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FUNDAMENTOS DEL SISTEMA 8.1, Aspectos general 1 cullve por lote allmentado (CLA es una modalidad de ferment ‘hn cuyaa caraeteristicas propies hace alraciva au aplcecion a Un ‘eid ama de procesos de fermentaci, Wisbamente es una operacion discontinua, durante 1a eval los nutrients o parte de ellos ingrenan al fermentader por una corrente smectite ext daca, owen ot inves de una elape previa obligatora de cullivy por ite. Una ver sarzadas estas condiciones se inila la alimentacton, lo que mares | [ais condiciones iniciales de un cult por ite allmentado se logran a ‘teomienzn del CLA, las Bara 15 muestra Ia operaeton de tn CLA junto con reunie la principal nomenelatura que se usara en las sgwientes secclones! FS)8.2. Tipos de alimentaction lus velocidad com que una poblaciin celular consume un nutriente ‘allquera, lene dada por In sgulenteexpresion: uxv toca de consumo =2EY gry en c a ie on Jermain 1) musta para un sutra ae de mas cela fla, demanda depende directamente de Ia velocidad espectica de frecliiento, De esta manera, conteolando la coneentracion del ‘utente limita en el caldo de fermentacon, se infu sobre la \eloedad espectierde crecimiento dela poblaclon y ls predominancla tte un determinado estado Nstologico, Lo anterior puede lograrse através de a velocidad de alimentacn ‘ota del nutrient limitante, lo que se expeesa por la ecuacto: Velocidad de alimentacton = FS, (/4) (02 ‘si defindas la demanda y oferta de nuteientes se tendra en general ‘ade el punt de vista dela velocidad especiiea de crecimiento del ‘hieroorgantamo, dos situaciones Jf) Sta ofera es mayer qut Ia demanda. el mutrenteHinitante 26 fcumulara enel fermentador yin masa cetar cecera a suse Iida espciea mama de crecimiento) {Yb St la oferta es menor que ta-demanda, [a concentracion de futlent imitate en el fermentador dismigulra hasta un pun ten que la masa celular crecerd.aumaselocidad especiica mena ‘ave la eassin La corrects programacion dela velocidad de slimentactn se debe ha: ‘eebanindse ela funelin demarida de microorganism, send esta ‘tind por lis coniciones de creelnsentotmpuestas por el proceso ‘ge ne desea leva ea. igurosamente, la funciin demands puede varia de cualquer forma Aurante el procewo de tal modo que es indispensable determinarta (Com anterlondad pars rillar adecuadsmente la programacion dela ert. De esta manera, la oferta de nutrients puede astm distintas Tunciones en el uempo, tal eame se apreca en la Figura 16 stuacion aque ha sido revisada por diversos autores Jones y Anthony. 1977; Tim peal, 1977; Yamane y Tstigano, 1977; Edwards y co. 1970) By) Geneaimente, para obtener estas fnciones aha preferdo mantenter Ccutante @)y varie con el temp de erento Sin embargo tn agunos Pato, se pun gar de manera mao anple distnas ftnclnes dein oeta mantenendo constants y haciendo varable Sy ton IgusL.a Ia ‘velocidad de dilucion meta det euluvo y por lo tanto constante ‘Adems, la concentraciin celular es gual a incl. En estas cond Clones de operacion del cultvo por late alimentado se obtlene una situaciin muy similar a lade un quimiostato operando en esta es facionaro. vale decir a velocidad expecfea de crecimiento concen lracion celular constantes, La diferenela radica, en que el volumen de medio ene fermentadoe no permanece constanie, con lo que se obte he una distibucton mas amplia de estados halogens dela clulas 11.2, Caso de CLA con alimentacién constente En este caso la condicion de estado pseudoestactonaro se logra en la zona de crecitlento liad (Yamane e Hirano. 