0.31

U 2/T 1 1.00 0.99 0.96 1.00

T 3/U 2 1.00 0.98 0.96 1.00
U 4/U 1 1.00 0.94 0.91 1.00
T4/T 3 1.00 0.99 0.97 1.00

Los datos eran la media de n=6 experimentos. Smbolos como

en tabla EII.

~5> Accin de neostiamina (0.1 aH 10 uPU desnus de

cantonnil 10 uM en solucin Tvrode hinernotsica FK+lo 5.4 mSI

En medio hiperpotsico, captopril 10 pM tena un ligero

incremento contrctil, de 106.314.4% del control. Neostigmina

despus de captopnil tena menor incremento contrctil en

relacin con neostigmina sola en solucin Tyrode normal. El

comienzo del efecto comparativamente con neostigmina sola tena

94

.
una latencia que se incrementaba significativamente <p<0.05> con
neostigmina 0.1. pH despus de captopril 10 pH en Tyrode [K+]o

5.4 mM, de 3.30.18mm. en solucin Tyrode normal a 5.20.23

mm. La mxima altura contrctil (162.711.8 % de la amplitud

control, pc0.001) era alcanzado despus de 16.2 mm. Con 1. pSI

de neostigmina rpidamente disminua la contraccin durante 3.3

mm., y despus de 7.5 mm., alcanzaba una altura mantenida de

92.612.9 % (p.cO.001> del control (fig. E3). Neostigmina 10 pSI

tenia disminucin contrctil adiccional, con rapidez durante 2.5

mm., y lentamente durante 18 mm., hacindose posteriormente

estable o con muy pequea disminucin de la contraccin en

algunos experimentos; a los 30 mm. la altura contrctil

alcanzada era de 61.015.1 % del control (p<0.Oi>.

TABLA P-V

Indices del TOE de neostigmina 0.1 pSI, 1 pH y 10 pSI despus

de captopril. 10 pH en hemidiafragmas de rata en solucin
hiperpotsica [K+]o 5.4 pH.

captopril neostigmina
Cociente 10 pSI 0.1 pSI 1 pSI 10 pH

Control
T4/T1=l.0

Vi/Ti 1.05 1.62 0.88 0.66

T2/T1 1.07 1.51 0.79 0.64
T3/T1 1.07 1.45 0.75 0.62
T4/T1 1.07 1.42 0.74 0.62

T2/T1 1.01 0.92 0.90 0.96

T3/T2 1.00 0.96 0.94 0.97
T4/T1 1.01 0.87 0.84 0.94
T4/T3 1.00 0.97 0.98 0.99

Los datos eran la media de n=6 experimentos. Smbolos como

en tabla EII.

La altura y gradiente del TOP eran menores en medio

95
 A

Fig. F-4.- Accin sobre el TOE de neostiginina <N>

0.1 pM, 1 pH y lo ~H despus de captopril <CP) 10 pH en
hemidiafragnias de rata indirectamente estimulados con
solucin Tyrode hipoclcico <A> e hiperpotsico (a).
hiperpotsico <fig. P4). Con relacin al TOP con neostigmina

sola en medio de Tyrode normal, disminua el valor de los

cocientes U/T del TOP con neostigmina 0.1 pSI, 1 pSI y 10 pSI

despus de captopril 10 pH. En cambio, las relaciones U/U eran

de valor prximo a la unidad y estaban incrementadas con

neostigmina <tabla PV>, por el. estado de despolarizacin causado

por el aumento de potasio en el medio nutricio. Eo obstante, la

evolucin del tren de a cuatro <TOP> en medio hiperpotsico en

relacin con neostigmina sola en solucin Tyrode normal, tena

un incremento mayor con la relacin Vi/Ti de 1.62 con

neostigmina 0.1 pSI despus de captopril 10 pH y el decremento

mayor era con las ratios T3/T1 y T4/T1 de 0.62 con

neostigmina 10 pH.

96
 5> ACCIN CONTRACTIL COMPARATIVA DE RANITIDINA Y NEOSTIGMINA

EN HEMIDIAFRAGMAS DE RATA AISLADOS.

5.1> Accin de ranitidina y neosticmina en hemidiafrapmas

de rata aislados en solucin Tvrode normal directa e

indirectamente estimulados.

A) Curva dosis respuesta de neostigmina <0.1 pSI 10 pSI>.

Con dosis de neostigmina 0.01 pSI e inferiores no haba

incremento contrctil, mientras que con 0.1 pH haba un

incremento contrctil mximo que era alcanzado en unos 9 mm.,

de 265.319.8 % del control <pcO.O01> estimulando el nervio

frnico y de 247.722.1 % del control <pC0.OO1> con estimulo

directo, tras un periodo de latencia de 186.714.7 segundos.

Dosis superiores disminuan el efecto contrctil. Asi, con

neostigmina 1 pSI en 8 mm. se alcanzaba una altura contrctil

mxima respectivamente de 218.415.8 % de la amplitud control

<pcO.01> con estmulo indirecto y de 212.017.9 % del control

<pC0.01) con estimulo directo y con neostigmina 10 pSI causaba a

los 30 mm. un decremento contrctil adiccional, que era

respectivamente de 92.39.5 % del control y 90.29.2 % de la

amplitud control con estimulo indirecto y directo.

En la evolucin de las relaciones del TOE <tabla 01V> haba

una altura mxima de T1 con dosis 0.1 pSI de neostigmina <tabla

GII> que disminua de forma tiempo y dosisdependiente. La

97

relaci6n T4/T1 era de 0.70 con dosis 0.1 pSI, de 0.53 con dosis

1 pH de neostigmina y con dosis 10 pH, inicialmente era de 0.78

y se aproximaba al. valor de la unidad, de forma tiempo

dependiente por el efecto desensibilizante del exceso de

neostigmina (Bowman, 1980)

B) Accin de ranitidina despus de neostigmina.

En hemidiafragmas aislados de rata estimulando el nervio

frnico neostigmina 0.1 pSI en dOsis nica produca un incremento

contrctil mximo de 258.623.7 % del control (pC0.001) en 9

mm. y la adicin posterior de ranitidina 100 pSI al bao de

rganos, deprima lentamente este valor un 25.5% en

aproximadamente 11 mm. <tabla 01>, hasta alcanzar una altura

contrctil de 232.8 27.9 % del control <<0.01>.

El tren de a cuatro <TOP> presentaba con neostigmina 0.1

pSI una relacin T4/Ttl de 0.83 y ranitidina 100 pH despus no
lo modificaba, relacin T4/T1 0.84 <tabla GIV>. Ranitidina

tambin disminua ligeramente la altura del TOP causada por

neostigmina (hg. G1 y tabla 0II>. El valor del ttanos de 50

Hz durante 5 seg. disminua hasta alcanzar una altura contrctil

de 94.48.8% del control con neostigmina 0.1 pSI y ranitidina

100 pH despus produca una respuesta tetnica prcticamente

anulada (fig. G2), con una altura contrctil de 8.73.5 % de].

control (p<0.001).

98
 C> Accin de neostigmina despus de ranitidina.

Cuando se inverta el orden de adicin al medio nutricio de

ranitidina y neostigmina, los efectos contrctiles eran

diferentes. Con ranitidina 100 pSI el incremento contrctil mximo

era en 4 mm. de 165.315.3 % del control (p<0.01> y

neostigmina 0.1 pSI despus produca una altura contrctil mayor,

de 181.017.5% del control <p<O.01) en cerca de 26 mm. <tabla

G-I>.

T A B L A GI

Accin de neostigmina 0.1 pSI y de ranitidina 100 pM sobre

la tensin contrctil en el hemidiafragma de rata, con estimulo
indirecto en solucin Tyrode normal [K+]o 2.7 mM e hiperpotsico
(K+]o 8.1 mM.
Altura contrctil Tyrode normal Tyrode hiperpotsico

control 100.0 100.0

Ranitidina sola 165.315.3** 122.715.7

Neostigmina
depus de ranitidina 181.017.5** 104.913.8

Neostigmina
sola. 258.323.7** 119.310.9

Ranitidina
despus de
neostigmina 232.827.9** 94.113.3

Todos los datos eran la media e.s.m. de n= 6 exptos.

Significacion: *pCO.O5; **p<0.O1; ***p<O.OOl

Con ranitidina 100 pH la relacin T4/U1 era de 0.79, la

ms baja de todos los TOP de Tyrode normal <fig.G-1) y la adicin

99
 A B

C R N CM R

Fig. G1.Registros del TOE control (C),

ranitidina (E) 100 pH y neostigmina (N) 0.1
pM en hemidiafragmas de rata indirectamente
estimulados con Tyrode normal, segn el
orden de adiccin al medio nutricio.

A
C R
4
14

C 14 R

Fig. G2.Evolucin del. ttanos segn el orden de adiccin

al medio con Tyrode normal de ranitidina (R> 100 pH y neostigmina
(1]) 0.1 pH en relacin al control (O), en hemidiafragmas de rata
indirectamente estimulados. Calibracin 6 s. y 2 g.
posterior de neostigmina 0.1 pSI lo incrementaba a 0.84 (tabla 0

IV) . La altura contrctil del TOP con ranitidina 100 pSI era cerca

del 50% menor que con neostigmina 0.1 pM y la adiccin de

neostigmina despues de ranitidina incrementaba el valor del TOE

de ranitidina sola <tabla 0II>. El ttanos con ranitidina 100

pSI tena una altura de 108.56.0 % del control, mientras que

neostigmina 0.1 pH despus disminua este valor hasta 87.86.2

% del control (fig. 02>.

D> Accin contrctil comparativa de ranitidina y

neostigmina.

Ranitidina en dosis nica (100 pH) causaba un incremento

contrctil instantneo, que era maximo en unos 4 mm., de

165.315.3 % del control <p<0.01) y 162.516.9 % del control

<p<0.01> respectivamente con estmulo indirecto y directo.

