RADMILAZELENOVIVjezba1STERILIZACIJA

Sterilizacijajepostupakkojimseunitavajuiliodstranjujuvegetativniisporogenioblici
mikroorganizama.Ciljprocesasterilizacijejeunitenjeilieliminacijasvihoblika
mikroorganizama,virusa,gljivicaiplijesniu/napreparatuilipriboru,posuu,uredjajima,radnim
povrinamaiuvazduhu.
Metodesterilizacije
Mehanike,kojepodrazumijevajufizikootklanjanjemikroorganizama(bakterijska
filtracija)
Fizike,kojeobuhvatajuprocesekojesezasnivajunapovedanjuenergije(sterilizacija
toplotom,zraenje)
Hemijske,kodkojihseupotrebljavajubaktericidnigasovi(sterilizacijatenostimai
gasovima).
MetodesterilizacijepropisanePh.Jug.V
1. Sterilizacijazasidenomvodenomparompodpritiskom:(uautoklavuna121C,najmanje
15minuta)
2. 2.Sterilizacijasuvimvrudimvazduhom:zagrijevanjeusuvomsterilizatoruna160C,
najmanje2sata
3. 3.Sterilizacijajonizujudimzraenjem
4. 4.Sterilizacijagasom(etilenoksid:koncentracijagasa;t;vlanost;vrijeme)
5. 5.Filtracija(bakteriolokifilteripromerapora0,22mi

6.Aseptinipostupak
1. Sterilizacijazasienomvodenomparompodpritiskom(autoklav)Mehanizam
unitavanjamikroorganizamaparomzasnivasenakombinovanomuticajuvlageitoplote
kojedovodidokoagulacijeproteinaiinaktivacijeenzimamikroorganizama.Sterilizacija
zasidenomvodenomparomizvodiseseuautoklavupoduslovimapovedanogpritiskai
najmanjetemperatureod121Cutrajanjunajmanje15min.Ovametodajeprikladnaza
sterilizaciju:
2. VODENIHPREPARATA(parenteralnipreparati:injekcijeiinfuzije;oftalmoloki
preparatiisterilnirastvorizaspoljanjuupotrebu...)
3. PRIBORiUREAJI(metal,guma,najlon...)
4. HIRURKImaterijal(zavojnimaterijal,odeda...)Nijeprikladnazasterilizaciju
termolabilnihsupstanci,
prakovaiulja.
AUTOKLAV(delovi):
HermetikakomoraVentilsigurnostiManometar(ureajzamerenjepritiska)Ventilza
dovodiodvodparetermometar
CILINDRIANiliPRAVOUGAONIHORIZONTALNO,VERTIKALNOpostavljeni
TUNELSKI
FAZEPROCESASTERILIZACIJE
Odstranjivanjevazduhaizkomoreautoklava,
Sterilizacija,
Odstranjivanjevodenepareizkomore,
Hlaenje(ubrzanohlaenje)isuenjematerijala.
VRIJEMESTERILIZACIJE
Vrijemezagrijevanja
Vrijemeodravanja
Vrijemesigurnosti
2.Sterilizacijasuvimvruimvazduhom
Mehanizamunitavanjamikroorganizamasuvomtoplotozasnivasenaizazivanjuoksidativnih
procesa,gubitkavlageidenaturacijeproteina.Sterilizacijasuvomtoplotomizvodiseusuvom
sterilizatorunatemperaturi160Citarajanju2h.Suvatoplotasekoristizasterilizacijui
depirogenizaciju(unitavanjehemijskeaktivnostipirogenailiendotoksina).
STERILIZACIJA:140C/180min160C/120min170C/90120min180C/4560min
DEPIROGENIZACIJA230C/6090min250C/3060min
FAZESTERILIZACIJE:
zagrijevanjematerijalanatemp.do100C(kondukcijomprovoenjemtoplote,konvekcijom
prenoenjemtoplotepomoduvazduha,zraenjeprekozidova)
vrijemesterilizacije(odmomentakadajepostignutatemp.sterilizacije):vrijemeodravanjai
vrijemesigurnosti
Ovommetodommoesevritisterilizacija:
pribora,ambalaepredmetaodmetala,staklaiporculana
mastiiulja(uljanirastvarai,podlogezamastiipreparati
pripremljenisamastimaiuljima)
termostabilniprakovi
 hirukiinstrumenti.

Nedostatciovemetodesterilizacijesu:
visokatemperatura
dugotrajanje
nemoeseprimenitizasterilizacijugume,plastikeitekstila.
