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CUANTIFICACION POR COMPARACION CON UN ESTANDAR,

DETERMINACION DE FRAMICETINA EN UNA SOLUCION
OTOOFTALFMICA

OBJETIVO
Aplicar el mtodo espectrofotomtrico para la determinacin cuantitativa de un
principio activo por medio de la formacin de complejos coloreados.

MARCO TERICO
El anlisis cuantitativo utilizando la espectrofotometra UV-visible se puede
realizar a travs de una solucin patrn de concentracin conocida seguido del
anlisis del compuesto desconocido. La concentracin de la muestra
desconocida se calcular mediante la expresin siguiente:

Donde:
C = concentracin del problema
Cs = concentracin del patrn
Ap = absorbancia que presenta la muestra
As = absorbancia que presenta la muestra patrn.
En este caso el clculo de la concentracin del problema depende del hecho de
que problema y patrn se vean sometidos a un tratamiento experimental
idntico. Adems ha de asumirse que existe proporcionalidad lineal entre la
absorbancia y la concentracin, en el intervalo de concentraciones objeto de
estudio; es decir, que si la solucin problema posee una concentracin doble
que la solucin patrn, deber por tanto, mostrar doble valor de absorbancia
que el patrn. Es frecuente utilizacin de dicha ecuacin en qumica clnica,
como ejemplo tenemos la determinacin de cido rico por el mtodo
propuesto

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RESULTADOS

1) Detallar los clculos previos. Detallar los clculos del factor de

dilucin

Se diluy la muestra problema, se tom 1 mL de muestra y se trasvas a una

fiola de 10 mL, por lo que el factor de dilucin (FD) es:

10 mL
FD= ----------- = 10
1 mL
Se trabaj con un estndar de concentracin conocida de 1000 g/mL. Los
datos dados por el espectrofotmetro UV- visible a =585 nm son:

Blanco Estandar M.P

A= 0,00 A=0,237 A = 0,175

Para hacer la aplicacin de la frmula primero debemos tener en cuenta la

absorbancia del estabilizador (Nitroprusiato de Na) y el solvente (acetona), para
eso debemos restar estas absorbancias a las del estndar y de la muestra
problema.

Absorbancia del estndar = Ast - AB = 0.237 - 0 = 0.237

Absorbancia de la MP = AMP - AB = 0.175 - 0 = 0.175

2) Hacer los clculos de la concentracin de framicetina en la forma

farmacutica expresados en mg/ml.

!"#
=
!"#
Donde:
Amp: Absorbancia de la muestra problema Ast: Absorbancia del estndar
Cst: Concentracin del estndar (mg/ml) FD: Factor de dilucin

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Para la muestra , la concentracin del estndar fue de 1000 ug/ml (1mg/mL)

0,175 1000
mp = 10 = 7383.96 /
0,237

CMP => 7,383 mg/mL

3) Concluya si la muestra se acepta o se rechaza, Porque?

El fabricante nos dice que la concentracin de framicetina (sulfato de
framicetina) es de 5mg / ml, hallando la cantidad que nosotros hemos hallado
en porcentaje.

7.383 /
%= 100% = 147.66
5 /

De acuerdo con la USP 38 nos indica que el sulfato de neomicina (framicetina)

usado como solucin oftlmica contiene el equivalente a no menos de 90 % y
no ms de 130 % de la cantidad declarada de framicetina , por lo tanto nuestro
valor encontrado escapa de ese intervalo, por lo tanto la muestra se rechaza.