Ranitidina a dosis <10 pSI no causaba incremento de la

contraccin. Paralelamente neostigmina a dosis <0.01 pSI no

incrementaba la contraccion en el hemidiafragma de rata, pero

a concentracion 0.1 pSI tras una latencia de 3.2 mm. causaba un

incremento contrctil mximo en unos 9 mm., de 258.323.7% del

control (p<0.0 1) y 247.722.1% de la amplitud control (p<0.01>

respectivamente con estimulo indirecto y directo. Dosis de

neostigmina >0.1 pSI causaban disminucin de la contracin. Se

intent obtener menor efecto con menores dosis, siendo imposible

por: a> la larga latencia; b> respuesta similar al todo o nada,

es decir con dosis por debajo de 0.1 pSI haba unas veces si y

100
otras no respuesta mxima y c> desglosando 0.01 pH 6 0.1 pH en

subdosis acumulativas no fu posible obtener curva dosis

respuesta. Ranitidina a dosis altas como 1 mM no alcanzaba el

incremento contrctil mximo de neostigmina, aunque la rorfologa

de los efectos era superponible. Por otro lado, cuando la

duracin de los estmulos en vez de 0.2 ms <todo este trabajo)

era 2 ms., en la CDR de ranitidina haba tambin efectos

depresores a dosis altas de 1 mM.

TABLA OII

Altura contrctil del TOE (T1,T2,T3 y T4> por neostigmina

(Neos.> y ranitidina <Ran.> en hemidiafragmas de rata indi-
rectamente estimulados con solucin Tyrode normal. Todos los
valores representan el % de la media y el error estndar de la
media (xe.s.m.> de n=6 exptos.

Altura contrctil Ti T2 T3 T4

Control T4=100 100.0 100.0 100.0 100.0

Neos. 0.lpSI 267.017.4**239.816.9**228.516.6**223.29.5**

Ran. 100 pSI

despus de 254.717.7**230.314.4**219.016.1**215.410.8**
neos. 0.1 pSI

flan. 100 pSI 146.28.9** 128.26.7* 120.68.5 116.55.3

Neos. 0.1 pSI

despus de 151.86.8** 133.44.7* 129.66.5* 128.55.4*
ran. 100 pSI

Todos los datos eran la media e.s.m. de n= 6 exptos.

Significacin: * p<0.05; ** p<0.01

101
 5.2> Accin de ranitidina y neosticimina en hemidiafragmas

de rata aislados en solucin Tvrode hinernotsico (8.1

A> Accin de ranitidina despus de neostigmina.

El incremento de (K+Jo de 2.7 mM a 8.1 mM en la solucin

Tyrode, causaba un ligero aumento de la contraccin al estmulo
indirecto. Neostigmina 0.1 pSI tena un periodo de latencia, de

unos 3.3 mm., seguido de un incremento contrctil rpido, de

119.310.9 % del control, en 2.5 mm. y despus haba una

disminucin suave y prolongada, que era a los 10 mm. de una

altura contrctil de 106.43.4 % del control. Ranitidina 100 pH

despus de neostigmina 0.1 pSI produca una pequea y lenta

disminucin de la altura contrctil, que era aproximadamente

a los 14 mm. de 94.113.3 % del control (tabla GI).

La evolucin del TOE <fig. G3> presentaba tipicamente una

disminucin de T2 mayor que T3 tanto en presencia de

neostigmina 0.1 pSI sola como de ranitidina 100 pSI despues de

neostigmina 0.1 pSI y las relaciones respectivas de T3/T2 en vez

de ser menor de la unidad como en Tyrode normal era mayor. El

menor valor contrctil de ambos frmacos se produca con T2 de

ranitidina 100 pSI despues de neostigmina 0.1 pSI y el mayor valor

era de T1 de neostigmina 0.1 pSI sola. Los valores del TOP

tenan escasa variacin en presencia de uno o ambos frmacos en

este orden de adicin (tabla GIII). As con neostigmina 0.1 pSI

la relacin T3/T2 era 1.10, mayor que con la adicin posterior

de ranitidina 100 pSI (con relacin de 1.01), que diferan de las

102
relaciones similares del TOP en Tyrode normal, siempre inferiores
a la unidad (tabla GIV>. El ttanos de 50 Hz durante 5 segundos

TABLA GhII

Altura contrctil del TOE <T1,T2,T3 y T4> por neostigmina

y ranitidina en hemidiafragma de rata con solucin Tyrode
hiperpotsica (ICtio 8.1 mM.
Altura contrctil Ti T2 T3 T4
Control T4=100 % 100.0 100.0 100.0 100.0

Neos. 0.1 pM 91.08.5 80.312.1 88.910.0 88.910.0

Ran. 100 pH
despus de 80.38.5 77.111.0 78.510.3 77.811.2
Neos. 0.1 114
flan. 100 pSI 109.819.3113.121.6 111.821.3110.121.2

Neos. 0.1 pSI

despus de 101.323.6 97.024.5101.624.2102.224.5
flan. 100 pH
Todos los valores representan el % de la media y el error
estndar de la media <xe.s.m.> de n=6 exptos.

decreca con neostigmina 0.1 pSI, alcanzando una altura contractil

de 73.06.4 % del control <p<0.05) y prcticamente se anulaba con

la adicin posterior al bao nutricio de ranitidina 100 pSI, con

una altura contrctil de 3.00.2 % del control (p<0.001> <fig.

G4>.

B> Accin de neostigmina despus de ranitidina en solucin

Tyrode hiperpotsica, [K+]o 8.1 mM.

Ranitidina 100 pSI en la preparacin frnicodiafragma

indirectamente estimulada tena un incremento contrctil

103
 A B

C R 14

diafragmas adiccionando tL
[K+]o Fig.
estimulados conde
mM, rataTyrode
8.1 G3.Registros
solucin enindirectamnente
tpicos del TOE en
hiperpotsico
1iI-it11.
A neostigmina
<N) 0.1 pSI y despus ranitidina (fi> 100 pH y
en B en orden inverso.

A
c R 14

C
1
14 R
4
Pig. G4.Evolucin del ttanos control (C> en
hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados con solucin
Tyrode con K+ 8.1 mM, segn el orden de adiccin al medio de
ranitidina (fi) 100 pH y neostigmina 0.1 pH. Calibracin 6 s. y
2 g.
bifsico, que era en cerca de 1 mm. de 122.715.7 % del control>

con descenso posterior> alcanzando una altura la contraccin de

108.76.3% del control en unos 10 mm. Con neostigmina 0.1 pSI

despus de ranitidina haba tambin un pequeo decenso

contrctil adiccional, que era a los 15 mm. de 104.913.8% del

control <tabla GI>

Si se compara la accin contrctil de ranitidina y

neostigmina en medio hiperpotsico (Tabla GI), se deduce que

ambos frmacos la tienen muy amortiguada, si bien ranitidina

tena un incremento contrctil mayor que neostigmina.

TABLA 3-1V

Indices del tren de a cuatro <TOE) en solucin Tyrode normal

e hiperpotsica [K+]o 8.1 mM, en presencia de neostigmina <N> 0.1
pM y/o rantidina (R> 100 pSI. fiN ranitidina despus de
neostigmina. NR neostigmina despus de ranitidina. Ti, T2, TS y
T4 son valores del TOE sin frmacos y Vi, T2, T3 y T4 en
presencia de frmacos.

Tyrode normal Tyrode hiperpotsico

Relacin N fiN R NR N fiN fi NR

T4/Tl control 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

U 1/Ti 2.67 2.54 1.46 1.51 0.91 0.80 1.09 1.01

T 2/Ti 2.39 2.30 1.28 1.33 0.80 0.77 1.13 0.97
U 3/Ti 2.28 2.19 1.20 1.29 0.68 0.78 1.11 1.08
T 4/Ti 2.23 2.15 1.16 1.28 0.88 0.77 1.10 1.02

U 2/U 1 0.89 0.90 0.87 0.87 0.88 0.96 1.03 0.95

T3/T 2 0.95 0.95 0.94 0.97 1.10 1.01 0.98 1.04
T 4/T 1 0.83 0.84 0.79 0.84 0.97 0.96 1.00 1.00
T 4/TNtese
3 que en medio
0.97 hiperpotsico
0.98 0.96 0.99 las 1.00
relaciones
0.99 del
0.98TOP se
1.00

acercan a la unidad.

Ranitidina 100 pSI sola, a diferencia de neostigmina 0.1 pSI

104
sola, produca en las relaciones del TOP un incremento contrctil
mximo en T2 (fig. G3) y el decremento mximo era tambin de

T2 en presencia de neostigmina 0.1 pSI despus de ranitidina 100

pH <tabla GIhI). Las relaciones del TOF eran mayores o iguales

a la unidad, excepto T3/T2 y T4/T3 de ranitidina sola, as

como T2/T1 y T2/T1 de neostigmina despus de ranitidina (tabla

31V>. El valor del ttanos no variaba o lo haca tenuamente,

tanto en presencia de ranitidina 100 pSI como en presencia de la

adicin posterior de neostigmina 0.1 pH, que era respectivamente

de 101.67.3 % del control y 90.55.6% del control (hg. G4>.

105
 6. ACCIN CONTRACTIL ANTICURARE COMPARATIVA DE RANITIDINA
Y NEOSTIGMINA PRENTE A ATRACtJRIO.

6.A> Hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados en

solucin Tyrode normal.

6.A.1> Accin de atracurio solo.

Despus de 15 mm atracurio 8 pH disminua la contraccin

por estimulo indirecto a 62.16.6 % de la amplitud control
(2<0.05) n=6, (tabla HI>. Como se muestra en fig. H1,
atracurio a esta concentracin disminua la contraccin

significativamente <tabla HII) de forma dosis y tiempo

dependiente.

TABLA H-I

Altura contrctil mxima y ttanos de ranitidina (R) 100 pSI,

neostigmina (14) 0.1 pH segn el orden de administracin al bao,
despus de atracurio (A> 8 pSI a los 15 mm., en hemidiafragmas
de rata indirectamente estimulados, en solucin Tyrode normal.

contraccin ttanos

Altura g. tensin g. tensin

Control 1.960.22 100.0 3.940.19 100.0

A 1.220.24 62.16.6* 0.o00.00*** 0.00.0***

MI 1.470.34 72.99.6 0.120.04*** 3.00.7***
ARN 1.530.30 75.08.9 O.380.11*** 9.61.7***
AN 1.730.33 88.39.5 0.170.02*** 4.30.4***
ANR 2.490.38 127.211.4 0.270.04*** 6.80.6***

A=atracurio solo; AR=ranitidina despus de atracurio; ARN

Atracurio seguido de ranitidina y despus neostigmina; AN
neostigmina despus de atracurio; ANR atracurio seguido de
neostigmina y despus ranitidina. Los datos eran la mediae.s.m.
de n=6 exptos. Significacin: * 2<0.05; ** 2<0.01; ~ pC0.001.