3.Sterilizacijajonizujuimzraenjem
Mehanizamsterilizacijezraenjemzasnivasenaotedenjudelijskihstrukturauslednastaka
slobodnihradikalaidrugihprodukataradijacijekojirazarajudelijskemembranei/ilioteduju
hromozomskenukleoproteine
.Ovametodasekoristizasterilizaciju:
enzima,vitamina,monoklonskiantitijelaipeptida
plazma,tkivoikotaniimplantatigamazraanje
.Prednosti:
smanjenjedegradacijeproizvoda,visokaproduktivnost,temperaturnanezavisnost
ekonominost.
TIPOVIZRAENJA:elektromagnetno(UVigamazraenje),estino(elektronivisoke
energije)
.1.UVzraenjetalasneduine240280nm:baktericidniefekatogranienapenetracija
Mehanizamdelovanja:stvaranjedimeratimidinauDNKkojispreavarazmonavanje
mikroorganizama;Primjena:sterilizacijavazduha,radnihpovrina,povrina
predmetaieventualnovodeutankomsloju;2.Gamazraci:visokoenergetskozraenje,
talasneduine1104nm,izvorsuizotopi60Coi137Cs;Mehanizamdjelovanja:jonizujude
zraenjeizazivajonizaciju
delijskogsadraja,nastajanjeslobodnihradikalaiekscitacijumolekule,todovodido
degradacijeenzimaiDNKunitenjedelije.
3.Elektronivisokeenergije(ubrzanielektroni,estice)
odvijaseuakceleratoru(npr.vanderGraaffakcelerator)alternativagamazraenju,mogu
proizvestixzraketejeneophodnazatitaokolineiosoblja,
malamodpenetracijeuodnosunagamazraenje.
4. Gasnasterilizacija
Mehanizamsterilizacijegasomzasnivasenareakcijialkilovanjaudelijamamikroorganizma.
Najedesredstvozasterilizacijujeetilenoksid(bezbojnigas,mirisaslinogetru).Primjenjuje
sezatermolabilnematerijale,ambalauipakovni
materijalodplastike,gume,papiraivlakana.Usloviprocesa(parametristerilizacije):T=
4060C(brzinareakcijesepovedava2.5putazasvakih
10CporastaT)koncetracijaETO4001299mg/lvlanostnajmanje33%vrijeme1h
30h
5. SterilizacijafiltracijomUprocesusterilizacijefiltracijommikroorganizmiseodstranjuju
sijanjem(akojeveliinamikroorganizamavedaodveliineporafiltera)iliadsorpcijomunutar
filtracionogmedijuma(filtera,membrane).Ovametodasterilizacijekoristisezaparenteralne
rastvorekojisadretermolabilnesupstancekaoiumagistralnojizradioftalmolokihpreparata.
Bakteriolokifiltri
sinterovanocelulozneploestaklo(G1doG5)
porcelanskesvedefluorid,66);
membranskipolietarfluoretilen,filtri(celulozapozitivnoinaelektrisanderivati,polivinil
najlon
6.AseptinipostupakCiljaseptinogpostupkajedaseobezbedisterilnost,odnosnosprei
mikrobiolokakontaminacijautokuizradepreparata.Aseptinipostupakizradepreparataizvodi
seukomorisalaminarnimstrujanjemvisokopreidenog(sterilnog)vazduha(laminarna
komora).Zafiltracijuvazduhakoristesevisokoefikasnifilteriodstaklenihiliporcelanskih
vlakana(HEPAfilteri).Dabisepovedaostepensigurnostiaseptinogpostupkaukomorama
ovogtipaseugraujeUVlampakojaobezbeujesterilizacijuradnihpovrinaipovrina
predmetaunetihukomoru.Neposrednopreizradepreparataukomoruseunosepotrebne
supstance,kaoiposue,priboriambalaaprethodnosterilisaniodgovarajudimmetodama.
Ispitivanjesterilnosti
Definicija:utvrivanjedalijeproizvodkojijebiopodvrgnutnekomprocesusterilizacije
kontaminiranmikroorganizmima;Vremeizvoenja:nakrajuilitokomprocesasterilizacijeza
kontrolusamogprocesabiolokiindikatori;Metodeispitivanja:
direktnainokulacija(zasijavanjempreparatanapropisanupodloguiinokulacijapod
propisanimuslovima(temperatura,vrijeme)
membranskafiltracija(filtriranjepreparatakrozmembranskifilterizasijavanjefiltra
nahranljivupodloguiinokulacijapodpropisanimuslovima).
