6. DETERMINACION DE FOSFORO A. METODO DE OLSEN 6.A.1. Concepto: El f£6sforo disponible define los grado de deficiencia, suficiencia o exceso de este elemento en relacién a su disponibilidad para los cultivos. 6.A.2. Principio Determinacién colorimétrica del f6sforo extraido del suelo mediante una solucién de Bicarbonato de Sodio (NaHCO3) 0,5 M a pH 8.5. 6.A.3. Equipos y Materiales ~ Balanzas - Agitadores de vaiven (reciprocos) - Espectro-colorimetro Bausch & Lomb (Spectronic 20), con fototubo rojo y A = 862 nm. - Botellas pl&sticas con tapa para agitaci6n. - Papel filtro Whatman # 1 6 equivalente. - Beakers de 50 ml para recibir filtrado. - Pipetas graduadas de varios volumenes. - Materiales pyrex para desarrollo de curvas de cali- bracién.6.4.4. Reactivos ~ Solucién 0,5 M de Bicarbonato de Sodio Agregue 42,01 g de NaHCO3 a aproximadamente 800 ml de agua destilada. Mezcle bien hasta disolucién completa. Ajustar el pH de esta soluci6n a pH 8,5 con NaOH 1M. Aforar a volumen de un litro con agua destilada. Guardar la solucién en frasco de polietileno y chequear el pi en caso de que la solucién se usara en un perfodo mAs largo. Soluciones para el desarrollo de color. - Solucién &cida de Molibdato de amonio Disolver 50 g de molibdato de amonio (NH4)M0,05,4.4H,) en aproximadamente 175 ml de agua destilada en un bal6n aforado de un litro. Disolver 1.2125 g de tartrato Goble de potasio y antimonio K (SbO) C,H#,0¢ 1/2 H,0) en la soluci6n de molibdato. Colocar el matraz en bafio de agua con hielo para enfriar y agregar lentamente y agitando 800 ml de #,S0, concentrado. Llevar luego a temperatura ambien- te y diluir a volumen con agua destilada, guardar en refrigerador en un frasco Pyrex oscuro.- Soluci6n de Scido ascérbico Disolver 8,8 g de &cido ascérbico en agua destilada y llevar a volumen de 100 ml. Guardar en frasco oscuro en el refrigerador. - Solucién de Trabajo Preparar esta solucién el mismo dfa que se vaya a trabajar usando una proporcién de 1 ml de la solucién de Scido ascorbico + 2 ml de solucién Scida de molibdato de amonio por cada 100 ml de solucién de trabajo. Se lleva a volumen determinado con agua destilada. - Solucién estandar de 25 ppm de P Pesar 0,1098 g de KH2P04 seco en estufa a 105% horas por litro de solucién de NaHCO, 0,5 pH 8,5. - Soluci6én de HCl al 4% v/v (Volumen por Volumen) por 2 6.A.5. Procedimiento 6.A.5.1. Calibracién de estandares para Fésforo En balones de 50 ml medir alicuotas con pipetas volumetricas de 1, 2, 4, 6, 8 y 10,mlde la solucién estandard de 25 ppm P. Diluir a la marca con solucién extractora de Na HCO, 0,5 M a pH 8,5 (soluci6n Olsen) y 3 mezclar bien.En balones de 50 ml: ml sol Sol Olsen Cone. P. conc. P. 25 ppm P NaHCO, en Sol. Suelo ppm ppm ° 50 0.0 ° 1 49 0,5 10 2 48 1,0 20 4 46 2,0 40 6 44 3,0 60 8 42 4,0 80 10 40 5,0 100Pipetear 2,0 ml de cada una de estas soluciones en tubos de ensayo altos (22x17 mm, ejemplo). Agregar 20,0 ml de solucién de trabajo y medir en fotémetro a 882 nm. Trazar gréfico de calibracién en papel semilogaritmico, concentraci6én de puntos en ppm en solucién vs. lecturas. 