106
 Cf
//
A 44
R
Al
N

c A R

Fig. H1.Registros del TOP de atra

crurio 8 pSI (A), seguido de neostigmna 0.1
pH (N) y ranitidina 100 pH <R>, segn el
orden de adiccin al liquido nutricio Tyrode
normal, en hemidiafragmas de rata indirec-
tamente estimulados.
 Las relaciones del TOP eran de tendencia a disminuir (fig.

Hl> tambin de forma dosis y tiempodependiente. Asimismo,

despus de 15 mm. de la adiccin de atracurio al bao la ratio

T4/T1 de 0.18 era la mas sensible a la curarizacin y la menos

sensible era T4/T3 de 0.98 (tabla HIII).

TABLA HII

Altura contrctil del tren de a cuatro <TOP) de atracurio

8 pM a los 15 mm, seguido de ranitidina 100 pM, y neostigmina
0.1 pSI en el hemidiafragma de rata con estimulo indirecto en
solucin Tyrode normal.

Altura contrctil Ti T2 T3 T4

Control T4=l00.0 100.0 100.0 100.0 100.0

A 55.96.8* 29.03.1***20. 43.5***18. 33.

MI 75.59.7 63.98.3* 55.96.9* 52.59.0**

ARN 76.79.2 68.54.7* 63.63.5* 61.44.4*

AN 87.911.5 75.212.5 70.712.4 69.411.5

ANR 121.316.7 84.114.9 75.212.9 72.99.6

Smbolos como en tabla HI. Los datos eran la mediae.s.m.

de n=6 exptos. Significacin: *p<0.05; **P.C0.001; ***P<0.001.

La estimulacin indirecta a 50 Hz durante 5 seg. causaba

anulacin del ttanos,muy significativa <P<0.001>, <tabla HI)

y en su lugar haba una contraccin fugaz, mostrada en figs. H2

107
 c t
N

11
1 1
ji
II
ji

C A N

Eig. H2.Evolucin del ttanos de atracrurio 8 pSI <A),

seguido de neostigmina 0.1 pM <14) y ranitidina 100 pH (fi), segn
el orden de adiccin al liquido nutricio Tyrode normal en
hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados. Calibracin E
s. y 2 g.
 6.A.2) Accin anticurare de ranitidina despus de

neostigmina .

Atracurio despus de 15 minutos de su adicin al medio

nutricio causaba una disminucin de altura contrctil de 62.16.6

% del control (p<0.05>. Neostigmina 0.1 pH despus de atracurio

causaba un progresivo incremento de la contraccin hasta 88.39.5

% de la amplitud control en 11.6 miii. aprox. que era seguido de

un incremento contrctil adi.ccional hasta 127.211.4 % del

control con la adiccin posterior al liquido nutricio de

ranitidina 100 pSI. El incremento contrctil por ranitidina era

tambin instantaneo tras su adicin al bao y el mximo efecto

se presentaba en 4 mm.

Tabla HIII
Indices comparativos del tren de acuatro <TOE> de atracurio
(A) 8 pH solo a los 15 mm., seguido de ranitidina 100 pH, y
neostigmina 0.1 pSI en el hemidiafragma de rata con estimulo
indirecto en solucin Tyrode normal.

Relacin A AN ANR MI ARN

T4/T1 control 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

T1/T1 0.56 0.88 1.21 0.75 0.77

T2/T1 0.29 0.75 0.84 0.64 0.68
T3/T1 0.20 0.71 0.75 0.56 0.64
T4/T1 0.18 0.69 0.73 0.52 0.61

T2/T1 0.51 0.85 0.69 0.84 0.89

T3/T2 0.70 0.94 0.89 0.87 0.92
T4/T1 0.32 0.78 0.60 0.69 0.80
T4/T3 0.89 0.98 0.96 0.93 0.96

Smbolos como en tabla HI.

108
 Neostigmina y ranitidina incrementaban la altura de las
contracciones del TOE <fig. H1 y tabla HII). Con neostigmina

0.1 pSI la relacin T4/T1 era 0.78, en contraste con la adicin

posterior de ranitidina 100 pM que la disminuia a 0.60(tabla H

III) . Un ejemplo de las respuestas del TOF en presencia de

atracurio seguido de neostigmina y despus ranitiduna se muestran

en fig. H1. Con este orden la accin anticurrica era de gran

potenciacin, mostrado en la mayor altura del TOP y en su

gradiente contrctil.
La anulacin del ttanos por atracurio 8 pH se incrementaba

poco por neostigmina 0.1 pSI e igualmente con ranitidina despus

de neostigmina (fig H2 y tabla 111)

6.A.3> Accin anticurare de neostigmina despus de

ranitidina .

Neostigmina despus de ranitidina no tenan una

significativa potenciacin contrctil anticurrica. As,

atracurio 8 pSI a los 15 mm. disminuia la contraccin a 58.27.1

% del control (p<0.05) y ranitidina 100 pH lo incrementaba a

72.99.6 % del control en unos 4 mm. Neostigmina 0.1 pH despus

de ranitidina 100 pSI causaba en alrededor de unos 7 mm. un

pequeo incremento contrctil adicional hasta 75.08.9 % del

control (tabla HI).

El incremento de los estmulos del TOP <fig. H3> era en

este orden T4>T3>T2>T2. (tabla II); la menor relacin era

T4/T1 de 0.69 con ranitidina 100 pSI despus de atracurio y con

109
neostigmina 0.1 pH despus de ranitidina se incrementaba a 0.80

(tabla HhII)

El ttanos deprimido por atracurio tena uit pequeo

incremento tanto por ranitidina sola como con neostigmina despus

de ranitidina (fig. H2 y tabla HI>

6.B) Hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados en

solucin Tyrode hiperpotsica, <K+ 8.1 mM>.

6.B.1) Accin de atracurio solo.

Despus de 15 mm. de la adiccin al lquido nutricio de

atracurio 8 pSI, la contraccin por estimulo indirecto disminua

a 79.35.4 % del control de forma tiempo dependiente.

Las relaciones del TOE tambin disminuan de forma tiempo

dependiente con atracurio, siendo la ms sensible a la

curarizacin T4/T1 de 0.45 y la menos sensible T4/T3 de 0.99

<tabla 11111>.

La estimulacin repetitiva a 50 Hz durante 5 seg. causaba

una una significativa (p<0.0O1) anulacin del ttanos (tabla HI>

y en su lugar apareca una contraccin fugaz (figs H4>.

6.B.2> Accin anticurare de ranitidina despus de

neostigmina.

Neostigmuna 0.1 pH adiccionada al bao nutricio despus del

110
 C
t
A
t
R
t
N

c A N R

Eig. H3.--Registros del TOF de atra

crurio E pH (A>, seguido de neostigmina 0.1
pH (14> y ranitidina 100 pSI <fi), segn el
orden de adiccin al lquido nutricio Tyrode
con K+ 8.1 mM~ en hemidiafragmas de rata
indirectamente estimulados.
efecto de atracurio 8 pH inmediatamente incrementaba la
contraccin basta un mximo de 96.77.2 % del control en aprox.

12 mm. Ranitidina 100 114 despus de neostigmina disminua la

altura contrctil a 89.19.7 % del control (tabla HT> despues

de 4 mm.

TABLA H-IV
Altura contrctil mxima y ttanos de ranitidina <R) 100 pSI,
y neostigmina <N) 0.1 pH despus de atracurio (A> 8 pSI, segn
el orden de administracin al bao, en hemidiafragmas de rata
indirectamente estimulados, en solucin Tyrode hiperpotsica.

contraccin ttanos
Altura
contrctil g. tensin % g. tensin

Control 1.840.11 100.0 4.100.09 100.0

A 1.460.10* 79354* 0.0O0.00*** 0.00.0***

AR 1.800.14 98.38.6 0.000.00*** 0.00.0***
ARN 1.810.17 98.29.0 O.000.00*** QQQQ***
AN 1.780.18 96.79.7 0.350.11*** 8.51.7***
ANR 1.640.25 89.13.8 O.580.15*** 14.12.3***

Smbolos como en tabla HI. Todos los datos eran la

mediae.s.m. de n=6 exptos. Significacin: * <0.05; ** <0.01;
**~ p<0.0Ol.

Tanto neostigmina como ranitidina incrementaban todas las

relaciones del TOP, que eran con T4/Tl respectivamente de 0.91

y 0.92 <tabla HIhI>. Un ejemplo de las respuestas macnicas del

TOP en presencia de neostigmina y despus ranitidina en su accin

anticurrica se muestran en fig. H3.

111
 c it it
A 14

fi
c A 14 R

Eig. H4.Evolucin del ttanos de atracrurio 8 pH CA),

seguido de neostigmina 0.1 MM (N> y ranitidina 100 pH (fi>. segn
el arden de adiccin al liquido nutricio Tyrode con K+ 8,1 mM, en
hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados. Calibracin 6
s. y 2 g.
 TABLA H-V

Altura contrctil del tren de a cuatro (TOE) de atracurio

8 pSI a los 15 mm, seguido de ranitidina 100 pSI, y neostigmina
0.1 pH en e]. hemidiafragma de rata con estimulo indirecto en
solucin Tyrode hiperpotsica.

Altura contrctil Ti T2 T3 T4

Control
T4=100.0 100.0 100.0 100.0 100.0

A 78.57.3* 54.95.4*** 46.05.4*** 45.85.4***

AR 71.87.2** 52.27.2*** 43.26.1*** 40.85.1***

ARN 71.16.1** 54.95.8*** 47.05.1*** 44.34.4***

AN 92.47.5 86.97.0 84.26.8 84.26.8

ANR 84.010.7 79.89.1 77.78.1 78.08.6

Smbolos como en tabla HI. Todos los datos eran la

mediae.s.m. de n~6 exptos. Significacin: *P.C0.05; **P<0.001;
***p.CO .001.