Stepensigurnostiprocesasterilizacije(eng.SALSterilityAssuranceLevel)jestepensigurnosti
podkojimaproceskojijeupitanjudajecijelinusterilnihproizvoda.Izraavasenaosnovu
smanjenjapoetnogbrojamikroorganizama(biolokoopteredenjepreparata)prijesterilizacijeu
odnosunabrojmikroorganizamaposlesterilizacije.Biolokiindikatoristandardizovane
populacijebakterijskihsporakojesenalazenainertnomnosau(trakafilterpapira,staklena
ploicailiplastinacevica),hermetikiupakovanomuodgovarajuduambalau.Bioloki
indikatorisepostavljajuunutarureajazasterilizaciju,namijestazakojasepretpostavlja,iliza
kojajeprethodnimfizikimmijerenjimautvrenodasunajmanjedostupnasteriliudemagensu.
Pirogeniipirogenitest
IspitivanjeprisustvapirogenihmaterijaupreparatuPirogeni
test:
1.Pirogenitestnakuniima(Jugo.Farmakopeja2000,Ph.Eur.1997,Ph.JugIV):
pirogeni semijere fiziolokim efektom (povedanje tjelesne temperature); zavrni test jednog
proizvodnogprocesa;nijesasvimpouzdan;skup.
2.LimulusAmebocyteLysate(LALtest):zaodreivanjeprisustvaendotoksina,kvalitativno
kvantitativantest(prisustvokoncentracija),osetljiv:1mg/mli<endotoksina,briijeftiniji,
pogodanzaprimenuutokuproizvodnje,osetljivzamalekoliineparenteralnihpreparata.
Mehanizam:stvaranjelimuluslizatgela(reakcijakoagulacijeproteina:geliranje,zamudenjeili
taloenje);zamudenjesrazmernokoncentracijiprisutnogendotoksinamijerenoturbidimetrijski
ilispektrofotometrijski.
IZOTONINIRASTVORIIIZOTONIZACIJA
Prisustvorastvorenihestica(molekulailijona)kaoinjihovukupanbrojurastvoruodreuje
koligativnasvojstvarastvora(snienjenaponapare,povienjetakekljuanja,snienjetake
mrnjenjaiosmotskipritisak).
Osmotskipritisakimavelikiznaajsafiziolokogstanovitajerjevelikibrojbiolokih
membranasemipermeabilan,atjelesnetenostikaotosukrvisuzeimajuznaajanosmotski
pritisakzbogvelikogbrojasupstancirastvorenihunjima.
Tjelesnetenostiimajuvrednostiosmotskogpritiskaisnienjetakemrnjenjakoje
odgovarajuvrednostimatihparametara0,9%rastvoranatrijumhlorida.
Vodenirastvorisupstancikojiimajuistoosmotskodjelovanje,odnosnoosmotskipritisak,kao
0,9%rastvornatrijumhloridanazivajuseizotoninirastvori.
Kaosredstvazaizotonizacijunajedesekoristenatrijumhlorid,glukoza,kalijumnitrat,
natrijumsulfat,fruktoza,manitol.Bornakiselinasekoristizaizotonizacijuiskljuivo
preparataza
oi.Izborsredstvazaizotonizacijuzavisiodfiziolokepodnoljivosti,nainaaplikacijei
kompatibilnostisaljekovitomsupstancom.
Metodasonogekvivalenta
Soniekvivalentpredstavljabrojgramanatrijumhloridakojirastvorenunekojkoliinivodedaje
istosnienjetakemrnjenjakao1gljekovitesupstancerastvorenuistojkoliinivode.Opti
principzaizraunavanjepotrebnekoliinesredstvazaizotonizaciju(natrijumhlorida)metodom
sonogekvivalenta,pojednostavljenopredstavljensastojiseuslededem:a.koliinalekovite
supstance/ikojajepotrebnazaizradudefinisane(propisane)koliinepreparatasepomnoisa
sonimekvivalentomdatesupstanceb.dobijenavrednostseoduzmeodkoliinenatrijumhlorida
kojajepotrebnazapripremu0.9%rastvoranatrijumhloridaistezapreminekaoipropisani
preparat.
c.dobijenavrednostpredstavljapotrebnukoliinusredstvaza
izotonizacijuzapropisanukoliinupreparata
d.ukolikosekoristinekadrugasupstancazaizotonizaciju,anenatrijumhlorid,dobijenirezultat
(vrednost)trebapodelitisavrednostizasoniekvivalentdatesupstance
e.ukolikousastavpreparataulazivieodjedneljekovitesupstancekoliinusvakesupstance
trebapomnoitisasonimekvivalentomzadatusupstancu,sabratidobijenevrednostiidobijeni
zbiroduzetiodkoliinenatrijumhloridakojajepotrebnazaizradu0,9%rastvoranatrijum
hloridaistezapreminekaozapropisanipreparat.