1979, Pt. 1376) Diferenciando ta ecuacton (110) y aplieand la condicién de estado seudoestaclonarto, se Nga x, s. as) aie ‘eta condi recmplasnda clas eeciones (109) (110) periniten tener tos siguientes resultados respectvamente: FF 110) ebay ae X=X45)-Yus wa Por un ldo la velocidad espeifica de crecimiento s ual af veloc: ‘acl de ditciin dl clive. por el otro la concentraciin cellar «3 Independiente del emp. lo cual era lo que se esperaba, Exread enn a ccna ang “ifereneia en el sigieado fico del termina velacidad de luton, En ‘aversaincnte proporcjonal Corel empe de lecinlanany 2 supone Gis velocidad eapectia de cecimiento dela masa celularaasasse— “rmsiua velocidad. Bata en una caratertaticasobresalente del cu ‘0 por lle aimed con allmentacion constante, ya que ene eta 4 pseudoestacionario a biomasa esta enn estado tansiente con st ‘elocidad expecta de cresimento bao contro, 12, FORMACION DE PRODUCTOS 12.1, Beuaciones generales 1a velocidad de formacion de producto en CLA viene representada por ta cause: wv 1 gx ce) en que , representa a veloeidad especie de formacion de producto¥ que en términos generals puede expresarse por (Luedekingy Pret 189: apenas, cus) cen que ay B son constantes La integracin de ia ceuaetin (118) esta supeditada a las condiciones ‘ec alimentacion con que se realic el CLA ya las earacterstcas dela formacton del product, yasea asociadoo no al recent del lero: ‘organism presente una condieon mit 12.2, Caso de CLA con alimentactén exponencial ‘Tomando como efemplo un CLA con alimentacsén exponencial.reem plusando las ccuaciones (119) y (98), previamente tntegrada (y ct En la ccuacion (118) se obtiene [a sguente expresion que define el perf de concentracion del products & raves del tempo de fermen: fac alimentada xy. (ye +B) No Riva tha BE Le 1) fa 19, APLICACIONES DEL CLA 19.1. Tipos de eultivos Weer eara ee ets eee pee ‘cas yee EICLA resulta adecuado también para procesoslntados por la ex {encia de epresioncatabolica,inibicion por sustato y comstante de saturation K muy alta. En todos eatos casos se esperaria encontrar mayores productividades en un CLA que en wn eultve por ote 19.2, Aplicaciones a eseala industrial ELCLA es una modatida de culo desarrliads prineipalmente en Ia vdustriasaisfaclendo procesos especiica. A principos de siglo yt se conoce este sistema de cultivo, cuando es utlzade a nivel indus thal controlando la dispontbildad de Ia fuente de cartono en el fermentador durante la produccion de biomass de levadura, fin de munmizar ia sinteats de etanol como consecuenta dl efecto Crabtree {Whtaker, 1980) Oto ito importante enel desarrollo del CLA. ue 9 pliacion ala produccion de peniclina en donde se pudo controlar luna primera etapa de crecimiento vgoroso para luego dar pase a otra fe condiciones apropiadas para la sinteis de este metaboito sean ‘tarp Uohnson. 1971). Et hecho de haberse desarrollo en la indus Iria mpiioque se dfundieran ss principtosy fue abo hasta fines de la décadia del 60, queen la iteraturaespecializada comenzaron a apa recer articulos en felacion a este sistema fundamentande sts pine Posy explorande nuevas apliesciones La Tabla 18 muestra una lista ée ejemplos de aplicaciones del CLA, Fesulta interesante destacarla adaptacin del CL ala produecion de ‘etchollos mediante mieroorganismos recomlanantes Lee col, 1989; ‘Yee Blanch, 1093: Cheng ye. 1997) ceulas animales Xie y Wan, 1994: Biblia y Robinson, 1998 Zhou y col 1987), En st aplicaciin industrial el CLA debe enfrentar entre otros dos «lementos de no fai salucion. Uno deelos esa optimtzacion ye otto fs lestrategia de contol de la velocidad de alientacion Bi el primer caso, el namero de variables involucradsycrterios que debe cumplirse hace que la opimizacion de las condiciones de ope aciin sea. hasta el momento, sumamentecomplea (Oho col. 1976. ‘Weigand y col, 1979; Yamane y col, 197)" La estrategia actus seguir al especto parece centrarse en una linea de ctleros de po fexpeimental mis que en