El ttanos anulado por atracurio, se recuperaba y era

incrementado por neostigmina y an ms por la adiccin posterior

de ranitidina hasta alcanzar un 14.12.3 % del control, altura

no alcanzada en solucin Tyrode normal (Tabla HIV>.

6.B.3> Accin anticurare de neostigmina despus de

ranitidina.

En la depresin contrctil por atracurio en solucion Tyrode

hiperpotsica, no se produca potenciacin anticurrica por

neostigmina y ranitidian en la contraccin por estmulo indirecto

al nervio frnico (tabla HI>, as la altura contrctil de

112
atracurio a los 15 mm era de 79.35.4 % del control y el

incremento contrctil con ranitidina era de 98.38.6 % del

Tabla EVI
Indices comparativos del tren de a cuatro <TOF) de atracurio
(A) 8 pM solo a los 15 mm., seguido de ranitidina 100 pM, y
neostigmina 0.1 pH en el hemidiafragma de rata con estimulo
indirecto en solucin Tyrode hiperpotsica.

Relacin A AN ANR MI ARN

T4/T1 control 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

Tl/T1 0.78 0.92 0.84 0.71 0.71

T2/T1 0.54 0.86 0779 0.52 0.54
T3/T1 0.46 0.84 0.77 0.43 0.47
T4/TI. 0.45 0.84 0.78 0.40 0.44

T2/T1 0.69 0.94 0.95 0.79 0.77

T3/T2 0.83 0.96 0.97 0.82 0.85
T4/Tl 0.58 0.91 0.92 0.56 0.62
T4/T3 0.99 1.00 1.00 0.94 0.94

Smbolos como en tabla 111.

control a los 4.5 mm. aprox. y con neostigmina 0.1 pSI despus

de ranitidina la altura contrctil era de 98.29.0% del control,

prcticamente inalterada.

Aunque la relacin T4/T1 del TOP es la que mejor indica

reversin de la curarizacin y pasaba de 0.56 con ranitidina sola

a 0.64 con neostigmuna despus de ranitidina, indicando mayor

reversin <tabla HIII) . El ttanos anulado por atracurio

evolucionaba con recuperacin de 3.00.7 % de altura contrctil

con ranitidina y 9.61.7 % del control con neostigmina despus

de ranitidina (tabla HI>.

113
IV. DISCUSION
 XV. DISCUSTON.

En la interaccin de las variaciones jnicas con la accin

contrctil de ranitidina en placa motora de rata se obsrvaba que

el incremento del [<+10 de 2.7 mM a 5.4 mM disminua el Emax de

ranitidina y no haba incremento contrctil en preparaciones

despolarizadas por 8.1 mM de [K+]o. En estas circunstancias se

incrementa la frecuencia del m.e.p.p. y se despolariza el

potencial de membrana del msculo (Asai and col., 1.982). De esta

manera ranitidina ejerca un pequeo efecto de incremento

contrctil, acorde con el nuevo estado de despolarizacin

repolarizacin muscular. No est claro cmo se produce el proceso

de acoplamiento excitacincontraccin y el menor acortamiento

de las proteinas contrctiles en la contraccin causada por

ranitidina aumentando (K+]o. La liberacin de Ca++ del SR del

msculo estriado se inactiva por despolarizacin de la membrana

por K+ o fijacin de voltaje (Bowman, 1.980> al igual que en

msculo cardaco (Beeler and Reuter, 1.970>.

Disminuyendo a la mitad y a un cuarto la [Ca++]o del medio

nutricio normal, el incremento contrctil mximo de ranitidina

se deprima proporcionalmente. Tambin el Emax de ranitidina se

deprima aumentando al doble la concentracin de [Ca++]. Esta

accin Ca++dependiente sugiere que se aumenta la entrada de

Ca++ dentro del msculo y/o nervio, ya que llevan un curso

paralelo el decremento de [Ca++]o y la disminucin de la fuerza

contrctil de ranitidina por los estmulos directo e indirecto.

Por ello cabe que ranitidina tenga un efecto mixto, a nivel de

msculo y a nivel de nervio, incrementando Ca++ libre y

115

favoreciendo tanto el proceso contrctil muscular como la

liberacin de acetilcolina. Los inhibidores de canales de Ca++

Tambin inhiban el efecto contrctil de ranitidina tanto con

estmulo directo como con estmulo indirecto, pat posible

movilizacin del Ca++ en placa motora producido por ranitidina

que favorecerla su efecto contrctil]. Por otra parte, otros

antihistamnicos -(2 como cimetidina y metiamida incrementan el

mf lux de Ca++ en msculo cardiaco <Sawamura and col. 1.985) como

resultado del incremento de AMPc intracelular. Aunque la

liberacin de Ca++ del SR puede ser inducida tambin por

compuestos con grupo reactivo SH (Martonosi, 1.984>, se desconoce

si este es el caso de ranitidina, que tambin lo posee.

El incremento contrctil de ranitidina se deprima conforme

se aumentaba [Mg++]o de O mM a 6 mM y a l2mM. En el diafragma de

rata, in vitro, e]. contenido cuantal de epps era incrementado

elevando [Ca++]o y disminuido aumentando (Mg++]o <Hubbard and

col. 1968). No est claro la ausencia de contraccin de

ranitidina a dosis bajas seguida de disminucin contrctil a

dosis mayores de 104M cuando se inhiba la neurotransmisin a

nivel presinptico con alto [Mg++]o y bajo [Ca++]o.

Por ello, el efecto contrctil de ranitidina en placa motora

puede ser multifactorial. Este frmaco inhibe pseudocolinesterasa

y ms potentemente acetilcolinesterasa <Hansen and Bert, 1983),

de ah que un efecto similar a prostigrnina podra justificar

algunos efectos que vemos en este trabajo. No obstante,

ranitidina en nuestra preparacin acta instantaneamente,

mientras que neostigmina presenta siempre una latencia. El efecto

nicotnico estimulante en placa motora de ranitidina ha sido

116
explicado en base a la analoga estructural que presenta con el

compuesto metilfurtretonio, de efectos colinrgicos <Re and col.,

1983>. A su vez, estos compuestos tienen en comn el grupo

dimetilaminometilfuranometil, estructuralmente similar a

acetilcolina, que posibilitaran el que ranitidina se uniera a

los mismos sitios: receptor nicotnico y enzima colinesterasa,

teniendo en cuenta tambin que el nitrgeno terciario de

ranitidina se puede cuaternizar a pH fisiolgico. No obstante,

ranitidina no slo no sustituye a Ach como agonista nicotnico

en el hemidiafragma de rata cuando se inhibe a nivel presinptico

la liberacin de Ach con el medio bajo en Ca++ y alto en Mg++,

sino que incluso deprime la contraccin. Es por tanto posible el

que sea preponderante la inhibicin de colinesterasa.

Estos hechos entran en conflicto con otros resultados

opuestos aparentemente, ya que ranitidina en la preparacin

msculo sartorionervio citico de rana disminuye la frecuencia

del contenido cuantal y amplitud de m.e.p.p. y e.p.p. (Re and

Rossini, 1.984> debido a un bloqueo pre y postsinptico causado

por este frmaco. Esta observacin es debida a que los efectos

colinrgicos de ranitidina no son ubicuos (Re and col 1.983),

presentando incluso efectos anticolinrgicos, dependiendo del

tejido y especie. En resumen, ranitidina tiene un efecto

contrctil en msculo estriado, pero se precisan otros estudios

para conocer su mecanismo de accin y el grado de interaccin con

otros efectos hipotticos o ya conocidos como son: el aumento de

Ca++ libre por disminucin del Ca++bound, aumento de la

liberacin de acetilcolina, efecto agonista nicotnico muscular

directo e inhibicin de colinesterasa.

117
 El principal efecto de los frmacos calcioantagonistas en

placa motora es la depresin contrctil por mecanismos pre y

postsinticos <Publicober and Duncan, 1979) . En placa motora se

han identificado receptores para estos frmacos <Reynolds and

col.,1983; Fosset and col., 1983). Verapamil causa efectos

neuromusculares, principalmente bloqueo contrctil en la rana

<Kraynack and col., 1983), aunque en otras preparaciones como

hemidiafragma de rata, carece de efecto para algunos autores

(Bikbaz and col., 1982), debido a la falta de accin contrctil

manifiesta a bajas dosis. En esta tesis se ensay verapamil para

conocer cmo modificaba la respuesta del antihistaminico H2

ranitidina. Se observ una significativa disminucin contrctil

del efecto mximo de ranitidina por verapamil de tipo no

competitivo y dosis dependiente como sigue: con 106 M de

verapamil era cerca del 20 %; con 105 cerca del 40 % y con 104

aproximadamente el 90 %. Estos valores demuestran una interaccin

importante en placa motora de rata. Tambin con dosis 104 M de

verapamil haba un efecto facilitador contrctil de ranitidina,

ya que aumentaba muy precozmente la altura de las contracciones

iniciales de ranitidina, de tal manera que si se hiciese una

valoracin con los controles latido a latido, los primeros 2030

latidos por dosis 20 pM de ranitidina tenan un significativo

incremento cuando se aada previamente verapamil al liquido

nutricio. No tiene explicacin fcil este notorio efecto

facilitador contrctil, salvo una accin de tipo aminopiridina

o calcioionforo en msculo. Verapamil solo, no tena un accin

contrtil manifiesta en esta preparacin, de ah que muchos

autores publican que carece de efectos a este nivel.

118
 En nuestros resultados diltiazen tena un efecto depresor

contrctil ms regular y menos potente que verapamil en su

interaccin con ranitidina, sobre todo a dosis altas. La

depresin contractil por diltiazen era en este orden: 104 M >

105 14 >106 M con una disminucin contractil respectivamente de

48 %, 38 % y 22 % del control. Hay muchas publicaciones sobre el

efecto de potenciacin del bloqueo neuromuscular por calcio

antagonistas como verapamil y diltiazem por otros frmacos. El

hecho de que verapamil. tenga mayor efecto depresor neuromuscular

que diltiazem puede ser debido a otros efectos de ambos como la

accin anestsica local <Hay and Wadsworth, 1982> pero con un

mayor efecto de este tipo con verapammil. Es tambin importante

el efecto de incremento contrctil progresivo de los cuatro

estmulos del TOF por verapamil 104 M solo, causando relaciones

T/T>1, igual que acontece con las aminopiridinas. La curva

dosisrespuesta de ranitidina despus de verapamil o diltiazem

siempre causaba un decremento progresivo de las alturas del TOF.