UPh.Jug.Vnavedenajeformulazaizraunavanjepotrebnekoliinesredstvaza
izotonizaciju:
C:'Aax=zarastvorsajednomsupstancom
10A,
C.'A.a)+(A..a,)+...+(A..a**/Eo)+(A,(A,zarastvorsaviesupstanci
gdeje:akoliina(g)supstancepotrebnazaizradupreparata(urastvorusaviekomponenata
koliinesupstancioznaenesusaa,a1,a2,...,an)vzapreminapreparatakojijepotrebno
izraditi(ml)xpotrebnakoliina(g)sredstvazaizotonizaciju
Avrednostsonogekvivalenta(urastvorusaviekomponenatasoniekvivalentioznaenisukao
A,A1,A2,...,A.Soniekvivalentsredstvazaizotonizacijuoznatenjesa)Ay(k
Ckoliinasredstvazaizotonizacijupotrebnazaizradu100mlizotoninograStVOra
Tabelasavrednostimasonogekvivalenta(A)iizotoninekoncentracije(C)lekoviti
pomonihsupstanciuvodenimrastvorimanalaziseuMF2008(prilogXI).
Preparatizaoi
UokvirumonografijePreparatizaoi,Ph.Jug.Vpropisuje:
kapizaoi,
losionezaoi,
poluvrstepreparatezaoi,
oftalmolokeinserte.Osimnavedenog,Ph.Eur.6uokvirumonografijePreparatizaoi
propisujeiprakovezaizradukapizaoiiprakovezaizradulosionazaoi.
Kapizaoisusterilni,vodeniiliuljanirastvoriilisuspenzijejedneilivieljekovitih
supstanci,namenjenezaukapavanjeuoko.
Ljekovitesupstancemogudabudupakovaneusuvom,sterilnomoblikukojiserastvaraili
suspendujeuodgovarajudemsterilnomvehikulumuneposrednoprijeupotrebe
.Pomodnematerije:zapodeavanjetoninostiiliviskozitetapreparata,zapodeavanjeili
stabilizacijupHvrednosti,zapoboljanjerastvorljivostiljekovitesupstance,ilizastabilizaciju
preparata
.Viedoznapakovanjavodenihpreparatazaoisadrepogodnekonzervanseu
odgovarajudimkoncentracijama,izuzevkadasampreparatimaadekvatnaantimikrobnasvojstva.
Ukolikojepropisanodasekapizaoiizraujubezkonzervansa,trebadabuduu
jednodoznimpakovanjima.Kapizaoikojeseprimenjujuzavremehirurkihintervencijane
smijudasadrekonzervanseimorajudabuduujednodoznimpakovanjima.
.Kapizaoitiparastvoramorajudabudubistreibezprisustvaestica.Kapizaoitipa
suspenzijamogudaimajutalogkojiselakoredispergujemudkanjem.
Najvedepakovanjekapizaoismedaiznosi10ml.Nasignaturiviedoznihpakovanjakapi
zaoimoradabudenaznaenrokupotrebeposleotvaranja.Akonijedrugaijepropisanoi
odobreno,ovajperiodnesmijedabudeduiod4nedelje.
Losionizaoisusterilni,vodenirastvorinamenjenizapranjeilikupanjeokailizanatapanje
zavojazaoi.Losionizaoimogudasadreipomodnematerije,naprimer,zapodeavanje
toninostiiliviskozitetapreparata,ilizapodeavanjeilistabilizacijupHvrednosti.Poluvrsti
preparatizaoisusterilnemasti,kremoviiligelovi,aprimenjujuseukonjunktivuoka.Sadre
jednuilivieljekovitihsupstancikojesurastvoreneilidispergovaneuodgovarajudojpodlozii
imajuhomogenizgled.Podlogazapreparatezaoinesmijedairitirakonjunktivu.Najvede
pakovanjepoluvrstihpreparatazaoiiznosi5g.PremaPh.Eur.6poluvrstipreparatizaoise
moguprimenjivatiinaonekapke,najvedepakovanjeovihpreparataiznosi10g,anasignaturi
moradabudenaznaenrokupotrebeposleotvaranja.Akonijedrugaijepropisanoiodobreno,
ovajperiodnesmijedabudeduiod4nedelje.