Discusin
El anlisis cuantitativo por espectrofotometra necesita de un factor la longitud
de onda ptima, el cual se obtiene a partir de la curva espectral, de este dato
deriva la curva de calibracin y las lecturas de absorbancias en el
espectrofotmetro. Uno de los avances es la espectrofometria de derivada la
cual permite tener resultados cuantitativos muy precisos y exactos por estas
caractersticas es usado en investigacin farmacutica y toxicolgica , esta
tcnica es obtenida por diferenciacin de espectros ultravioleta y visible lo que
permite una medicin muy exacta de la longitud de onda de mxima
absorbancia y una perfecta resolucin de espectros , suministrando una
informacin de la sustancia analizada mucho ms compleja que el espectro
original , al tiempo que permite eliminar las interferencias en las medidas,
causadas por la presencia en el medio de la matriz biolgica , de excipientes ,
disolventes 1. En una cuantificacin por comparacin con un estndar se debe
de tener en cuenta las interferencias, el estndar y el blanco deberan contener

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la misma concentracin de todos los elementos de la matriz de la muestra

excepto la del analito, lo cual no ocurre prcticamente lo que supone que no
deben existir interferencias que comprometan la exactitud del resultado. Las
interferencias deben su aparicin a las diferencias en composicin de la
muestra analizada, de los estndares externos y los blancos utilizados para la
calibracin; una interferencia causado por el blanco o aditiva es causada por
los componentes de la matriz que producen una seal no compensada
independiente de la concentracin de analitos2, 3.
El rango de valores para el sulfato de neomicina en diferentes preparados nos
lo indica la USP 38, para un ungento que contiene flurandrenolina los valores
oscilan entre 90%-135%, para una crema con dexametasona 90%-135%, para
solucin oftlmica con fosfato sdico de dexametasona la cual era la muestra
que se trabaj en el laboratorio nos indica que los valores deben estar entre
90% y 130% lo cual estaba fuera del rango en nuestro trabajo experimental 4.

Conclusiones
Concluimos que debe verificarse que no existan interferencias que
comprometan con la exactitud del resultado analtico, para ello se
minimizan utilizando el mtodo del estndar interno, la compatibilizacin
de matrices o el mtodo de adicin de estndar.
El mtodo del patrn externo nos permite realizar anlisis con mayor
exactitud ya que solo se trabaja con 2 muestra y el error instrumental se
omite ya que ambas se pueden analizar bajo las mismas circunstancias.
Se aplic el mtodo del espectrofotmetro para la determinacin
cuantitativa de un principio activo como es la Framicetina en una
solucin oto-oftalmica por medio de la formacin de complejos
coloreados donde participaron el nitroprusiato, acetona y tetraborato de
sodio.

CUESTIONARIO

1) Desarrolle la ecuacin qumica del fundamento

Nitroprusiato de sodio

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De la ecuacin de Lambert-Beer, la absorbancia es directamente proporcional

a la concentracin siempre y cuando la absortividad molar y la longitud de la
celda se mantengan constante, dicho de otra manera:
A= E.b.C

Para la muestra problema:

Amp= E. b. Cmp.. (1)
Para el estndar:
Ast= E. b. Cst..... (2)
De 1 (2) y despejando Cmp
!"#
=
!"#
De donde se deduce que la concentracin de la muestra problema es
inversamente proporcional a la Absorbancia del estndar.

2) Cul es la ventaja de esta forma de cuantificacin?

La ventaja de este mtodo es que se trabaja con un estndar, adems la
cuantificacin no es afectada al agregar una solucin reactivo , de esta manera
esta forma de cuantificacin es aceptable para otras muestras problema en
donde en todos los casos se tienen en cuenta la linealidad, precisin,
exactitud,especifidad y sensibilidad.

3) En qu consiste un patrn externo? Ejemplos prcticos

Los estndares de calibrado seleccionados deben aproximarse tanto en la
concentracin del analito en su composicin de los diferentes componentes
qumicos presentes en la matriz de la muestra. Este requerimiento es aplicado
en todos los mtodos de calibracin propuestos.2 El patrn externo es una
solucin que tiene al analito a estudiar pero con concentracin conocida.
Un ejemplo en donde se utilice un patrn externo seria: Se tiene 3 muestras de
agua potable A, B y C de 10mL cada una, en la cual se debe cuantificar la
cantidad de cobre presente por absorcin atmica. Para ello, la muestra es
filtrada, acidificada con cido ntrico y se diluye a un volumen final de 25 mL.
Posteriormente, se mide la respuesta instrumental de cada muestra de agua.
Adicionalmente se prepara una serie de patrones de Cu en agua destilada y
desionizada que tambin se acidifica y se mide su respuesta instrumental junto