6.0.5.2. Procedimiento en si A) Preparacién del extracto de suelo: Pesar 1 g. de suelo y colocar en frasco plAstico, afiadir 20 ml de la solucién de NaHCO3 0,5. pH 8,5. Agitar por 30 minutos y filtrar por papel Whatman No. 1 6 de calidad similar. Filtrado muy claro. B) Fésforo: Tomar 2 ml del extracto y agregar 20 ml de la soluci6n de trabajo. Agitar con corriente de aire y dejar en reposo 30 minutos. Leer en Baush & Lomb con una longitud de onda de 882 nm o con filtro rojo en Klett. Para el 100 (B&L) 0 cero (KLETT) del aparato,usar un blanco preparado agregando 20 ml de la solucién de trabajo a 2 ml de la soluci6én de NaHCO3. Agitar con corriente de aire. Reposo 30 minutos. 6.4.5.3. Rango y Sensibilidad El complejo de molidato, responde a la ley de Beer (da una lfnea recta cuando es graficado el logaritmo del % de tramitancia vs la concentracién) por encima de concentraciones de f6sforo en la solucién final de 2 ppm.La sensibilidad de este método es de 0,02 ppm de P en el extracto. 6.A.5.3. Interferencias | No hay interferencias de silicatos en la solucién, para concentraciones de 10 ppm de silice: Fe (+3) hasta 50 ppm; Cu (+2) hasta 10 ppm, arsenico hasta 1’ppm. 6.4.5.4. Observaciones Se destaca la necesidad de hacer mediciones periédicas del pH de la solucién de extraccién de Olsen (pH 8/5), en caso de que esta se mantenga por perfodos prolongados de tiempo. Observaciones en relacién al uso de carb6n activado. 6.4.6. CAlculos ppm P suelo = ppm P extracto x 20 6.4.7. Forma de Expresi6n de Resultados Los contenidos de f6sforo en el suelo, se expresarén como "P" enteros. 6.4.8. Interpretaciones Se incluye los nuevos criterios de interpretaci6n Propuestos, en base a la agrupaci6n de los suelos por tipos © grupos texturales CATEGORIAS FOSFORO (OLSEN) ppm GRUPOS MUY BAJO(MB) BAJO(B) MEDIO(M) ALTO(A) MUY ALTO (MA) ‘TEXTURALES GRUESAS O98 10-18 = 19-36 37-108 + 108 MEDIAS Pree os 6-12 13-25 26-75 + 756.A.9. Comentarios - Efecto de Almacenamiento de las muestras EL secado de las muestras al aire y el almacenamiento puede tener algin efecto sobre el P extraido con Bicarbonato de Sodio; sin embargo, para los propositos de anélisis de rutina con fines de diagnéstico de fertilidad, este efecto no es significativo. Una vez hecha la extracci6n, el f6sforo en el extracto debe ser medido dentro de las 2 horas después de su extraccién. SegGn comunicacién verbal de Rafael E. Gonzélez Troconis, el Dr. Luis Marfa de Elizalde; estudid, adopté e implemento en el antiguo laboratorio de suelos del Instituto Nacional de Agricultura (INA) la metodologia de Morgan (Acetato de Sodio, 0/125 M pH4.8) para las extraciones de todos los elementos quimicos que se determinaban por los afios 40-50. El procedimiento era de amplio uso en los EE.UU en donde se lo promocionaba como un extractante universal. Por los afios 56 el quimico Manuel Marifio, prestando sus servicios en el laboratorio de esa seccién de suelos del antiguo CIA, le introduce la modificacién del pH a la soluci6n de extraccién, dejandola en pH 4,2. La modalidad analftica del Morgan modificado, continua a ser la utilizada en el laboratorio de Suelos y fue la adaptada en los 4 laboratorios regionales dependientes del MAC, localizados en Barquisimeto, Maracaibo, Maturin y San Crist6bal, los cuales cerraron sus puertas en 1962; siguiendo directrices y asesoramiento técnico del Dr. Fitts del Programa Internacional de Soil Testing de la Universidad de California del Norte (USA). Correspondié a las autoridades del CIA, dependientes de la*6.8. Direccién