Vehikulumizaizradupreparatazaoi
Zaizradukapiilosionazaoisekaovehikulumnajedekoristivoda.Vodazaizradu
oftalmolokihpreparatamorabitisterilna,odnosno,odgovarazahtevimazaVoduzainjekcije
(Aquaadiniectabilia).Ostalirastvarai/vehikulumizaizradukapizaoisu:neutralnaulja
biljnogporekla(npr.ricinusovoulje),parafin,teni,sintetskiestrimasnihkiselina(npr.oleil
oleat),trigliceridisrednjeduinelanca.Kaovehikulumisemogukoristitiiizotoninisterilni
rastvori,kojimogudasadreiodgovarajudikonzervans(naprimer,rastvorbornekiseline
koncentracije1,9%;rastvornatrijumhloridakoncentracije0,9%uzdodatakbenzalkonijum
hlorida;rastvorbornekiselinekoncentracije1,9%uzdodatakbenzalkonijumhlorida).
Zaizradupoluvrstihpreparatazaoimogusekoristiti:
bezvodnepodlogeuijisastavulazemasnekomponentekaotosu:vazelin,teniparafin,
bezvodnilanolinilanolinskialkoholi;
podlogetipahidrofobnihihidrofilnihkremova;
podlogetipahidrofilnihgelova(hidrogelova)(npr.hidrogelovisaNaCMCilipoliakrilnom
kiselinom(Carbopol940ili980)).Ph.Jug.ViPh.Eur.6uoptimmonografijamaKapizaoii
Losioni
zaoinenavodepodatkezaizotoninost.Ph.Jug.ViPh.Eur.6uoptimmonografijama
Kapizaoii
LosionizaoinenavodepodatkezapHvrednost.Konzervansenesadravajupreparatikoji
seprimenjujutokomhirurkihintervencija,oftalmolokiinserti,rastvorizaispiranjeokakojise
primenjujuuvelikimkoliinamanaotedenukorneu,preparatizaoiujednodoznompakovanju.
Kaokonzervansinajedikojisekoristesubenzalkonijumhlorid(0,01
0,02%),feniliva(II)borat,feniliva(II)nitratilifeniliva(II)acetatSredstvaza
povedanjeviskoziteta
derivaticeluloze,polivinilpirolidon(PVP),polivinilalkohol(PVA)ikarbomer.Antioksidansi
Uuslovimaapotekeizraujusekapizaoi,losionizaoiipoluvrstipreparatizaoi.Izradi
preparatazaoiprethodiproveraispravnostidoziranjausmisluproverekoncentracijalekovitih
supstanci.Kodkapizaoivodenihrastvorailosionazaoiprovjeravaseizotoninost.Izrada
preparatazaoiumagistralnojpraksiizvodisepodaseptinimuslovima,ukomorisa
laminarnimprotokomvazduha.
Laminarnakomorajesmjetenauzasebnojprostorijikojasekoristiiskljuivozapripremu
sterilnihpreparata(tzv.aseptiniblok).Krozradniprostorkomorestrujisterilanvazduhpotisno,
slojevito(bezturbulencije).Potrebnaistodavazduhasepostieprolaskomkrozpredfilter,a
zatimikrozvisokoefikasanfilterzaesticeizvazduhatzv.HEPAfiltere(eng.HighEfficiancy
ParticulateAirHEPA)kojisuugraeniukomoru.HEPAfilteruklanja99,97%lebdedih
esticaveliine0,3m.UkomoramasalaminarnimprotokomvazduhaugraenajeestoiUV
lampa,kaodopunskamerauobezbeivanjuaseptinihuslova.
Pripremakomorezaizradusterilnihpreparataumagistralnojpraksi,
obuhvata:
provjeruispravnostiradavagekojasekoristizamerenjeukomori;
brisanjeradnepovrineiunutranjihpovrinakomorepogodnim
sredstvomzasanitaciju(obinosekoristi70%tniizopropanol);
unoenjestojnicasaljekovitimipomodnimsupstancamapotrebnimzaizradupreparata
kaoiodgovarajudegpribora,posuaiambalaekojisuprethodnosterilisaniodgovarajudim
metodamasterilizacije;
ukljuivanjekompresoraipodeavanjebrzineprotokavazduhai
ukljuivanjeUVlampe(ozraivanjeobinotraje20minuta);
iskljuivanjeUVlampeipodeavanjebrzinekojomfiltriranivazduhkontinuirano
protiekrozradnideokomoretokomizradepreparata(od0,20,5m/s).
prijepoetkaradaukomorisalaminarnimprotokomvazduhapotrebnojeopratiruke
sapunomidezinfikovatiihodgovarajudimsredstvomzadezinfekciju(npr.rastvori
benzalkonijumhlorid0,10,2%,cetavlon0,5%uetanoluidr.).