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con una solucin blanco (solucin que no contiene analito). Los resultados se
presentan a continuacin:

Cu (mg/L) Respuesta instrumental

0 0.001
1 0.1
2 0.2
3 0.3
4 0.4
5 0.5
6 0.6

Una vez que se calibra el instrumento utilizando los estndares y aplicando el

mismo procedimiento se miden las muestras de agua y se registran los
siguientes resultados:
Muestra Respuesta instrumental
A 0.39
B 0.45
C 0.41

Tanto los resultados obtenidos de las seales medidas correspondientes a las

soluciones estndares como a las muestras, deben corregirse utilizando la
medida del blanco.
Se observa que la relacin entre la respuesta instrumental y la concentracin
de los estndares de cobre muestran una relacin lineal (lo que indica que la
respuesta instrumental es directamente proporcional con la concentracin). Por
ello, es posible relacionar la respuesta con el contenido de Cu en las muestras
de agua, la cual se puede expresar por la siguiente ecuacin:
Seal analtica (Y) = (constante) (concentracin del estndar) + seal
blanco
Por mnimos cuadrados se obtiene:
Constante = 0.1 seal analtica/concentracin
Intercepto = 5.5 seal analtica
Ahora la ecuacin queda como:
Seal (Y) = 0.1 x (concentracin de Cu) + 5,5, con la cual se determina las
concentraciones del Cu en las muestras de agua.

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Muestra Cu (mg/L)
A 9.75
B 11.25
C 10.25

4) Determine el valor de K de los datos obtenidos en la preparacin de la

curva de calibracin y observe si es constante o no. Interprete K= Ast/Cst
i) En la solucin estndar (st)

A st = 0,237

C st =1 mg/ml
!,!"#
= = 0,237
!

ii) En la muestra problema (mp)

Amp= 0,175
Cmp= 7.383 mg/ml
!,!"#
= = 0,0237
!.!"!

El valor de K en los 2 casos vara considerablemente por lo que se deduce que

la framicetina no es aceptada para su uso.
5) Cmo se puede calibrar la influencia de la matriz en el mtodo?
Las interferencias de la matriz son causadas por componentes de la matriz que
alteran la respuesta de la seal del componente analito en forma proporcional a
la seal; para evitar el efecto matriz generalmente se construye la recta de
calibrado tomando una muestra parecida a la muestra problema pero libre del
constituyente a determinar y se aade cantidades conocidas del constituyente
para formar soluciones patrn , pero esta tcnica no resulta ser tan exitosa ya
que el efecto matriz puede variar de una muestra a otra ; otra manera de evitar
el efecto matriz es utilizando la tcnica de las adiciones estndar donde se
adiciona cantidades conocidas y crecientes del constituyente a la propia
muestra problema , la cuantificacin del constituyente se realiza por
extrapolacin de la recta de calibrado ; pero surge un problema ya que para
cada adicin de estndar se necesita construir una recta lo cual hace que el
trabajo de laboratorio sea extenso . Ms all de estas dos tcnicas existen

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otras pero solo MINIMIZAN las interferencias de la matriz: el mtodo del

estndar interno, la compatibilizacin de matrices.

Referencias Bibliogrficas
1. Farhat. La aplicacin de la espectrofotometra de derivada al anlisis de
benzodiazepinas en medios qumicos, biolgicos y formas farmacuticas
diversas. Universidad de Granada. (Acceso 6 de Setiembre del 2014). 2002
Disponible en: http://dialnet.unirioja.es/servlet/tesis?codigo=12144
2. Skoog, D. West, D. Introduccin a la qumica analtica. 1 ed. Barcelona:
Editorial Revert S.A.; 1986 p. 502
3. Hernandez H. Lucas. Introduccin al anlisis instrumental. 1ed. Espaa.
Editorial Ariel. 2002. p 413
4. The United States Pharmacopeial Convention. USP 38 NF 33. Farmacopea
de los Estados Unidos de Amrica Formulario Nacional. Vol. 3; 2015 p. 4930-
4931

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