Con verapamil 104 M tambin la altura de los cuatro latidos del

TOP disminuan proporcionalmente con dosis acumulativas de

ranitidina hasta desparecer el TOF con dosis 1 mM de ranitidina.

Diltiazem tambin causaba disminucin de los cuatro estmulos

acoplados del TOF pero no habia el efecto depresor tan intenso

como con 104 14 de verapamil a igual dosis. De nuestros

resultados se deduce que verapamil tiene efecto depresor

neuromuscular mayor que diltiazem en su interaccin con

ranitidina, acorde con lo encontrado por otros autores <Del Pozo

and Baeyens, 1986) . En comn solo tienen el efecto depresor

neuromuscular dosisdependiente. En su mecanismo de accin es

119
posible que intervengan otros factores como la aacin anestsica
local adems de la accin calcioantagonista (Edeson and col.,

1985), todava mal conocidas, pero muy diferenciados segn el

tejido, especie animal y frmaco con el que interacionan. Como

ejemplo en el trabajo de Del Pozo and Baeyens (1986) el bloqueo

neuromuscular inducido por neomicina era ms potenciado por

verapamil que diltiazem, mientras que el bloqueo neuromuscular

por estreptomicina solo era potenciado por verapamil y no por

diltiazem.

Los efectos de captopril en placa motora han sido

escasamente publicados, debido a que carece de efectos

contrctiles manifiestos. Captopril, al igual que enalapril, no

afecta las contracciones del msculo gastrocnemio de rata,

estimulando el nervio citico <Matsumo and col. 1986). Se ha

demostrado que captopril interfiere con la transmisin

adrenrgica, va acciones ambas uniones pre y posyuncionales

<Antonaccio and Kerwin, 1981; Chiva and col., 1.982; Saruta,

1.982), que no se ha asociado con un efecto angiotensin

dependiente, considerando la posibilidad del paso de Angiotensina

1 a Angiotensina II por enzima convertidor de angiotensina local.

Los efectos de angiotensina II en msculo son de incremento

contrctil y con poca literatura (Wali, 1.986), por lo que hoy

da no es posible relacionar el efecto depresor que nosotros

vemos de captopril, como un efecto antagonista del enzima

convertidor de angiotensina a nivel de placa motora. No obstante,

el efecto de captopril puede estar en relacin con cierto efecto

calcioantagonista, ya que al actuar en solucin con bajo calcio

120
el efecto depresor se incrementa y con ms calcio el efecto

depresor se atena. Angiotensina II, al igual que otros pptidos

pueden modificar la transmisin neuromuscular (Wali, 1.985).

Tambin es escasa la literatura sobre efectos de los

neuropptidos en la placa motora <Steinacker, 1.977; Akasu and

col. 1.983; Wali, 1.985). As las endorfinas estn presentes en

la vecindad de la unin neuromuscular, pueden modificar la

transmisin neuromuscular, inhibiendo acetilcolinesterasa (Haynes

and Smith, 1.982). Captopril interacciona con morfina

posiblemente por un efecto inhibitorio del enzima degradante de

encefalinas <Oktay and col. 1.981) y disfuncin neurolgica se

ha visto en pacientes asociando cimetidina y captopril (Atkinsons

and col. 1.980). Angitensina II incrementa la contraccin en el

msculo diafragma de rata, efecto que no es inhibido por

saralasina en administracin previa. En cambio, la disminucin

de calcio en el bao nutricio, causa disminucin del efecto

contrctil de angiotensina indicando que el efecto de

angiotensina es calciodependiente <Wali, 1986). Por otro lado,

en msculo uterino de rata, tanto verapamil como la disminucin

de calcio del bao nutricio disminuye el efecto estimulante de

angiotensina II (Freer, 1975) . En nuestros resultados captopril

tena poco efecto sobre la accin contrctil de ranitidina en la

contraccin por estimulo indirecto, pero cuando el msculo se

despolarizaba por potasio el efecto contrctil de ranitidina era

significativamente disminuido. Por otro lado, la disminucin de

calcio en el lquido nutricio tambin causaba una depresin

contrctil importante de ranitidina. Es conocido el hecho de que

la liberacin de Ca++ del SR del msculo estriado se inactiva por

121
despolarizacin de la membrana por K+ o fijacin de voltaje

(Bowman, 1.980> y cuanto menor es el calcio activo para la

contraccin, menor es esta. Las variaciones del TOF por captopril

en relacin con ranitidina sola eran pequeas pero con tendencia

a una menor gradiente de altura contractil con mayores dosis de

captopril. El ttanos tena poca variacin pero interfera con

la altura contrctil mxima de ranitidina, era menor en los casos

que se aplicaba ttanos que en los que se obviaba. En la

potenciacin postetnica (FTT) haba tambin escasa variacin

pero con dosis 104 M de captopril haba una disminucin

significativa de esta con dosis de ranitidina 100 UM y 1 mM,

hipotticamente las reservas de Ach disponible para la

contraccin disminuyen al final ms que en otros protocolos con

menor dosis de captopril, ya que inicialmente haba mayor

incremento de la PTT.

Comparando la accin contrctil de neostigmina sola con

neostigmina despus de captopril y modificando en el medio los

iones Ca++ y K+, se puede concluir que: a) Captopril disminua

de forma dosisdependiente el incremento contrctil de

neostignina. b) Captopril solo 100 pM disminua la contraccin

7.7 % del control y menos, de 4.1 % del control con dosis 10 MM.

c) La disminucin de la concentracin de [Ca++]o a 0.90 mM tena

un efecto adiccional con captopril en la disminucin del efecto

contrctil de neostigmina. d) El incremento de la concentracin

externa de [K+]o a 5.4 mM tena un efecto de mayor decremento

contrctil adiccional de captopril 10 pM, que con la disminucin

de [Ca+#]o a 0.90 mM con dosis de neostigmina 0.1 pM y 1 wM,

122
mientras que con 10 pM el decremento contrctil era menor, e) En

los ndices del TOP con neostigmina sola la menor ratio era con
T4/T1 <mayor gradiente) con dosis 1 pH, mientras que con 10 pH

esta ratio era mayor (menor gradiente). f) Con neosti~mina 1 pH

y 10 pM despus de captopril 10 pM en Tyrode normal las ratios

T4/T1 tenan menor depresin en relacin con neostigmina sola.

g) La depresin del TOP era mnima en la ratio T4/T1 con dosis

de neostigmina 0.1 pH, 1 pH y 10 pH despus de captopril 10 pH

tanto en un medio hipoclcico [Ca++]o 0.90 mM como hiperpotsico

(K+]o 5.4 mM. h) La latencia de neostgmina sola 0.1 pH en

relacin con neostigmina 0.1 pH despus de captopril 10 pH en

medio hiperpotsico JK+Jo 5.4 mM era incrementada

significativamente.

La falta de incremento contrctil inmediata por neostigmina

0.1 pM sola en el hemidiafragma de rata hipotticamente puede

estar en relacin con una fase previa de interaccin

neostigminaenzima acetilcolinesterasa, a los que sigue acmulo

local de Ach, en placa motora (Katz and Hiledi, 1973). El TOP

tpico de despolarizacin T4/T1 deberla ser con neostigmina

0.1 pM de valor prximo a la unidad y en cambio tenia valores

inferiores, similares al TOF por ocupacin de receptores

nicotinicos en placa motora. En efecto, neostigmina tiene una

accin directa en placa motora (Ricker and Wescoe, 1946) . Por

tanto con dosis bajas de neostigmina como 0.1 pH serian

compatibles ambos efectos, directo e indirecto por aumento de

Ach. Dosis ms altas de neostigmina como 1 pM causaban

disminucin contrctil por estimulo indirecto y el TOP T4/T1

era mximamente disminuido, simulando una ocupacin tambin

123
mxima de receptores en placa motora <AchRs>. En cambio, dosis

superiores de neostigmina como 10 pH causaban una tendencia de

los cuatro latidos del TOP a alcanzar la misma altura, que era

conseguido al cabo de unas dos horas, de forma similar al TOF

del bloqueo neuromuscular despolarizante y esto ltimo seria

compatible con la disminucin de la contraccin al estimulo

simple que en estas circunstancias se produca en la

preparacin frnicodiafragma de rata. Aunque el efecto de

captopril no disminua significativamente la contraccin por

estimulo simple en placa motora, en cambio, si lo hacia la altura

contrctil mxima de neostigmina <0.1 MM 10 pH), que era

disminuida por captopril de forma dosis dependiente. Angiotensina

II en bajas concentraciones incrementa la liberacin de

noradrenalina (Zimmerman and Gisslen, 1968> y si las aminas

simpaticomimticas mejoran la contraccin muscular (Bowman,

1980a), captopril que suprime la liberacin de noradrenalina por

una va angiotensinindependiente <De Graeff and col., 1985>,

hipotticamente disminuira la contraccin indirectamente a

travs de catecolaminas. Por otro lado, angiotensina II puede

facilitar la neurotransmisin ganglionar simptica en el conejo

<Wallis and col. 1978; Wali, 1983), terminaciones adrenrgicas

(Paiva and col., 1976; Starke, 1977) y colinrgicas (Brown and
col., 1980; Wali, 1983>. El neuropptido angiotensina II

incrementa la liberacin de Ach del nervio presinptico, causando

despolarizacin a nivel de membrana postsinptica <Wali, 1.986)

Asimismo, este efecto de liberacin de Ach no era bloqueado por

saralasina, un antagonista de angiotensina II (Wal, 1986>, por

lo que hoy da no es posible relacionar el efecto depresor que

124
nosotros vemos de captopril, como un efecto antagonista del

enzima convertidor de angiotensina a nivel de placa motora.

Aunque es escasa la literatura sobre efectos de los neuropptidos

en la placa motora, se ha postulado que pueden interferir la

transmisin sinptica modificando la liberacin del

neurotransmisor, inhibicin de acetilcolinesterasa y la

concentracin intracelular de calcio libre (Wal, 1985)

En nuestro trabajo la disminucin de la concentracin de

calcio externa potenciaba el efecto depresor contrctil de

captopril sobre neostigmina, efecto calciodependiente.