de Investigacién del MAC, tomar la decisién del cierre en aquel momento. Informacién verbal de Rafael R. Gonz&lez Troconis, sefiala que la justificaci6én para el cambio de pH de 4.8 a 4.2 en la solucién de Morgan, se fundamenta esencialmente en:. La influencia para el cambio de pH de 4.8 (método original) a pH 4.2 (Morgan modificado), es que a ese mayor grado de acidez se elimina la interferencia del elemento arsénico, que produce reaccién con el molibdato de amonio, similar a la del ion £6sforo, produciendo por lo tanto su presencia, coloracién azul. En otras palabras, el descenso de pH a 4.2, dié facilidad en el desarrollo de color y en la reproducibilidad de resultados. Igualmente, el Procesamiento a ese pH, permiti6 la determinacién colorimétrica de los Nitratos extraidos con esa soluci6n de Morgan modificada.6.9. Una correlacién preliminar de este método fue presentada en las lras. Jornadas Agronémicas ( 3 ). En el laboratorio de la Secci6n de Suelos del CIA continua siendo utilizada hasta el 15/02/69 para extraer los elementos Pésforo, Potasio, Calcio y Nitratos. En febrero de 1969 fundamentados en los resultados de las investigaciones sobre seleccién de métodos llevadas a cabo por Gonz&lez Troconis, R. ( 4 ) se adopta la metodologia de Olsen (Bicarbonato de Sodio, 0,5 M pH 8,5) para la extracci6én del Pésforo y Potasio) y se mantiene la extraccién de Morgan para calcio y nitratos. Para junio/85 se descontinua la determinaci6én de nitratos, haciéndose en los laboratorios para diagnéstico de fertilidad (rutina del FONAIAP) la extracci6n de Morgan Gnicamente para los elementos calcio y magnesio. La calibraci6n del elemento calcio extraido por este método, constituye uno de los criterios que intervienen en los instructivos sobre requerimientos de encalado. Inicialmente, tres criterios de interpretaci6n fueron considerados (B-!-A) para todos los suelos. Actualmente, se proponen niveles de interpretacién diferenciales para suelos de texturas gruesas y par suelos de texturas medias y finas.6.10. VARIACIONES CRONOLOGICAS EN EL USO DE SOLUCIONES EXTRACTORAS EN LOS LABORATORIOS DEL FONAIAP (ANTIGUO CIA) DETERMINACIONES Aito P K ca NO, 1960-68 MOR 4,2 MOR 4,2 MOR 4,2 MOR 4,2 1a Ah 42 42 OLS 8.5 OLS 8.5 MOR 4,2. MOR 4,2 1969-85 “a lr so Mea An OLs 8.5 OLS 8.5 9 MOR 4,200 =~ 1985 en ad. di: ge Lia Wk MOR = MORGAN OLS = OLSEN6.B. METODO DE BRAY 1 6.B.1. Concepte El £6sforo disponible define los grados de deficien- cia, suficiencia o exceso de este elemento en relacién a su disponibilidad para los cultivos. 6.B.2. Principio Determinacién colorimétrica del f6sforo extraido del suelo mediante una solucién de fluoruro de amonio - Acido clorhidrico a pH 2.6. (Solucién Bray 1). 6.8.3. Reactivos 1.- Floruro de amonio, soluci6én madre, aprox. 1,0 N Disuelva 37 g de floruro de amonio en un litro de agua destilada. Conserve la solucién en un frasco de polietile- no. Acido Clorhfdrico 0,5 N Diluya 40,4 ml de HC1 concentrado a un volumen de 1000 ml con agua destilada. 3.- Soluci6én Extractora En bal6n aforado de 1000 ml, afiada 30 ml, de la solu- cién Nly 50 ml de la solucién 2. Llevar el volumen con agua destilada. La soluci6n resultante es 0,03 N de floruro de amonio y 0,025 N de HCl. Esta solucién puede conservarse en frasco de vidrio por m&s de un afio. Ajustar pH a 2,6 +- 0,05 con HC] 6 NaOH diluido. Soluciones para el desarrollo de color Igual a 6.A.4.6.12. 