tun riguroso analists matematico,reac “Tipo de adicin evar ‘Mears, fuentes de® Py Be ‘atcerot ‘Asticar, carbo de sta ‘Acetonay Buta Most completo Proteasa ‘hires © hoi de cseina Crieaftrnn Ccarbohidrato iamicina ‘cosa ldo gases ‘oneretina Ghucoms ‘eid Cio Cabelas, mono sina tana utes tal y amano Esureptomicina (tacoma y mento Respecto al segundo punt. las posibldades pueden darse en el ran 19 de dos extremos, Por un lado programar una fancton alimentacien ‘ene! tempo sobre bases puramentetericasyvaldadas luego exper Imentalmente. que se cumple independientemente de lo que padiera ‘star ocurriendo en el ermentador Una estrategia de esta natal corre el riesgo de que por cualquier razin el eultvo deja ce respon Ger como se supone, el sistema completo queda fuera de contro, 10 ‘ual podria Hegar @siguicar la perdda de esa fermentacion. Ene ‘tro extremo,fdeal, la velocidad de allmentaciondeberia estar contr lad eon tan sensor en tinea que mediante un lop de contol adeeua: do, heera las correcciones convententes para que el ctv se man twins dentro de lo programado, Un factor que atenta contra estable: fer estos sistemas de contrat lo constituve las diieultades de rela fn linea bajo condiciones industriales mediciones drectas de mass ‘celular concentracién de faente de carbon por ejemplo. Sin embar ‘,alteando mediciones indirectas de estas variables, se han obteni- ts inaenom resultados. En et Smbto industrial a resultado fanda ‘nalaten la produeeon de levadura de parieaeon, la implementacton ‘Hew loop de contol que al devctartrizas de alcool en los gases de ‘ila del fermentador o en clcaldo,disminuye la velocidad de a ientacion de la fuente de casbono, afin de evtar la expreston de ‘Mrspecto se han publleado diversos trabajos que establecenestrate fu de control de velocidad de allmentacion en base a mediciones de igen molecular disuelto (Renard y co.,1984), formacion de CO, Ihiay’ cot 19871, euociente respiraiocio(Spruytenburk yea. 1973) DIU Nis col 197) 9 otros la inportancta de establecer una adectada esrategla de contol de a ‘cidad de alimentaen en funcion de la respuesta fistlogiea del ‘iieoorganismo es evident, lo que se manifesta a traves de la pro ANctvdad del sistema y su efcenel, F—fajo votumétrco de allmentacton,1/ K, ——constante de saturacion, g/t ’ ceoncentraciin de producto en el fermentor. 8/1 4 velocidad especiica de produce, S——concentrsciin de sustrateUnitante en el fermentadar, g/t 5, concentractén de sustratoimitante en la allmentactn. ‘concentracién de sustratolimitante en el fermentador en CLAcom alimentacion exponencia. g/l v wolumen de ealdo en el fermentador, X ——_concentraciin celular en el fermentador, g/t You Fendimtento global de sustrato en cua, g/g 2 constantes del ecuacion de Luedeking y Pie, ees. (119 (20. ay w/a » ‘velocidad especitica de crecimiento, h* Ny _-Yelocelal especfiea minima de erecimiento, h*° Inteto de CLA ' terminode CLA T _nterfase entre las zonas de crecimiento exponen yl ado en CLA con alimentacion constante BIBLIOGRAFIA ‘bia. and Robinson. D.X. (1995). In pars ofthe optimal fe ba 1h proce or noone nity ree enol oy. (Cheng, C.. Huang. ¥- and Yang, 5. (19971 “A nove feeding strategy for ‘enhanced plasmid stably and protein production in rcombst ‘east eat bate fermentation” Btecinol, Bing, 36,23. Dawards. Gottschalk M. Noon. A.-Tuhil Land Tanna. (1970, Extended ealturt the growth of Candia at controled acetate oncenteaions” istechinol ng. 12.975, Fucnsalids, A yGentina, 3. (1979) “Diseiey etude de un sistema de “limentacton para altos por Lote alimentados™Escla de Inge ler Bloguimica, Universidad Catolien de Valparaiso Johnson, Md (97). "Permentation - yesterday an tomorrow". Chem. Jones and Anthony. (1977. 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