Tipus de PCR

Problemes que
Tipus Aplicacions Fonament o funcionament
soluciona
PCR inici calent
2 ADN polimerases
Augmentar el Amplificaci termostables (una amb activitat
PCR de rendiment en de fragments correctora i l altre normal)
fragments grans fragments ms curts no Baixa [K+]
grans (5-35kb) deitjats. Additius/potenciadors

Evitar
Estudi ADN polimerasa amb activitat
mutacions
PCR dalta expressi correctora
puntuals (
fidelitat gnica, Condicions optimes per la
canvis de
clonaci polimerasa [Mg2+], pH...
nucletids)
Amb poca [ ]
dADN inicial 2 PCR acoplades. La 2a usa ADN
O Major motlle obtingut com amplic en
PCR aniuada Fragments sensibilitat i la 1a .
semblants especificitat 2 parelles dencebadors, els
dinteres en la eterns i els interns
seqencia.
PCR mltiple Amplificar
varies Utilitza varies parelles
Permet fer
seqencies dencebadors amb una TC
menys PCR
diferents en la dhibridaci semblant
mateixa PCR
PCR amb Analitza Permet Polimerasa amb activitat
transcripci molcules ARN obtenir copies transcriptasa inversa
inversa (RT-PCR) Expressio dADN a partir Sondes poli-T
gentica dARN
(ARNm)
1. Quins sn els avantatges de la PCR a temps real?
2. Quins dos sistemes fluorescents de detecci hi ha en la PCR a temps real?
3. Qu s el principi de transferncia denergia fluorescent per ressonncia?
Consisteix en la transferncia denergia lumnica dun fluorocrom a un altre.
Perqu aix tingui lloc els dos fluorocroms han destar prxims i lespectre
demissi dun ha de coincidir amb lespectre dexcitaci de laltre.
4. Omple el quadre dels mtodes de detecci fluorescent:

Fase de la PCR de
Tipus Funcionament
detecci
Final del cicle
Agents Augmenten la seva
damplificaci, al
Independents fluorescents emissi quan sintercalen
finalitzar la fase
intercalants en lADN de doble hlix.
delongaci o extensi.

Un fluorocrom donant -
notificador en lextrem 5 i
un fluorocrom acceptor en
Sondes lextrem 3.
dhidrlisis El 2n fluorocrom es pot
(o TaqMan) substituir per altres
molcules capaces de
captar lemissi del primer
fluorocrom sense emetre
fluorescncia.

Igual que TaqMan per els

dos extrems contenen
seqncies curtes
repetides i invertides (i
Especfiques per tant
complementaries).

La part central doncs, s

lautntica sonda amb una
Balises seqncia
moleculars complementaria a la regi
(o beacons) central del fragment que
samplifica.

Quan la sonda suneix a

lADN motlle, els dos
extrems, que no es poden
aparellar amb lADN
motlle, es separen de
manera que en excitar el
notificador aquest emet
 fluorescncia.

Parelles de sondes que

hibriden en la zona central
de lamplic en zones
contiges. Una delles
Sondes FRET: porta un notificador en
posici 3 i laltre un
fluorocrom acceptor en
posici 5. (aquest si que
ha demetre fluorescncia)