6.B.5. Procedimiento 6.B.5.1. Calibraci6én de Estandares (P) En balones de 50 ml medir alicuotas con pipetas volumé tricas o microburetas de 1,2,4,6,8 y 10 ml de la soluci6n patr6n de 25 ppm. Diluir a la marca con solucién extractora Bray 1 y agitar muy bien. Pipetear 2,0 ml (pipetas volumétricas) de cada una de estas soluciones en tubos de ensayos altos (22 x 175 mm. por ejemplo). Agregar 20,0 ml de la solucién de trabajo para "P" y agitar con corriente de aire. Después de 10 minutos y antes de 30 medir el color a una longitud de onda de 882 y después de colocar el instrumento (B&L) a 100 con el blanco preparado similarmente con 2,0 ml de solucién extractora. Trazar gr&fico de calibracién en papel semilogar{tmico concentraciones de ppm P vs. lecturas aparato de transmitancia. En balones de 50 ml ml de Sol Sol Bray 1 Conc. P. Conc. P. 25 ppm P ml en solucién en Suelo ! ppm 0.0 50.0 0.0 0.0 1.0 49.0 0.5 5.0 2.0 48.0 1.0 10.0 4.0 46.0 2.0 20.0 6.0 44.0 3.0 30.0 8.0 42.0 4.0 40.0 10.0 40.0 5.0 50.06.13. 6.B.5.2. Procedimiento en si A 2,0 g de suelo agregar 20,0 ml de solutién extractora Bray 1. Agitar por un minuto y filtrar rSpidamente en papel filtro Whatman N.1 u otro de calidad similar. Se debe chequear cada nuevo lote de papel de filtro por contaminacién de As 6 P corriendo un blanco. F6sforo, proced como en la preparaci6én de la curva de P (6.B.5.1.) a partir de donde dice "pipetear 2,0 ml. Pero en este caso del"extracto de suelo". 6.B.6. C&lculos ppm de Psuelo = ppm P extracto x 10 6.B.7. Forma de Expresién de Resultados El f6sforo en el suelo, extraido con Bray 1, se presen- tar& con enteros. 6.B.8. Interpretaciones Ppm FOSFORO - BRAY 1 (7) BAJO (B) MEDIO (M) ALTO (A) TODOS Los 0-15 16-30 30 SUELOS 6.B.9. Comentarios La extraccién con Bray 1 es usada por los diferentes - laboratorios de la Regién Oriental del pafs (U.D.0. y FONA- IAP - El Tigre).6.14. 6.10. Referencias 1) BRAY, R.H. y KURTZ, L.T. 1945. Determination of total, organic and available forms of phosphorus in soils. Soil Sci. 59:39-45. 2) GILABERT DE BRITO, J. y CHIRINOS, A.V. 1982. Interpre- taci6n de anélisis de suelos mediante ensayos de in- vernadero. II Establecimiento de niveles criticos tentativos en funci6n de la capacidad de intercambio de los suelos. Agronomfa Tropical. Vol. XXXIII (1 al 6):459-481. 3) GONZALEZ TROCONIS, R.; RODRIGUEZ BELLO, A. y MARINO, M. 1960. Resultados preliminares sobre correlacién de anélisis de f6sforo del suelo, con los rendimientos. Maracay, Centro de Investigaciones Agropecuarias. sec cién de Suelos. (Presentado en las lras. Jornadas A- gronémicas 25-29, Mayo 1960. 4) GONZALEZ T., R.E. y PEREZ SILVA, R. 1976. Métodos de an&lisis del f6sforo de suelos de Maracay estudiados con experimentos de campo. Agronomfa Tropical Vol. XXVI_ (1):15-29. 5) JACKSON, M.L. 1958. Soil Chemical Analysis. Prentice Hall, Inc. p. 151. 6) OLSEN, S.R.; COLE C.V.; WATANABE, F.S. y DEAN, L.A. 1954. Estimation of available phosphorus in soils by extraction with sodium bicarbonate. U.S.0.A. Cir. No. 939. 7) OLSEN, S.R. and L.A. DEAN. 1965. Phosphorus. pp 1044- 1046. In. C.A. Black (ed.) Methodos of Soil Analy- sis. Agronomy No. 9. Am. Soc. Agron. Madison Wis. 8) Ver Referencia 1 de 7.C.10.