Igualmente, la disminucin de calcio en el bao nutricio, causa

disminucin del efecto contrctil de angiotensina II (Wali,

1986>. Por otro lado, en msculo uterino de rata, tanto verapamil

como la disminucin de calcio del bao nutricio disminuyen el

efecto estimulante de angiotensina II (Preer, 1975) . Aunque

algunos de los canales de calcio yustaglomerulares parecen

responder a angiotensina II (Eisen and col., 1987>, en el msculo

no hay literatura con efecto similar.

Cuando se aumentaba la concentracin de potasio en el medio

nutricio el efecto de captopril 10 uTM no slo no disminuia la
altura contrctil sino que la incrementaba, no obstante deprimia

el incremento contrtil de neostigmina 0.1 pH, 1 pM y 10 pH y

por el contraro, alargaba la latenca contrctil de neostgmina

0.1 pM. A lo arriba expresado de las acciones de captopril se

uniran las acciones neurornusculares del incremento de potasio

en el medio. En preparaciones pretratadas con captopril, el

incremento extracelular de potasio causaba una disminucin del

incremento contrctil de neostigmina. El exceso de potasio causa

125
mayor despolarizacin (Bowman, 1980) y mayor liberacin de

acetilcolina <Van der Kloot, 1978). Por otro lado, neostigmina

tambin incrementa los niveles de Ach en la hendidura sinptica

<Katz and Hiled, 1973) y cuando se acumula exceso de Ach causa

un efecto feedback negativo con inhibicin de su liberacin

(Wilson, 1982>, as como disminucin de los receptores

nicotnicos activos en placa motora AchRs (Gwilt and Wray,

1986; Chang and col., 1973). Las fasciculaciones por neostigmina

tendran su origen en la elevada concentracin de Acb en la

vecindad de los colinoceptores axnicos causando pequeas

contracciones espontneas al actuar sobre las unidades motoras

<Bowman, 1980a>. Con neostigmina 10 pM haba ausencia de

fasciculacin por incremento de Ach as como el efecto directo

aditivo del exceso de neostigmina en placa motora causando

bloqueo por despolarizacin. Es conocido en clnica el efecto de
recurarizacin por dosis altas de neostigmina (Payne and Huglies,

1981), ya que la dosis de neostigmina es crtica, en exceso puede

causar bloqueo neuromuscular inducido por exceso de Ach (Payne

and col., 1980). Tambin la depresin del TOF era mnimo en

nuestros resultados cono consecuencia del bloqueo neuromuscular

despolarizante que aparece en estas circunstancias (Bowman,

198Gb). En conclusin, dada la escasa literatura que hoy da se

ha dedicado a estas facetas, cabe esperar que ulteriores estudios

aclararan si los efectos neuromusculares de captopril eran por

accin no slo sobre el ECA, sino tambin en sitios receptores

de angiotensina II, incremento de kininas, as como la posible

interaccin con acetilcolina, catecolaminas, canales inicos y

la movilizacin de calcio en placa motora.

126
 Aunque en nuestros resultados del estudio de la accin
contrctil comparativa en la preparacin frnicodiafragma de
rata de ranitidina y neostigmina en dosis ptimas, neostigmina

era mil veces ms activa que ranitidina (0.1 pH frente a 100 pM),
sus efectos eran 1.5 veces ms potentes en Tyrode normal,

mientras que en Tyrode hiperpotsico era un poco ms potente

ranitidina. En la contraccin por estimulo indirecto neostigmina

potenciaba a ranitidina administrada previamente, pero no haba

el incremento normal de neostigmina, es decir ranitidina impeda

el incremento contrctil mximo de neostigmina y el incremento

producido era menor, hipotticamente es posible un incremento

excesivo de la despolarizacin por el efecto aditivo de ambos

frmacos o bien se unen a receptores comunes, de tal forma que

la mayor selectividad de neostigmina no puede ser desarrollada

en estas circunstancias y explicara tambin en parte el que

tampoco haya potenciacin de ranitidina administrada despus de

neostigmina.
La inhibicin de colinesterasa verdadera se considera el

efecto principal de neostigmina y ranitidina que puede explicar

los efectos en placa motora. Por un lado, neostigmina inhibe

Achasa por un mecanismo competitivo, actuando directamente sobre

el enzima, con una constante de disociacin del complejo enzima

inhibidor <<~.) de 0.9 pmol/l., mientras que ranitidina acta de

forma descompetitiva otro modelo adems del competitivo y no

competitivo con una constante de disociacin del complejo

enzimasubstratoinhibidor (K~~) de 1.56 pmol/l. (Lee and col.,

1985) . No obstante, para otros autores ranitidina tambin acta

conforme al modelo competitivo (Hansen and Bertl, 1983a, 1983b),

127
no competitivo <Gall. and col., 1984>, habindose encontrado

actividad anticolinesterasa iii vitro tan potente ranitidina como

neostigmina (Lee and col., 1985,), por lo que no es de extraar

su diferente potencia, mecanismo de accin y efectos

neuromusculares. No obstante, el aparente efecto final de

incremento de Ach en placa motora se unen otras acciones menos

conocidas, por un lado neostigmina tiene efectos directos (Ricker

and Wescoe, 1946) que explicaran los efectos diferenciales. Los

frmacos anticolinestersicos prolongan la accin de Ach por

inhibir su hidrlisis, con acumulo en la hendidura sinptica

<Katz and Miledi, 1973). Por otro lado, en placa motora se

producen cambios funcionales como respuesta a un incremento

excesivo de los niveles de acetilcolina en la synapsis (Gwilt and

Wray, 1986>. La elevacin crnica de los niveles de acetilcolina

en placa motora puede disminuir la sensibilidad de los receptores

a la misma <Gwilt and Wray, 1986>, as como una disminucin de

receptores activos a abungarotoxina (Chang and col., 1973). Es

uno de los cambios electrofisiolgicos de los receptores para

equilibrar efectos en exceso o defecto de los neurotransmisores

en las sinapsis: desensibilizacin e hipersesibilidad. Es decir,

en un exceso crnico de acetilcolina puede causar una adaptativa

reduccin en la carga pasada por un nico canal junto con una

reduccin en el nmero de AchRs en placa motora; estando la

frecuencia de apertura de canales reducida <Gwilt and Wray,

1986) . Por el contrario, en la denervacin hay un dficit crnico

de acetilcolina, incrementndose los receptores <Axelson and

Theslef, 1959; Miledi, 1960) as como el tiempo de apertura de

los canales (Wray, 1980), que origina un aumento del flujo de

128
iones a travs de tales canales, produciendo un incremento de la

despolarizacin producida por la apertura de un canal simple

(Katz and Miled, 1972). Todos estos cambios son modulativos, ya

que tienden a amortiguar y adaptarse al incremento o disminucin

de acetilcolina.

Los inhibidores de Achasa tambin tienen los siguientes

efectos: prolongan la corriente de placa motora (end plate

current, epc), e interfieren el complejo del canal receptor de

Ach (Pascuzzo and col., 1984), la apertura del canal inico

receptor de Ach <<uba and col., 1974), cintica del canal de

placa motora que produce desensibilizacin <Pascuzzo and col.,

1984) y la conductancia del canal activo (Akaike and col., 1984>.

Ranitidina tambin inhibe colinesterasa en el mismo rango

de concetracin (105 H 104 H) que potencia las respuestas

contrctiles en la preparacin ileomientrica de cobayo (Galli

and col., 1984). Por otro lado Lee and col., (1983) sealan el
bloqueo neuromuscular de ranitidina en la preparacin frnico

diafragma de rata que no puede ser antagonizado por neostigmina,

lo cual seala el grado de confusin que se ha llegado y los

deficientes conocimientos farmacolgicos en esta investigacin,

como es revertir un bloqueo neuromuscular de un inhibidor de

Achasa por otro.

Las sacudidas musculares espontneas entre estmulos

elctricos que se producan con neostigmina 0.1 pH,

hipotticamente pueden estar en relacin con aumento de la

excitabilidad muscular debido tambin al incremento de

concentracin de acetilcolina en placa motora capaz de estimular

a la vez al nervio y al msculo, as como suficientes receptores

129
nicotnicos, produciendo potenciales de accin propagados, que

se traducan en nuestros resultados en contracciones asincronas

de altura irregular y menor que las contracciones normales por

estmulo elctrico.
La relacin T4/T1 del TOP ha sido considerada ms sensible
que el estimulo simple a 0,1 Hz y menos sensible que el ttanos

de 100 Hz durante SS como indicador de curarizacin <Waud and

Waud, 1972), si bien para Ah and col. <1981> el TOP muestra la

misma informacin clnica de la recuperacin del bloqueo

competitivo que el obtenido por ttanos a frecuencia fisiolgica

<50 Hz durante Ss), por ello, la recuperacin de la contraccin

por estmulo simple como criterio para la funcin neuromuscular

normal puede ser engaosa. Las relaciones del TOP mas sensibles
al efecto de los frmacos anticolinestersicos eran T3/T1 y

T4/T1 tambin tanto en Tyrode normal como hiperpotsico. En este

ltimo se produca el valor de la unidad con la relacin T4/T3,

mientras que en Tyrode normal se sobrepasaba el valor 1.0 con la

relacin T1/T1 como efectos diferenciales.

Ulteriores estudios se precisan para saber si neostigmina

y ranitidina ocupan receptores comunes o prximos.

El ttanos en nuestros resultados no se anula o disminuye

significativamente por neostigmina o ranitidina solas, pero en

administracin conjunta el ttanos se anula si se pone
neostigmina seguido de ranitidina pero no al revs. En tales

circunstancias hay un exceso de Ach en placa motora que puede

tener efecto desensibilizante (Fascuzzo and col., 1984) tras

alcanzar un efecto contrctil mxima de neostigmina sola y no al

revs, impedido por ranitidina que preceda a neostigmina.

130
 La anulacin de la contraccin tetnica durante la

estimulacin a altas frecuencias se considera en general debido

a un bloqueo que induce despolarizacin del msculo esqueltico

por acumulo excesivo de acetilcolina en la hendidura sinptica

<Bowman and Rand, 1980) . Tambin se ha propuesto que la anulacin

del ttanos por anticolinestersicos se debe a desensibilizacin

del receptor postsinptico <Akasu and Karezmar, 1980>, as como

un efecto de feedbaclc negativo, con inhibicin de la liberacin

de acetilcolina, causada por acumulo de la misma (Wilson, 1982)

Es decir, el efecto de los frmacos anticolinestersicos sobre

las contracciones tetnicas es depresor debido a que la

acetilcolina transmisora se acumula hasta el extremo de producir

bloqueo despolarizante tanto en la fibra nerviosa como en la

placa motora postunin. Neostigmina interaccionara en el

complejo canal inicoreceptor nicotnico de placa motora,

produciendo una alteracin en e]. estado del mismo y bloqueo de

receptores de acetilcolina (Fickers, 1985), quizs en relacin

con cierta similitud estructural con acetilcolina, que permitira

la unin a sitios comunes de esta: receptor nicotnico y enzima

colinesterasa. Tambin neostigmina tiene efectos presinpticos

que son poco conocidos. Comparativamente edrofonio es ms

efectivo que neostigmina, mientras que piridostigmina lo es menos

en la disminucin de receptores presinpticos (Donati and col.

1983)

Los agentes anticolinestersicos aumentan la respuesta al

estmulo simple, causando por el contrario una rpida anulacin

del ttanos <inhibicin Wedensky>, por estmulos a altas

frecuencias (Horrison, 1977, Hedfron and Hobbinger, 1979, Clark

131
and Hobbinger, 1983, Clark and col. 1983; 1984). El incremento

de la contraccin al estimulo indirecto se considera debido al

encendido del msculo despus de impulsos simples por una

prolongacin de los potenciales de placa y/o del repetitivo

encendido del nervio (Clark and col., 1984). No obstante, el

incremento del ttanos de neostigmina despus de atracurio seria

por oposicin funcional.

Durante la anulacin del ttanos por neostigmina en el

hemidiafragma de ratn no se producen potenciales de accin, los

potenciales de membrana se reducen de 80 a 50 y el msculo no

puede conducir directamente el potencial de accin a travs de

la zona central de la placa motora, debido a inactivacin de los

canales de sodio (Chang and col., 1986), siendo la anulacin del

ttanos por disminucin del neurotransmisor liberado. Es decir,

Chang y col, consideran que la depresin de ttanos por

neostigmina es inducido por inactivacin de canales de sodio

alrededor de la placa motora y que la depresin sostenida es

debido a una disminucin de la liberacin del neurotransmisor.

Ambos efectos son como consecuencia del acumulo de acetilcolina.

En las terminaciones nerviosas despolarizadas

elctricamente, exceso de K+ o anoxia, se aumenta la liberacin

de acetilcolina. Estos potenciales de accin superpuestos a nivel

basal de despolarizacin son menores que normalmente, ya que el

potencial de membrana esta desplazado, acercndose al. potencial

de equilibrio de sodio; los potenciales de accin disminuidos

desencadenan una menor liberacin de acetilcolina y tambin se

inactiva la liberacin de calcio del retculo sarcoplsmico, si

bien hay una fase con aumento de la conductancia con

132
desplazamiento transmembrana de iones que aumentan la liberacin

y las contracciones control son mayores que en un medio normal

(Bowman, 1980) . Por ello las contracciones y el ttanos estaban

disminuidos en presencia de neostigmina 0.1 (AM en solucin Tyrode

hiperpotsico en relacin con Tyrode normal.

En Tyrode hiperpotsico haba un pequeo incremento

contrctil por estmulo indirecto tanto de ranitidina como de

neostigmina solas, pero la adiccin al lquido nutricio de ambos

causaba un pequeo decremento contrctil. A la despolarizacin

del msculo por potasio hipotticamente se unirla la del

incremento de Ach local que causarla desensibilizacin del

receptor de Aeh en placa motora. El ttanos tena un

comportamiento similar al que se produca en Tyrode normal. En

cambio, el TOP tena un aumento de T2 con ranitidina sola y al

revs, neostigmina sola causaba un decremento de T2, sin

explicacin plausible. Si queda como constancia de efecto tpico

diferencial de dos frmacos con efectos contrctiles musculares

que inhiben colinesterasa con mecanismos similares, pero en medio

hiperpotsico y en el T2 son contrapuestos. Ciertamente hay

resultados en los que ranitidina desplaza a la derecha la curva

dosisrespuesta (CDR> de Ach en el msculo de sapo (Cheah and

col., 1985> y en el trabajo de Gwee and Cheah (1986) tambin se

revisa la accin bloqueante neuromuscular de ranitidina. Ya se

seal en esta tesis los efectos colinrgicos y anticolinrgicos

de ranitidina en relacin con la especie, rgano y dosis

ensayada. Por lo que no es de extraar que tales resultados

aparentemente dispares sean congruentes.

133
 Los efectos del bloqueo neuromuscular por atracurio en

hemidiafragma de rata era revertido por dosis ptimas de

neostigmina y ranitidina, si bien el efecto anticurare era mayor

con neostigmina sola. Cuando se asociaba neostigmina y ranitidina

no haba potenciacin si en primer lugar se pona ranitidina, en

cambio cuando lo era neostigmina la potenciacin posterior era

significativa. Naturalmente que cuando se bloquean los receptores

de Ach en placa motora se produce mayor sensibilidad a la misma

y el incremento contrctil se facilitaba mayormente por

neostigmina, considerando el incremento de Ach local como el

principal mecanismo de la accin anticurrica. Por el contrario,

el aparente freno o bloqueo parcial al accin contrctil de

neostigmina por ranitidina previa, cabe plantearse si se produce

activacin parcial de Achasa por la competicin entre ranitidina

menos selectiva y neostigmina ms selectiva por el enzima. De

ranitidina tambin se han descrito acciones de tipo bloqueante

neuromuscular (Gwee and Cheah, 1986> y Cheah and col. (1985)

encuentran que con dosis altas de ranitidina la CDR de Ach se

desplaza a la derecha, por lo que an que dan mecanismos oscuros

no descifrados, pero que podran explicar los diferentes efectos

segn el tiempo de administracin. Un ejemplo ms de la

cronofarmacologa y cmo el orden de administracin de algunos

frmacos puede beneficiar o perjudicar en ciertas ocasiones.

La potencia anticurare est en relacin con la concentracin

plasmtica y la inhibicin de colinesterasa <Cronnelly and

Horris, 1982). Tambin presentan interacciones en su efecto

antagonista del bloqueo neuromuscular con otros frmacos, pH, e

iones potasio, calcio y magnesio <Feldman, 1963; Miller and

134
Roderic]c, 1978) . Neostigmina a dosis altas en clnica, puede no

solo carecer de efecto anticurare sino aumentar el bloqueo

neuromuscular en algunos casos, particularmente cuando se asocian

otros frmacos como polimixina B <Van Nahuis and col., 1976). Es

decir, que neostigmina tiene de forma similar a ranitidina una

dosis teraputica anticurrica ptima y crtica, dosis inferiores

son ineficaces y las superiores pueden causar bloqueo inducido

por exceso de Ach (Payne and col., 1980). Ha habido algunos casos
de recurarizacin en Anestesia, despus del antagonismo

aparentemente adecuado, que se pueden atribuir a sobredosis de

neostigmina <Payne and Hughes, 1981). Al aumentar la dosis de

neostigmina se incrementa la despolarizacin del msculo y poco

a poco se produce un bloqueo por despolarizacin. En este proceso

puede influir no solo la inhibicin de colinesterasa sino tambin

cierta accin de neostigmina sobre el complejo canal

inicoreceptor nicotinico de placa motora, produciendo una

alteracin en el estado del mismo y bloqueo de receptores de

acetilcolina, hipotticamente en relacin con la similitud

estructural con acetilcolina que permitira la unin a sitios

comunes de esta: receptor nicotnico y enzima colinesterasa. En

este trabajo se confirman tambin estos efectos depresores

neuromusculares en la curva dosis respuesta de neostigmina, con

dosis mayores que sobrepasan el efecto mximo.

Es posible que neostigmina y ranitidina ocupen receptores

prximos o comunes o mecanismos de accin similares (inhibicin

de colinesterasa, etc.> que podan explicar la similitud de sus

efectos anticurricos.
Por otro lado, ranitidina tiene no solo actividad anticurare

135
(Re and col., 1983) sino tambin actividad bloqueante

neuromuscular (Re and col., 1983; Lee and col., 1985), de

mecanismo no bien conocido (Gwee and Cheah, 1986>.

En el TOP la relacin T4/T1 era la mas sensible como

indicador de curarizacin, acorde con lo encontrado por otros

autores <Waud and Waud, 1972>. Tambin un menor gradiente y mayor

altura del TOP causado por la accin anticurrica de neostigmina

sola y aun mayor indice de recuperacin del bloqueo

neuromuscular con ranitidina despus de neostigmina. Aunque el

TOP presentaba una precoz recuperacin tras administrar

neostigmina o ranitidina, el ttanos tena una ms lenta

recuperacin por lo que es ms indicativo de la ocupacin

residual de receptores de Ach, aunque para Ah and col.,

(1981> ambos parmetros TOF y ttanos tienen una informacin

equiparable.
La relacin T4/T1 del TOF ha sido considerada ms sensible

que el estmulo simple a 0,1 Hz y menos sensible que el ttanos

de 100 Hz durante Ss como indicador de curarizacin (Waud and

Waud, 1972), si bien para Ah and col. (1981) el TOE muestra la
misma informacin clnica de la recuperacin del bloqueo

competitivo que el obtenido por ttanos a frecuencia fisiolgica

<50 Hz durante Ss), por ello, la recuperacin de la contraccin

por estmulo simple como criterio para la funcin neuromuscular

normal puede ser engaosa. En nuestros resultados la relacin

T4/T1 era la ms sensible a la curarizacin y la menos sensible
la relacin T4/T3, tanto en Tyrode normal como hiperpotsico.

Tambin las relaciones del TOP mas sensibles al efecto de los

frmacos anticolinestersicos eran T3/T1 y T4/T1 tambin tanto

136
en Tyrode normal como hiperpotsico. En este ltimo se produca

el valor de la unidad con la relacin T4/T3, mientras que en

Tyrode normal se sobrepasaba el valor 1.0 con la relacin T1/T1

como efectos diferenciales.

Si los anticolinestersicos anulan el ttanos y los

bloqueantes neuromusculares competitivos tambin cmo se puede

explicar que con neostigmina despus de atracurio se incremente

la altura del ttanos?. Hipotticamente por oposicin funcional,

por despolarizacin, sensibilizacin de receptores a Ach o

supresin del feedback negativo.

En Tyrode hiperpotsico haba menor efecto depresor

neuromuscular por atracurio que en Tyrode normal ya que el

incremento de la liberacin del neurotransmisor por cloruro

potsico hipertnico es dependiente del influx de Ca++ en el

nervio terminal a travs de los canales dependientes del voltaje

(Van der Kloot, 1978), por esa razn en clnica se ha propuesto

la administracin de potasio para revertir el bloqueo

neuromuscular competitivo <Wily and ChurchillDavisson, 1968>.

por su accin anticurare (Wilson and Wright, 1936), no obstante,

hoy da no tiene justificacin, ya que los riesgos de

hiperpotasemia se obvian con los anticolinestersicos.

La accin anticurare de ranitidina y neostigmina solas o

asociadas era poco eficaz en medio hiperpotsico. En estas

circunstancias es posible que el estado de despolarizacin se une

al que causa ranitidina y/o neostigmina por incremento de Ach

local con una desensibilizacin del receptor de Ach. In vitro

nosotros vimos cmo la despolarizacin del msculo por

succinilcolina, el efecto posterior de ranitidina era de

137
incremento de la misma con una disminucin contrctil adicional

(Iglesia, 1986)

Nuestra conclusin es que as como en la sensibilidad al

bloqueo neuromuscular competitivo es mayor en la hippotasemia

en la hiperpotasemia es menor segn se aprecia en el estmulo

indirecto y el TOF. Este ltimo muestra una evolucin paralela

ala del Tyrode normal si bien el efecto despolarizante del exceso

de potasio en el medio se une el de los agentes

anticolinestersicos que hemos utilizado por lo cual los valores

de T3 y T4 se igualan y as tienden tambin Vi y T2. El

ttanos evolucionaba tambin de forma similar al del Tyrode

normal, con mayor altura de las contracc iones iniciales.

En resumen, la depresin del TOP y del estimulo indirecto

por atracurio se debera a la ocupacin de receptores en placa

motora. La anulacin del ttanos por bloqueo neuromuscular

competitivo sera debido al taponamiento de canales inicos del

paso de Na+ y K+ en la membrana, ya que abungarotoxina deprime

pero no anula el ttanos, y en estas circunstancias los

anticolinestersicos son incapaces de la apertura de canales al

aumentar los niveles de acetilcolina en placa motora (Bowman,

1980>

138
y. CONCLUSIONES
 Y. CONCLUSIONES.

1> DE LA INTERACCIN DE RANITIDINA CON LAS VARIACIONES

INICAS EN HEMIDIAPRAGMAS DE RATA DIRECTA E

INDIRECTAMENTE ESTIMULADOS

1~) Nuestros resultados mostraban que ranitidina en el rango

20 MM 1 mM tena un incremento contrctil dosisdependiente

mayor con estimulo indirecto y menor con estmulo directo.

2~> La curva dosisrespuesta <CDR> control de ranitidina se

desplazaba a la derecha con incremento de [Hg++]o a E mM y a 12

mM, aumentando el [K+]o a 5.4 mM, disminuyendo [Ca++]o a 0.90 mM

y a 0.45 mM, al igual que en un medio sin Mg++ o con 3.6 mM

lo.
30> Aumentando el K+ en el medio nutricio a 8.1 mM se

anulaba el efecto contrctil de ranitidina.

40) Haba disminucin de la CDR de ranitidina muy

significativa en bajo [Ca++]o, de 0.6 mM y alto (Mg++]o, de 6

mM.

II> DE LA INTERACCIN DE LOS CALCIOANTAGONISTAS DILTIAZEN

Y VERAPAMIL SOBRE LA ACCIN CONTRACTIL DE RANITIDINA.

1~) El efecto contrctil de ranitidina disminua

proporcionalmente a la concentracin de diltiazem en este orden:

1 pH < 10 pH < 100 pH.

140
 2~) Las alturas del TOF disminuan con diltiazem 1 pM; haba

un incremento de las relaciones T/T con 10 pH y aproximacin al

valor de la unidad por menor gradiente entre las relaciones del

TOP de ranitidina despus de diltiazem 100 MM.

30) Haba un pequeo decremento contrctil de ranitidina con

verapamil 1 pM y mayor decremento con verapamil 10 pM, mientras

que con 100 pH de verapamil haba un mayor incremento contrctil

de ranitidina a dosis bajas, mientras que con dosis altas de

ranitidina haba un significativo descenso contrctil.

~ Verapamil produca una disminucin dosisdependiente de

las alturas del TOP, excepto con dosis io~ 14 que causaba

incremento contrctil de ranitidina a dosis bajas.

III> INTERACCIN DE CAPTOPRIL CON LA ACCIN CONTRACTIL DE

RANITIDINA

10> Captopril con dosis 10 pH y 100 pH disminua la accin

contrctil de ranitidina, mientras que con dosis 1 pH tena un

efecto de incremento contrctil.

2~) Disminuyendo la concentracin de calcio a 0.90 mM en el

lquido Tyrode haba disminucin de la contraccin de ranitidina,

que era ms acentuado con el incremento de potasio a 5.4 mM en

la solucin nutricia.

141
 IV) INTERACCIN DE CAPTOPRIL CON LA ACCIN CONTRATIL DE

NEOSTIGMINA.

1~) En hemidiafragmas de rata indirectamente estimulados

en medio nutricio Tyrode normal, neostigmina sola causaba un

incremento contrctil mximo con dosis 0.1 pH; menores dosis como
0.01 pM no causaban incremento contrctil y mayores dosis como

1 pH y 10 pH lo disminuan.

2~) Captopril 10 pH disminua la altura contrctil de

neostigmina sola y esta disminucin era mayor con captopril 100

pH.

30) Captopril 10 pH en medio hipoclcico (0.9 mM) causaba

una disminucin contrctil adiccional, todava mayor en medio

hiperpotsico (5.4 mM), excepto con dosis de neostigmina 10 pM.

40) En el tren de a cuatro (TOP) las relaciones tenan un

gradiente mximo (menor valor) con neostigmina 0.1 pH y gradiente

mnimo (mayor valor) con 10 pH. En relacin con neostigmina sola

las relaciones ms modificadas por captopril previo a neostigmina

eran T4/T1, T3/T1, T2/T1 y Vi/Ti de la siguiente manera: a>

captopril 10 pM incrementaba los valores del TOP con neostigmina

1 pH y 10 pM; b) captopril 100 pH disminua esos valores con

neostigmina 0.1 pH; y) en medio Tyrode hipoclcico <0.9 mM)

disminuan esas relaciones con captopril 10 pH previo a

neostigmina 0.1 pH, 1 pH y 10 pH, excepto en las relaciones

T4/T1, T<3/T1 y T2/T1, que se incrementaban; y d) captopril 10

MM en medio hiperpotsico (K+ 5.4 mM) disminuan esas relaciones

con dosis de neostigmina 0.1 pH y 1 pM.

142
 V> ACCIN CONTRACTIL COMPARATIVA DE NEOSTIGMINA Y

RANITIDINA.

A> En medio nutricio Tyrode normal:

10> En bemidiafragmas de rata indirectamente estimulados

tanto neostigmina como ranitidina tenan un incremento contrctil

ptimo respectivamente con dosis 0.1 pH y 100 pM

2~) La accin contrctil mxima de ranitidina sola era menor

que neostigmina sola.

3~> Cuando se asociaba ranitidina despus de neostigmina,

la altura contrctil mxima era menor que en la asociacin en

sentido inverso.
40) Cuando se asociaba neostigmina despus de ranitidina

haba un incremento contrctil inferior que con neostigmina sola.

50) El gradiente del TOF era menor con la asociacin de

neostigmina y ranitidina que solas.

6~) El TOF tena mayor gradiente con neostigmina despus de
ranitidina mientras que el gradiente era menor con ranitidina

despus de neostigmina.
7~> Ni neostigmina ni ranitidina solas anulaban el ttanos.

En cambio, cuando se aada ranitidina despus de neostigmina se

anulaba el ttanos.

143
 B) En medio nutricio Tyrode hiperpotsico <8.1 mM):

1~) La altura contrctil de ranitidina sola era mayor que

neostigmina sola.
2~) La asociacin de ranitidina y neostigmina no tena

incremento contrctil

30> El ttanos se anulaba por ranitidina despus de

neostigmina y no en sentido inverso efecto cronofarmacolgico,

ni por ranitidina o neostigmina solas.

~ En medio hiperpotsico haba incremento del gradiente

de los estimulos del TOP con ranitidina, mientras que haba

disminucin del TOF con neostigmina despus de ranitidina.

VI> EFECTO PROSTIGMIN-LIKE DE RANITIDINA COMPARADO CON

NEOSTIGMINA FRENTE A ATRACURIO.-

A> En medio Tyrode normal:

10> La relajacin muscular causada por atracurio era

parcialmente revertida por neostigmina o ranitidina, si bien el

incremento contrctil era mayor con neostigmina.

20) En asociacin la accion anticurrica era mayor cuando

neostigmina preceda a ranitidina y no al revs que carecian de

potenciacin.
30) El tren de a cuatro tena una disminucin mxima con

atracurio que se haca mnima con neostigmina sola en asociacin

posterior.

144
 4~>El ttanos anulado por atracurio tena un tenue

incremento por ranitidina o neostigmina y algo mayor en

asociacin -

B> En medio Tyrode hiperpotsico:

1~) La accin anticurare era algo mayor con ranitidina sola

o ranitidina seguida de neostigmina al contrario que en medio

Tyrode normal.

2~) Todas las relaciones de]. TOP se acercaban a la unidad

por la accin despolarizante del incremento del potasio en el

medio nutricio.

145
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